Содержание к диссертации
Введение
1- Обзор литературы 8
1.1. Общие сведения о собаке и краткая история происхождения современных пород собак 8
1.2. Общие сведения о физиологии размножения животных 13
1.3. Нейро - эндокринная регуляция гормональной функции гонад 14
1.4. Половые железы животных 20
1.5. Гормоны половых желез 24
1.6. Продукция половых гормонов при различных возрастных периодах 39
1.7. Последствия нарушения баланса половых гормонов в организме 44
1.8. Влияние породы на функцию эндокринной системы 46
1.9. Краткие характеристки исследуемых пород собак 47
1.10. Влияние физиологического состояния на уровень половых гормонов в крови самок 52
1.11. Влияние некоторых природных факторов на функцию эндокринной системы 57
2- Собственные исследования 59
2.1. Материал и методы исследования 59
2.2. Результаты исследования 66
2.2.1. Концентрация половых гормонов самок в связи с возрастом 66
2.2.2. Концентрация половых гормонов самцов в связи с возрастом 69
2.2.3. Концентрация половых гормонов самок в связи с породой 72
2.2.4. Концентрация половых гормонов самцов в связи с породой 76
2.2.5. Концентрация половых гормонов самок в связи с физиологическим состоянием 79
2.2.6. Концентрация половых гормонов самцов в связи с сезоном года 82
2.2.7. Концентрация половых гормонов самок в связи с сезоном года 84
2.2.8. Концентрация половых гормонов собак в связи с полом животного в весеннее - летней период 86 '
2.2.9. Концентрация половых гормонов собак в связи с полом животного в осенее - зимнем период 86 ,'
3. Обсуждение результатов 89
Заключение 104
Выводы 105
Предложения 106
Список литературы 107
Приложения
- Общие сведения о собаке и краткая история происхождения современных пород собак
- Общие сведения о физиологии размножения животных
- Материал и методы исследования
- Концентрация половых гормонов самок в связи с возрастом
Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ
Правильное понимание сущности процессов размножения открывает путь управления природой животных организмов и позволяет создавать новые и совершенствовать существующие породы, сохранять и правильно выращивать высокопродуктивных животных.
Физиологическое состояние, продуктивность, адаптация к новым условиям содержания, а также многие заболевания животных находят своё отражение в гормональной активности желёз внутренней секреции (АД. Белов, Н.П. Лысенко, Л.В. Рогожина, 1986),
В последние годы физиолого-биохимические характеристики организма собаки стали предметом интенсивных исследований. При этом есть несколько аспектов;
- Собака как модель, очень широко используется для исследований в области трансплантации органов;
- Собака служит моделью человека при изучении его иммунологии, генетики^ биохимии, при фармакологических исследованиях.
- Собака широко используется в народном хозияйстве, охрана, пограничная служба, милиция и во много' другах областях общества.
- Собака - компаньон для создания психологического комфорта человека.
- Физио - биохимические показатели собаки часто являются идентичными с другими млекопитающими, в том числе человеком. Поэтому, изучая показатели крови собак, мы косвенно изучаем и показатели крови человека.
Всё это служиі' прекрасной иллюстрацией интереса и возможного использования этого вида животных в сравнительной физиологии и патологии ("Woiter R., 1994. KronfeldD.S, 1991, К, В. Конопатив, 1997).).
На научной конференции, посвященной Государственной Академии Ветеринарной Медицины им. Н. Н. Баумана, ведущий гистолог России П.А. Ковальский (1974) сказал: «Одной из первостепенных проблем ветеринарии
является борьба с яловостью. В то же время нельзя сказать, чти биология полового аппарата животного изучена достаточно, особенно в условиях современного ведения хозяйства. Поэтому, всякое новое исследование биологов в этой области должно обеспечить изучение данной проблемы, дать новые научные материалы, достойные внимания клиницистов и практиков искусственного осеменения и будет ценна для тех, кто разрабатывает профилактику и лечение различных заболевания или трудятся над повышением продуктивности животных».
Ряд отечественных и зарубежных ученых (Франты 1972; Павлова СИ., 1974; Беляев Д.К, 1974; Боннин, 1978; Смит АС, 1974; Бейрд Д.Г., 1987; Баранникова И.К5 1991; Савченко 1992 и др.), посвятили свою деятельность изучению общих вопросов эндокринологии размножения у животных.
