Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города Ильдебенева, Светлана Аркадиевна

Особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города
<
Особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города Особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города Особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города Особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города Особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города Особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города Особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города Особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города Особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города Особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города Особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города Особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города Особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города Особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города Особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города
>

Диссертация - 480 руб., доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Ильдебенева, Светлана Аркадиевна. Особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города : диссертация ... кандидата биологических наук : 03.03.01 / Ильдебенева Светлана Аркадиевна; [Место защиты: Поволж. гос. акад. физ. культуры, спорта и туризма].- Набережные Челны, 2013.- 153 с.: ил. РГБ ОД, 61 14-3/82

Содержание к диссертации

Введение

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1.1. Изоантигенный полиморфизм эритроцитов крови 16

1.1.1 Антигены системы АВО и их значение 18

1.1.2 Антигены системы Резус и их значение 23

1.1.3 Антигены системы Kell-Cellano и их значение 28

1.2 Антитела системы АВО 30

1.2.1 Биохимическая структура и свойства антител 30

1.2.2 Естественные антитела системы АВО, биологическое значение и свойства 32

1.2.3 Иммунные антитела системы АВО, механизм возникновения и свойства 36

1.3 Распределение антигенов групп крови среди различных национальностей 39

1.4 Эритроцитарные антигены групп крови на фоне различных патологий 45

1.5 Генетико-демографическая структура популяций коренных народов Сибири 50

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования

2.1. Характеристика исследованного материала 56

2.2. Методы исследования иммуносерологических характеристик крови 57

2.3. Методы статистического анализа 64

ГЛАВА 3. Результаты исследования и их обсуждение

3.1. Иммуносерологическая характеристика систем крови АВО, Rhesus и Kell-cellano обследованной группы ханты новопоселенцев 66

3.2. Иммуносерологическая характеристика групп крови систем АВО, Rhesus, Kell-Cellano среди новопоселенцев различных национальных групп г. Нижневартовска 80

3.3. Выявление IgG-антител системы АВО среди ханты и новопоселенцев в зависимости от групповой принадлежности и пола 89

3.4. Характеристика серологических систем крови у обследованных с различными заболеваниями 97

3.4.1. Особенности распределения групп крови АВО и слабого антигена А2 у обследованных с различными патологиями желудочно-кишечного тракта 98

3.4.2. Частота фенотипов групп крови систем АВО и Резус среди больных, имеющих патологию сердечно-сосудистой системы 102

3.4.3 Иммуносерологические особенности распределения групп крови системы АВО среди больных ишемической болезнью сердца и язвенной болезнью желудка 106

Заключение

Выводы 114

Практические рекомендации 116

Список литературы 117

Введение к работе

Актуальность. Многолетние исследования свидетельствуют о том, что многовековое проживание различных популяций в привычных условиях среды обитания определило не только их внешний облик и культуральные черты, но и физиологические особенности жизнедеятельности организма. Проблема сохранения здоровья коренных народов Севера определяет необходимость глубокого изучения как физиологических механизмов адаптации пришлого населения, так и морфофункциональных особенностей коренного населения, для которого субэкстремальные и экстремальные условия северных регионов могут считаться адекватными (В.П. Казначеев, 1980; А.Н. Кучер, 2001).

Распределение эритроцитарных антигенов изучалось в различных популяциях мира и России, в том числе у финно-угорских народов (Н.Н. Меркулова, 1999; А.В. Суворов, 2007). Однако исследований, направленных на изучение распространения IgG(иммуноглобулины класса G)-антител системы АВ0, на изучение частоты встречаемости слабых антигенов А среди различных популяций, недостаточно. Проведенная нами работа в определенной степени направлена на восполнение «пробела» в изучении данных особенностей у здоровых и больных жителей Ханты-Мансийского автономного округа.

Установлено, что в последние десятилетия происходит разрыв этнического тождества национальных меньшинств, населяющих Ханты-Мансийский автономный округ. Исследование коренного населения в настоящее время приобретает особую значимость, что очень важно для исследуемого региона, так как в результате интенсивного освоения округа изменяется традиционный уклад жизни ханты, рост «метисации» населения за счет этнически смешанных браков, что в конечном итоге ведет к реорганизации популяционной структуры (Р.И Сукерник, 1986; Ф.А. Лузина, 1987; В.К. Шумный, 1992; В.Д. Вильгельм, 2004).

