Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Значение системы регуляции агрегатного состояния крови (PACK) в поддержании гомеостаза организма (обзор литературы) 12
1.1. Уровни функционирования системы PACK 12
1.1.1. PACK как система защиты организма от патологических факторов внешней среды 12
1.1.2. Сосудисто-тромбоцитарный уровень 14
1.1.3. Коагуляционный гемостаз 16
1.1.4. Фибринолиз 19
1.2. Роль изменений системы PACK в патогенезе заболеваний 21
1.3. Пути и способы коррекции изменений системы PACK 28
1.3.1. Антитромботическая терапия 28
1.3.2. Гемостатики 36
1.4. Электроактивированные водные растворы (ЭАВР), их физико-химические свойства и фармакологические эффекты 39
1.4.1. Вода in vitro и in vivo. Коллоидная теория структуры живой клетки 39
1.4.2. Электроактивированные водные растворы 42
1.4.3. Применение ЭАВР в медицине 45
Глава II. Материалы и методы исследования 48
2.1. Исследование параметров, характеризующих состояние системы PACK при введении ЭАВР 53
2.1.1. Электрокоагулография 53
2.1.2. Тесты коагулограммы 55
2.1.3. Определение времени свертывания крови по Lee, White 59
2.1.4. Определение времени кровотечения по методике Дьюка 60
2.1.5. Морфометрия тромбоцитов 61
2.1.6. Метод визуальной оценки агрегации тромбоцитов по Шитиковой 62
2.2. Экспериментальные модели патологии системы PACK 63
2.2.1. Моделирование коагулопатий и гиперкоагуляционных состояний 63
2.2.2. Экспериментальный инфаркт миокарда 64
2.2.3. Моделирование венозно-капиллярного кровотечения из уха кролика 65
2.2.4. Моделирование луночного кровотечения после удаления зуба 65
2.2.5. Моделирование капиллярно-паренхиматозного кровотечения 66
2.2.6. Модель венозно-капиллярного кровотечения из уха кролика при варфа-рининдуцированной коагулопатий 67
2.2.7. Модель венозно-капиллярного кровотечения из уха кролика при гепари ниндуцированной коагулопатий 67
2.3. Математическая обработка материалов исследований 67
Глава III. Изменение параметров, характеризующих состояние системы PACK при введении ЭАВР 70
3.1. Показатели электрокоагулограммы при свободном приеме животными электроактивированных водных растворов 70
3.2. Показатели стандартных тестов контроля гемостаза при недозированном введении кроликам ЭАВР 81
3.3. Показатели стандартных тестов контроля гемостаза при дозированном введении кроликам ЭАВР 85
3.4. Время свертывания крови при свободном приеме внутрь кроликами ЭАВР 90
3.5. Время кровотечения при недозированном введении кроликам ЭАВР 91
3.6. Морфометрия тромбоцитов при пероральном недозированном введении ЭАВР 95
3.7. Агрегация тромбоцитов при приеме кроликами ЭАВР в свободном доступе к поилкам 97
Глава IV. Особенности действия ЭАВР на экспериментальных моделях патологии системы PACK 101
4.1. Действие католита и анолита на параметры системы PACK при экспериментальных моделях гипо- и гиперкоагуляционных состояний 101
4.1.1. Параметры гемостаза при моделированной варфарининдуцированной коагулопатии на фоне введения ЭАВР 101
4.1.2. Изменение параметров гемостаза при гепарининдуцированной коагулопатии при введении ЭАВР 105
4.1.3. Действие ЭАВР на параметры гемостаза при викасолиндуцированной гиперкоагуляции 108
4.2. Действие ЭАВР при экспериментальном инфаркте миокарда 113
4.3. Остановке крови ЭАВР при моделировании кровотечения из уха кролика 124
4.4. Влияние ЭАВР на длительность луночного кровотечения после удаления зуба 125
4.5. Влияние ЭАВР на длительность капиллярно-паренхиматозного кровотечения 127
4.6. Действие католита и анолита на длительность венозно-капиллярного кровотечения из уха кролика при варфарининдуцированной коагулопатии 129
4.7. Действие католита и анолита на длительность венозно-капиллярного кровотечения из уха кролика при гепарининдуцированной коагулопатии 130
Глава V. Принципы влияния и пути реализации влияния ЭАВР на систему PACK (обсуждение результатов исследования) 134
Заключение 158
Выводы 164
Научно-практические рекомендации 165
Список литературы 167
Приложения 204
- Роль изменений системы PACK в патогенезе заболеваний
- Показатели электрокоагулограммы при свободном приеме животными электроактивированных водных растворов
- Параметры гемостаза при моделированной варфарининдуцированной коагулопатии на фоне введения ЭАВР
- Принципы влияния и пути реализации влияния ЭАВР на систему PACK (обсуждение результатов исследования)
Роль изменений системы PACK в патогенезе заболеваний
В последнее время клиницисты и специалисты в области лабораторной диагностики проявляют огромный интерес к нарушениям системы гемостаза. В немалой степени это объясняется прогрессом знаний в данной отрасли и открывающимися новыми возможностями в области распознавания и лечения самых разных видов патологии человека в практике гематологов, акушеров-гинекологов, реаниматоров-анестезиологов, травматологов, урологов, кардиологов, невропатологов, пульмонологов, педиатров и врачей других специальностей [40, 127, 21, 64, 128, 174].
