Содержание к диссертации
Введение
1. Гипоксия и проблема защиты организма от кислородной недостаточности 16
1.1. Классификация гипоксии 16
1.2. Митохондриальная дисфункциия при гипокии 18
1.3. Проблема фармакологической защиты организма от кисло родной недостаточности 21
1.4. Фармакологическая коррекция гипоксии 22
1.4.1 .Синтетические антигипоксанты 23
1.4.1.1. Производные мочевины 24
1.4.1.2. Амиды 29
1.4.1.3. Макроциклы 30
1.4.1.4. Азот- и серусодержащие гетероциклы 33
1.4.1.5. Антиоксиданти 50
1.4.1.6. Другие соединения 53
1.4.2. Биологически активные соединения индола 57
1.4.3. Растительные антигипоксанты 58
2. Синтез соединений 61
2.1. Синтез и свойства ацилгидразонов изатина и индандиона-1,2 63
2.1.1. Производные 3-семикарбазона изатина 63
2.1.2. 2-Тио- и семикарбазоны изатина и их свойства 67
2.1.3. Получение новых гидразонов 1,2-индандиона и его производ ных, исследование их строения 70
2.2. Синтез конденсированных производных индола 72
2.2.1. Получение 2,3-дигидро-3-тиоксо-1,2,4-триазино[5,6-Ь]индола и его производных 72
2.2.2. Получение имидазо[4,5-Ь]индол-2тиона и его производных 73
2.2.3. Новый подход к синтезу тиазоло[5,4-Ь]индолов, получение новых производных и их свойства 77
2.2.4. Синтез 2-алкилтио-З-формилзамещенных производных индола 80
2.3. Экспериментальная часть 82
3. Материалы и методы фармакологического исследования 106
3.1. Экспериментальные животные 106
3.2. Лекарственные средства сравнения и объекты исследования 106
3.3. Методы исследования 113
3.3.1. Методика определения острой токсичности 113
3.3.2. Методики исследования антигипоксического действия 113
3.3.2.1. Гипоксическая (гипобарическая) гипоксия 113
3.3.2.2. Гипоксия с гиперкапнией 114
3.3.2.3. Гемическая гипоксия 114
3.3.2.4. Гистотоксическая гипоксия 114
3.3.3. Методика исследования противоэдематозного действия 115
3.3.4. Методика исследования гепатотропного действия 117
3.3.5. Методики исследования работоспособности 118
3.3.5.1. Определение оптимальной дозы по методике предельного плавания 118
3.3.5.2. Физическая выносливость в неосложненных условиях по методике бега на третбане 118
3.3.5.3. Определение выносливости в условиях гиперкапнии 119
3.3.6. Методика исследования противосудорожного действия 120
3.3.7. Методики исследования мембранотропного действия 120
3.3.8. Статистическая обработка результатов опытов 122
4. Фармакологические исследования новых соединений 123
4.1. Изучение острой токсичности новых соединений 123
4.1.1. Производные имидазо[4,5-Ь]индола 123
4.1.2. Производные тиазоло[5,4-Ь]индола 123
4.1.3. Производные 2-тио-З-формилиндола 124
4.2. Фармакологическая активность ацилгидразонов изатина, индандиона-1,2 и продуктов их циклизации 125
4.2.1. Антигипоксическая активность ацилгидразонов изатина, индандиона-1,2 и продуктов их циклизации 125
4.2.2. Антигипоксическая активность солей 8-метокси-3-(2-мор- фолиноэтилтио)-1,2,4-триазино[5,6-Ь]индола 129
4.2.3. Другие виды фармакологической активности ацилгидразонов изатина и триазиноиндолов 130
4.2.4. Актопротекторные свойства 1 -тиосемикарбазона З.З-дифенилиндандиона-1,2 131
4.3. Фармакологическая активность производных имидазо[4,5-Ь]индола 134
4.3.1. Антигипоксическая активность производных имидазо[4,5-Ь]индола 134
4.3.2. Противосудорожное действие производных имидазо[4,5- Ь]индола 140
4.3.3. Актопротекторная активность 143
4.3.4. Другие виды активности производных имидазо[4,5-Ь]индола.144
4.3.4.1. Противоэдематозное действие 144
4.3.4.2. Гепатопротекторное действие 145
4.3.4.3. Вирусингибирующая активность 145
4.3.5. Обобщение данных по биологической активности производных имидазо[4,5-Ь]индола 145
4.4. Фармакологическая активность производных тиазоло[5,4-Ь]индола 147
4.4.1. Антигипоксическая активность производных тиазоло[5,4-Ь]индола 148
4.4.2. Исследование противоэдематознои активности производных тиазоло [5,4-Ь] индола 156
4.4.3. Гепатопротекторное действие производных тиазоло[5,4-Ь]индола 161
4.4.4. Исследование корреляции между защитным действием при гипоксии, отеке легких и токсическом поражении печени 163
4.4.5. Актопротекторное действие производных тиазоло[5,4-Ь]индола 165
4.4.6. Противосудорожное действие производных тиазоло [5,4-Ь]индола 170
4.4.7. Обобщение данных по биологической активности производных тиазоло[5,4-Ь]индола 171
4.5. Исследование антигипоксических свойств в гомологическом ряду 2-аминотиазола 174
4.6. Фармакологическая активность производных 2-алкилтио- 3-(цианимид)формилиндола 181
4.6.1. Антигипоксическая активность 181
4.6.2. Противоэдематозное действие 183
4.6.3. Гепатопротекторное действие 185
4.6.4. Обобщение данных по биологической ативности производных 2-алкилтио-3-(цианимид)формилиндола 186
5. Изучение мембранотропнои активности соединений тиазолоиндольного ряда 189
5.1. Характеристика ионных каналов 190
5.2. Сравнение антигипоксических свойств исследуемых соединений 194
5.3. Влияние антигипоксантов тиазолоиндольной структуры на калиевые ионные токи 195
5.4. Влияние антигипоксантов тиазолоиндольной структуры на кальциевые ионные токи 199
5.5. Влияние антигипоксантов тиазолоиндольной структуры на натриевые токи 200
5.6. Обобщение результатов мембранотропного исследования 201
6. Обсуждение полученных результатов 204
6.1. Сравнение фармакологических свойств производных имидазо[4,5-Ь]- и тиазоло[5,4-Ь]индола 204
6.1.1 .Антигипоксическая активность 204
6.1.2. Противоэдематозное действие 206
6.1.3. Гепатопротекторное действие 207
6.1.4. Актопротекторное действие 208
6.1.5. Противосудорожное действие 208
6.2. Сравнение фармакологических свойств аналогичных соединений в рядах 1,2,4-триазино[5,6-Ь]- и -[6,5-Ь]индолов 209
6.2.1. Антигипоксическая активность 209
6.2.2. Противоэдематозное действие 209
