Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Сведения о сборах, содержащих комплекс фенольных соединений с антимикробной и диуретической активностью (обзор литературы) 10
1.1. Номенклатура сборов с мочегонной активностью 10
1.2. Сведения о лекарственном растительном сырье в составе исследуемых сборов 13
1.3. Характеристика основных групп биологически активных соединений сборов 28
1.3.1. Качественный анализ и количественное определение:
Флавоноидов 29
Дубильных веществ 35
1.4. Фармакологическая активность фенольных соединений 38
Выводы 41
Глава II. Объекты и методы исследования 42
Глава III. Фитохимическое и технологическое исследование сборов , 57
3.1. Качественный анализ биологически активных соединений сборов 57
3.2. Идентификация и количественное определение:
Флавоноидов и фенолокислот 61
Арбутина 70
Дубильных веществ 72
Кислоты аскорбиновой 76
3.3. Выбор технологии изготовления водного извлечения сборов 77
3.3.1. Определение технологических параметров:
- Коэффициента водопоглощения и коэффициента общей потери экстрагента .77
- Содержания экстрактивных веществ 78
- Содержания биологически активных веществ 79
Выводы 81
Глава IV. Изучение острой токсичности и специфической активности 82
4.1. Установление острой токсичности сборов 82
4.2. Влияние сборов на функцию почек у крыс 83
4.3. Антимикробная активность сборов 93
4.4. Антиоксидантная и прооксидантная активность сборов 98
Выводы 101
Глава V. Стандартизация сборов 102
5.1. Определение подлинности 102
5.1.1. Макроскопический анализ 102
5.1.2. Микроскопический анализ 104
5.1.3. Гистохимический анализ 121
5.2. Определение показателей доброкачественности 131
5.3.Установление сроков годности сборов 133
Выводы 133
Общие выводы 137
Список литературы
- Сведения о лекарственном растительном сырье в составе исследуемых сборов
- Фармакологическая активность фенольных соединений
- Коэффициента водопоглощения и коэффициента общей потери экстрагента
- Антимикробная активность сборов
Введение к работе
Актуальность проблемы. Проблема создания эффективных фитопрепаратов из лекарственного растительного сырья в настоящее время является актуальной [27, 95, 99]. Это связано с тем, что лекарственные средства на основе природных биологически активных соединений обладают преимуществами по сравнению с их синтетическими аналогами, так. как широта терапевтического действия сочетается с минимальными побочными эффектами. Особое значение отводится сборам, которые содержат комплекс БАС, отвечающий- за поливалентное действие на различные системы организма [8, 74, 81, 169].
Перспективным является использование сборов из лекарственного растительного сырья, Алтайского края и республики Алтай - экологически благополучных районов Российской Федерации. Богатый, опыт народной медицины и многочисленные научные исследования дают возможность составлять композиции сборов с направленным фармакологическим действием, которое связано с содержанием определенных групп биологически активных соединений [46, 55, 77, 112].
В* Алтайском государственном медицинском университете на кафедре фармацевтической химии3 с курсами органической и токсикологической химии разработаны и подтверждены патентом (№2249460) составы трех сборов с использованиеМі лекарственного растительного сырья, собранного на территории Алтайского края и республики Алтай. Композиции составлены с учетом проявления мочегонной, антимикробной, антиоксидантной активности, что позволит использовать данные сборы для лечения микробных заболеваний органов мочевыводящей системы.
Необходимо исследовать влияние фармакотехнологических процессов на сохранение комплекса БАС при совместном содержании в сборах и проявлении ожидаемого фармакологического эффекта.
Цель и задачи исследования.. Целью работы являлось фармакогностическое изучение и стандартизация сборов, установление специфической активности.
Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
Изучить, фитохимический состав сборов. Провести разделение и идентификацию БАС, установить их количественное содержание.
Определить технологические параметры сборов и обосновать технологию изготовления водных извлечений.
Определить острую токсичность и специфическую активность -сборов. Провести сравнительный анализ.
Провести морфолого-анатомическое и гистохимическое изучение сборов, выявить диагностические признаки.
Установить показатели подлинности и доброкачественности сборовї ".
Разработать.проекты ФС на сборы.
Научная новизна. Проведено комплексное фармакогностическое, технологическое, фармакологическое и микробиологическое изучение сборов.