Все нарушения системы PACK можно условно разделить на две большие группы — кровотечения и тромбозы.
При наличии геморрагического синдрома (кровоточивость) выбрать правильную тактику ведения больных могут помочь знание причин кровоточивости [31, 22, 174]. Выделяют следующие основные типы кровоточивости: мик-роциркуляторный (петехиально-пятнистый, синячковый) тип связан, прежде всего, с нарушением функции или числа тромбоцитов, легкой формой болезни Виллебранда и с некоторыми редкими нарушениями свертывания крови. Он характеризуется появлением мелких безболезненных точечных или пятнистых геморрагии на коже, часто сочетающихся с меноррагиями, кровоточивостью десен, реже — с кровоизлияниями в сетчатку глаза и желудочными кровотечениями. Гематомный тип кровоточивости протекает с болезненными, напряжен ными кровоизлияниями как в мягкие ткани, так и в крупные суставы с выраженной патологией опорно-двигательного аппарата, и типичен для гемофилии А и В. Смешанный (микроциркуляторно-гематомный) тип характеризуется сочетанием микроциркуляторной кровоточивости с появлением отдельных больших гематом. При отсутствии поражений суставов и костей синяки могут быть большими и болезненными. Такой тип кровоточивости наблюдается при остром и подостром ДВС-синдроме, тяжелом дефиците факторов протромбинового комплекса, резком снижении уровня фактора XIII, тяжелой степени болезни Виллебранда, промболитической терапии. Васкулитно-пурпурный тип объединяет геморрагии, обусловленные воспалительными изменениями в микрососудах и периваскулярной ткани. Он наблюдается при инфекционных и иммунных васкулитах и характеризуется появлением на конечностях, на ягодицах и реже на туловище мономорфной папулезно-геморрагической сыпи, имеющей вначале выраженную воспалительную основу, часто определяемую пальпаторно в виде уплотнения или возвышения.
Ангиоматозный тип наблюдается при телеангиоэктозии, ангиомах и характеризуется упорными, строго локализованными и призванными к локальной сосудистой патологии геморрагиями. Наиболее часто этот тип кровоточивости проявляется при геморрагической телеангиоэктазии (болезни Рандю-Ослера) и характеризуется очаговым истончением стенок и расширением просвета микрососудов, неполноценным развитием субэндотелия и крайне малым содержанием коллагена.
Представляет интерес, так называемый, невритический, или психогенный, вариант кровоточивости [26]. Он характеризуется немотивированным появлением геморрагии строго определенной или периодически меняющей локализацию, нередко в таких местах, которые у больных геморрагическими диатезами никогда не кровоточат. Речь идет о возникновении спонтанных кровотечений из обоих ушей и/или обеих ноздрей, из неповрежденных участков кожи на щеках, подбородке, в области надбровных дуг, из сосков молочных желез и др. При обследовании не удается обнаружить каких-либо дефектов покровов [138]. Такое разделение на типы кровотечения удобно для клиницистов. Вместе с тем в прикладном аспекте можно выделить кровотечения с нарушением тромбоци-тарного, коагуляционного гемостаза или системы фибринолиза.
Термином «тромбофилии» обозначаются все наследственные и приобретенные нарушения гемостаза, которым свойственна предрасположенность к раннему появлению и рецидивированию тромбозов и облитераций кровеносных сосудов [23]. Тромбофилии могут возникать при различных заболеваниях. Мы рассмотрим тромбофилии гемореологические, при сердечно-сосудистых, метаболических, онкологических, гинекологических, акушерских и неонатоло-гических заболеваниях. Это далеко неполный перечень ситуаций, при которых очень важен контроль состояния системы гемостаза. Классификация основных видов гематогенных тромбофилии представлена в приложении 2.