Слабая изученность своеобразия групповых факторов крови среди населения России побудила ведущих специалистов «Гематологического научного центра» разработать специальную программу «Уточнение геногеографической карты России» (2006). Уточнение распределения антигенов эритроцитов у пациентов является важным для практических врачей-трансфузиологов и, как отмечают исполнители научной программы в настоящее время не учитывается.

Объект исследования: распределение иммуносерологических характеристик крови.

Предмет исследования: особенности иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города.

Гипотеза исследования: уточнение антигенного состава и определение особенностей иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев возможно, если определить иммуносерологическими методами антигены, гены и генотипы эритроцитов систем АВО, антигенов систем Резус, Kell-Cellano, антитела системы АВО среди ханты и новопоселенцев г. Нижневартовска.

Цель исследования: изучение особенностей иммуносерологических характеристик крови ханты г. Нижневартовска в сравнительном аспекте с аналогичными параметрами новопоселенцев и выявление зависимости соматических заболеваний желудочно-кишечного тракта и сердечно-сосудистой системы от иммуносерологических характеристик крови.

Задачи исследования:

  1. Определить частоту встречаемости антигенов, генов и генотипов системы АВ0, антигенов систем Резус, Kell-Cellano среди ханты и новопоселенцев г. Нижневартовска.

  2. Определить частоту встречаемости антигенов систем АВ0, Резус и Kell-Cellanо среди новопоселенцев различной национальной принадлежности г. Нижневартовска.

  3. Изучить распространенность иммунных антител IgG-антител системы АВ0 среди ханты и новопоселенцев г. Нижневартовска с учетом групповой и половой принадлежности.

  4. Исследовать частоту встречаемости фенотипов групп крови систем АВ0 и Резус среди больных, имеющих соматические патологии желудочно-кишечного тракта и сердечно-сосудистой системы.

Методы исследования:

Определение антигенов эритроцитов групп крови системы АВ0 и слабого варианта антигена А2 проводили перекрестным методом с использованием моноклональных антител (цоликлонов) производства «Гематолог» (г. Москва) и стандартных эритроцитов. АВ0 и резус-принадлежность определяли гелевым методом с использованием ID карт фирмы «BioRad», Франция («Моноклональные АВ0/RH»). Исследование резус-принадлежности проводили с помощью цоликлона анти-D Супер.

Фенотипирование антигенов эритроцитов системы Резус (С, с, Е, е) проводили с использованием моноклональных антител анти-С, анти-Е, анти-е, анти-с серии Супер («Гематолог»). Антиген Келл определяли моноклональным цоликлоном анти-Келл Супер («Гематолог»). Использовали также ID-карты фирмы «BioRad», Франция («Моноклональные реагенты для RН/Kell фенотипирования».

При иммуносерологическом исследовании применяли методы лабораторной диагностики с использованием реакции гемагглютинации, утвержденные приказом МЗ РФ № 2 от 09.01.1998 г. (А.Г. Башлай, 1998).

В связи с одновременным присутствием в сыворотке крови человека естественных анти-А и/или анти-В антител и иммунных анти-А и/или анти-В антител необходима инактивация IgM антител. В качестве редуцента нами был использован 5% раствор унитиола (2,3-димеркаптопропансульфоната). Для выявления иммунных антител системы АВ0 использовали ID-карты фирмы «BioRad», Франция «Кумбс анти-IgG, C3d».

Статистическую обработку полученных результатов осуществляли методами вариационной статистики с определением средней арифметической величины, ошибки средней арифметической; о достоверности различий судили по параметрическому t-критерию Стьюдента, с определением уровня значимости Р (достоверными считали отличия при Р<0,05), критерия соответствия 2 (Г.Ф. Лакин, 1973).

Достоверность и обоснованность результатов исследования обеспечены исходными теоретическими положениями, применением методов исследования, адекватных предмету, целям и задачам исследования; использованием достаточной выборки с выделением групп по этническим и нозологическим признакам; применением методов математической статистики при количественном анализе полученных данных, адекватных поставленным задачам; обсуждением полученных результатов на научно-практических конференциях по проблемам медицины, физиологической адаптации и экологии человека.

Научная новизна исследования.

1. Проведен сравнительный анализ иммуносерологических характеристик крови среди ханты, постоянно проживающих в городе, и новопоселенцев, проживающих на территории г. Нижневартовска.