Изучен химический состав сборов. Установлено, что комплекс БАС сборов включает дубильные вещества, флавоноиды, фенолокислоты, фенологликозиды, флороглюциды, сапонины, водорастворимые витамины.
Методом ТСХ, ВЭЖХ, СФМ в сборах идентифицированы флавоноиды: рутин, ликвиритин, гиперозид, ликурозид, кверцетин, апигенин. Фенологликозид - арбутин. Фенолокислоты - в* сборе №1 и №2: галловая, коричная, хлорогеновая и ее производные; сборе №3: галловая; хлорогеновая и ее производные.
Изучены дубильные вещества; во всех сборах идентифицированы танин и кислота галловая.
При проведении качественных реакций идентифицирована кислота аскорбиновая в сборах.
Показана целесообразность стандартизации сборов по содержанию дубильных веществ.
Установлено количественное содержание в сборах дубильных веществ, флавоноидов, кислоты аскорбиновой.
Проведена сравнительная оценка качественного и количественного содержания БАС в сборах.
Проведены исследования по определению острой токсичности; установлена мочегонная, антимикробная и антиоксидантная активность сборов.
Определены технологические параметры сборов, показана целесообразность изготовления отваров.
Установлены показатели подлинности и доброкачественности сборов. На основании полученных данных разработаны проекты ФС сборов.
Практическая значимость. В результате проведенных исследований установлена возможность расширения ассортимента лекарственных препаратов на основе растительного сырья за счет использования разработанных сборов и применения их в качестве мочегонного, антимикробного, антиоксидантного средства для лечения микробных заболеваний органов мочевыводящей системы.
Разработаны проекты ФС на сборы.
Степень внедрения. Теоретические положения и результаты экспериментальных исследований используются в учебном процессе и научно-исследовательской работе кафедры фармацевтической химии с курсами органической и токсикологической химии, кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и кафедры фармацевтической технологии Алтайского государственного медицинского университета. Подготовлены к рассмотрению проекты ФС на сборы.
Основные положения, выносимые на защиту. Результаты
фармакогностического, фитохимического, технологического и
8 фармакологического исследования сборов, обладающих мочегонной, антимикробной, антиоксидантной активностью.
Апробация* полученных результатов. Основные материалы диссертации обсуждены на научно-практических конференциях «Актуальные проблемы фармации (г. Барнаул, 2004, 2005, 2006, 2007); «Молодежь -Барнаулу» (г. Барнаул, 2005, 2006, 2007); на Ш Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (г. Барнаул, 2007).
Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук. Диссертационная; работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Алтайского государственного медицинского университета (номер государственной регистрации 01.200316088).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 научных работ, одна из которых в журнале, цитируемом ВАК.
Экспериментальные исследования по теме диссертации выполнялись на базе Алтайского государственного медицинского университета: на кафедре фармацевтической химии с курсами органической и токсикологической химии, на кафедре фармакогнозии с курсом, ботаники (под рук. ст. преподавателя Гербер Т.В.), на кафедре фармакологии (под рук. д.б.н., проф. Лампатова В.В.), на кафедре микробиологии и вирусологии (под рук к.м.н., доц. Юровой В.А.), а также ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Алтайском крае».
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 155 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, трех глав, отражающих результаты собственных экспериментальных исследований, выводов, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 26 таблицами и 85 рисунками. Библиографический указатель включает 170 источников литературы, из них 54 зарубежных.
Во введении изложена актуальность темы, сформулированы цель и задачи* исследования, обозначена новизна и практическая значимость проведенных исследований, описаны положения, выносимые на защиту.
Первая глава содержит обзор отечественной и зарубежной литературы: проведен анализ номенклатуры разрешенных к использованию сборов с мочегонной акшвностью. Приведено описание лекарственного' растительного сырья, входящего в состав сборов. Описаны методы качественного и количественного определения- биологически активных соединений, содержащихся.в сборах; данные по их фармакологической активности.
Вторая глава посвящена описанию объектов и методов исследований;
В третьей главе приведены результаты фитохимических исследований флавоноидов, фенолокислот, фенологликозидов, дубильных веществ, кислоты аскорбиновой, методики стандартизации сборов по содержанию БАС, внесенные в проекты ФС на сборы. Изложены результаты определения технологических параметров и технологии водных извлечений сборов.