6.2.3. Гепатопротекторное действие 210
6.2.4. Противовоспалительное действие 210
6.2.5. Актопротекторное действие 211
6.3. Биологическая активность неконденсированных производных индола 211
Заключение 213
Выводы 220
- Митохондриальная дисфункциия при гипокии
- Антиоксиданти
- Синтез конденсированных производных индола
- Лекарственные средства сравнения и объекты исследования
Введение к работе
Одной из важнейшей задач экспериментальной и клинической фармакологии является поиск лекарственных средств для повышения выживаемости человека в условиях острой гипоксии. Ситуации, приводящие к развитию кислородного голодания организма, многочисленны: заболевания органов дыхательной и сердечно-сосудистой систем, нарушение функций желез внутренней секреции, изменение интенсивности тканевого обмена при наркозе, отравление различными ядами, действие больших физических нагрузок, нарушение штатной работы систем регенерации воздуха в обитаемых отсеках летательных аппаратов при полетах на большой высоте, подводных лодок и других подводных объектов, при нахождении в условиях средне- и высокогорья. В перечисленных ситуациях необходимо сохранение нормальной жизнедеятельности человека. Проблема гипоксических состояний и их последствий имеет особо важное значение для медицинской службы армии, Военно-морского флота, Военно-воздушных сил, космической медицины, а также для других служб экстренного реагирования (Пас-тушенков Л.В., Лесиовская Е.Е., 2003; Ушаков И.Б. и др., 2006).
Первые отечественные антигипоксанты были разработаны на кафедре фармакологии Военно-медицинской академии им. С.М.Кирова в 1960-х гг. (гутимин, амтизол, бемитил). Химически они представляют собой производные тиомочевины и тиобензимидазола (Арбузов С.А., Пастушенков Л.В., 1969; Виноградов В.М., Криворучко Б.И., 2001). В дальнейшем было показано, что и для других гетероциклических соединений (например, производных пиримидина, пиперазина, 3-оксипиридина, индола) характерно антигипоксическое действие (Воронина Т.А., 2001; Новиков В.Е. и др., 2004). В исследованиях последних лет выявлена у производных триази-но[5,6-Ь]- и -[6,5-Ь]индолов поливалентная биологическая активность с преобладанием антигипоксической, часто превосходящей активность эта лонных препаратов, например, амтизола (Томчин А.Б. и др., 1997). Индоль-ный цикл входит во многие известные лекарственные препараты синтетического и биогенного характера - триптофан, индометацин, арбидол и др. Конденсирование индольного цикла с триазином, имидазолом, тиазолом дает возможность получения широкого спектра новых химических соединений, обладающих биологической активностью. Сравнительно небольшой арсенал подобных соединений предполагает поиск новых активных препаратов как узкой направленности (например, антигипоксантов, актопротекторов, гепатопротекторов), так и веществ с широким спектром действия.
Целью настоящей работы явилось изучение биологической активности новых соединений в рядах конденсированных производных индола, полученных направленным синтезом как предполагаемых антигипоксантов.
В задачи исследования входило:
1. Изучение строения и связи химических и фармакологических свойств ацилгидразонов изатина и производных индандиона-1,2.
2. Получение новой конденсированной системы индола - имидазо[4,5-Ь]индола и ее производных; разработка новых удобных способов получения тиазоло[5,4-Ь]индола, триазино[6,5-Ь]индола и новых 2-алкилтиопроизвод-ных 3-формилиндола - для изучения спектра их биологической активности.
3. Изучение фармакологической активности новых производных индола для выявления перспективных антигипоксантов, актопротекторов, гепатопротекторов, противоэдематозных средств, установление зависимости между структурой и активностью.
4. Выявление и отбор наиболее активных соединений для дальнейшего экспериментального и клинического изучения.
Научная новизна
Доказана перспективность поиска новых лекарственных препаратов антигипоксического действия в рядах конденсированных производных индола, содержащих в сочлененном гетероцикле фрагмент тио- или изотиомоче-вины. Получена новая гетероциклическая система - имидазо[4,5-Ь]индол и ее производные, разработаны новые подходы к синтезу тиазоло[5,4-Ь]индола и 2-алкилтиопроизводных 3-формилиндола, триазино[6,5-Ь]индола, синтезированы на их основе новые биологически активные соединения. Изучено биологическое действие впервые выделенных геометрических изомеров 3-семикарбазона изатина и N-метилизатина, новых ацилгидразонов 1,2-индандиона, а также влияние тонкой структуры на биологическую активность, которое особенно существенно при изучении противовирусного действия. Антигипоксическая активность ацилгидразонов изатина и их циклических производных не равнозначна и зависит от строения триазинового цикла и заместителей в молекуле.
Впервые показано, что оригинальные соединения на основе конденсированных производных индола малотоксичны, обладают антигипоксическим, актопротекторным, противоэдематозным, гепатопротекторным и противовирусным действием, что тиазолоиндолам свойственна мембранотропная активность.
Сравнительный анализ зависимости между структурой и активностью в каждом ряду и между аналогичными соединениями в разных рядах (всего изучено более 100 соединений) не выявил прямой корреляции между анти-гипоксической и другими видами активности. Это свидетельствует об отсутствии универсального антигипоксического механизма действия при различной патологии, что связано, по-видимому, не только с их метаболическим типом действия, но и с влиянием на ионные каналы мембран. Установлено, чем большей антигипоксической активностью обладает соединение, тем больше защитных свойств оно проявляет при других экстремальных воздействиях химической, физической или биологической природы.