2. Выявлен антигенный полиморфизм эритроцитарных систем крови АВ0, Резус, Kell-Cellano среди ханты, постоянно проживающих в городе, и новопоселенцев, проживающих на территории г. Нижневартовска.

3. Показано, что ханты имеют отличающееся от многонационального пришлого населения распределение антигенов и генов эритроцитарных систем АВ0, Резус, Kell-Cellano

4. Впервые у ханты, жителей г. Нижневартовска, была выявлена группа крови А2В(IV).

5. Установлена высокая частота встречаемости АВ(IV) группы среди городских ханты по сравнению с ханты Сургутского района, что свидетельствует о возможно большей глубине процесса метисации.

6. Показана высокая частота групп крови АВ(IV) и В(III) системы АВ0 у городских ханты по сравнению с новопоселенцами различной национальной принадлежности.

7. Выявлено, что IgG-антитела системы АВ0 у городских ханты встречаются реже по сравнению с новопоселенцами, являющимися по своему составу многонациональным населением, что свидетельствует об иммунологической толерантности к группоспецифическим веществам А и В.

8. Встречаемость патологий сердечно-сосудистой системы и желудочно-кишечного тракта зависит от иммуносерологических особенностей новопоселенцев г. Нижневартовска. Впервые выявлена А2В(IV) группа крови среди новопоселенцев северного города, имеющих патологии желудочно-кишечного тракта.

9. Проведен сравнительный анализ частоты встречаемости фенотипов систем групп крови АВО у больных с язвенной болезнью желудка и ишемической болезнью сердца у новопоселенцев.

Теоретическая значимость исследования: заключается в том, что результаты исследования существенно дополняют сведения о механизмах физиологической адаптации людей к локальным географическим условиям мест длительного проживания. Впервые получены данные иммуносерологических характеристик крови ханты, новопоселенцев г. Нижневартовска, выявлен их антигенный полиморфизм, в результате чего выявлены этнические различия. Представленные данные иммуносерологического исследования популяции ханты и новопоселенцев различной национальной принадлежности г. Нижневартовска уточняют геногеографическую карту России, позволяют составить карту распределения клинически значимых и трансфузионно опасных эритроцитарных антигенов, что необходимо для выбора правильной тактики проведения гемотрансфузионной терапии, профилактики посттрансфузионных реакций гемолитического типа.

Практическая значимость исследования

Полученные данные служат основой для разработки мероприятий: по профилактике посттрансфузионных реакций гемолитического типа, в перинатальной диагностике АВ0-конфликтной беременности и в диагностике гемолитической болезни плода и новорожденного, с этой целью в КУ «Станция переливания крови» филиал г. Нижневартовске проводится определение IgG-антител системы АВ0 в сыворотках крови доноров и беременных при гетероспецифической беременности. Выявление группы крови А2В(IV) системы АВ0 учитывается при выборе тактики проведения гемотрансфузионной терапии. Установленные ассоциации групп крови у лиц с патологиями сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта позволяют формировать группы повышенного риска.

Результаты исследования используются в учебном процессе при чтении курсов «Физиология человека и животных», «Физиология системы крови» на кафедре анатомии и физиологии человека и животных ФГБОУ ВПО «Тюменский государственный университет», на кафедре нормальной физиологии ФГБОУ ВПО «Тюменская государственная академия», в ФГБОУ ВПО «Сургутский государственный университет Ханты-Мансийского автономного округа-Югры».

Основные положения, выносимые на защиту:

  1. Изменения частоты встречаемости антигенов эритроцитарных систем групп крови зависят от географических процессов (смена региона проживания населения) и генетических (метисация). Процессы метисации привели к изменению национальных особенностей распределения эритроцитарных антигенов.

  2. Частота встречаемости IgG-антител системы АВ0 в сыворотке крови человека зависит от групповой принадлежности и пола.

  3. Формирование предрасположенности к развитию патологий сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта у лиц с группами крови системы АВ0 и Резус могут различаться в зависимости от вида патологии и половой принадлежности.

