Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Разработка иммуноферментных методов определения биологически активных соединений растительного происхождения Еременко, Светлана Николаевна

Данная диссертационная работа должна поступить в библиотеки в ближайшее время
Уведомить о поступлении

Диссертация, - 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Еременко, Светлана Николаевна. Разработка иммуноферментных методов определения биологически активных соединений растительного происхождения : автореферат дис. ... кандидата химических наук : 02.00.10 / МГУ им. М. В. Ломоносова.- Москва, 1993.- 22 с.: ил. РГБ ОД, 9 92-5/1392-X

Введение к работе

Атугуплт^оот*» проСл^ч. Успехи сиотепіологии растений,
особеппо разработка способов пзрйщпвзнпя клоточшх культур
гасшта растеши, позволила значительно облегчить задачу по
лучения змяпокзе соэдпнсшШ растительного происхождения, в
частности локорстЕошиг ECC9CTD. .Прггарош лекарственных ве-
цоств, пепользуегзк D ка.:.»рчоских количествах, могут слу-'
птаь сордочше гдпкозпдц (датасеш, дигптокепп) Digitalis
Inrmta, D. purpurea; протпвоопухолегаз препарата Catharantua
гозеиэ (вяпблзстпз, вппкрпстст); анальгетики Раратег
GOCTirenm (кодеин, ::cpjan) л іпогпо другпэ. Из-за слоішостл
хппчоского состава щегаз продуктов рзститольпого происхож
дения поштея'ХП.ЛЧССЯОГО спітоза,''ясл'о одаокогшопептшп
продуктов, яо всегда успсппи. II по слогах случаях шс бпосип-
тоз в рзстеппл оказывается предлочтитольнгм, IIoDan экспери
ментально созданная спотс::а - клетки п ткапл глсеих расто
пи!, пірспзвзємю па пптатольтіх средах в строго контролиру
ема условиях, позволяет создавать пргшщпиолыго поело тох-
^ологпк'для гіришлошости п сельского хозяйства, однако от
бор нопболоо прддукгигштх клопов при Емрсгдгаания растптзль-
псЗ ткани в культурз бішзог често алтрудлсл пз-аа стсутстгпя
чусстпгтольпого ггогода определения пятсресукатх исследовате
ля сездпісппи. В деппем случае пр^сиснио п^іупогналпза пкэ-
от г-л ирг :':-r.z",z:i ;гр~д трзлЖіспппп методсп, тскт*У! как
zz--'.c".rx;"::~i ;,рс:;г.гогрс"лл. г.::зслс::тро::отрпл,' глссісог'"зі:-
ї.' :";л : ":..;:іос'ліг.а*.трс:гатогрс7":я, ::бо, кск прагпло, для ого
с(;;:;гоі'л;;::птл по грзбуогся c~c:—r.z :{гт-'чг-*гзлглал обработка
сОр"":п, сспр.т,:с!г!ТГ!я с ггсксі uovri "гатл отрэдол.тс:"ГЕ вз-
".'. ( :'. iv;fr" "?р, л"Я Гг'сгггтг* і '"' \-:"::""""\'>), :v -т .г'о?т-
' '''-У-';';.. :: ' ' с" ,' -'"' *:. "'.' - ---^-- .

ное преимущество ихдаоалализп заключается в его экспрессное і: вокїз::лозїп анализировать одновремзкпо до ста образцов.

Среда методов иммукозлализа наиболее популярны:,] становится КША, что объясняется безопасностью а удобством работ с нэрадиоактивпш материалом в сравнении с РИА, а такие елл-роким распространением специальных спектрофотометров, с помощью которых можно проводить измерения оптической плотности в S6 лунках илашета одновременно. Проскольку и в !;?.,, а и РИЛ действуют одни и то х:е термодинамические ограпнчыпм, а присутствие ферментативной меиаі мойві быть обнаружено, если она находится б то:,: ;::а диапазоне молярних концентрации, с каком О0І1ЧИО попользуются радиоактивные изотопы, то чувотвл-телькость и избирательность обоих мэгодов оказызается сравнимой.