Однако, у собак параметры половых гормонов изучены не достаточно, а
\/ имеющийся данные незначительны. Также нам не удалось найти в литературе
данных об исследовании половых гормонов в сыворотке крови собак
[J иммупоферментньш методом, в связи с возрастом, породой, физиологическим
. состоянием-, сезоном года и полом. В связи с этим 'аша работа посвящена,
изучению концентрацию половых гормонов собак.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ
Цель исследований состояла в разработке параметров половых гормонов в сыворотке крови собак в связи с возрастом, породой, физиологическим состоянием, сезоном года и полом. Для её решения были поставлены следующие задачи:
1- установить содержание в сыворотке крови собак эстрадиола,
прогестерона и тестостерона в зависимости от возраста;
установить содержание в сыворотке крови собак эстрадиола, прогесте -рона и тестостерона в зависимости от породы;
установив параметры эстрадиола, прогестерона и тестостерона в сыворотке крови собак в связи с физиологическим состоянием;
установить содержание в сыворотке крови собак эстрадиола^ прогестерона и тестостерона в зависимости от сезона года;
установить содержание в сыворотке крови собак эстрадиола, прогестерона и тестостерона в зависимости от пола
НОВИЗНА РАБОТЫ Разработаны с помощью иммуноферментного метода параметры половых гормонов собак ( зстрадиола, прогестерона и тестостерона) у собак, в связи с возрастом, полом, породой, астральным периодом и сезоном года,
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ Впервые установлены спомощью иммуноферментного метода параметры половых гормонов у здоровых собак и приделы их колебания. Эти данные важны для практики так как они могут быть использованы для оценки репродуктивных функций и обоснования более эффективных профилактических мероприятий в крупных питомниках собак. Параметры половых гормонов у собак могут быть использованы и включены в соответствующие разделы учебных пособий, и специальной соравочной литературы, использованы при чтении лекций и проведение лабораторно-практических занятий, на факультетах ветеринарии и зоотехнии и повышения квалификации ветеринарных ирачей и зоотехников.
НА ЗАШИТУ ВЫНОСЯТЁСЯ Параметры половых гормонов собак в связи с возрастом, породой, физиологическим состоянием, сезоном года и полом,
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ Материалы диссертаций доложены и обсуждены; На международной учебно-методической и научно-практической конференции, посвященной 85-летию ММГАВМиБ им. K.R Скрябина (2004, Москва), на 3-й конференции учебно-методической, воспитательной и научно-практической работе МГАВМнВ им К.И. Скрябина (2006, Москва).
ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ Данные о концентраций половых гормонов собак в связи с физиологическим состоянием включены в учебный процесс при чтении лекций и проведении лабораторно-практических зайнятий (справка о внедрении в приложении).
ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ РАБОТЫ По данным диссертации опубликовано 4 печатных работы.
Общие сведения о собаке и краткая история происхождения современных пород собак
Млекопитающие семейства собачьих (canidae) включает 29 видов. На территории Российской Федерации встречаются 8 видов: волк, енотовидная собака, красный волк, кормак, лисица обыкновенная, лисица афганская, песец, шакал (ФлинтВ. Е. и др., 1965)
Собака домашняя (canis familiaris) вероятно, была одомашнена 13-17 тыс.лет до н.э. При этом для отдельных народностей собаки служили пищей (Drtesh A. Von Den, 1992). Сегодня предназначение собаки - самое разнообразное: охранная служба, розыск, спорт, медико-биологические исследования, охота, декорация и т.д.
Домашние собаки несут явные признаки дестабилизирующего отбора и очень изменчивы по размерам и конституции. Ясно, что был многовековой отбор на пониженную к человеку агрессивность. По своему происхождению и по мнению многих авторов, собаки есть поли филетическая группа, т. е. группа, происходящая от нескольких предков (В. С, Барлаков, 1992, Бэр, 1953).