В результате проведенных исследований сложилось новое научное направление - химия и фармакология неизвестных ранее конденсированных систем индола, содержащих в цикле тио- и изотиомочевинные группировки. Показано, что изучение биологической активности в зависимости от строения открывает возможности конструирования новых эффективных лекарственных препаратов широкого спектра действия.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Для изучения биологической активности важно знание тонкой структуры впервые выделенных геометрических изомеров 3-семикарбазона изатина и N-метилизатина и их взаимных превращений. Разработан новый подход к синтезу 2-производных изатина с использованием малотоксичных реагентов, изучены направления реакции 1,2-индандиона и его производных с тиосемикарбазидами и семикарбазидами, установлены конфигурации полученных продуктов. Впервые совместно изучена антигипоксическая активность ацилгидразонов изатина и их циклических производных - триазино-индолов.
2. На основе оригинального синтеза новой гетероциклической системы конденсированного индола - имидазо[4,5-Ь]индола - получены, химически и фармакологически охарактеризованы ее производные. Разработан новый удобный способ получения другой конденсированной системы - тиазо-ло[5,4-Ь]индола, получены и охарактеризованы новые соединения этого ряда. Осуществлен синтез и фармакологическое изучение новых 2-алкилтио-З-формилпроизводных индола.
3. Результаты фармакологического изучения производных имидазо[4,5-Ь]индола, тиазоло[5,4-Ь]индола, триазино[5,6-Ь]индола и 2-алкилтиопроиз-водных 3-формилиндола позволили выделить 17 перспективных соединений, обладающих антигипоксическими, противоэдематозными, гепатопро-текторными и актопротекторными свойствами. Среди исследованных соединений наиболее перспективными для использования в медицинской практи ке являются 4-ацетилимидазо[4,5-Ь]индол-2тион, 2-амино-4-ацетилтиазо-ло[5,4-Ь]индол, 2-метилтио-З-цианимидоформилиндол.
4. В результате изучения антигипоксических свойств в гомологическом ряду 2-аминотиазола на четырех моделях гипоксии доказана целесообразность сочетания его структуры с индолом, что обеспечивает усиление биологической активности.
5. Новые производные тиазоло[5,4-Ь]индола обладают мембранотроп-ной активностью в отношении основных клеточных ионных каналов (Na, К, Са).
6. Конденсированные соединения индола, содержащие в сочлененном ядре фрагменты тио- или изотиомоч евины активно защищают организм от воздействия различных факторов химической, физической и биологической природы.
Научно-практическое значение
Изучение антигипоксической активности ацил- и тиоацилгидразонов изатина и 1,2-индандиона и их циклических производных показало равнозначность действия Z- и Е-изомеров 3-семикарбазона изатина и различие у соединений с открытой цепью и их циклическими производными. При противовирусном действии более активны соединения в Z-форме.
Разработаны новые технологичные методы синтеза неизвестных ранее биологически активных замещенных имидазо[4,5-Ь]индола, тиазоло[5,4-Ь]индола, триазино[6,5-Ь]индола и новых 2-алкилтиопроизводных 3-формилиндола.
Изучена биологическая активность новых соединений и показано наличие мощных антигипоксических свойств у производных ряда имидазо[4,5-Ь]индола и тиазоло[5,4-Ь]индола. Углубленное исследование биологической активности новых антигипоксантов выявило ее поливалентный характер, наиболее перспективные соединения отобраны в качестве потенциальных средств для использования в медицинской практике. Так, соединения 4 ацетилимидазо[4,5-Ь]индол-2-тион, 2-амино-4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]индол и их бромзамещенные аналоги обладают ярко выраженной антигипоксическои активностью на моделях гипоксической, гиперкапнической и гемической гипоксии. Другие соединения - 2-амино-4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]индол и его производные - активно защищают организм от токсического воздействия фосгена (противоэдематозная активность), те же соединения и 2-алкилтиопроизводные 3-цианимидформилиндола - от воздействия четырех-хлористого углерода (гепатопротекторная активность), других токсикантов. По результатам исследований получено 15 патентов РФ и авторских свидетельств на изобретения, подано 8 заявок (положительные решения по 4 заявкам) на патенты РФ, внедрено 87 рационализаторских предложений.
Апробация работы
Основные результаты работы доложены на V съезде фармакологов СССР (Ереван, 1982); Всероссийской научной конференции «Антигипоксан-ты и актопротекторы: итоги и перспективы» (Санкт-Петербург, 1994); Всероссийской конференции по химии гетероциклов памяти А.Н.Коста (Суздаль, 2000); научной конференции «Молодые ученые и специалисты здравоохранению Санкт-Петербурга в XXI веке» (Санкт-Петербург, 2000); международной конференции «Медико-биологические исследования чрезвычайных ситуаций» (Санкт-Петербург, 2001); международной конференции «Химия и биологическая активность азотистых гетероциклов и алкалоидов» (Москва, 2001); Всероссийской конференции «Нейрофармакология в XXI веке» (Санкт-Петербург, 2002); Ш Всероссийской конференции «Гипоксия. Механизмы, адаптация, коррекция» (Москва, 2002); 3-м Всероссийском съезде научного общества фармакологов «Фундаментальные проблемы фармакологии» (Москва, 2003); Всероссийской научно-практической конференции «Терапевтическая помощь в экстремальных ситуациях» (Санкт-Петербург, 2003); 15-й международной научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии», посвященой 300 летию Санкт-Петербурга (Санкт-Петербург, 2003); Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной неврологии, психиатрии и нейрохирургии» (Санкт-Петербург, 2003); Всероссийской научной конференции «Фармакотерапия гипоксии и ее последствий при критических состояниях» (Санкт-Петербург, 2004); международной научной конференции «Нейрохимия. Фундаментальные и прикладные аспекты» (Москва, 2005); 36-м Всемирном конгрессе по военной медицине (Санкт-Петербург, 2005); IV Всероссийской конференции «Гипоксия. Механизмы, адаптация, коррекция» (Москва, 2005), научной конференции по боли (Самара, 2005), научно-практической конференции «Современные проблемы военной и экстремальной терапии» (Санкт-Петербург, 2005), 4-й международной научной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» (Москва, 2006); 5-м Всероссийском симпозиуме « Война и здоровье» (Москва, 2006); всеармейской научно-практической конференции «Инновационная деятельность в Вооруженных силах Российской Федерации» (Санкт-Петербург, 2006).
Апробация работы прошла на совместном научном заседании кафедр фармакологии, военно-медицинского снабжения и фармации, токсикологии и медицинской защиты Военно-медицинской академии им. С.М.Кирова МО РФ (2006).
Публикации По теме опубликовано 66 работ, из них 18 статей в центральных журналах, получено 15 патентов РФ и авторских свидетельств СССР, подано 8 заявок (4 положительных решения) на патенты РФ, внедрено 87 рационализаторских предложений.