Четвертая глава содержит результаты изучения острой токсичности и специфической активности сборов (мочегонной, антимикробной, антиоксидантной).
В пятой главе приведены результаты морфологического, микроскопического, гистохимического анализа, установлены показатели подлинности и доброкачественности сборов, использованные для разработки НД на сборы.
В приложении представлены данные хроматографических, спектрофотометрических исследований БАС, результаты изучения сроков годности сборов, протоколы лабораторных исследований по определению микробиологической чистоты, пестицидов, радионуклидов, особотоксичных элементов, проекты ФС на сборы, основные документы, подтверждающие внедрение результатов диссертационной работы.
Сведения о лекарственном растительном сырье в составе исследуемых сборов
В народной медицине Алтая растение используется для лечения туберкулеза легких, гриппа, суставного ревматизма. Отвар бадана понижает артериальное давление и увеличивает частоту сердечных сокращений, применяется как средство от поносов и при лихорадке. Из бурых листьев заваривают чай, который пьют при тиреотоксикозе [14, 54]. В монгольской медицине бадан используют при рвоте и тошноте [54, 58].
Корневища с корнями валерианы - Rhizoma cum radicibus Valerianae (ГФ XI ст. 77). Собранные осенью или ранней весной, освобожденные от остатков листьев и стеблей, отмытые от земли и высушенные корневища с корнями культивируемого и дикорастущего растения - валерианы лекарственной (Valeriana officinalis L.) семейства валериановые (Valerianaceae). Представляют собой цельные или резанные корневища длиной до 4 см, толщиной до 3 см с рыхлой сердцевиной, часто полые, с поперечными перегородками. От корневища со всех сторон отходят многочисленные тонкие придаточные корни и подземные побеги - столоны. Корни часто отделены от корневища: гладкие, ломкие, различной длины, толщиной до 3 мм. Цвет корневища и корней желтовато-коричневый, на изломе от бледно-желтого до коричневого. Запах ароматный. Вкус пряный, сладковато-горький [56, 60, 68].
Корневище и корни валерианы содержат от 0,5 до 2,4% эфирного масла, в состав которого входят борнилизовалерианат, изовалериановая кислота, валереналь, борнеол, пинен, терпинеол. Обнаружены свободная валериановая и валереновая кислоты, валепотриаты, тритерпеновые гликозиды, дубильные вещества, алкалоиды (валерин, хатинин). Из неспецифических действующих веществ: сахара, органические кислоты, свободные амины [47, 60, 79].
Применяют корневища с корнями валерианы в виде настоя, настойки, экстракта в качестве успокаивающего средства при нервном возбуждении, бессоннице, судорогах, мигрени, истерии, эпилепсии, гипертонической болезни, неврозах сердечно-сосудистой системы, спазмах кровеносных сосудов и внутренних органов, для лечения астмы, при функциональных нарушениях эндокринных желез, заболеваниях печени и желчных путей, несахарном мочеизнурении, климактерических расстройствах. Наружно - для лечения нейродермитов [8, 60, 99, 169].
В народной медицине применяется как сердечное средство, при истерии, головных болях, эпилепсии, скарлатине, воспалении легких, в качестве глистогонного [54, 59].
Трава володушки - Herba Bupleuri multinervis (ВФС 42-580-96). Собранная в период цветения и высушенная трава дикорастущего многолетнего травянистого растения володушки многожильчатой (Bupleurum multinerve DC.) семейства зонтичных (Umbelliferaceae). Сырье состоит из смеси облиственных стеблей с бутонами, цветками, плодами, частично осыпавшимися и измельченными. Прикорневые и нижние стеблевые листья ланцетные или, с 5-7 параллельными жилками, суженные в черешок длиной от 1 до 6 см. Средние и верхние листья сидячие, с сердцевидным стеблеобъемлющим основанием. Цвет стеблей и листьев зеленый или грязно-зеленый. Зонтики крупные с 5-15 лучами и обертками. Зонтички многоцветковые, с оберточками; цветки желтые. Плод — овальный, сжатый с боков вислоплодник с крылатыми ребрами. Запах своеобразный; вкуса не имеет [54, 60, 79].
В траве володушки содержатся: сапонины, алкалоиды, флавоноиды до 6-8% (рутин, кверцетин, изокверцетин, рутинозид), аскорбиновая кислота, каротин, дубильные вещества, эфирные масла, фитостерин [54, 60, 99, 120].