Опытно-экспериментальная база исследования - Исследования проводились в лаборатории иммунологических исследований КУ «Станция переливания крови» филиал в г. Нижневартовске. Были обследованы ханты (n=458); доноры в возрасте от 18 до 60 лет (n=8951), в том числе была исследована группа доноров (n=1511) с учетом национальной принадлежности (русские, татары, украинцы). Больные, имеющие патологии: холецистит (n=1307), язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки (n=1082), атеросклероз магистральных сосудов нижних конечностей (n=765), варикозная болезнь (n=1168), тромбофлебит (n=540), ишемическая болезнь сердца (n=75). Обследованы здоровые и больные лица пришлого населения с различной патологией желудочно-кишечного тракта и сердечно-сосудистой системы с учетом пола.

Личный вклад автора. Автором самостоятельно проведен анализ литературы по профилю диссертационного исследования. Лично получены первичные данные, отражающие особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города. Автор провел исследования по определению антигенов эритроцитарных систем крови АВ0, Резус, Kell-Cellano и антител системы АВО с помощью иммуносерологических методик; проведена статистическая обработка данных. Автор обобщил результаты исследования, сформулировал выводы. Доля личного участия соискателя в личных публикациях - 67%.

Апробация результатов исследования: Основные материалы диссертации представлены на II съезде физиологов Урала (Екатеринбург, 2006), VI Сибирском физиологическом съезде (Барнаул, 2008), Всероссийских научно-практических конференциях с международным участием (Ярославль, 2009; Тюмень, 2012), ХХI съезде Физиологического общества имени И.П. Павлова (Калуга, 2010). По теме исследования опубликовано 9 научных работ, в том числе 4 научные статьи в изданиях, включенных в перечень ВАК.

Результаты исследования внедрены в работу казенного учреждения Ханты-Мансийского автономного округа - Югры «Станция переливания крови», в учебный процесс кафедры анатомии и физиологии человека и животных ФГБОУ ВПО «Тюменский государственный университет», кафедры нормальной физиологии ФГБОУ ВПО «Тюменская государственная академия», в ФГБОУ ВПО «Сургутский государственный университет Ханты-Мансийского автономного округа-Югры».

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 133 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, глав с описанием методов исследования, изложением результатов собственных исследований и их обсуждением, заключения, выводов, списка литературы (259 источников, из них 210 отечественных, 44 зарубежных авторов, 5 электронных ресурсов). Работа иллюстрирована 30 таблицами.

Антигены системы Kell-Cellano и их значение

Эпохальным событием в развитии медицинской науки и практике является открытие групп крови человека. Оно положило начало научно обоснованному методу переливания крови от одного человека другому [83; 156].

Представления о группах крови с момента открытия К. Ландштейнером системы АВО претерпели изменения: если в начале XX века под этим словосочетанием понимали только принадлежность к той или иной группе генетических вариантов эритроцитарных антигенов, формирующих группы крови каждого человека [85; 148; 171; 228; 245; 249].

Система группы крови состоит из одного или более антигенов, контролируемых одним генетическим локусом, двумя и более, очень тесно связанными гомологичными генами с небольшой или не выявляющейся рекомбинацией между ними. Для каждой системы показана четкая генетическая дискретность от другой системы группы крови [147; 171; 233].

Среди групповых систем встречается "нулевой" ("null") фенотип, который характеризуется тотальной или частичной, но выраженной, редукцией экспрессии антигенов, определяющих различные группы крови. Такие фенотипы встречаются в популяции достаточно редко. Тем не менее их изучение имеет огромное значение.

На фундаментальном уровне это позволяет расшифровать молекулярно генетические основы антигенного разнообразия; структурно функциональные взаимодействия молекул, участвующих в формировании этих фенотипов; надмолекулярную организацию мембранных комплексов. С клинической точки зрения представляет несомненный интерес ассоциация таких "нулевых " фенотипов с клиническими синдромами [32; 75; 254]. Оловникова Н.И. (2001) отмечает, что в случае «нулевых» фенотипов какие-то другие молекулы дублируют функции отсутствующих эритроцитарных антигенов [133].

Антигены эритроцитов формируются в раннем эмбриогенезе и выявляются уже у 5-9 недельного эмбриона. На ранних стадиях онтогенеза у плода еще ни разу не были выявлены анти-А или анти-В антитела отсутствующие у матери. Групповые антигены являются врожденными и не изменяются в течение жизни. Антигены эритроцитов являются структурными образованиями, расположенными на внешней поверхности эритроцитов, обладающими способностью взаимодействовать с соответствующими антителами и образовывать комплекс антиген-антитело [42; 68; 180; 182; 194; 227]. Фактически любая структура на поверхности эритроцитов, способная вызвать иммунный ответ, может рассматриваться как антиген или группа крови.