В зоологии вопросы полифилии или монофилии собак дискутируются давно. Еще в 1774 г., К. Бюффон высказывался за монофилетическое (от одного предка) происхождение всех пород собак, объясняя вес их многообразие влиянием климата и культуры. Все породы он выводил от овчарок цит, по (В. С. Барлаков, 1992). А, Гульденштадт ( A. Guldenstadt) уже в 1775 г. был склонен считать шакала предком всех собак, Ж. Штудер (J, Siuder 1776) в этой роли видел вымершую собаку Canis ferus. И сейчас у монофилетической точки зрения много сторонников, причем большинство предком собаки считают волка (В. С, Барлаков, 1992).
На стороне полифилетической точки зрения стоят не менее замечательные ученые. Одним из первых высказал ее великий французский натуралист Сент-Илер. Великий англичанин Ч. Дарвин тоже склонялся к ней. Полифилетической группой считал собак крупный специалист по доманпшм животным профессор зоологии немец Ш. Келлер, работавший в XIX — начале XX века, автор книги «Естественная история домашних животных» (цит. по В. С. Барлаков, 1992). В пользу полифилегического происхождения собак К. Келлер в 1909 г, приводит следующие соображения; 1 — домашние собаки, у которых с самого начала ясно выражены признаки породы, рано появляются в далеко лежащих друг от друга культурных областях; 2 — собаки, живущие в разных областях, имеют сходство с обитающими там дикими собачьими — аргумент, взятый Келлером у Ч. Дарвина; 3 — слишком разнообразна и неоднородна группа домашних собак, чтобы се происхождение можно было объяснить только искусственным подбором, произведенным с потомками одного предка. Действительно, ни одно домашнее животное не имеет такого широкого спектра столь не похожих друг на друга пород, как домашняя собака.
К. Келлер выделяет щесть основных генеологических групп домашних собак: 1 —Птицеобразные; 2 — собаки-парии; 3 -- овчарки; 4 — борзые и выводимые от них гончие; 5 — догообразиые собаки; 6 — собаки Нового Света до появления там европейцев.
Для каждой основной группы Келлер, последовательный приверженец полифилии, приводит соответствующего дикого предка. У птицеобразных собак это обыкновенный шакал. Этот же вид дал азиатских собак-парий, тогда как африканские собаки-парии выводятся от африканского шакала-волка, которого теперь считают американским подвидом обыкновенного шакала. Группа овчарок, по Келлеру, происходит от индийского волка, которого в начале XX века считали самостоятельным видом, а теперь классифицируют как мелкий подвид серого волка. Прародителем группы борзых Келлер называет эфиопского шакала.
Большинство старых авторов, в том числе и Келлер, выводят всех догообразных собак от тибетского дога, который, в свою очередь, произошел от тибетского волка (черный волк) К, Келлер, 1909),
Прародителем группы борзых Келлер называет эфиопского шакала — стройного, длинноногого и очень длинномордого зверя среднего размера. От борзых, по Келлеру, прослеживается ряд к типичной гончей собаке. Большинство старых авторов, в том числе и Келлер, выводят всех догообразных собак от тибетского дога, который, в свою очередь, произошел от тибетского волка. Дог использовался в самых различных целях, в том числе и для охоты на диких быков.
Современная классификация пород собак выделяет семь основных групп пород собак; Птицеобразные собаки и близкие к ним терьеры и пинчеры; догообразные; борзые; овчарки; гончие и легавые собаки; собаки Нового Света до появления там европейцев; собаки Южного полушария. Кратко охарактеризуем эти группы (В. С. Барлаков, 1992, П. Ларкин и М. Стокман, 2001).
Шпицеобразные собаки - Одна из древнейших групп, включающая в себя много пород. Делятся на подгруппы: настоящие шпицы; лайки и ездовые собаки (наиболее близкие к волку породы) . Сюда же относится чау-чау. Скелеты собак, очень похожих на птицеобразных, были найдены на Суматре и Мадагаскаре. Ездовые собаки Северной Америки и Гренландии имеют се-веро-азиатское происхождение и относятся к подгруппе лаек и ездовых собак. Многие авторы, например, Смычиньский (Польша) относят терьеров и пинчеров (со шнауцерами) к группе птицеобразных.