Володушка обладает антисептическим, ранозаживляющим действием. Усиливает секреторную деятельность печени и поджелудочной железы, изменяет химический состав желчи: увеличивает содержание желчных кислот, билирубина, холестерина, используется для лечения холециститов, гепатитов [54, 95, 99]. Рекомендована при капиляротоксикозах, геморрагических диатезах, глазных кровоизлияниях, кровоточивости носа, десен и других органов, отеках сосудистого происхождения, нефритах [60, 99, 145, 160].
В народной медицине Средней Азии употребляется отвар корней при малярии, для заживления ран [54, 64].
Цветки календулы - Flores Calendulae (ГФ XI ст. 5). Собранные в начале распускания трубчатых цветков, высушенные соцветия — корзинки культивируемого однолетнего травянистого растения календулы лекарственной (Calendula officinalis L.) семейства астровые (Compositae). Представляет собой цельные или частично осыпавшиеся корзинки диаметром до 5 см, без цветоносов или с остатками цветоносов длиной не более 3 см. Обертка одно-двурядная, серо-зеленая, из линейных заостренных густо опушенных листочков. Цветоложе слегка выпуклое, голое. Краевые цветки ложноязычковые, длиной 15-28 мм, шириной 3-5 мм- с изогнутой короткой опушенной трубкой и трехзубчатым отгибом с 4-5 жилками, вдвое превышающим обертку. Они расположены в 2-3 ряда у немахровых ив 10-15 рядов у махровых форм. Пестик с изогнутой нижней одногнездной завязью, тонким столбиком и двулопастным рыльцем. Срединные цветки трубчатые с пятизубчатым венчиком. Цвет краевых цветков красновато-оранжевый, оранжевый или желтый; срединных: — оранжевый, желтовато-коричневый или желтый. Запах слабый, вкус солоновато-горький [56, 60, 68, 72].
Цветки ноготков содержат каротиноиды до 3% (а- и Р-каротин, ликопин, лютеин, виолоксантин, цитраксантин, неоликопин, хризантемоксантин, флавоксантин, рубиксантин); кумарины, флавоноиды - до 4% (изорамнетин, кверцитрин), сапонины, эфирное масло, горькие (календен) и дубильные вещества, смолы около 3,5%, слизь 2,5%, азотсодержащие соединения 1,5%, полисахариды, органические кислоты: яблочная, пентадециловая и салициловая, следы алкалоидов [60, 79, 80, 156].
Фармакологическая активность фенольных соединений
Являясь наиболее активными веществами большинства лекарственных растений, фенольные соединения определяют их . желчегонную, противовоспалительную, противоаллергическую, сосудорасширяющую, антимикробную активность [38; 47, 77, 79, 151]; Используются для лечения язвенной болезни желудка, бронхиальной астмы, геморрагического синдрома, почечной недостаточности, болезней сердца, сосудов, печени [2, 73, 119, 159].
Большинство фенолов лекарственных растений практически нетоксичны [5,6,156].
Несмотря на разнообразие, растительные фенольные соединения обладают общностью химической структуры, а именно наличием системы сопряженных связей и свободных гидроксильных групп, что обусловливает легкость отдачи молекулами фенолов электрона, их участие в окислительно-востановительных и других биохимических реакциях [3,35, 40].
Фенольные соединения и их обратимо окисленные формы (семихиноны, хиноны) способны взаимодействовать с рядом ферментов. Установлено угнетающее действие флавоноидов на активность фосфодиэстеразы, что определяет спазмолитическое действие растительных препаратов [36; 137]. Выявлено ингибирующее действие флавоноидов и антрахинонов на активность цитохрома Р-450 1А1-зависимых ферментов печени, что сопровождается подавлением мутагенности пищевых канцерогенов [160]: Флавоноидные гликозиды подавляют активность ферментов аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы, что обусловливает гепатопротекторное действие флавоноидов [164].
Биологическое действие фенолов обусловлено способностью хелатировать ионы переходных металлов [33, 107, 138} и нейтрализовать свободные радикалы, что сопровождается инактивацией ферментативных реакций и лежит в основе антиоксидантного действия [2, 35, ИЗ, 115], которое характерно практически для всех растительных фенольных соединений. Так, флавоноиды способны ингибировать перекисное окисление липидов в опытах in vitro и in vivo [118, 130, 141, 148].
