Введение к работе
Актуальность проблемы.
Инфекционные процессы, развивающиеся на фоне иммунодефицита, тречаются в медицинской практике довольно часто. Исходя из этого, помимо лотропной или патогенетической терапии, направленной на лечение основного эолевания, необходимым является назначение многоплановой сопроводительной рапии, к которой относится, в том числе, антибактериальная терапия, «меняемая с целью профилактики и лечения инфекционных осложнений. Однако практика показывает, что широкое применение антибактериальных едств приводит к развитию нежелательных побочных явлений, одним из которых ляется собственное влияние антибиотиков на состояние иммунной системы, 'льшинство исследователей приходит к выводу о неоднозначности действия тибиотиков различных групп на иммунокомпетентные клетки. Таким образом, изучение влияния антибиотиков на показатели иммунного атуса является особенно актуальным, поскольку эти средства часто назначаются фоне уже имеющегося иммунодефицита. С другой стороны, проведение добных исследований также целесообразно для обоснованного выбора тибактериального средства с наиболее подходящими иммуномодулирующими ойствами с учетом иммунного статуса, а также принимая во внимание прочие карственные назначения в конкретном клиническом случае. Как известно, центральную роль в специфическом адаптивном иммунном ответе рают лимфоциты, активно участвующие в процессе поддержания гомеостаза. В рмальных условиях пролиферация и гибель лимфоцитов обычно взаимно авновешены, вследствие чего сохраняется постоянство клеточного состава, [бель клеток, в свою очередь, может быть реализовано либо путем некроза, либо оптоза. Апоптоз, или программированная клеточная гибель, является реализацией гюженных в геноме клеток суицидальных механизмов, активным и строго нтролируемым процессом самоуничтожения клетки. Апоптоз играет ключевую ль в нормальном обновлении тканей и, в том числе, несет ответственность за екращение иммунных реакций, опосредуемых лимфоцитами. Различные ізические и химические агенты, включая лекарственные вещества различных ірмакологических групп, могут индуцировать или, напротив, отменять процесс оптоза клеток лимфоидного ряда, причем апоптотропное действие может быть ализовано в отношении как зрелого лимфоцита, так и предшественников. Таким образом, широкое применение антибактериальных средства, а также іогресс в области создания и внедрения новых лекарственных субстанций с ідобньїм действием требует разработки методических систем, позволяющих ;енить различные аспекты иммунотропного потенциала антибиотика как на этапе клинической оценки, так в клинической практике в условиях in vitro.
С учетом вышеизложенного, разработка системы биологической оценки бе-лактамных антибиотиков по показателю апоптоза клеток лимфоидного ряда весь актуальна в качестве одного из обязательных параметров безопасности ЛВ.
Разработка подобной системы оценки бета-лактамных антибиотик соответствуют содержанию проекта федеральной программы по созданию применению комплекса стандартных биотест-систем для научно-исследовательск целей и контроля качества медицинских препаратов. Программа базируется основных положениях Закона Российской Федерации «О сертификации продукц и услуг» (№ 5151-1 от 10 июня 1993 года) и направлена на гарантирован!: обеспечение биологической безопасности населения.
Цель и задачи исследования.
Целью настоящей работы явилась разработка системы оценки иммунотропн активности бета-лактамных антибиотиков по показателю апоптоза клеї лимфоидного ряда человека in vitro в обычных условиях и услов* индуцированной иммунодепрессии. Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
-
Выбрать биологические модели, позволяющие изучить и оценить влияние бе лактамных антибиотиков на апоптоз клеток лимфоидного ряда человека in vitrc
-
Выбрать метод для количественного анализа апоптоза клеток лимфоидного р? человека in vitro и разработать оптимальные условия количественного анализ помощью выбранного метода.
-
Определить количественные показатели и дозозависимость апоптоза модеї клеток лимфоидного ряда человека in vitro под влиянием бета-лактамн антибиотиков в норме и условиях индуцированной иммунодепрессии.
-
Провести сравнительный анализ модулирующего влияния исследуемых бе лактамных антибиотиков на апоптоз моделей клеток лимфоидного ряда нормальных условиях и условиях индуцированной иммунодепрессии.
-
Разработать алгоритм системы биологической оценки бета-лактамн антибиотиков по показателю апоптоза на моделях клеток лимфоидного pj человека in vitro.
Научная новизна проведенных исследований.
-
Впервые предложен алгоритм системы биологической оценки бета-лактамн антибиотиков по показателю «апоптоз» на моделях клеток лимфоидного ряда vitro методом проточной цитофлуориметрии.
-
Впервые изучено влияние различных концентраций бета-лактамн антибиотиков на апоптоз клеток лимфоидного ряда человека in vitro мето^ проточной цитофлуориметрии в обычных условиях.
-
Впервые изучено влияние различных концентраций бета-лактамн антибиотиков на апоптоз клеток лимфоидного ряда in vitro методом проточі цитофлуориметрии в условиях дексаметазон-индуцированной иммунодепресси
-
Впервые проведен сравнительный анализ апоптотропного дейсті исследованных бета-лактамных антибиотиков на моделях клеток лимфоид» ряда.
Практическая значимость.
Предложенная система биологической оценки на модели апоптоза клеток (мфоидного ряда человека in vitro методом проточной цигофлуоримегрии может ужить основой для изучения апоптотропного действия как уже применяемых :та-лактамных антибиотиков, так и новых препаратов данной группы, іходящихся на стадии доклинических исследований.
Разработанная система может быть использована для обоснованного выбора :та-лактамного антибиотика с учетом состояния лимфоцитов и их ранних эедшественников в конкретном клиническом случае.
С помощью предложенной системы биологической оценки возможно оценить и ірогнозировать апоптоз клеток лимфоидного ряда человека под воздействием бета-штамных антибиотиков при различных режимах дозирования и с учетом прочих дарственных назначений.
Разработанная система отличается высокой чувствительностью, точностью, эспроизводимостью результатов.
Связь целей и задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук.
Диссертационная работа выполнена в рамках комплексной темы кафедры армакологии фармацевтического факультета «Разработка биологической и эонофармакологической оценки положительного и отрицательного влияния ЛС, шитков, пищевых добавок на одноклеточные модели и модели экспериментальных ивотных». Номер госрегистрации 01970007165.
Апробация материалов диссертации.
Материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-практической энференции кафедры фармакологии и фармацевтической химии армацевтического факультета ММА имени И.М. Сеченова (Москва, 2000); на 2-ой оссийской конференции молодых ученых «Фундаментальные науки и прогресс цинической медицины» (Москва, 2001).
Публикации.
По материалам исследования опубликовано 4 печатные работы.
Структура и объем диссертации.
