Введение к работе
Актуальность тем;. Изохинолиновый алкалоид виибластин - одно из наиболее активных и широко применяемых химиотерапевтических лекарственных веществ противоопухолевого действия.
Основным (и пока единственным) способом производства винблас-тина является извлечение его из растительного лекарственного сырья {Catharantlma гозеиэ). Ввиду довольно низкого содержания винбластина в катарантусе розовом (сотые доли процента) и наличия близких по структуре других соединений, получение его в чистом виде представляет значительные трудности. Это определяет и высокую стоимость винбластина (тысячи долларов за грамм).
Ежегодная потребность нашей страны в вннбластиве 'около одного килограмма, тогда как его'производство - около 300 граммов в год. Кроме того, желательно было бы иметь некоторый резерв винбластина, который позволил бы наладить полусинтетическоо производство другого противоопухолевого лекарственного средства - винкристина.
Увеличение производства винбластина выдвигает на первый плав обеспечение производителей высококачественны?,) сырьем с достаточно высоким содержанием винОластіша. В связи с этим встает вопрос'о методе определения содержания винбластина в катарантусе розовом.
Для определения содержания винбластина в растительном сырье в СІІГ до сих пор приманились устаревшие методы, страдающие рядом су-ществешшх недостатков. 'Разработка новых методов, основанных на испольоовмпш писоко»Ф201смш!1оД жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), позволяет повисить точнооть и сократит!, время анализа. Еще большего повышения объективности анализа можно достичь при использовании
специфических антител к винблаетину - иммуноферментными методами анализа.
Иммуноферментный метод анализа винбластина в сырье не только значительно сокращает время анализа, но и позволяет производить анализ большого количества образцов сырья практически одновременно, что открывает перспективу его широкого применения при селекции наи более продуктивных по винбластину сортов катарактуса розового.
Цель работы. Целью работы являлась разработка иммуноферментного метода количественного анализа винбластина в катарантусе розовом.
Научная новизна. Впервые разработан иммуноферментный метод количественного анализа винбластина в катарантусе розовом на основе использования антител к конъюгату винбластина с белком, полученному глутаральдегидным методом. Исследовано перекрестное взаимодействие полученных антител о некоторыми алкалоидами катарантуса розового.
Разработан метод определения степени чистоты препаратов винбластина с помощью ВЭЖХ.
Разработаны методы количественного анализа винбластина в катарантусе розовом с использованием ВЭЖХ.
Для всех разработанных методов определены метрологические характеристики.
Практическая ценность работы. Разработанный иммуноферментный метод анализа содержания винбластина в сырье катарантуса розового доведен до возможности практического применения.
Метод определения степеїш чистоты препаратов винбластина и метод количественного анализа винбластина б катарантусе розовом с использованием ВЭЖХ кашли применение при научных исследованиях в
ряде отделов НПО ВИЛЛР и при прозводстве розевина - препарата вин-бластипа, на производствегао-эксперименталыюм заводе НПО ВИЛАР. В ходе работ по усовершенствованию технологии выделения винОластина из сырья проведено исследование стабильности винбласткна в некоторых растворителях.
На защиту выносятся следующие положения:
разработка иммунофэрментного метода количественного анализа вин-блостина в катарантусе розовом;
разработка метода определения степени чистота винбластина и полупродуктов его производства с помощью ВЭЖХ;
разработка метода количественного анализа винбластшо в катарантусе розовом с помощью ВЭЖХ.
Апробация работы и публикации. Отдельные части работы доложены на Пятом Всесоюзном симпозиуме по молекулярной жидкостной хроматографии, Рига, 1990 г. .По материалам диссертации опубликовано четыре научные статьи.
Объем и структура работы. Дкссортецлоина'я работа состоит из сведения, обзора литературы, обсуждения результатов, акетори'.«итм».иой части, выводов и списка цитированной литературы (215 наименовании). Диссертация содержит \66 страшщ машинописного текста, w.man ІІ таблиц и!% рпсушсов.