Связь задач исследования с проблемным планом
Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Военно-медицинской академии им С.М.Кирова по проблеме «Медицина катастроф».
Структура и объем диссертации
Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований, заключения, выводов, научно-практических рекомендаций, списка литературы и приложений. Она изложена на 286 страницах машинописного текста, содержит 62 таблицы, 41 рисунок. Библиографический указатель включает 372 источника литературы, из них 89 на иностранных языках.
Митохондриальная дисфункциия при гипокии
Согласно современным представлениям (Лукьянова Л.Д., 2004) аэробный синтез энергии осуществляется в митохондриях - специализированных сложноорганизованных внутриклеточных мультиферментных органеллах, имеющих двойную мембрану (наружную и внутреннюю) и внутримембран-ное пространство - матрикс. Группа ферментов и белков, участвующих в процессах окислительного фосфорилирования и образования АТФ, локализованных во внутренней мембране митохондрий и кристах, получила название «митохондриальной дыхательной цепи». Она представляет собой муль-тиферментную систему, которая акцептирует восстановительные эквиваленты от доноров-субстратов и способствует их переносу к молекулярному кислороду с помощью расположенных в строгой последовательности окислительно-восстановительных переносчиков. По своим физико-химическим и функциональным свойствам ферменты митохондриальной дыхательной цепи объединены в четыре митохондриаль-ных ферментных комплекса (МКФ I-IV). Связующими звеньями переноса восстановительных эквивалентов между МКФ являются специальные посредники - высокомолекулярные переносчики, способные участвовать в окислительно-восстановительных реакциях. Один их них - убихинон (CoQ) -обеспечивает связь между комплексами I и И, с одной стороны, и комплексом III - с другой. Второй посредник - низкомолекулярный белок цитохром С, который осуществляет связь между комплексами III и IV. Именно к митохондриям направлен основной поток кислорода из внеклеточной среды. В таких клетках, как нейроны и кардиомиоциты до 80-90% поступающего в клетку кислорода потребляются митохондриями. Биоэнергетическая гипоксия (Лукьянова Л.Д., 1997) - это сложный, фазный процесс, развивающийся при разных формах кислородной недостаточности, в основе которого лежат последовательные изменения свойств МФК, приводящие к нарушениям энергосинтезирующей функции дыхательной цепи, которые начинаются на субстратном и распространяются к терминальному участку. По механизму действия можно выделить три стадии биоэнергетической гипоксии. I стадия связана с инактивацией NAD-зависимого пути окисления и сопутствующим усилением сукцинатоксидазного пути (компенсаторная стадия биоэнергетической гипоксии). II (некомпенсируе- мая) стадия биоэнергетической гипоксии характеризуется подавлением элек-тронтранспортной функции дыхательной цепи в области цитохромов в-с. III (терминальная) стадия биоэнергетической гипоксии характеризуется ингиби-рованием ЦХО (цитохромоксидазы) в условиях аноксии.
Очевидно, что фазные нарушения функции митохондриальных ферментов сопутствуют практически любым формам гипоксии или ишемии и включаются в них в качестве обязательного элемента как базисный молекулярный (биоэнергетический) механизм. Ингибирование митохондриальных ферментных комплексов, подавление аэробного синтеза энергии и дизрегуляцию энергозависимых функций и метаболизма клетки вызывает не только неадекватное снабжение тканей и органов кислородом, возникающее как в условиях экзогенной гипоксии, так и при патологиях, связанных с нарушением дыхательной, сердечнососудистой систем и транспортной функции крови, но и различные эндо- и экзотоксикозы, вызванные ядами дыхательной цепи. Последние могут подавлять ее функцию в любом участке (барбитураты, пиерицидин, ротенон -МКФ I; малонат - МКФ II; антимицин - МКФ III; цианиды, оксид углерода, азид - МКФ - IV). Таким образом, расширяется понятие гистотоксической (цитотоксической) гипоксии, которая раньше считалась результатом исключительно только ингибирования ЦХО. Особенностью энергетического обмена является отсутствие в организме централизованного обеспечения его энергетических запросов. Тем не менее появляется все больше данных о том, что энергетический обмен находится под гормональным контролем. Изучение этих взаимодействий приобретает особое значение при гипоксии. Рецепторные системы и нейромедиаторы могут отвечать за включение компенсаторных метаболических реакций, модулирующих и контролирующих энергетический обмен в этих условиях (Кондрашова М.Н. и др., 1996; Курлаев С.Н. и др., 1992). В силу этого существуют сложные взаимодействия между системной реакцией организма на гипоксию, развивающейся по типу стресс-реакции, и изменениями, происходящими в клетке и приводящими к биоэнергетическим нарушениям. Реакция организма на дефицит кислорода является отражением сложного полифункционального ответа клетки, координированного нейрогуморальними механизмами, где в общей иерархии внутриклеточных процессов энергетический обмен выполняет триггерную роль, а нарушение функции митохондриальных ферментных комплексов является базисным механизмом любой формы гипоксии.