Догообразные собаки — древняя группа азиатского происхождения. Группа подразделяется на 3 подгруппы: крупные пастушьи собаки, настоящие короткошерстные доги и длинношерстные доги. К первой подгруппе относятся такие породы; как кавказская, среднеазиатская, южнорусская, подгаляиская овчарки, комондор, кувач, маремма, пиренейская собака, анатолийский карабаш и швейцарские овчарки — зенненхунды. Вероятно, прародителем этих собак был тибетский дог. Вторая подгруппа — настоящие договые или боевые собаки. К ним относятся мастиф, мастино бульмастиф. бордосский дог? бульдоги? боксер, немецкий дог (хотя у него есть кровь борзых, полученная от древнего ирландского волкодава), ротвейлер и другие. Впрочем, ротвейлер очень близок и к пастушьим швейцарским овчаркам. Третья подгруппа — длинношерстных догов — включает ньюфаундленда, сенбернара, леонбергера и хововарта. Выделение этих пород в самостоятельную подгруппу признается не всеми, тем более что у сенбернара есть и короткошерстная форма-Группа борзых собак - Делится на западных и восточных. Первые, в свою очередь, подразделяются на северных (ирландский волкодав и дирхаупд) и южных. На мой взгляд, несколько обособленное положение занимают как раз ирландский волкодав и дирхаунд, тогда как остальные борзые представляют собой единую группу, происходящую из Египта и в дальнейшем в несколько «волн» распространенную по Европе, Африке и Азии.
Общие сведения о физиологии размножения животных
В системе физиологических механизмов, регулирующих гормональную и генеративную функцию половых желез, доминирующее значение имеют гипофиз и гипоталамус (Дорфман В, А., 1963, Квасницкий А.В., 1950, Benoll L, 1955, Burke T.L, 1986, Carlson D,E., 1992). Уже давно установлена зависимость работы гонад от гонадотропиык гормонов адсногипофизат которые оказывают совместное активирующее действие на половой цикл и продукцию половых гормонов. Фолликулостимулирующий гормон (ФСГ); вырабатывающийся гамма-клетками гипофиза, стимулирует развитие фолликулов в яичнике и сперматозоидов в семенниках (Миловаиов В. К., 1962, Павлов М.М. Теппермен Д.Л., 1989, Фурдий Ф.К, 1990, Christiansen I.B., 1984, Ettinger S., 1995,FeldmanE.C.? 1995), Лютеинширующий гормон (ЛГ) необходим для выхода зрелых яйцеклеток из фолликулов и развития желтого тела. Этот гормон контролирует секрецию тестостерона и стимулирует образование эстрона в яичниках. Лютеотропный гормон (ЛТГ) способствует образованию желтым телом прогестерона. Во время беременности функция желтого тела поддерживается хорионичесжим гоиадотропином Юдаев Н.А., 1956, Allen Е., 1941, AssenmacherJ„ 1957, Aran М,, 1950,.
В ходе полового цикла гонадотрофы аденогигюфиза претерпевают закономерные ритмические изменения, которые у полиэстральиых животных особенно отчетливо проявляются у самок. С наступлением полового созревания в цитоплазме гонадотрофов постепенно накапливаются гранулы глюкопротеидов, которые затем выводятся в кровь при первой течке (Квасницкий А.В. 1959, Albrecht Е. D., 1990, А1 Теп, 1923, Arai Н, 1920,. Известно, например, что у свиней дегрануляция гонадотрофов начинается в предтечковый период и особенно усиливается в период течки (Кашенко А.Х. 1954). Биологическое тестирование показывает, что после овуляции в гипофизе содержится уже мало гонадотропного гормона.
1. синтез и секреция гормонов стимулируется внешними и внутренними сигналами; 2- сигналы по нейронампоступают в гипоталамус, где стимулируют синтез и секрецию ридизинг-гормонов; 3- рилизинг-гормоны стимулируют (либирипы) или ипгибируют (статины) синтез и секрецию тропных гормонов гипофиза; 4- тройные гормоны стимулируют синтез и секрецию гормонов периферических эндокринных эюелея; 5- гормоны эндокринных желез поступают в кровоток и взаимодействуют с клетками — мигиенями; 6- изменение концентрации метаболитов с клетках-мишенях по механизму отрицательной обратной связи подавляет синтез гормонов эндокринных желез и гипоталамуса; синтез и секреция тропных гормонов подавляется гормонами эндокринных желез; I стимуляция синтеза и секреции гормонов; - подавление синтеза и секреции гормонов (отрицательная обратная связь).
