Введение к работе
Актуальность темы. Среди большого арсенала лекарственных препаратов, обладающих анальгезирующим и жаропонижающим действием, важное место занимает парацетамол. Наиболее часто он используется в детской практике. Особый интерес для проведения судебно-химической экспертизы представляют вопросы превращения лекарственных веществ. Парацетамол в организме претерпевает изменения с образованием ряда метаболитов, одним из которых является очень токсичное вещество п-аминофенол.
Наряду с терапевтическим эффектом при пере дозировках парацетамол оказывает побочное и токсическое действие на организм. В судебной химической практике известны случаи острых отравлений парацетамолом.
Широкое применение в медицинской практике, токсическое действие при передозировках и смертельные случаи придают этому лекарственному веществу определенное токсикологическое значение. Несомненно, что возможность определения одного из метаболитов лекарственного вещества в трупном материале расширит границы судебно-медицинской экспертизы и позволит судебно-следственным органам иметь более веские доказательства при решении вопроса об отравлении. Разработанные методики определения парацетамола в биологических жидкостях не применимы при общем ходе химико-токсикологического анализа биологического объекта на лекарственные препараты. Не изучены оптимальные условия извлечения из водных растворов п-аминофенола, что не позволяет сделать выбор наиболее подходящих растворителей для экстракции изучаемого лекарственного вещества и его основного метаболита п-аминофенола из вьпяжек и для очистки парацетамола после выделения из биологического материала. Не предложены частные методики изолирования, обнаружения и определения парацетамола в трупном материале. В доступной литературе не описаны методики обнаружения парацетамола и п-аминофенола при совместном присутствии, а также не определена чувствительность цветных реакций при обнаружении обоих веществ.
Отсутствуют данные о сохраняемости парацетамола при гнилостном разложении биологического материала, что очень важно при проведении судебно-химического анализа на наличие указанных веществ.
Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования является разработка методологического подхода к выделению, обнаружению, и определению парацетамола и п-аминофенола для проведения судебно-химических исследований с использованием современных физико-химических методов анализа.
Решение поставленной цели возможно с помощью следующих задач:
- найти оптимальные условия разделения и обнаружения парацетамола и п-аминофенола методами ТСХ, ГЖХ, ВЭЖХ;
- изучить оптимальные условия экстракции парацетамола и п-аминофенола из водных растворов органическими растворителями в зависимости от различных факторов;
- изучить возможность использования при анализе извлечений из печени на исследуемые вещества методов ТСХ, ГЖХ, ВЭЖХ;
- провести сравнительное изучение по выделению парацетамола и п-аминофенола из печени общепринятыми судебно-химическими методами изолирования;
- предложить схему и методологический подход к анализу трупного материала на парацетамол и п-аминофенол;
- изучить сохраняемость парацетамола и его основного метаболита при гнилостном разложении печени трупов.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук Диссертационная работа выполнена по плану научно исследовательских работ Пятигорской государственной фармацевтической академии (номер государственной регистрации N° 01960009199) и соответствует проблеме «Фармания» межведомственного научного совета JV 38.
Научная новизна работы На основе сравнительной оценки результатов исследований найдены оптимальные условия разделения и способы детектирования парацетамола и п-аминофенола с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ);
- разработаны условия разделения и обнаружения и количественного определения парацетамола и п-аминофенола с помощью методов газожидкостной хроматографии (ГЖХ) и высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Предел обнаружения ГЖХ методом 0,1 мг парацетамола и 0,05 мг п-аминофенола, ВЭЖХ методом 2,3 мкг/мл парацетамола, 30 мкг/мл п-аминофенола;
- изучены условия экстранщи парацетамола и п-аминофенола из водных растворов органическими растворителями, показано, что максимум экстракции парацетамола наблюдается при рН 1-7 эфиром без электролитов, п-аминофенол экстрагируется при рН 5-7 етилацетатом в присутствии электролитов;
- научно обоснована и разработана схема обнаружения, изолирования и определения парацетамола из трупного материала (печени), по нативному соединению и по продукту гидролиза парацетамола п - аминофенолу;
- впервые изучена сохраняемость парацетамола при гнилостном разложении трупного материала. Парацетамол и его метаболит п-аминофенол можно обнаружить в консервированной этанолом печени в концентрации 5 % и 24 % соответственно в течение двух лет.
Практическая значимость работы и внедрение результатов исследования.
Предложены методики идентификации и количественного определения парацетамола и п-аминофенола в вытяжках из биологического материала методами газожидкостной и высокоэффективной жидкостной хроматографии, полуколичественного определения методом тонкослойной хроматографии. Разработанные методики анализа парацетамола и п-аминофенола рекомендованы для использования в химико-токсикологических лабораториях с целью определения их подлинности и диагностики отравления. Методики имеют ряд преимуществ: позволяют в одной пробе одновременно определять парацетамол и п-аминофенол.
Материалы внедрения. Предложенные методики апробированы и внедрены в практику судебно- химических лабораторий Краевого клинического Бюро судебно - медицинской экспертизы Ставропольского края и Бюро судебно -медицинской экспертизы Астраханской области. Составлено информационное письмо «Определение парацетамола в биологическом материале при проведении судебно-химического исследования», проект которого принят к рассмотрению в Российском центре судебно-мелининской экспертизы г. Москва (вх-№ 290 от 1(1.02.03).
Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены на 53 и 55 региональных конференциях но фармании, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 1997,2000 гг.)
Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ.
Основные положения выносимые на защиту.
- результаты разработки методик обнаружения и количественного определения парацетамола и п-аминофенола при совместном присутствии;
- результаты разработки методик пробоподготовки, изолирования и очистки извлечений, содержащих парацетамол и п-аминофенол, из объектов биологического происхождения (печени трупа);
- способы обнаружения и количественного определения парацетамола и п аминофенола в извлечениях из биологического материала (печени трупа);
- критерии сохраняемости парацетамола и п-аминофенола в трупном материале в зависимости от времени и условий хранения;
- схема и результаты выбора общего методологического подхода к анализу трупного материала, содержащего парацетамол.
Структура и объем работы. Диссертационная работа изложена на 140 страницах печатного текста, и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (3 главы), общих выводов, списка литературы. В диссертации приводится 14 рисунков и 41 таблица. Библиографический указатель включает 137 источников, из них 78 на иностранных языках.
