Введение к работе
Актуальность проблемы- Яды-эмей: и насекомых и их отдельные компоненты шроко используются в практической 'медицине- при лечении различных заболеваний, ' в Фармацевтической промышленности и' в научных исследованиях. Этим, объясняется повышенное внимание исследователей- к разработке высокоэффективных методов фракционирования компонентов ядов,-, выделению и получений в очищенном состоянии отдельных компонентов, . изучению' их физико-химических и функциональных- особенностей,- механизмов-проявления-токсических эффектов-'
В этом отношении яд среднеазиатской кобры является' наиболее изученным: разработаны методы фракционирования его1 компонентов, изучен биохимический'состав, при, этом покззано наличие- в яде целого ряда Ферментов (Фосфолилазы А^» фосфожзстераэы.. АТФ-пирофосФотазы и др.), мембранотактивиых полипептидов, а также нейротоксинов. Особый- интерес : -предстааляйт цитотоксины -мембраноактивные полшэптида с молекулярной массой -6900, которые обуславливают многие токсические эффекты цельного , яда: гемолитическую активность /фкельсон, 1378/, нарушение структурной организации биологических мембран /condrea, tar-t, Арипоз и др., 198S/v разобщение, дыхания и окислительного фосфорилирсвания./Кхсла и др., 1980/'и др.. Наибольшее внимание исследователей привлекает изучение механизма так назьааемого синергического эффекта способности цитотоксина усиливать каталитическое действие фосфолипазыА^.
Предполагается, что этот эффект связан с. образованием каталитически более активных, комплексов фермента с цитотоксином-При этом эффективность комплакссобразования зависит от присутствия фосфолипидэз- Кроме того,. иммобилизованные фосфолипиды
представляют собой высокоэффективные сорбенты ДЛЯ ОЧИСТКИ фосфолипазы. А^- В этой связи можно предположить, что использование цитотоксина и фосфолшидов в.качестве лигандое позволит получить сорбенты для аффинной хроматографии с больной" биоспецифичностью. Настоящая работа представляет . собой ' часть фундаментальных исследований, проводимых в'лаборатории физико-химических методов исследования Института биоорганической химии АН УзССР в соответствии с положениями ГКНТ СССР, Госплана СССР, АН СССР #24/25/13 от 13.02.31 по проблеме 074-05-ОІ.НБ и №23/13 от 03.02.87 по проблеме 13.Н2- '
Цель и задачи исследования. Основной целью, .настоящей работы было исследование молекулярных аспектов взаимодействия фосфолипазы А2 с биоспецифическими ^шгандами., обуславливающими синергический эффект- усиление каталитической активности фермента. В ходе исследования .решались следующие задачи:
- исследование влияния различных Факторов на. комплексо-
образование фосфолипазы А2 и илтотоксина в модельных системах;
.'- изучение каталитических свойств фосфолипазы. ^ в иммобилизованном на специфических лигандах состоянии;
- синтез 'сорбентов с иммобилизованными Оиоспецифическими
лигандами.
. Научная новизна и ' практическая значимость результатов исследования- В -работе впервые изучены иммобилизованные формы цитотоксина \л из яда кобрьи а также билиганлные производные цитотоксина и фосфолипида - фссфатидилэтаналамияа на полиамидных носителях. Изучены условия комплаксообразсвания фосфолипазы А^ из того хе яда с 'цитотоксином, фосфатидилэтаноламином и их смесями в ' модельных системах, в свободном к 'иммобилизованном состояниях. Показано,' что в молекуле фермента- "штзтрксинсвязывающий'* и
"субстратсвязьваюший" участки пространственно разграничены-
Связывание фермента с цитотокеином, независимо от того, находится
он в свободном или иммобилизованном состояния повывает' сродство
фермента к субстрату, что проявляется в повышении эффективности
связывания. Вместе с этим, в бнлигандных сиситемах прочность
комплексоэбразованмя с цитотокеином ' (в .присутствии
фосфотадилэтаноламина) повышается. Определены.оптимальные условия комплексообразования.
На основе полученных данных найдены, наилучшие условия синтеза биоспецкфического' сорбента для билигашшой систеш. Разработаны условия биоспецифической' хроматографии ...фосфолипазы А~ на синтезированных сорбентах. Достигнуто повышений эффективности биоспецифической хроматографии более чем в три раза* '
Наряду с вышеизложенным полученные сведения позволяют по-новому' интерпретировать механизм синергичного действия фосфолипазы А г, и цитотоксина.
В результате настоящих исследований был получен новый, тип биоспецифического' сорбента ,для' очистки фосфолипазы А-, и разработаны условия аффинной хроматографии-этого фермента. Данные, полученные в работе, используются при чтении .лекций 'ПО биотехнологии на биологическом факультете ІашГУ км. В.И ..Ленина-
Апробация работы- Материалы диссертации докладывались на v и vi Всесоюзных симпозиумах по инженерной энзишлогии (2985, 1988), и на Всесоюзной конференции "Выделание, очистка и анализ биологически активных соединений" (1987).
Публикации. . "По теме диссертации, опубликовано .7 печатных работ-
Структура и обьем работы: Диссертация состоит из введения, 3-к глав, обсуждения результатов, выводов и списка цитируемой
литературы. Диссертация представляет собой рукопись ка 109 страницах, включая 14 рисунков и Э таблиц. Список литературы содержит 110 ссылок на работы отечественных и зарубежных авторов-
