Введение к работе
Актуальность темы исследования. Профилактика и остановка кровотечений имеют важнейшее значение в различных областях клинической медицины, прежде всего в гематологии (Воробьев А.И. 2005; Giangrande P. 2005; Yanada M., и соавт. 2007), хирургии (., и соавт. 2008), травматологии (Lienhart H.G, и соавт. 2008), онкологии (Lichtiger B. and Huh Y. 2008), акушерстве (. и соавт. 2008) и др. в связи с увеличением числа больных с геморрагическими проявлениями, широким использованием антикоагулянтов (гепаринов и препаратов кумаринового ряда) (. и соавт. 1994), внедрением в медицинскую практику лекарств, обладающих наряду с необходимыми терапевтическими эффектами гепатотоксическим действием.
Особую роль играет разработка гемостатических средств в медицине катастроф и для оказания помощи при критических и неотложных состояниях в условиях боевых действий (. 2008; . 2008). Развитие военной науки и техники неизбежно сопровождается появлением новых видов поражений, увеличением их количества, усилением тяжести патологического процесса, в том числе геморрагических осложнений при огнестрельных ранениях, воздействиях ядерного и химического оружия (, 2008; Чазов Е.И, и соавт. 1984).
Актуальность данного исследования связана и с тем, что зачастую препараты для остановки кровотечений, традиционно применяемые в медицинской практике, недостаточно эффективны и неспособны привести к действенному снижению кровопотери, что опасно развитием геморрагического шока, острого ДВС-синдрома, ишемии и некрозов жизненно важных органов. Это обусловлено широким разнообразием причин, способствующих возникновению гематомного и/или микроциркуляторного типа кровоточивости (Баркаган З.С., Момот А.П., 2001). Клинический опыт показывает, что при плановых хирургических вмешательствах на печени, почках, селезенке при целостности магистральных артерий и вен капиллярно-паренхиматозные кровотечения являются основными источниками операционной кровопотери (Абакумов М.М. и соавт. 2002; , и соавт. 1990; , и соавт. 1992). Для их остановки прибегают к местной гипотермии, используют лазерное облучение кровоточащих тканей (, . 1992), аппликацию жидкого азота, термо- (, и соавт. 1990) и ультразвуковую коагуляцию (, и соавт. 2004), парентерально вводят свежезамороженную плазму и ее продукты - факторы свертывания крови (изолировано или в различных комбинациях), амбен, эпсилон-аминокапроновую кислоту, ингибиторы сериновых протеиназ (трасилол, гордокс), адроксон, этамзилат, серотонин, окситоцин, питуитрин и ряд других препаратов, обладающих различными механизмами остановки кровотечений (Баркаган З.С., Момот А.П. 2001; , и соавт. 2007; . и соавт. 2008; Hedner U, и соавт. 2007; . и соавт. 2008; . И соавт. 2007). В числе средств, обладающих местным гемостатическим эффектом, обычно используют тромбин, фибриноген, фактор XIII, апротинин, фибриновые и полимерные пленки и композиции (Абоянц Р.К. и соавт. 1999; Mannucci P.M., 1998).
Тем не менее, появление новых, перспективных препаратов и композиций, обладающих системным или местным гемостатическим действием требует углубленного изучения их эффективности в контролируемых (модельных) условиях эксперимента, что и было выполнено в настоящей работе.
Цель исследования: Сравнительное исследование специфической фармакологической активности различных гемостатических средств системного и местного действия.
Задачи исследования:
-
Провести анализ прокоагуляционной местной и системной гемостатической активности препарата «НовоСэвен» в модельных экспериментах у интактных кроликов и в условиях коагулопатии, вызванной гепарином и варфарином.
-
Исследовать специфическую фармакологическую активность образцов отечественного активированного рекомбинантного фактора VII (рФVIIa) в условиях экспериментальной модели на интактных кроликах и при гипокоагуляции, обусловленной гепарином и варфарином.
-
Провести сравнительный анализ результатов исследования гемостатической активности препарата «НовоСэвен» и экспериментальных серий нового отечественного рФVIIa.
-
Провести сравнительное исследование местной кровоостанавливающей способности средств различного химического строения и механизма действия при их аппликации на раневую поверхность печени кроликов.
