Введение к работе
Одной из фундаментальных проблем в современной биологии является изучение молекулярних механизмов, контролирующих стимуляцию активности клеток человека и животных. Важное звено в цепи передачи внешнего сигнала на цитоплазматичес-кие структуры клетки представляет регуляторная система кальция. Одним из путей регуляции кальциевой сигнализаций в-эукариотических клетках моиет служить изменешіе плотности, кальциевых каналов плазматической мембраны.
В настоящее время по электрофизиологическим и фармакологическим критериям различают три типа потенциалозавиеимых кальциевых каналов, обычно обозначаемых как L-, Т- и N-каналы (Fedulova et al. , 1985; Nowycky et al. , 1985). В биохимическом плане наибольший интерес представляют медленно инактивируюшиеся каналы L-типа.
Интенсивное исследование молекулярных и функциональных свойств каналов L-типа стало возможным после того, как было обнаружено, что альфа1-еубъединина канала, являющаяся собственно каналом, содержит высокоаффинные участки связывания соединений трех типов: производных 1,4-дитидролиріщи-на, бензотиазепиков и фенилалкиламинов (Campbell et al. , 1988). Эти соединения избирательно и стереоеелективно взаимодействуют с участками связывания в составе кальциевого канала в наномолярных и ниже концентрациях, инактивируя или, наоборот, активируя канал, что предопределило их широкое использование в фармакологии ( Jenis, Triggle, 1986 ).
Появление радиоактивно меченных производных перечисленных соединений позволяет применять.их в качестве молекулярных зондов при изучении факторов, регулирующих биосинтез
- 2 -кальциевых каналов L-типа, и, соответственно, их содержание в плазматической мембране клеток. При этом наибольший интерес представляют производные 4-арил-1,4-дигидропиридина, центр связывания которых расположен на участке молекулы канала, находящемся с внешней стороны клеточной мембраны.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ: установление факторов, определяющих содержание рецепторов производных 1,4-дигидропиридина, ассоциированных с кальциевыми каналами L-типа, в плазматической мембране эмбриональных фибробластов человека.
Исходя из поставленной цели, были определены следующие задачи исследования:
-
Изучение взаимодействия радиоактивно меченного зонда с фибробластами человека.
-
Определение влияния факторов роста клеток на содержание рецепторов производных 1,4-дигидропиридина.
-
Изучение роли ионов кальция и сАМР в биогенезе рецеп-.торов производных 1,4-дигидропиридина.
-
Выявление роли биосинтеза белка и гликозилирования в биогенезе рецепторов производных 1,4-дигидропиридина.
б. Исследование функциональной роли рецепторов производных 1,4-дигидропиридина, ассоциированных с кальциевыми каналами L-гила, в стимуляции пролиферации фибробластов человека факторами роста клеток.
Установлено, что структурный аналог риодипина 2,6-диме-' ,тил-3-метоксикарбонил-5([2,3-^Н ] пропоксикарбонил)-4-(2'-дифторметокеифенид)- 1,4 -дигидропиридин ( С ШПЩ ) соответствует требованиям, предъявляемым- к молекулярным зондам рецептора производных 1,4-дигидропиридина ( ДТП ), и может
- 3.-
быть использован для детекции рецептора на уровне десятка фмоль в пробе. Впервые методом радиолигандного анализа идентифицирован ДТП-рецептор в плазматической мембране фиб-рсбдзстсв человека. Псглзако, что содержание рецептора зависит от наличия межклеточных контактов, определяется природой фактора роста клеток и, соответственно, пролиферативны.ч статусом клеток, а также уровнем внутриклеточной концентрации ионов кальция и сAMP. При этом биосинтез кальциевых каналов-плазматической мембраны фибробдаст-jB человека, по-видимому, может регулироваться на уровне трансляции.
Полученные данные показывают, что кальциевые каналы
L-типа плазматической мембраны участвуют в пролиферативном
ответе фибробластов человека, что. может найти, непосредс
твенное применение как в биотехнологии, таї и в медицине
для направленного воздействия на пролифгративную активность
клеток. ":"
Основные.результаты работы были долокены на: II Всесоюзной конференции по нейронаукам (Киев, 1988), 14 Международном биохимическом конгрессе (Прага, 1988), 10 Объединенном симпозиуме биохютіческих обществ СССР-ГДР "Механизмы регуляции клеточной активности" (Ташкент, 1989) и конференциях НЩ Медицинской биотехнологии } СССР.
По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ.
СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ
![Расщепление РНК конъюгатами на основе 1,4-диазабицикло[2.2.2]октана и антисмысловых олигонуклеотидов, несущих остатки имидазола](/i/i/4301/324197.png "Расщепление РНК конъюгатами на основе 1,4-диазабицикло[2.2.2]октана и антисмысловых олигонуклеотидов, несущих остатки имидазола Белоглазова Наталья Геннадьевна")