Эти изменения наступают не во всех клетках одновременно. В течение эстральной фазы дегрануляции подвергаются базофилы, вырабатывающие ФСГ; гонадотрофы второго типа изменяются позже в лютеиновую фазу (Казаченко А.В., 1994, Остина К-, 1987, Carlson D.E., 1992, Keine А., 1986).
У моноэегральных животных цитологические изменения гипофиза носят ярко выраженный сезонный характер. У уток, например, по наблюдениям А.И. Новикова, Н.С. Мошкова, В. Феликса (цит. по Мицкевичу М.С., 1957), активность гонадотрофов повышается к началу размножения и остается на ньтсоком уровне до периода наиболее интенсивной яйцекладки. Во время полового покоя у самок и самцов они уменьшаются в размерах и почти полностью утрачивают глюкопротеидные гранулы.
Удаление гипофиза у всех животных приводит к развитию симптомов кастрации. После операции исчезают циклические изменения в половых проводящих путях самки, и наступает обратное развитие половых органов (Bamman В. L., 1980, Barcroft J., 1939, 1941, Foote R.H., 1972, Ikegawa A.? 1986).
Инъекции гонадотропних гормонов, напротив, вызывают у инфантильных животных преждевременное половое созревание. Введение в организм самки во время размножения ФСГ приводит к созреванию и овуляции большего количества яйцеклеток. На этом основании М. М Завадовский разработал метод повышения многоплодия сельскохозяйственных животных. Н. Л. Гербильский ввел в практику искусственного рыборазведения гипофизарные инъекции для стимуляции икрометания (цит. (Поспелова B.C., 1995).
Гонадотропные гормоны не обладают половой специфичностью, и вызываемая ими реакция определяется свойствами периферических тканей. Поэтому пересаженные гонады в организме кастрированного реципиента другого пола ведут себя так же, как и в норме. С другой стороны, трансплантация гипофиза самца в зону срединного возвышения гипоталамуса приводит к восстановлению у гипофизэктомированной самки астрального цикла и развитию беременности (Эскин И.А., 1951, Daya S., 1987, DorganJ,F., 1995).
За последнее десятилетие накоплен обширный фактический материал, который показывает, что гонадотропная функция гипофиза в свою очередь контролируется гипоталамусом. Об этом свидетельствует прежде всего наличие у многих животных синхронных изменений в половом цикле, гонадотропной функции гипофиза и морфологических сдвигов в гипоталамусе (Фурдни Ф. И., 1990, Элленбергср В.В., 1933, Benoit I, 1955)
У млекопитающих в предтечковътй период в цитоплазме нейронов и их отростков значительно повышается содержание гомориположительного вещества. В послетечковую и межтечковую стадии, напротив, во многих нейронах нейросекрет уже не обнаруживается (Фурдий Ф. И., 1990). Более прямые доказательства гипоталамического контроля гонадотропной функции гипофиза дают эксперименты по локальному повреждению гипоталамуса, перерезке гипофизарной ножки и трансплантации гипофиза. (А.А. Арон, 1988 и Д-EL Петрович, 1995) уже давно установили, что повреждение гипофизарной ножки и прилегающих к ней участков гипоталамуса у овец приводит к понижению содержания в гипофизе ФСГ и приостановке астрального цикла. При перерезке ножки гипофиза у кроликов, крыс и уток наступают глубокие дегенеративные изменения в гонадотрофах и половых железах. Характерно, что нормальная функция яичника у гипофизектомировапных самок при трансплантации гипофиза восстанавливается только в том случае, когда в него врастают сосуды портальной системы. Показано также, что при совместной инкубации вне организма активация гонадотропной функции гипофиза наступает и в результате контакта его с гипоталамусом.
Материал и методы исследования
Эксперименты выполнялись в течение 2002-2005 гг. в питомниках «Вязьма» (Смоленская Область) и «Красная Звезда» (Дмитровский район). Лабораторные исследования проведены в Центральной Люберецкой Лаборатории Ветеринарной Медицины города Москвы.
В качестве объектов исследований были выбраны 6 пород служебных собак (немецкая овчарка, кавказская овчарка, ротвейлер, среднеазиатская овчарка, черный терьер, ризеншнауцер), в возрасте от 1 года до 11 лет. Всего в исследованиях было использовано 1140 проб от 380 животных.