В клинической физиологии считается общепринятым факт решающей роли гипоксии как в возникновении, так и в течении многих заболеваний. По механизму действия антигипоксанты принято разделять на две основные группы: вещества, корригирующие работу систем транспорта кислорода к тканям, и метаболические антигипоксанты. Последние восстанавливают функции дыхательной цепи в клетке. Назначение антигипоксантов - оптимизация процессов доставки кислорода к тканям или восстановление нормального функционирования дыхательной цепи митохондрий. Дефицит энергии, лежащий в основе любой формы гипоксии, приводит к качественно однотипным метаболическим и структурным сдвигам в различных органах и тканях (Боголепов Н.Н., 1979; Виноградов В.М., 1973; Лукьянова Л.Д., 1989). Необратимые изменения и гибель клетки при гипоксии обусловлены нарушением многих метаболитических путей в цитоплазме и митохондриях, возникновением ацидоза, активацией свободнорадикально-го окисления, повреждением биологических мембран, затрагивающим как липидный бислой, так и мембранные белки, включая ферменты. Рассматривая биоэнергетику клетки при гипоксии во всей ее сложности, следует подчеркнуть комплексный характер развивающихся нарушений, тесно связан- ных друг с другом причинно-следственными отношениями: недостаточная энергопродукция в митохондриях при гипоксии обуславливает развитие многообразных неблагоприятных сдвигов, которые в свою очередь нарушают функции митохондрий и приводят к еще большему энергодефициту, что, в конечном счете, может вызвать необратимые повреждения клеток и гибель. «Реанимация» на клеточном уровне - один из путей предупреждения необратимых состояний. С развитием этого направления связаны надежды на удовлетворительное решение проблемы защиты организма от гипоксии, особенно при тяжелых травмах и шоке. Такой подход заключается в разработке нового класса фармакологических препаратов - антигипоксантов, способных предотвратить, уменьшить или ликвидировать проявления гипоксии благодаря поддержанию энергетического обмена в режиме, достаточном для сохранения структуры и функциональной активности клетки хотя бы на уровне допустимого минимума (Смирнов А.В., Криворучко Б.И., 1998). Идея фармакологической коррекции гипоксических состояний сформировалась в середине прошлого столетия. Кафедра фармакологии Военно-медицинской академии им. С.М.Кирова является пионером в создании и развитии антигипоксантов и актопротекторов, веществ, которые помогают переносить различные чрезвычайные ситуации и нагрузки. Идея известного отечественного фармаколога и токсиколога Н.В.Лазарева, возглавлявшего кафедру в середине 1950-х годов, о фармакологической защите от физических факторов внешней среды, вот уже более полувека является основой научной работы кафедры.
Антиоксиданти
Наиболее часто в комплексную терапию гипоксических состояний включаются природные антиоксиданты, относящиеся к двум группам: витамины Е (токоферолы) (Власов А.П. и др., 2000; Guarnieri С. et al., 1978; Dip-lock А., 1985; Ekiel I.H. et al., 1988), А и К ( Burton G.W. et al., 1985), кароти-ноиды (Ревина A.A., 1996; Terao J., 1994; Ozhogina O.A., Kasaikina O.T., 1995), витамин С и ферментативные антиоксиданты. К последним относятся супероксиддисмутаза и каталаза, комбинированное применение которых имеет наиболее выраженный антиокислительный эффект. Известно, что при гипоксии и ишемии стимулируется метаболизм ара-хидоновой кислоты (Nikolov R., Rimen А., 1984) и вероятный механизм анти-гипоксической активности а-токоферола объясняют его способностью «улавливать» свободные радикалы и подавлять превращение арахидоновои кислоты (Овчаров Р. и др., 1986). В последние годы проводится интенсивный поиск синтетических анти-оксидантов, способных компенсировать при гипоксических состояниях органов и тканей организма недостаток природных антиоксидантов, поступаю- щих с пищей. Наиболее далеко исследования в этой области продвинулись в отношении применения производных 3-оксипиридина, в частности мексидо-ла. Следует отметить, что они являются структурными аналогами соединений витамина В6, играющего роль природного антиоксиданта в организме (Владимиров Ю.А., Арчаков А.И., 1972; Бубнова В.И., Черногубова Е.А., 1993; Вагнер Е.А. и др., 1997). К естественным для организма компонентов дыхательной цепи митохондрий, участвующих в переносе электронов, относится убихинон. Убихинон используют в комплексной терапии больных ишемической болезнью сердца, при инфаркте миокарда (Машковский М.Д., 1987). Из средств, формирующих искусственные редокс-системы, в медицинскую практику внедрен олифен [натриевая соль (2,5-дигидроксифенилен)-4-тиосульфокислоты], представляющий синтетический полихинон. Антигипок-сический эффект препарата связан, в первую очередь, с наличием в его структуре полифенольного хинонового компонента, участвующего в переносе электронов по дыхательной цепи. Исследования на экспериментальных моделях гипоксическои, циркуляторнои, гемическои и тканевой гипоксии показали, что препарат обладает отчетливыми антигипоксическими и антирадикальными свойствами (Смирнов B.C., Кузмич М.К., 2001; Тургенева Л.Б. и др., 1997; Новиков В.Е., Тургенева Л.Б., 1993; Барсуков Ионол (дибунол) - один из основных синтетических препаратов, являющихся ингибиторами свободнорадикальных процессов.
Внедрен в практическое здравоохранение (Машковский М.Д., 2002). В связи с антиокси-дантными и антигипоксантными свойствами ионола изучается его эффективность при различных заболеваниях, сопровождающихся перекисным окислением липидов. Антиоксиданты - оксипиридины и упомянутые выше токоферолы -оказывают защитное действие при ишемических и реперфузионных повреждениях различных органов и играют существенную роль в защите тканей от усиления процессов перекисного окисления липидов (Виленко М.В., 1989). В ряду антиоксидантов биогенного типа антигипоксическое действие установлено у ноотропа нооглютила [1Я-(5-гидроксиникотиноил)-а-глутаминовой кислоты], который по антигипоксической и антиамнестиче-ской активности превосходит многие известные ноотропные средства (Воронина Т. А. и др., 1990; Кузнецова Е.А. и др., 1980). Арбидол обладает комплексом ценных фармакологических свойств, являясь иммуномодулятором, индуктором интерферона и антиоксидантом. Наличие у арбидола антиоксидантных свойств позволяет ему функционировать в качестве ловушки для перекисных соединений (Глушков Р.Г., Гусько-ваТ.А., 1999). Одним ИЗ эталонных антигипоксантов является оксибутират натрия (натриевая соль у-оксимасляной кислоты). По химическому строению и фармакологическим свойствам у-оксимасляная кислота (ГОМК) близка к у-аминомасляной кислоте (ГАМК). Препарат оказывает антигипоксическое действие и повышает устойчивость организма, в том числе тканей мозга, сердца, а также сетчатки глаза к кислородной недостаточности. Оказывает также противошоковое действие (Машковский М.Д., 1997). Механизм действия оксибутирата натрия при гипоксии складывается из двух компонентов: антигипоксического и прогипоксического - сукцинатогенного (Кондрашова М.Н.идр., 1977). Антигипоксические эффекты янтарной кислоты были реализованы в препарате лимонтар, представляющем смесь янтарной и лимонной кислот в соотношении 4:1. В эксперименте было показано, что однократное внутри-брюшинное введение лимонтара повышает устойчивость беременных животных к острой гипоксической гипоксии (Корнеев и др., 1990). Парентеральная форма янтарной кислоты представлена препаратом реамберин, который применяется в качестве детоксикационного средства, обладающего антигипок-сантным и антиоксидантным действием (Исаков В.А. и др., 2001). Препарат мафусол, представляющий собой раствор фумарата (субстрат цикла Кребса) и хлорида натрия, оказался особенно эффективным (Селиванов Е.А. и др., 1994). Урюповым О.Ю. разработан первый антидот против острого отравления СО, представляющий собой комплексный препарат цинка - бис(1-винилимидазол)цинкацетат.