Атеросклероз является главной причиной смерти в индустриально развитых странах. Тем не менее, современные представления, базирующиеся на клинических и лабораторных исследованиях, рассматривают тромбозы, а не стенозы, как главную причину инфарктов миокарда и инсультов, считая их главным фактором, ответственным за смертность при атеросклерозе [336, 8]. Многие годы атеросклероз расценивался как пассивное накопление липидов в сосудистой стенке. Современная воспалительная концепция атеротромбоза позволила представить в новом свете эволюцию атеросклеротического процесса [309, 337, 6, 242, 264, 277, 318, 97, 150, 182, 227, 241, 311, 10]. Воспалительный каскад включает активацию, генерацию и экспрессию контактной и коагуляционной системы, тромбоцитов, адгезионных молекул, тромбина, эндотелиальных клеток и других медиаторов [48]. Важным показателем эндотелиоза является повышение спонтанной и индуцированной агрегации тромбоцитов, причем выявляется достоверная связь этого нарушения со степенью выраженности гиперго-моцистемии [39]. Считается, что гомоцистеин ингибирует несколько антикоа-гулянтных механизмов, которые опосредуют участие эндотелия в патологическом процессе, в результате чего даже умеренное его повышение может способствовать не только артериальным, но и венозным тромбозам [185, 257]. На ряду с тромбогенными факторами, такими как, усиление адгезии и агрегации тромбоцитов, большое значение придается гиперкоагуляционным изменениям крови и нарушениям реологических свойств крови, в частности вязкости, агрегации эритроцитов, гематокриту и другим параметрам [13]. В то же время изучение реологических свойств крови выявило, что повышение концентрации фибриногена и его дериватов является одним из основных факторов ухудшения вязкости плазмы при уменьшении скорости сдвига [199, 238, 113]. Однако не только воспалительные изменения эндотелия провоцируют нарушения системы PACK, но и циркулирующие в крови липопротеины. Недавние клинические обследования выявили, что баланс липопротеинов низкой плотности к липопро-теинам высокой плотности отражает не только уровень холестерина, но таюке и коагуляционный статус крови: увеличенная концентрация липопротеинов низкой плотности имеет прокоагулянтный эффект, в то время как липопротеины высокой плотности имеют антикоагулянтные свойства [260]. Другой феномен, дающий вклад в тромбогенность бляшки, - это высвобождение микрочастиц из апоптотических макрофагов, лимфоцитов и, возможно, гладкомышечные клетки [319]. Было показано, что эти микрочастицы не только содержат большое количества фосфатидилсерина (его транслокация с внутренней поверхности на внешнюю - процесс, который также происходит при активации тромбоцитов), но также являются основным источником функционально активного тканевого фактора [324]. Это касается артериальных тромбозов. Накопленные к настоящему времени факты позволяют считать значительную часть венозных тромбозов генетическими или приобретенными дефектами в плазменном звене гемостаза [47]. Полагают, что на долю нарушений, обусловленных снижением выработки АТІП, протеина С, протеина S приходится более 50% случаев тромбозов вен нижних конечностей [14]. Рассмотрим изменения системы гемостаза и фибринолиза в патогенезе отдельных заболеваний.
Артериальная гипертензия является независимым фактором риска развития сердечно-сосудистых и цереброваскулярных осложнений. Одной из причин формирования протромботических условий при артериальной гипертензии служит нарушение реологических свойств крови. Повышение вязкости крови на уровне микроциркуляторного русла и нарушение функциональной активности эндотелия приводит к увеличению периферического сопротивления и нарушению перфузии тканей [69, 90, 68, 212].