- Во втором опыте для выявления влияния породы па концентрацию половых гормонов Б крови собак, были исследованы также 100 животных, 6 пород (немецкая овчарка, кавказская овчарка, чёрный терьер, ротвейлер, ргоеншнаутцер и средне азиатская овчарка)
- В третьем опыте, для изучения влияния половой цикличности самок (состояние покоя, предтечка, течка, после течки ) на концентрацию половых гормонов в крови собак, были исследованы в динамике 40 самок одной породы «немецкая овчарка», в осеннем периоде,
- В четвертом опыте для выявления влияния сезона года на концентрацию половых гормонов в крови собак, были исследованы в динамике 80 собак, одной породы немецкая овчарка. Исследования проводили в осенне - зимнем периоде (октябрь, ноябрь и декабрь) и в весенне - летнем периоде (апрель, май и июнь)
- В пятом опыте для изучения влияния пола на концентрацию половых гормонов в крови собак были исследованы 40 самок и 40 самцов, также одной породы (немецкая овчарка), в двух сезонах года: зимой (декабрь) и весной (апрель).
Поскольку такие факторы, как время суток (Fukuda et аі., 1975? Дж. Симеон, Г. Иигланда, и М Харви, 2005), кормление (Волков, Мухорина, 1971; Korhonen, 1987), возраст (Bieguszewski, Korowajchyk, 1975, Дж. Симеон, Г. Иигланда, и М Харви, 2005) к иол (Garibaldi ef al., 1990, Дж. Симеон, Г. Ингланда, и М Харви, 2005), могут влиять на содержание гормонов у животных, мы придерживались определенных процедур при взятии биологического материала. В группы включали клинически здоровых животных, отобранных при комплексной диспансеризации, которую проводили совместно с ветеринарными специалистами хозяйств. Все исследованные собаки содержались в одинаковых условиях. В качестве корма получали стандартные сухие корма фирмы Педегри. Воду все животные получали без ограничения.
Кровь брали утром натощак (после ночного голодания) кровь получали из локтевой вены в количестве 5-7 мл, затем ее центрифугировали при 3000 об/мин в течение 20 мин. Сыворотку отделяли, замораживали и хранили при t0= -20 С до использования в исследованиях. Размораживание и повторное замораживание не допускалось.
Содержание в сыворотке крови эстрадиола, прогестерона и тестостерона определяли иммуноферментным методом. Концентрацию гормонов можно точно измерить путём ферментосвязывающего иммуносорбентного анализа (ФСИСА-ИФА), а результаты молено получить в течение одного часа после взятия пробы.
Доступны как количественные, так и качественные методики ФСИСА: а) количественные методы требуют использования считывающего устройства и построения стандартной кривой для известных нормативов прогестерона; б) качественные методы позволяют определить концентрацию но изменению цвета по сравнению с известными нормативами для данного гормона.
В основе определения эстрадиола в биологических жидкостях животных лежит конкурентный вариант твердофазного иммуноферментного анализа. Приннип метода основан на конкуренции между адсорбированным на поверхности лунок планшета гормоном и свободным (в калибровочной пробе или анализируемом образце) гормоном за активные центры связывания антител к гормону, меченых пероксидазой. В результате иммуноспецифической реакции между антителами к данному гормону и самим гормоном содержащимся в пробах (стандарты или образцы) и на поверхности лунок планшета образуются комплексы антитело-антиген. Комплекс антиген-антитело, не связанный с поверхностью планшета, удаляют путем промывки. В результате ферментативной реакции пероксидазы с перекисью водорода субстратного раствора происходит окрашивание 3,3 Д51- тетраметилбензидипа (ТМВ) в синий цвет. Интенсивность окраски обратно пропорциональна содержанию эстрадиола в анализируемом образце.
Пробы хранят до анализа при температуре от 2 до 4 С в течение 1 сут или в течение 2 мес при температуре от минус 18 до минус 20 С, Допускают транспортировку крови без охлаждения в течение 4 ч, не допускают использование гемолизированных и мутных образцов. ОБОРУДОВАНИЕ Для постановки ИФА использовали: одно и многоканальные автоматические пипетки со сменными наконечниками разных объемов, вибротермостат с температурой нагрева от 20 до 45±0,5С, холодильную камеру с температурой минус 18DC и ниже, промывающее устройство ручное или автоматическое, спектрофотометр с вертикальным лучом и длиной волны 450 им, водяная баня.