Антиоксидантное действие фенольных соединений лежит в основе гепатопротекторной и радиопротекторной активности лекарственных растений [10, 12], благоприятном воздействие на организм при таких заболеваниях, как атеросклероз, ишемическая болезнь сердца, диабетические ангиопатии, нейродегенеративные и аутоиммунные заболевания, рак, катаракта и др. [94, 129, 154]. В механизме антиоксидантного действия растительных фенольных соединений выделяют три основных момента: 1 - подавление процесса генерации клетками супероксидных радикалов [168]; 2 - хелатирование ионов двухвалентного железа, ионов меди, кобальта, марганца, молибдена, цинка, алюминия, присутствие которых ускоряет окислительные процессы [2, 19, 35, 168]; 3 -инактивация свободных радикалов (прямое антирадикальное действие) [2, 35, 113]. Большей активностью обладают флавоноиды и фенол окислоты, в меньшей степени антиоксидантные свойства проявляют дубильные вещества [163].
Противовоспалительной активностью обладают представители всех видов растительных фенольных соединений - как фенол окислоты, так и дубильные вещества [2, 123, 146]. По сравнению с синтетическими стероидными и нестероидными противовоспалительными средствами, фенольные соединения отличаются меньшей силой, но более мягким и постепенным действием [3, 8, 126].
Флавоноиды, дубильные вещества и фенолокислоты способствуют уплотнению биологических мембран (стенок лизосом, клеточных оболочек), благодаря чему уменьшается выход медиаторов воспаления — гистамина, протеаз, нуклеаз [2, 132, 141, 147, 151]. Выявлена- способность фенолов, усиливать секрецию глюкокортикоидных гормонов, подавляя воспалительную реакцию [3, 27, 47,159].
Антибактериальное действие БАС обусловлено наличием ароматического кольца, фенольных гидрокси- и метоксигрупп [2, 83, 121, 145, 166]. Механизм бактерицидного действия растительных препаратов связывают с нарушением целостности цитоплазматической мембраны микробной клетки, что происходит в результате инактивирования ферментов, участвующих в процессе синтеза жирных кислот [125, 149, 170].
Высокая антибактериальная активность установлена у флавоноидов [11, 47, 157, 162, 167]. Наиболее активными среди них являются соединения с незамещенным кольцом В [11]. Флавоноиды активны по отношению к грамположительным, грамотрицательным микроорганизмам, грибам рода Candida, а также холерным вибрионам [136, 144, 157]. Отмечена высокая активность гидролизуемых танинов в отношении Helicobacter pillory [125]. При этом фенольные соединения активны в отношении антибиотикорезистентных штаммов и проявляют синергизм с синтетическими антибактериальными препаратами [22, 121, 122, 153].
Коэффициента водопоглощения и коэффициента общей потери экстрагента
При изготовлении водных извлечений из лекарственного растительного сырья и сборов для проведения исчерпывающей экстракции необходимо учитывать коэффициент водопоглощения. Возникла необходимость, установления данного технологического показателя исследуемых сборов [66]; Данные представлены в таблице 19.1
Для подтверждения достоверности полученных данных изучали коэффициент общей потери экстрагента, предложенный Чижовой Е.Т. с соавторами. Данная методика позволяет учесть гистологические особенности лекарственного растительного сырья, вид получаемого извлечения (отвар, настои, настойка и т. д.), содержание в сырье отдельных групп биологически активных веществ, например, дубильные вещества [109]. Результаты определения представлены в таблице 19.
Как видно из таблицы 19, значения коэффициента водопоглощения и общей потери экстрагента для сбора №1 соответственно составили: 1,88±0,17 и 1,89±0,19; для сбора №2: 1,79±0,13 и 1,81±0,22; для сбора №3: 1,79±0,16 и 1,84±0, 31. Значения коэффициентов не имеют достоверных отличий, при изготовлении извлечений в дальнейшем использовали коэффициент водопоглощения.
Определение содержания экстрактивных веществ в настоях и отварах сборов Рациональное использование сборов предусматривает применение извлечений из них с максимальным выходом биологически активных веществ. Возникла необходимость подобрать рациональную лекарственную форму сборов для экстемпоральной рецептуры по содержанию экстрактивных веществ в настоях и отварах. Полученные данные представлены на рис. 6.