Научная новизна
-
Оценена в эксперименте на кроликах гемостатическая активность отечественного рФVIIa при его внутривенном введении в дозе 90 мкг/кг в сравнении с «НовоСэвен»
-
Выявлена высокая эффективность отечественного рФVIIa в условиях экспериментальной коагулопатии, обусловленной наиболее распространенными в клинической практике антикоагулянтами - гепарином и варфарином
-
Сочетание системного и местного воздействия отечественного рФVIIa приводит к более результативному кровоостанавливающему эффекту по сравнению с применением его или системно, или местно
-
Впервые в эксперименте на модели капиллярного кровотечения оценена местная гемостатическая активность аппликатов, включающих факторы свертывания крови: «НовоСэвен», отечественный препарат рФVIIa, растворимый фибрин-мономер, комбинация фибрин-мономера с эпсилон-аминокапроновой кислотой, а также активаторов факторов свертывания крови: эхитокс, либетокс, анцистрон.
Практическая значимость работы
Установлено, что отечественный рФVIIa проявляет в условиях внутривенного введения близкую гемостатическую активность к препарату «НовоСэвен», что свидетельствует о целесообразности его дальнейших доклинических и клинических испытаний.
Включение отечественного рФVIIa в состав гемостатических средств, предназначенных для местного применения (аппликации), может расширить спектр использования данного рекомбинантного белка.
Применение белка крови фибрин-мономера самостоятельно или в комплексе с эпсилон-аминокапроновой кислотой может лечь в основу разработки гемостатической композиции, предназначенной, для остановки паренхиматозных кровотечений при местном применении.
Положения, выносимые на защиту:
-
Внутривенное введение препарата «НовоСэвен» в дозе 90 мкг/кг интактным кроликам сокращает протромбиновое время (ПВ) свертывания плазмы, повышает активность ФVII в плазме крови и сокращает время остановки кровотечения и объем кровопотери.
-
Внутривенное введение отечественного рФVIIa приводит к сокращению значений ПВ и возрастанию активности ФVII в плазме животных. Введение отечественного рФVIIa сокращает время остановки кровотечения и объем кровопотери.
-
При внутривенном введении в дозе 90 мкг/кг отечественный рФVIIa обладает сопоставимой специфической фармакологической активностью с препаратом «НовоСэвен»
-
Препарат «НовоСэвен» и отечественный рФVIIa способны купировать действие гепарина, устранять антикоагулянтый эффект варфарина, уменьшая время остановки кровотечения и объем кровопотери.
-
Местным гемостатическим действием обладают белок крови фибрин-мономер, отечественный рФVIIa и препарат «НовоСэвен», а также эхитокс.
Личный вклад автора
Автором была проведена серия экспериментов на 201 кролике породы «Шиншилла» по изучению специфической фармакологической активности средств системного и местного действия (43 образца). Диссертантом освоены и лично проводились современные методики исследования системы гемостаза, в том числе и на моделях коагулопатии: определение основных параметров активности системы гемостаза, оценка активности образцов рФVIIa in vitro и ex vivo, а также определение местной и системной гемостатической активности на модели капиллярно-паренхиматозного кровотечения в эксперименте.
Апробация диссертации
По материалам исследования были сделаны доклады на 12-ом Всероссийском съезде сердечно сосудистых-хирургов (Москва 2006) на тему «Оценка гемостатического действия рекомбинантного FVIIa (NovoSeven) в эксперименте», Всероссийской конференции молодых ученых (Москва 2008) - «Специфическая фармакологическая активность рФVIIa (НовоСэвен) в условиях экспериментальной гипокоагуляции» и Всероссийской конференции с международным участием «Тромбозы, кровоточивость ДВС-синдром: современные подходы к диагностике и лечению» - «Исследование гемостатической активности отечественного рФVIIa на модели тромбоцитопении при острой лучевой болезни у кроликов».
Апробация диссертации проведена на заседании проблемной комиссии «Патология гемостаза» (протокол №15 от 29.09.2008).
Публикации: по теме диссертации опубликовано 11 печатных работ в отечественной литературе, в том числе 3 работы в журналах, рекомендованных ВАК РФ для публикации материалов диссертационных исследований.
Объем и структура работы
Диссертация изложена на 168 страницах машинописного текста, иллюстрирована 36 таблицами и 45 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов, заключения, выводов и списка литературы, включающего 241 источник, в том числе 77 отечественных и 164 зарубежных.