В настоящее время доказана важнейшая роль факторов гемостаза в патогенезе ишемической болезни сердца (ИБС) [145, 111, 158]. В образовании тромба при ИБС ведущую роль играют изменения функциональной активности тромбоцитов и снижение антитромбогенной активности сосудистой стенки [18]. Тромбоз может провоцировать быстрое увеличение размера бляшки, в результате секреции тромбоцитами двух очень сильнодействующих митоген-ных цитокинов, которые стимулируют развитие атеросклеротического поражения в зоне тромба [234, 208]. Одним из факторов, способствующим активации тромбоцитов, могут быть эритроциты [254]. При ИБС наблюдаются изменения гемостаза характерные для атеросклероза. Наиболее выражены нарушения реологии крови при остром инфаркте миокарда и нестабильной стенокардии, которые сопровождаются повышением агрегационной способности эритроцитов и снижением их деформируемости [98, 200, 156], повышением концентрации маркеров активации тромбоцитов (тромбоксан В2, (3-тромбоглобулин, растворимый Р-селектин и др.) в плазме крови [261, 65, 66], повышение агрегации выделенных из крови тромбоцитов [66]. Наблюдаемое при этом повышение вязкости крови приводит к снижению трансмитрального кровотока и уменьшение сократительной функции миокарда [158]. Гемореологические механизмы при неотложных состояниях приобретают особо важное значение, поскольку именно реологические свойства эритроцитов определяют транспорт кислорода кровью в микрососудах [155].
Показатели электрокоагулограммы при свободном приеме животными электроактивированных водных растворов
Показатели электрокоагулограммы характеризует систему гемостаза в целом. Любые препараты, оказывающие влияние на систему PACK, будут изменять отдельные показатели электрокоагулограммы, поэтому данную методику использовали для скринингового исследования.
Эксперимент проводился на 50 белых крысах самцах массой 180-220 г., разделенных на 5 групп по 10 особей в каждой. Животным каждой группы вводили представленные в таблице 4 растворы при свободном доступе к поилке. У животных 2-ой и 3-ей опытных групп забор крови проводили на 7 и 14 сутки, а 4-ой и 5-ой опытных групп - на 30 сутки. Взятие крови осуществляли из хвоста крысы, надсекая лезвием его кончик. Первую каплю крови удаляли. Исследуемую кровь заливали в кювету.
Запись электрокоагулограмм проводилась на самопишущем коагулографе Н334. Исследовались 17 электрокоагулографических показателей, 12 из них расшифровывались, а 5 рассчитывались по формулам. Результаты исследования действия анолита представлены в таблице 5.
При введении анолита анализ электрокоагулограмм показал, что увеличилось время начала свертывания крови (ТІ) (рис. 3) на 12% (р 0,05) на 7 сутки и на 30% (р 0,01) на 14 сутки, однако к 30 суткам изменения не установлены. Показатель продолжительность процесса свертывания, а также скорость свертывания за первую и третью минуту не меняются, скорость свертывания за вторую минуту имеет тенденцию к снижению на 7 и 14 сутки и повышению к 30 суткам. Время начала ретракции и фибринолиза также имеет тенденцию к увеличению. При этом скорость ретракции и фибринолиза за первые 5 минут (VI) уменьшилась на 67% (р 0,01) на 7 сутки и на 44,5% (р 0,05) на 30. При расшифровке электрокоагулограмм получено, что происходит изменение как максимальной амплитуды (Am), которая на 7 сутки уменьшилась на 19% (р 0,01) и на 14 на 15% (р 0,01), так и минимальной(АО), которая увеличилась на 25% (р 0,05) на 7 сутки, а на 30 на 37,5% (р 0,05).
Амплитуда фибринолиза (А1) (рис. 3) на 10-ой минуте уменьшилось на 52% (р 0,05) только на 7 сутки тогда как на 14 и 30 достоверных изменений не было. Время существования плотного сгустка и степень коагуляции достоверно не меняются.
Кроме того, отмечалось достоверное увеличение коагулирующей активности (КА) (рис.3) на 36,5%) (р 0,05) и снижение степени фибринолиза (СФ) на 45% (р 0,05) на 7 сутки. Фибринолитический потенциал (ФП) уменьшился к 7 суткам на 66% (р 0,01) и к 14 суткам на 61% (р 0,01). При этом гемостатиче-ский потенциал (ГП) увеличился в 2,5 (р 0,01) раза как на 7, так и на 14 сутки.
Для более глубокого изучения изменений был использован однофактор-ный дисперсионный анализ сравнения средних значений выборок по критериям Бонферрони, Шефе, Тьюки (табл. 6).