Установили, что при изготовлении настоев и отваров сбора №1 извлекается соответственно 20,19%; 22,53% и 25,61% экстрактивных веществ; из сбора №2 -20,13%; 22,62% и 24,96%; из сбора №3 - 20,49%; 22,79% и 25,87%.
Определение содержания биологически активных веществ в отварах При проведении фотохимических исследований были изучены входящие в состав сборов биологически активные вещества: флавоноиды, дубильные вещества, водорастворимые витамины (аскорбиновая кислота) и установлено их количественное содержание.
При изготовлении водных извлечений из лекарственного растительного сырья, содержащего дубильные вещества, рекомендуется процеживать отвары, минуя стадию охлаждения, но, помимо дубильных веществ, исследуемые сборы содержат флавоноиды и кислоту аскорбиновую, также отвечающие за фармакологическое действие. Определяли содержание биологически активных веществ в отварах, процеженных без и после охлаждения. Результаты представлены на рисунке 7.
Как видно из диаграмм, при охлаждении сборов происходит потеря дубильных веществ. Так, в сборе №1 при охлаждении отвара, обнаруживается 4,89±0,09% дубильных веществ, в отваре, процеженном без охлаждения -5,82±0,19%; из сбора №2 - после охлаждения - 4,55±0,15%, без охлаждения -5,44±0,13%; сборе №3 - 5,05±0,11% и 6,25±0,17% соответственно.
Кроме того, при охлаждении отваров происходила потеря витамина С. В отваре сбора №1 без охлаждения его содержание составило 219,1±9,2мг%, после охлаждения 210,3±6,4мг%; отварах сбора №2 - 251,3±6,1мг% и 226,2±8,1мг%; отварах сбора №3 - 203,1±7,2мг% и 188,2±8,1мг% соответственно. На содержание флавоноидов в отварах сборов технология изготовления влияет незначительно. В отваре сбора №1 без охлаждения содержание флавоноидов составило 0,91±0,03%, после охлаждения - 0,95±0,041%; отварах сбора №2 -0,81±0,05% и 0,85±0,038%; отварах сбора №3 - 2,33±0,Ю% и 2,38±0,09% соответственно.
Исходя из полученных результатов можно сделать вывод о том, что оптимальным видом извлечения сборов является отвар, процеженный без охлаждения. 1. В результате проведения фотохимических реакций установлено наличие в сборах: флавоноидов, фенологликозидов, флороглюцидов, дубильных веществ, сапонинов, водорастворимых витаминов. 2. Проведено разделение и идентификация флавоноидов и фенолокислот сборов. Установлено, что сборы содержат флавоноиды: рутин, ликвиритин, гиперозид, ликурозид, кверцетин, апигенин. Идентифицированы фенолокислоты: сбор №1 и №2 - галловая, коричная, хлорогеновая и ее производные; сбор №3 - галловая, хлорогеновая и ее производные. 3. В результате качественного анализа дубильных веществ, установлено, что они представлены конденсированной и гидролизуемой группами. В сборах идентифицированы танин и кислота галловая. 4. Проведен качественный анализ фенологликозидов сборов, идентифицирован арбутин. 5. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин составило: сбор №1 -0,44±0,015%; сбор №2 - 0,60±0,02%; сбор №3 - 1,06±0,04%. 6. Количественное содержание дубильных веществ составило: сбор №1 — 7,27±0,21%; сбор №2 - 6,67±0,19%; сбор №3 - 7,45±0,20%. 7. Содержание кислоты аскорбинвой: сбор №1 - 226,2±5,1мг%; сбор №2 -246,1±4,2мг%; сбор №3 -207,1±6,3мг%.
Антимикробная активность сборов
Антибактериальную активность отваров сборов определяли методом погружения микробной взвеси в лекарственную форму с последующим высевом на питательную среду - мясо-пептонный агар (МПА)[69].
Сущность методики состоит в следующем: исследуемые отвары сборов №1, №2, №3 разводили в соотношении 1:1 средой Сабуро для грибов рода Candida, средой №8 для грамотрицательных условно-патогенных микроорганизмов (Е. coli, Ps. Aeruginosa), средой №3 для стафилококков. В качестве контроля использовали физиологический раствор, который также разводили соответствующей средой в соотношении 1:1.