Антигипоксический эффект соединений цинка связан с изменением функциональных свойств молекулы гемоглобина (Урю-пов О.Ю., Сумина Э.Н., 1985). Запатентованы 1-амино-2,3-Дигидро-1Н-индены и их соли, применяемые в качестве лекарственных средств при гипоксии и гипоксемии (Патент R- аминосодержащие радикалы; R ,R2,R3,R4,R5,R6-anKH арил, гетарил, галоген. У нестероидного противовоспалительного препарата вольтарена (ор-тофена) - натриевой соли 2-(2,6-дихлорфениламино)фенилуксусной кислоты обнаружены антигипоксические свойства (Кузнецова В.М., 1986). Для адаптации человека в условиях повышенного нервного напряжения, при глубоководных погружениях предложены антигипоксические средства вышеуказанного строения (А.с. НРБ 40837). Запатентовано производное бутеновой кислоты -4-ClC6H4COCH=C(COOMe)NHC6H4CF3-3, - проявляющее несколько более выраженную антигипоксическую активность по сравнению с гутимином (А.с. 1519172). В условиях гипоксической нормобарической гипоксии установлена ан-тигипоксическая активность известного противоэпилептического препарата депакина, превосходящая таковую у оксибутирата натрия (Островская Р.У., 1982). Антиконвульсант дифенин, производное гидантоина, в термокамере проявляет дозозависимый антигипоксический эффект, особенно наглядно его защитное действие проявляется на модели гипобарической гипоксии (Островская Р.У., 1982). Для проверки гипотезы о том, что стимуляторы а-адренорецепторов могут привести к уменьшению потребности организма в кислороде, и, следовательно, к увеличению устойчивости к гипоксии, в работе (Кулинский В.И. и др., 1982) экспериментально исследован рецепторный механизм антиги-поксического действия а-адреноагонистов. гипоксии изученные препараты располагаются в следующем порядке: клофелин нафтизин мезатон. В работе (Машковский М.Д. и др., 1987) изучен ряд ингибиторов биосинтеза простагландинов: ибупрофен, ортофен, бутадион и ацетилсалициловая кислота - на моделях гипоксической гипоксии с гиперкапнией, асфикси-ческой гипоксии и циркуляторной гипоксии. Исследования показали, что ибупрофен оказался эффективным антиги-поксантом на разных моделях гипоксических состояний у различных видов животных. Ортофен менее активен, а бутадион и ацетилсалициловая кислота не проявляют заметного антигипоксического действия. Синтезированы и изучены антигипоксические свойства некоторых 4-иминохроменов на модели гипоксической гипоксии (А.с. 1746675). Показано, что соединения 4-иминохроменов по антигипоксическому действию превосходят пирацетам и в то же время обладают гипотензивной и антиаллергической активностью.
Синтез конденсированных производных индола
Активно защищают организм от экстремальных факторов успешно внедренный в клиническую практику бемитил (2-этилтиобензимидазол) (Машковский М.Д., 1993) и алмид (2-аллилтиобензимидазол) (Виноградов В.М., Криворучко Б.И., 2001). Они содержат фрагмент изотиомочевины в имидазольном кольце. В развитие этих работ была поставлена задача синтезировать для биологических испытаний производные индола, содержащие конденсированное имидазольное кольцо по стороне Ь, то есть имидазо[4,5-Ь]индол-2-тион (2.29) и его производные. В литературе описана гетероциклическая система 9Н-имидазо[1,2-а] индола, в которой имидазольный цикл сочленен с индольным по другой связи (Khan М.А., Polya J.B., 1968), тогда как рассматриваемые имидазоин-долы до сих пор не были известны. С целью последующей циклизации в имидазоиндол (2.29) мы попытались получить 2-оксо-З-индолилтиокарбамид (2.25) взаимодействием гидрохлорида З-амино-2-индолинона (2.26) (Schachat К.Е. et al., 1951) с роданидом калия в присутствии уксусной кислоты (рис. 7).
Однако эта реакция не привела к цели и из реакционной смеси были выделены 2 соединения (2.27) и (2.28), каждое из которых содержит в молекуле два индол ьных фрагмента. Одно из них (2.27) оказалось изоиндиго, а второе дизамещенной тиомочевинной (2.28). Поскольку 2-оксо-З-индолинилтиокарбамид (2.25) получить не удалось, мы решили синтезировать изомерное ему соединение, содержащее тио-карбамидную группу в положении 2 индольного кольца. При этом для защиты от окисления необходимо ацетилирование по индольному атому азота. Поэтому в качестве исходных веществ были выбраны 1-ацетил-З-индолинон (2.30а) (Островская В.М., Горкер И.А., 1967; Baileanu D. et al., 1967) и, наряду с ним, его бромпроизводное (2.306) (Островская В.М., Горкер И.А., 1969). Выбор последнего был обусловлен тем, что, по нашим данным, введение атома брома в производные триазиноиндола усиливает их актопротекторное действие. Кроме того, выбор в качестве объектов исследования бромирован-ных соединений упрощает расшифровку масс-спектров, а также спектров ПМР, так как уменьшает вероятность взаимного наложения сигналов ариль- ных протонов (Томчин А.Б., 1990). і С целью получения аминопроизводных по второму положению проведено бромирование соединений (2.30а, б), без выделения бромпроизводные (2.31а, б) вводят в реакцию с аминами.