Упаковку со стрипами (с планщетом) вскрывают, в рамку вставляют необходимое для работы количество стрипов, во все используемые лунки в носят по 300 мкл промывочного буфера и оставляют на 1 мин.
Образцы биологических жидкостей, если они не исследуются в тот же день, замораживают и хранят при температуре от минус 18 С и ниже. Все работы по экстракции исследуемих образцов необходимо проводить в вытяжном шкафу. Для анализа эстрадиола и прогестерона у особей мужского пола требуется больший объем исследуемого материала, чем для особей женского пола а для исследования тестостерона у женских особей требуется больше сыворотки крови чем у самцов.
Концентрация половых гормонов самок в связи с возрастом
Результаты опыта показали что, у самок до года, концентрация эстрадиола находится в интервале от 9,51 до 9,57 нМоль/л. У самок от одного до 3-х лет, эстрадиол несколько выше, но находится в пределах 9,34 - 9,90, У самок от 3-х до 7-й лет, эстрадиол повышается до 10,02 - 11,46 нМоль/л. У самок старше 7 лет, эстрадиол находится в интервале от 9,29 до 9,86 нМоль/л,
Результаты опыта показали что, у самцов до года, концентрация эстрадиола находится R интервале от 0,14 до 0,26нМоль/л. У самцов от 1-ого до 3-х лет, концентрация эстрадиола слего повышается и находится в пределах ОД 8 - 0,24 нМоль/л. У самцов от 3-х до 7-й лет, концентрация эстрадиола также немного повышается и находится в интервала от 0,23 до 0,25 нМоль/л. У самцов старше 7-й лет, концентрация эстрадиола намного выше и находится в пределах от 0,80 - 0,92 нМоль/л.
Значительное, достоверное увеличение концентрации эстрадиола не наблюдалось тем не менее, установлена tn,o, с возрастом концентрация эстрадиола постепенно повышается в сыворотке крови кобелей.
Прогестерон: У самцоя до года, концентрация прогестерона находится в интервале от 0,31 до 0,41 нМоль/л. У самцов от 1-3 лет, концентрация прогестерона несколько выше, и находится в интервале от 0.34 до 0,38 нМоль/л . У самцов от 3-х до 7-й лет, концентрация прогестерона сушественно увеличивается и находится я пределах 0,35 - 0,37 иМоль/л. У самцов старше 7-й лет, концентрация прогестерона несколько понижается и находится в пределах v 0,79 -0,97 нМоль/л.
Значительное, достоверное увеличение концентрации тестостерона наблюдалось в возрасте от 3-х лет, оставаясь на высоком уровне и в 7-й летнем возрасте. После этого периода, постепенно наблюдается снижение концентрации тестостерона в сыворотке крови кобелей, т.е. с возрастом уровень тестостерона постепенно увеличивается достигал пик в период от 3-х до 7-й лет после этого возраста наблюдается снижение концентрации тестостерона в сыворотке крови кобелей.
Значительное, достоверное увеличение концентрации прогестерона наблюдалось У самок «средная азиатская овчарка», концентрация прогестерона которых находится в пределах от 3,58 до 3?73 нМоль/л, а наименьшая концентрация наблюдается у самок «немецкая овчарка», концентрация прогестерона которых находится в интервале от 2,38 до 2,42 нМоль/л.
Тестостерон: У самок «немецкая овчарка», концентрация тестостерона находится в интервале от 1,60 до 1,82 нМоль/л. У самок «кавказкая овчарка», тестостерон находится в интервале от 1J6 до 1,95 нМоль/л. У самок «ротвелер», концентрация тестостерона находится в интервале от 1,64 до 1,80 нМоль/л. У самок «ризень шнауцер», концентрация тестостерона находится в интервале от 1,58 до 1,61 нМоль/л. У самок «средная язиятская овяарка», концентрация тестостерона находится в интервале от 1,71 до 2,07 нМоль/л. У самок «черный терьер»», концентрация тестостерона существенно выше по сравнению с другими породами и находится в приделах от 2,08 - 2,09 нМоль/л.