Пели и сплаті ітсслг-ідопатш. Целью настоящей рабои: является, создедне 1ц.мулоСермептиых їзет-систем, пршшш.Ы2: для использования в биотехнологии раоїсилй, при опредояошгд сведущих ішзюло'лекуляршіх соединений: стефарина - елкалоида Stephanla glabra Ulers, сбладащого' Едтиголпнэстерогысл активностью; папаверина - алкалоида F.ijever scmnlferua, относящегося к спазмолитическим средствам; дагоксина и родственных соединений - сердечных глпкгшдов Digitalis laaata.

Для достижения этой цели решали следующие задачи:

  1. Синтез коныогпроваяных антигенов шзксиолекуляршх соединений с белковыми носителями, определение степени эшло-щзнпя полученных коньюгатов. Бооор оптимальных концентраций для сорбшш аа пластике при проведении твердофазного ИФА для' выявлении специфических антител.

  2. Получение поликлональных сывороток с высоким" титром антител к стефарину и папаверину. Оценка их специфичности.

  3. Получение мовоклональшп антител к дигоксину, определение их характеристик. Наработка моноклональшх антител в

препаративних количествах, выбор способа очистки антител.

  1. Синтез меченых реагентов для иммунсферментного анализа и подбор оптшалышх рабочих разведений.

  2. Создание на основе получении* антител твердофазных иммунофермеятных тест-систем для определения указанных соединений в экстрактах растений или клеточных культур. Подбор условий проведения экстракции*, и ИФА.

  3. Сравнение результатов анализа проб традиционными методами (ЮЖХ, ТСХ) и результатов, полученных методом ИФА.

Научная новизна. Впервые созданы высокочувствительные
:иммуноферментіше тест-системы для определения стефарина и
папзверинз, осуществлен синтез коньюгировэгашх антигенов и
мечоїшх ферментом алкалоидов. :

Получены и охарактеризованы внеокоэффинные моноклональ-

ные антитела к дигоксину, на основе которых предложен инги-

биторный вариант '-ИФА для определения дигоксина и родственных

. соединений в растительных экстрактах. Специфичность, высокая

чувствительность и точность метода подтверждены с помощью

данных ВЭЮС-анэлизз.

Основные положения, выносимые на зашиту.

Ї. Разработан, твердофазный ИФА для количественного оп-_ ределения стефарина.

. . 2. Разработан, твердефэлшй Шк лля количественного оп- ределешш папаверина. : ;

  1. Получены я охарактеризованы. моноклоналыше ентитела к дигоксину.

  2. Газработан ИФА для количественного определения ди-гоксигекиновых гликозидов.

Практическая значимость работы. Чувствительность разработанных методов и простота выполнения анализа позволяют использовать иастояндае тест-системы в биотехнологии растений для изучешгя условий накопления вторичных метаболитов в растениях и для селекции клеточных клонов.

Твердофазный ИФА определения стефарша шробнроваи і: используется в Институте ф'лзкологак растений для селекции клеточных клопов Stephanie: Glabra, продуцируетдх стефарші. С учетом конкретних условий проведення анализов, бшш.подоОра-іш оптимальные вариапти зкстракщш алкалоидов из влзяной ткаші.

Разработанная тест-система опрэделзкпя дигоксина и родствашшх соединений Сила использована для подтверждения дашшх селекционной раооти по Digitalis lanata. проводимой в НПО ВИЛР.

дпрооашт раооти. Материалы диссертации докладывались на конференциях: Всесоюзной конференции "Современные направления создашш г.:здшшшіх дпагаоетккумов" (декаорь, 1983 г., Москва), Украинской республиканской конференции "Применение іаа!унофор.:еитного анализа в медицине" (ноябрь, 198Э г.)

Цуоликацші. Материала дкссвртащщ отрааенн в 4 статьях, З тезисах.

Объем и структура яиссертаїдн. Диссертация изложена на страшщах машшописного текста із состоит из введения, обзора литературы, теоретической ц экспериментальной частей, выводов, списка литературы, вклшслаего источника. Работа иллюстрирована схемами, " таблицами, рисунками.

.1 '

Похожие диссертации на Разработка иммуноферментных методов определения биологически активных соединений растительного происхождения