В результате было получено несколько аминопроизводных общей формулы (2.32), такие соединения под действием калия роданида в уксусной кислоте легко циклизуются в производное ди-гидроимидазогидроксииндола общей формулы (2.33) (приложение 1, табл. 10). В определенных условиях, а именно при нагревании в диметиловом эфире диэтиленгликоля с метафосфорной кислотой происходит дегидратация с образованием соединений искомой структуры (2.34). В ИК спектрах (приложение 1, табл. 14) отсутствуют полосы поглощения в области 2500-2600 см-1, присущие группе SH, однако содержатся полосы, приписанные группе C=S, подобно близкому к исследуемым веществам по строению бензимида-зол-2-тиону (Ouchi A., Takeuchi Т., Taminaga J., 1970). Таким образом, для полученных производных имидазоиндола преобладает тионная таутомерная форма. Для получения структуры подобной лекарственному препарату беми-тилу провели алкилирование по атому серы в щелочной среде и получили ряд соединений структуры (2.35) с различной длиной углеродной цепи радикала (рис. 9). Если ту же реакцию тиона (2.34) проводить в водном растворе в присутствии избытка щелочи, то алкилирование сопровождается гидролизом ацетильной группы. В этом случае получаются S-алкильные производные (2.36). Строение соединений доказано с помощью спектров ПМР (приложение 1, табл. 11, 12) и наличием молекулярных и других дочерних ионов в масс-спектрах (приложение 1, табл. 13). Почти все описанные превращения (рис. 9) сопровождались появлением некоторого количества продуктов рециклизации (2.38) и образованием небольших количеств изоиндиго (2.39) (рис. 10). Способ получения описанных выше тионов имидазоиндола отличается от известного общего способа получения имидазолтионов нагреванием солей а-аминокетонов с роданидами щелочных металлов или аммония в водном растворе, обычно приводящего сразу к получению дегидратированных соединений (Абрамова Н.Д., Тржцинская Б.В., 1988). В нашем случае использование в этих реакциях воды в качестве реакционной среды неприемлемо, так как вызывает превращения в ином направлении. Попытки варьирования реакционной среды и дегидратирующего агента показали, что изменение найденных нами условий дегидратации недопустимо. Таким образом, нам удалось найти простой и эффективный способ синтеза производных новой гетероциклической системы имидазо[4,5-Ь]индола, которые могут обладать биологической активностью. Известны биологическая активность производных 2-аминобензтиазола и его производных ( Кочинова Е.Ф. и др., 2000), а также, что многие антиги-поксанты содержат тиазольные циклы (А.с. СССР 1074096, 1088328, 1095612).
Нам было интересно выяснить, обладают ли фармакологической активностью и, в частности, антигипоксической производные тиазоло[5,4-Ь]индола, содержащие в своей структуре фрагмент изотиомочевины, который характерен для антигипоксантов амтизола, бемитила. Конденсированные соединения тиазола с индолом по стороне b известны с 1971 г. (Абраменко П.И., 1971), однако они использовались как исходный продукт для синтеза полиметиновых красителей, применяемых в качестве фотосенсибилизаторов (Абраменко П.И., Пономарева Т.К., 1972; Абраменко П.И., Пономарева Т.К., 1983; Дзюбенко В.Г.,Абраменко П.И., 1986). Ранее описана методика получения производных тиазоло[5,4-Ь]индола (Абраменко П.И., 1971), исходя из 3-оксима изатина, связанная с двумя трудоемкими стадиями с общим выходом от 14% до 27%. С целью оптимизации и упрощения процесса исходным соединением для синтеза, как и в случае получения имидазо[4,5-Ь]индола, служит 1-ацетил-3-индолинон (2.30а) и его 5-бромпроизводное (2.306), которые бро-мируются в диоксане в положение 2 (рис. 11). Без выделения соединений (2.31а, б) их вводят в реакцию с тиомочевиной и получают сразу гидробромиды аминов дигидротиазологидроксииндола (2.40а, б). Последние действием в воде ацетата натрия переводят в основания (2.40в, г). Соединения (2.40) подвергаются дегидратации легче, чем имидазоин-долы (2.33)-+(2.34). При кипячении в диметиловом эфире диэтиленгликоля в течение 5 мин. образуется система (2.41), даже при нагревании (2.40) в спирте, по данным ТСХ, происходит частичная дегидратация (рис. 11) (приложение 1, табл. 15). Строение соединений подтверждается ИК, ПМР спектрами (рис. 11) (приложение 1, табл. 16). Общий выход по структуре (2.41) составляет 60-80%. Разработанный способ получения конденсированных производных тиа-зола отличается от известных ранее (Абраменко П.И., 1971). С целью модификации биологически активных соединений проводят ацилирование аминогруппы соединений (2.416, г). В расплаве янтарного ангидрида за 40 мин. получают имиды (2.43а, б). При взаимодействии с янтарным ангидридом в растворе ДМФА при 130 С в течение 40-45 мин. получают амид янтарной кислоты (2.42). При кипячении (2.416) в уксусном ангидриде получают ацетильное производное (2.44а). Исходя из литературных данных, для соединений (2.42, 2.43) можно предположить наличие актопро-текторных свойств. Таким образом, нами найден новый, удобный и более эффективный, в отличие от известных ранее, способ получения потенциально биологически-активных производных тиазоло[5,4-Ь]индола. Поскольку 3-тиопроизводные 1,2,4-триазино[5,6-Ь]индола, содержащие в конденсированном с индольным ядром гетерокольце фрагмент тиомочеви- ны, проявляют защитные свойства от различных экстремальных факторов, мы решили синтезировать близкие по строению производные 2- тиопиримидо[4,5-Ь]индола (2.45).
Лекарственные средства сравнения и объекты исследования
Острую токсичность определяли на белых беспородных мышах самцах массой 18-22 г (Прозоровский В.Б., 1978; Прозоровский В.Б., 1994), изучаемое соединение вводили внутрибрюшинно однократно в виде суспензии в воде с добавлением твина-80. Полученные данные приведены в табл. 1. Все соединения исследовали в эквимолярных дозах по отношению к амтизолу (стандартному антигипоксанту) в дозе 25 мг/кг (Л.Д.Лукьянова (ред)., 1990). Гипоксическую гипоксию моделировали на крысах самцах массой 180-200 г. помещением их в проточную барокамеру, исключающей накопление двуукиси углерода [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Москва (2000), ее. 153-158]. Препараты вводили внутрибрюшинно за 30 мин до эксперимента. Животных поднимали на «высоту» 11000 м со скоростью 50 м/сек, время пребывания на «высоте» 30 мин. Регистрировали время жизни на «высоте» и процент выживших животных. Гипоксическую гипоксию моделировали на мышах самцах массой 18-20 г. помещением их в проточную барокамеру [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Москва (2000), ее. 153-158]. Препараты вводили внутрибрюшинно за 30 мин до эксперимента. Животных поднимали на «высоту» 10000 м со скоростью 50 м/сек, время пребывания на «высоте» 90 мин. Регистрировали время жизни на «высоте» и процент выживших животных. Гипоксию с гиперкапнией [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Москва, 2000, С. 153-158] исследовали на беспородных мышах самцах массой 18-20 г. Животных помещали в стеклянные банки объемом 250 мл с герметичными крышками, которые переворачивали вверх дном и опускали в поднос с водой во избежание подсоса воздуха. Препараты вводили внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл за 30 мин до гипоксии. Регистрировали продолжительность жизни опытных животных. Гемическую гипоксию [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Москва, 2000, С. 153-158] изучали на мышах самцах массой 18-20 г. Исследуемые препараты вводили внутрибрюшинно за 30 мин до инъекции 2%-ного раствора нитрита натрия в дозе 200 мг/кг. Регистрировали продолжительность жизни опытных животных. Гистотоксическую гипоксию [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Москва, 2000, С. 153-158] изучали на мышах самцах массой 18-20 г. Исследуемые препараты вводили внутрибрюшинно за 30 мин до инъекции раствора нитро-пруссида натрия в дозе 20 мг/кг. Регистрировали время жизни животных.