Концентрация тестостерона у самок особо не отличается; тем не менее Значительное, достоверное увеличение концентрации тестостерона (Р 0,95) наблюдалось У самок «черный терьер», тестостерон которых находится в приделах от 2,08 - 2?09 нМоль/л, а наименьшая концентрация наблюдалось У самок «ризень шнауцер», концентрация тестостерона которых находится в интервале от 1,58 -1,61 нМоль/л,
Результаты исследования показали что, у самцов «немецкая овчарка», концентрация эстрадиола находится в интервале от 0,21 до 0,25 нМоль/л, У самцов «кавказкая овчарка», концентрация эстрадиола находится в интервале от 0,22 до 0,24 нМоль/л. У самцов «чеоный терьер», концентрация эстрадиола находится в интервале от ОД 8 до 0,22 нМоль/л. У самцов «ротвелер»», концентрация эстрадиола находится в интервале от 0,17 до 0,21 нМоль/л.
Значительное, достоверное увеличение конпешрации концентрация эстрадиола наблюдалось у самцов «немецкая овчарка», концентрация эстрадиола которых находится в интервале от 0,21 до 0,25 нМоль/л а наименьшая концентрация наблюдалось у самцов «ротвелер», концентрация эстрадиола которых находится винтереале от0,17 до 0,21 иМоль/л.
Прогестерон: У самцов «немецкая овчарка», концентрация прогестерона находится в интервале от 0,34 до 0,36 нМоль/л. У самцов «кавказкая овчарка», концентрация прогестерона сравнительно близко с предыдущей породой и находится в интервале от 0,37 до 0,39 нМоль/л, У самцов «чеоный терьер», концентрация прогестерона существенно выше и находится в приделах 0,64 -0,66 нМоль/л. У самцов «ротвейлер», концентрация прогестерона ниже других пород и находится в интервале от 0,31 до 0,35 нМоль/л.
Концентрация прогестерона у самцов 4-х пород находится в близких интервалах, достоверное увеличение наблюдается у самцов «чёрный терьер», концентрация прогестерона которых находится в приделах 0,64 - 0,66 нМоль/л; а наименьшая концентрация наблюдается у самцов сротвейлер», концентрация прогестерона которых находится в интервале от 0,31 до 0,35 нМоль/л.
Тестостерон; У самцов «немецкая овчарка», концентрация тестостерона находится в интервале от 5,46 до 5,64 нМоль/л. У самцов «кавказкая овчарка», концентрация тестостерона несколько выше и находится в интервале от 10,61 до 10,87 нМоль/л, У самцов «черный терьер»», концентрация тестостерона существенно выше и находится в приделах 11,29 до 12,11 нМоль/л. У самцов «ротвелер», концентрация тестостерона находится в интервале от 6,11 до 6,33 нМоль/л.
Значительное, достоверное увеличение концентрации тестостерона наблюдается у самцов «черный терьер», концентрация тестостерона которых находится в приделах 11,29 - 12,11 нМоль/л5 а наименьшая концентрация наблюдается У самцов «ризеншнауцера», концентрация тестостерона которых находится в интервале от 5,46 до 5,64 нМоль/л.
Для определения концентрации половых гормонов в крови самок в связи с физиологическим состоянием (анеструс, проэструс , эструс и метеструс), были исследованы 40 животных в возрастах от 3-х до 7-й лет, одной породы (немецкая овчарка), в период покоя, в осенью; результаты исследования отражены в таблице №11.
Полученные результаты показывают о том, что Концентрация эстрадиола сук в периоде покоя (анеструс) самая низкая и находится в интервале от 1,05 до 1,11 нМоль/л. Затем в дальнейшим периоде «проэструс» наблюдается резкое увеличения концентрации эстрадиола в сыворотке крови сук достигая свой пик в приделах 26,24 - 27,28 нМоль/л, В тритем овуляциоиым периоде «Эструс» концентрация эстрадиола несколько подает и находится в приделах 23,74 - 24,2 нМоль/л. На конец в периоде «метеструс», концентрация эстрадиола резко подает и держится в пределах 7,02 - 7,24 нМоль/л. .