После применения анализа видно, что время начала свертывания (ТІ) достоверно увеличивается только на 14 сутки на 30 % (р 0,01), при этом при сравнении с контрольной группой F равен 8,5 (р 0,01). Скорость ретракции и фибринолиза за первые 5 минут (VI) достоверно не меняется. Происходит уменьшение максимальной амплитуды (Am) на 19% (р 0,01) на 7 сутки приема анолита и на 14 на 15% (р 0,01), без изменения минимальной амплитуды (АО). При сравнении с контрольной группой значимость различия максимальной амплитуды довольно высокая и составляет 25,6 ( р 0,01). Амплитуда фибринолиза (А1) на 10-ой минуте уменьшилось на 52% (р 0,01) на 7 сутки, F равен 6,2 (р 0,01) при сравнении с контрольной группой. Увеличилась коагулирующая активность (КА) на 36,5% (р 0,01) на 7 сутки, при этом различие с контрольной группой составило 5,4 (р 0,01). Степень фибринолиза (СФ) на 7 сутки уменьшилась на 45% (р 0,05) и F критерий составил 3,5 (р 0,05). На 7 сутки приема анолита без ограничения доступа животных к поилке фибринолитический потенциал (ФП) уменьшился на 66% (р 0,01), а на 14 сутки на 61% (р 0,01), при этом значимость различий с контрольной группой равна 19,9 (р 0,01). Гемоста-тический потенциал (ГП) увеличился к 7 суткам в 2,5 (р 0,01) раза и сохранился на этом уровне на 14 сутки, при F критерии 5,9 (р 0,01).
Таким образом, при приеме внутрь крысами анолита без ограничения доступа к поилке происходит некоторое повышение гемостатической активности на 7-е и 14-е сутки, выражающееся в повышении таких показателей, как коагулирующая активность и гемостатический потенциал. При этом также на 7 -е и 14-е уменьшается фибринолитическое действие, что видно по снижению скорости ретракции и фибринолиза за первые 5 минут, степени фибринолиза и фибринолитического потенциала. На 30-е сутки данные показатели не отличаются от контроля.
Результаты исследования действия католита на показатели электрокоагу-лограммы представлены в таблице 7.
При приеме внутрь католита без ограничения доступа крыс к поилке время начало свертывания (ТІ) к 30 суткам уменьшилось на 13,5% (р 0,05), на 7 и 14 сутки достоверных изменений нет. Конец свертывания (Т2) имеет тенденцию к снижению, но продолжительность процесса свертывания (Т) при этом не меняется. Скорость свертывания за первую минуту (Vcl) несколько повышается, что не является достоверно подтвержденным, а скорость свертывания за вторую минуту (Vc2) на 14 сутки имеет тенденцию к снижению, на 7 и 30 сутки показатели близки к контролю. Однако за третью минуту не происходит изменений скорости свертывания. Обнаруживается тенденция к уменьшению времени начала ретракции и фибринолиза, в тоже время скорость ретракции и фибринолиза за первые 5 минут (VI) и амплитуда через 10 минут после начала ретракции и фибринолиза (А1) не отличаются от контрольных. Максимальная амплитуда (Am) снизилась на 15,5% (р 0,01) на 14 сутки, без изменений на 7 и 30. Увеличилась минимальная амплитуда (АО) на 7 сутки в 2 раза (р 0,01), на 14 на 62,5% (р 0,05) и к 30 суткам на 25% (р 0,05) (рис. 4).
При приеме крысами внутрь католита показатели время существования плотного сгустка (Т4), степень коагуляции (СК), коагулирующая активность (Ка) достоверно не меняются. Отмечается уменьшение степени фибринолиза (СФ) на 7 сутки на 54,5% (р 0,01), на 14 сутки на 51% (р 0,01) и к 30 суткам на 49% (р 0,01), при этом фибринолитический потенциал (ФП) не отличается от нормы. Гемостатический потенциал (ГП) на 7 сутки приема католита повысился на 50% (р 0,05), при этом на 14 и 30 сутки этот показатель имеет также тенденцию к повышению (рис. 4).
После применения дисперсионного анализа достоверно изменились следующие показатели: уменьшилось время начала свертывания (ТІ) на 13,5% (р 0,05) на 30 сутки, при этом различие с контрольной группой равно 4,7 (р 0,01). Максимальная амплитуда (Am) снизилась на 15,5% (р 0,01) на 14 сутки, при этом F критерий равен 8,1 (р 0,01). При приеме крысами католита без ограничения доступа их к поилкам увеличилась минимальная амплитуда (АО) в 2 раза (р 0,01) на 7 сутки, на 14 и 30 сутки изменения показателя не достовер ны. При сравнении показателя минимальная амплитуда на 7 сутки с данным показателем в группе контроля F равен 13,5 (р 0,01).
Кроме того степень фибринолиза (СФ) уменьшилась к 7 суткам на 54,5% (р 0,01), к 14 сутки на 51% (р 0,01) и к 30 суткам на 49% (р 0,01), при достоверной значимости различий с контрольной группой 12,6 (р 0,01) (табл. 8).