В каждую серию экспериментов включали контрольную группу. Животные контрольной группы получали инъекцию 0,9%-ного раствора хлорида натрия (физиологического раствора). Из анализа отечественной и зарубежной литературы можно заключить, что моделирование ТОЛ с помощью ингаляции фосгена в экспериментальных исследованиях получило достаточно широкое распространение (Brain J.D., BeckB.D., 1974; Galkin B.N. et al, 1995). Трудности использования такой модели связаны с высокой токсичностью газа и потенциальной опасностью самой процедуры затравки. Это объясняется минимальным раздражающим действием газа на верхние дыхательные пути, отсутствием прижигающего действия на слизистые. Поражение при этом протекает без выраженного бронхоспастического компонента, а ведущим патогенетическим звеном процесса является повышение проницаемости сосудов микроциркуляторного русла легких. Фосген получали в химической лаборатории путем взаимодействия че-тыреххлористого углерода с параформом в присутствии хлористого алюминия. Ингаляционное отравление проводили с использованием стендовой установки для моделирования ингаляционных поражений парообразным токсикантом (ПТ), разработанной в НИИЦ (МБЗ) ГНИИИВМ МО РФ (Реутов В.П. и др., 1994). Стендовая установка предназначена для экспонирования различных видов лабораторных животных в облаке газа или пара ПТ в статическом или динамическом режимах. Эксперименты проводили с моделированием поражений ПТ в статическом режиме. Установка изготовлена из нержавеющей стали и состоит из рабочего канала, двух шлюзовых камер, двух универсальных подсадных устройств для лабораторных животных и размещена во внешнем боксе. Сверху и сбоку установка имеет штуцеры для сие- тем отбора проб, дегазации и подключения контрольно-измерительной аппаратуры, штуцер приточно-вытяжной вентиляции, вентилятор перемешивания, светильник и смотровые окна. Снизу камера оборудована штуцером, к которому подключена фильтровентиляционная установка для дегазации ПТ. В ходе экспериментов в затравочной камере создавали концентрацию фосгена, равную 1,0 мг/л. Эксперименты проводили на неинбредных мышах самцах массой 18-24 г. Токсический отек легких моделировали путем ингаляции животными фосгена в дозе 4,2 мгхмин/л при экспозиции в течение 4 мин. Уровень поражения определяли по фактической гибели животных контрольной группы через 24 ч после отравления.
Оценку результатов осуществляли через 3 и 24 ч после отравления (Методические рекомендации по экспериментальному моделированию ингаляционных поражений ВТВ/ ГВМУ МО РФ.- М., 1995) Определяли легочный коэффициент (ЛК), по которому судили о степени выраженности отека легких, и выживаемость животных через 24 ч после отравления. ЛК вычисляли по формуле: масса легких (г) масса животного (г) Соединения вводили внутрибрюшинно за 30-60 мин до отравления животных (профилактическое действие) в виде суспензии с твином-80 в дозе 25 мг/кг в объеме 0,2 мл или через 20-30 мин после отравления (лечебное действие). Контрольные животные получали инъекцию растворителя. Рассчитывали коэффициент защиты К3 по формуле: а и с - число животных, выживших в опыте и контроле соответственно, b и d - число животных в каждой группе. Выборка для каждой дозы препарата составляла 10-12 животных. Испытание гепатопротекторного действия проводили на беспородных белых крысах-самцах массой 150-200 г. Токсическое поражение печени вызывали подкожным введением 50% раствора тетрахлорметана в вазелиновом масле в дозе 0,4 мл/100 г массы в течение 4 суток ежедневно (Лазарев Н.В. (ред.), 1954). Параллельно с этим опытным группам животных ежедневно в течение 4 суток внутрибрюшинно вводили исследуемые соединения в виде тонкой суспензии с добавлением твина-80 в объеме 1 мл на животное, а контрольным - физиологический раствор. В каждую группу животных включали по 6-10 крыс. В качестве препарата сравнения использовали эссенциале в дозе 80 мг/кг (Венгеровский А.И. и др., 1987). Все соединения исследовали в эквимолярных дозах. Поскольку наибольшие морфологические и функциональные изменения наблюдаются на седьмой день от начала введения тетрахлорметана (Slater T.F., 1978), материал для проведения биохимических исследований забирали именно в этот день. Наиболее широко при диагностике заболеваний печени применяется определение активности аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатами-нотрансферазы (АсАТ), поскольку при таких заболеваниях в результате некроза гепатоцитов эти ферменты освобождаются в кровеносное русло и их концентрация в сыворотке крови увеличивается (Slater T.F., 1978). Содержание в сыворотке крови АлАТ, АсАТ, общего билирубина, общего белка, глюкозы определяли на автоматическом биохимическом анализаторе Hitachi 917. Для оценки активности вычисляли отношение соответствующего показателя контрольной группы животных к показателю опытной группы. Таким образом, влияние соединений на концентрацию АлАТ и АсАТ характеризовали коэффициентами КАл и КЛс- Величины КАл более чувствительны к изменению химического строения, чем величины КАс. Для интегральной оценки мы характеризовали соединения величиной, названной нами К3, которую вычисляли как среднеарифметическую величину: К3= (Кдл + КАс)/2.