В работе использованы 29 штаммов патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, выделенных из клинического материала от больных с гнойно-воспалительными, гинекологическими, урологическими, стоматологическими заболеваниями. Микроорганизмы относились к семействам: Enterobacteriaceae - Escherichia Coli - 6 штаммов, Pseudomonadaceae - Pseudomonas aeruginosa - 7 штаммов, Micrococcaceae - Staphylococcus epidermidis - 3 штамма, Staphylococcus aureus - 6 штаммов, грибы рода Candida -7 штаммов.
Для проведения исследований выращивали суточную культуру на скошенном МПА, стандартизовали по стандарту мутности на 10 единиц. Стандартизованную микробную взвесь в объеме 0,02 мл откалиброванной петлей вносили в отвары. Через 30 минут, 1 час, 2 часа, 24 часа делали высевы на МПА. Чашки с посевами инкубировали в термостате при 37С в течение 24 часов, подсчитывали количество колоний.
Результаты исследования антимикробной активности отваров в отношение грибов рода Candida представлены в таблице 24.
Как видно из таблицы 24, ни один из исследуемых отваров не проявлял выраженной антимикробной активности в отношении грибов рода Candida. Количество колоний микроорганизмов при высеве из отваров достоверно не отличалось от такового при высеве из физиологического раствора (рис. 14). количества колоний по сравнению с физиологическим раствором (Р 0,002). При высеве после 24-х часовой инкубации наблюдали сплошной рост микроорганизмов как в физиологическом растворе, так и в отварах.
Результаты изучения антимикробной активности отваров сборов в отношении эпидермального стафилококка представлены в таблице 25.
Как видно из таблицы 25, изучаемые отвары оказывали антибактериальное действие на эпидермальные стафилококки уже через 30 минут после инкубации микробной культуры в лекарственной форме. Так, из физиологического раствора высеяно 109,6 колоний микроорганизмов; из отвара сбора №1 — 81,0; отвара сбора №2 - 82,6; отвара сбора №3 - 74,6. Разница статистически достоверна (Р 0,003, Р 0,0001, Р 0,0002 соответственно). После часовой экспозиции из физиологического раствора высевалось 117,3 колонии; из отвара сбора №1 - 71,3; отвара сбора №2 - 78,0; отвара сбора №3 - 71,1 (Р 0,002, Р 0,0001, Р 0,00006) (рис. 15). Наиболее выраженное угнетение размножения Staphylococcus epidermidis наблюдается через 2 часа (Р 0,0001, Р 0,0003, Р 0,001). Из отвара сбора №1 высевается 29,0 колоний; отвара сбора№2—36,3; отварасбора№3—43,7, тогдакак из раствора сравнения-104,3 колонии.
Через 24 часа после инкубации микробной взвеси Staphylococcus epidermidis в отварах и в физиологическом растворе наблюдали сплошной рост колоний микроорганизмов.
При высеве микроорганизмов на питательные среды из отваров и физиологического раствора без временной экспозиции не наблюдалось достоверного уменьшения количества колоний (рис. 16). Через 30 минут и 1 час после экспозиции микробной взвеси в отварах сборов №2 и №3 наблюдали достоверное уменьшение количества колоний (через 30 минут из физиологического раствора высевалось 60,0 колоний, из отвара сбора №2 - 30,0; из отвара сбора №3 - 46,3; через 1 час - в физиологическом растворе 64,6 колоний; отваре сбора №2 - 41,0; отваре сбора №3 - 41,3). Через 2 часа все отвары проявили антимикробное действие в отношении Staphilococcus aureus с достоверностью Р 0,002. Так, в контрольном растворе высеяно 66,3 колонии микроорганизмов; отваре сбора №1 - 47,0; сбора №2 - 39,6; сбора №3 - 44,6.
Выраженное антимикробное действие отваров сборов проявилось через 24 часа. В то время как из физиологического раствора высевалось более 100000 колоний Staphylococcus aureus, из отвара сбора №1 всего 8, из отвара сбора №2 -в среднем 6,25, а из отвара сбора №3 - 5,6 колоний. Разница статистически достоверна (Р 0,00001, Р 0,000002, Р 0,000001) соответственно.