Параметры гемостаза при моделированной варфарининдуцированной коагулопатии на фоне введения ЭАВР
Исследование проводили на 24 кроликах самцах массой 2,5-3,5. У ин-тактных кроликов забирали кровь. Далее животные были распределены на 3 группы: первая получала питьевую воду в течении 5 дней, вторая — католит, третья - анолит без ограничения доступа к поилке. При моделировании гипо-коагуляции кроликам в течение 5 дней перорально вводили, растворенный в физиологическом растворе порошок варфарина в дозе 0,06 мг/кг массы тела на фоне приема ЭАВР. На 6-е сутки брали кровь из краевой вены уха кролика. У животных определяли стандартные тесты коагулограммы описанные выше. Основной показатель, характеризующий действие варфарина, является MHO, он должен увеличиться в 2-2,5 раза.
Полученные результаты представлены в таблице 23.
При моделировании коагулопатии в контрольной группе на 6 сутки происходит следующие изменения показателей. Увеличиваются АЧТВ на 170% (р 0,05) по сравнению с исходными показателями, тромбиновое время на 50% (р 0,05), протромбиновое время на 130% (р 0,05). Протромбин по Квику уменьшился на 83% (р 0,01). Повысились показатели MHO и фибриноген в 2,4 раза (р 0,05) и на 26% (р 0,05) соответственно. Исходя из полученных данных, можно констатировать коагулопатию, обусловленную введением варфарина.
При приеме анолита на фоне варфарининдуцированной гипокоагуляции на 6 сутки повышается АЧТВ на 30% (р 0,05) по сравнению с исходными данными, при этом протромбиновое время увеличивается всего на 9% (р 0,05), а MHO повышается на 7% (р 0,05). Количество фибриногена не меняется по сравнению с исходными данными (табл. 23).
При введении анолита внутрь кроликам без ограничения доступа к поилкам на фоне варфарининдуцированной коагулопатии было установлено, что снижается показатель АЧТВ в 1,5 раза (р 0,01) (рис. 16) по сравнению с контрольной группой. Для выявления достоверных различий между группами использовался дисперсионный анализ с повторными измерениями, рекомендуемый в этом случае. При сравнении с контрольной группой по показателю АЧТВ F критерий равен 117,6 (р 0,01). Показатель тромбиновое время уменьшился на 43% (р 0,01) и при этом F критерий 22,9 (р 0,01) по сравнению с группой, находящейся на стандартном питьевом режиме. Протромбиновое время снижает ся на 124% (р 0,01), при F критерий 37,7 (р 0,01). Протромбин по Квику увеличился на 85% (р 0,01) по сравнению с контрольной группой при р 0,01 F критерии равном 4617,6. При приеме анолита MHO снижается более чем в 2 раза (р 0,01) при F критерии 31,3 (р 0,01). Количество фибриногена снизилось на 35% (р 0,01), F критерий 15,6 (р 0,01). Эти данные свидетельствуют о слабо выраженной гипокоагуляции.
Результаты исследования действия католита представлены в таблице 24.
При приеме католита на фоне гипокоагуляции, вызванной варфарином, тромбиновое время достоверно не меняется, протромбиновое время увеличивается на 77% (р 0,05) по сравнению с исходными данными (табл. 24). Протромбин по Квику снижается на 83% (р 0,01). При приеме католита MHO повышается в 2 раза (р 0,05). Уровень фибриногена не отличается от исходного.
В группе, принимающей католит на фоне коагулопатии показатель тромбиновое время уменьшился на 52,5% (р 0,01) по сравнению с контрольной группой, F критерий, характеризующей степень различия между группами равен 50,6 (р 0,01). Протромбиновое время снизилось на 56% (р 0,05), при сравнении с группой, принимающей питьевую воду F 11,4 (р 0,05). Показатель протромбин по Квику при приеме католита уменьшился на 83 % (р 0,01), что соответствует изменениям в контрольной группе. MHO уменьшился на 125%о (р 0,05), при F критерии равном 12,2 (р 0,05). Кроме того, количество фибриногена снизилось на 22% (р 0,05) по сравнению с контрольной группой. При сравнении между группами по показателю уровень фибриногена, F критерии равен 6,9 (р 0,05).
При введении ЭАВР на фоне варфарининдуцированной коагулопатии снижается действие варфарина на 97% при введении анолита и на 54% при введении католита. Следовательно, параметры свертывающей системы крови, при приеме анолита, нормализуются, при приеме католита экспериментальная ги-покоагуляция уменьшаются в 2 раза.
Принципы влияния и пути реализации влияния ЭАВР на систему PACK (обсуждение результатов исследования)
Известно, что количество воды в плазме крови взрослого человека составляет около 3 литров, при том, что суммарная площадь поверхности только эритроцитов в том же количестве крови достигает 5000 м , кроме того в плазме присутствуют и другие белковые молекулы и клетки. Все эти биологические объекты окружены молекулами воды, которые располагаются на их поверхности, составляя внешний слой толщиной меньше одного микрона. Это, с одной стороны, вполне обеспечивает скольжение одних форменных элементов крови по отношению к другим, так что кровь текучая, но, с другой стороны, кровь гораздо плотнее воды и никак не напоминает свободную жидкость в стакане [67]. При получении ЭАВР, содержащих в своем составе активные ионы, свободные радикалы, ион-радикалы и другие активные соединения, не только изменяется структура гидратных оболочек ионов, но и структура окружающей воды. Кроме того, доказан факт увеличения свободной энергии поверхности водных структур при всех видах активации воды [84]. Неудивительно, что такие растворы способны изменять водный спектр организма.
Итак, по одну сторону оказывается кровь, которая оказывается не просто плазмой с форменными элементами, а биологической системой, все компоненты которой взаимодействуют между собой посредством образующихся вокруг них микрослоев воды, а по другую - католит и анолит, представляющие собой растворы, содержащие активные молекулы и ионы и обладающие свободной энергией. Сразу возникает несколько вопросов. Как изменяется биологическая система свертывания крови при введении электроактивированных водных растворов? В чём отличие в действии анолита и католита при дозированном и не-дозированном введении? Почему они оказывают именно такое действие на систему PACK? Эти вопросы мы попытались решить в своем исследовании.
Первая глава экспериментальной части посвящена исследованию действия ЭАВР на систему гемостаза здоровых лабораторных животных. На первом этапе изучались параметры электрокоагулограммы при недозированном введении внутрь католита или анолита. Этот метод позволяет характеризовать систему гемостаза в целом и даёт представление, как о процессе образования сгустка, так и о фибринолизе. Важным было также убедиться в возможности токсического действия ЭАВР при их недозированном применении. Для сравнения показателей разных групп животных материалы представлены в процентах от исходного уровня, принятого за 100%.
Как видно из рисунка 31 на 7 сутки введения ЭАВР происходит увеличение гемостатического потенциала как при введении анолита на 57%, так и католита на 62,5% по сравнению с исходными данными, что свидетельствует о повышении свертываемости крови. К 14 суткам в обеих группах происходит снижение гемостатического потенциала, но его величина не достигает исходной нормы. Однако на 30 сутки происходит снижение гемостатического потенциала ниже исходной нормы на 24% (р 0,01) при действии анолита, тогда как при действии католита этот показатель возрастает на 72,5% (р 0,05) по сравнению с исходной нормой. Следовательно, впервые 14 дней происходит однонаправленное действие ЭАВР в сторону повышения гемостатического потенциала. Следовательно, на 30 сутки выявляются разичия в действии этих растворов: у животных, принимающей анолит, гемостатическии потенциал снижается, а у крыс, принимающих католит повышается ещё в большей степени. Различия в действии анолита и католита в отношении процессов фибринолиза прослеживаются на рис. 32.
На 7-е сутки приема ЭАВР (рис. 32) наблюдается резкое снижение степени фибринолиза в обеих группах (при приеме анолита на 45% (р 0,05), католита на 54,5% (р 0,01) по сравнению с исходными значениями, но уже на 14-е сутки выявляются существенные различия. В группе животных, которым вводили католит, степень фибринолиза остается на уровне 50% (р 0,01), в группе принимающей анолит показатель стал близок к норме. На 30-е сутки показатели практически не отличались от уровня 14-х суток. Следовательно, на 7 сутки наблюдаются одинаковые изменения степени фибринолиза в сторону ее снижения как у католита, так и у анолита, а на 14 и 30 сутки показатель в обеих группах остается сниженным, но более выражено снижение в группе, принимающей католит.
На рисунке 33 видно, что изменения показателя начала свертывания крови идут параллельно в обеих группах. Однако достоверно повышается этот показатель на 30% на 14-е сутки только при введении анолита, тогда как при введении католита он снижается только на 30-е сутки всего на 13%.
Следовательно, и по этому показателю выявляется разнонаправленное действие анолита и католита, причём наивысшие изменения наблюдаются для анолита на 14-е сутки (повышение), а для католита на 30-е сутки (снижение). происходит на 7 сутки, когда видно, что в группе принимающей католит максимальная амплитуда недостоверно снижается на 9%, а в группе, принимающей анолит на 18% (р 0,01). На 14 и 30 сутки различия в действии этих растворов не выявлено. Следовательно, под влиянием ЭАВР происходит равное изменение показателя максимальная амплитуда свертывания.
На рисунке 35 видно, что при введении католит и анолит происходит повышение минимальной амплитуды свертывания на 7 и 14, при этом католит вызвал более существенные изменения и на более раннем сроке. На 7 сутки минимальная амплитуда увеличилась в группе животных, принимающих католит на 73% (р 0,01), а в группе животных, принимающих анолит на 25% (р 0,05) по сравнению с исходными данными. Но уже 14 сутки при введении католита он начинает снижаться и его величина по сравнению с исходной повышена уже на 62% (р 0,01), в то время как при действии анолита он продолжает повышаться увеличиваясь на 38% (р 0,05) по сравнению с исходным уровнем. На 30 сутки в группе животных, принимающих католит этот показатель повышен на 25% (р 0,05) и т.к.он значительно ниже, чем на 7 и 14 сутки, а при введении анолита на 30 сутки минимальная амплитуда также повышается всего на 38% (р 0,05).
Обобщая полученные данные можно констатировать: при приеме внутрь крысами анолита без ограничения доступа к поилке происходит некоторое повышение гемостатической активности на 7 и 14 сутки, выражающееся в повышении таких показателей, как коагулирующая активность и гемостатический потенциал. При приеме католита в таком же питьевом режиме на 7 и 14 сутки также как при приеме анолита происходит увеличении гемостатического потенциала, но при этом происходит уменьшение времени начала свертывания крови, что можно характеризовать как слабо выраженное усиление коагулирующей активности. В обеих опытных группах наблюдается уменьшение фиб-ринолитической активности. Данные изменения наиболее выражены на 7 и 14 сутки, на 30 сутки большинство показателей не отличаются от контроля.
Для уточнения полученных данных проведено исследование стандартных тестов гемостаза при свободном приеме ЭАВР без ограничения доступа животных к поилкам и при дозированном пероральном приеме из расчета 1 мл/кг массы тела 3 раза в день. Материалы этой части работы представлены на рисунке 36. Прием кроликами католита и анолита без ограничения доступа животных к поилкам в течение 7 приводил к снижению показателя АЧТВ на 58% (р 0,05) при приеме католита и несколько меньшему снижению на 45% (р 0,05) при приеме анолита. Количество фибриногена повышается на 22% (р 0,05) у животных принимающих католит и на 33% (р 0,05) у животных,
Таким образом, при сопоставительном анализе гемостатических показателей на 7 сутки приема ЭАВР в свободном доступе к поилкам можно утверждать, что изменения указанных показателей в основном носят однонаправленный характер, при этом выраженность действия на разные показатели различается по силе.
На 14 сутки (рис. 37) проявляются сходные изменения параметров этих параметров при приеме анолита и католита. Наблюдается снижение АЧТВ на 46% (р 0,05) при приеме анолита и на 30% (р 0,05) при приеме католита, значит анолит обладает более выраженным действием на данный показатель. Количество фибриногена повышается на 33% (р 0,05) и на 22% (р 0,05) соответственно. MHO в обеих группах мало отличается от исходных значений, несмот Рис. 37. Сопоставительный анализ гемостатических показателей у кроликов на 14 сутки при свободном приеме католита и анолита.
Обозначения: АЧТВ - активированное частичное тромбопластиновое время, фибр. - количество фибриногена, MHO - международное нормализованное отношение на то, что при приеме католита снижается на 5% (р 0,05). Представленные материалы свидетельствуют о незначительных различиях в действии католита и анолита на систему PACK при свободном приеме.
Можно предположить, что при свободном доступе животных к поилкам ЭАВР оказывают влияние на все фазы гемостатических реакций, но наибольшее, по-видимому, на конечный этап (повышение фибриногена на 22% (р 0,05) и на 33% (р 0,05).
Однако, неконтролируемый прием ЭАВР приводит к большому варьированию величины указанных показателей, что не позволяет убедительно доказать факт их вмешательства в процессы гемостаза.