По химической структуре антигены групп крови в основном относятся к одному из классов: антигены систем ABO, Р, Lewis -гликолипиды, антигены систем Резус, MNSs - протеины [65; 89; 230; 236; 257; 258].

Ряд антигенов групп крови могут служить рецепторами для паразитов, бактерий, вирусов (вирус гриппа, вирус Сендай - антиген рецептор MN, Helicobacter pillory - Leb) [150]. При выяснении вопросов, связанных с происхождением антигенного полиморфизма людей, необходимо отметить широкое распространение большинства свойственных человеку антигенов в органическом мире. Антигены, подобные человеческим системам антигенов, были обнаружены у млекопитающих, растений, низших позвоночных, одноклеточных организмов. Многими исследователями была достаточно полно изучена система АВО у человекообразных обезьян: 11% шимпанзе имеют группу 0(1), остальные - А(П); среди орангутангов 85% - обладатели А(П) группы крови, 12% - группы AB(IV), 3% - группы В(Ш); среди горилл более распространена группа крови В (III) (82%), чем А(П). Также в крови некоторых обезьян обнаружены факторы систем Резус, Kell-Cellano, MNSs, Даффи. В современной иммуносерологии можно выделить 2 направления - фундаментальное и прикладное. Фундаментальное - развивающееся параллельно с достижениями молекулярной биологии (молекулярная генетика групп крови, исследование структуры и функций антигенов). Цель прикладного -обеспечение безопасности трансфузий, трансплантаций органов, создание методов, диагностикумов, разработка стратегии подбора крови [41; 62; 70; 133; 225; 256]

Каждый человек иммуногенетически индивидуален, поскольку его клетки и сывороточные белки имеют своеобразный и обычно только ему присущий набор антигенов. Появление (экспрессия) того или иного антигена зависит от наличия определенного гена и его варианта - аллеля. Вследствие большого количества генов и аллелей антигенный состав каждого организма неповторим. Исключение составляют однояйцевые близнецы, которые имеют идентичный набор генов и, соответственно, антигенов [42].крови системы АВО, то в настоящее время у человека идентифицировано более 20 систем групп крови, определяющих существование более 200

Естественные антитела системы АВО, биологическое значение и свойства

Забуференный декстрановый гель может быть как нейтральным, так и содержащим специфические антисыворотки или антиглобулиновый реагент на гелевом матриксе. На гель наносятся эритроциты или смесь эритроцитов и сыворотки. Клетки всегда вносятся перед сыворотками (в отличие от стандартных серологических методик), с тем, чтобы тестируемые сыворотки не контактировали с гелем, что особенно важно при проведении антиглобулинового теста. После инкубации следует центрифугирование в строго определенном режиме. Если условия центрифугирования не выполняются (центрифугирование не достаточно длительное или слишком мягкое), могут иметь место ложноположительные результаты. Ложноотрицательные результаты также могут иметь место при нарушении условий центрифугирования (при форсировании). Использование автоматической ID-центрифуги устраняет эти проблемы.

Для проведения тестов обычно используется три вида геля: 1) нейтральный, не содержащий специфических антител (применяется для поиска и идентификации антител солевым ферментным методом, на холодовой стадии пробы на совместимость крови донора и реципиента); 2) специфический, содержащий антитела (моноклональные или поликлональные) к антигенам крови человека (применяется для типирования антигенов эритроцитов систем АВО, Резус, Келл и др.); 3) антиглобулиновый, содержащий антитела (полиспецифические или моноспецифические) к иммуноглобулинам человека и компоненты системы комплемента (применяется для прямого и непрямого антиглобулинового теста, т.е. реакции Кумбса, при поиске и идентификации ауто- и аллоиммунных антител, пробы на совместимость крови донора и реципиента).

Исследуемая кровь добавляется в верхнюю часть микропробирок диагностических карт, и при центрифугировании осуществляется разделение агглютинированных и неагглютинированных эритроцитов следующим образом: неагглютинированные эритроциты имеют размер, сравнимый с размерами частиц геля, и свободно проходят сквозь них под воздействием центробежной силы, формируя на дне пробирок компактный осадок красного цвета - отрицательный результат; аглютинированные эритроциты ввиду больших размеров задерживаются на поверхности геля или в его толще - положительный результат.

Фиксированная агглютинация в геле позволяет легко оценивать результат реакции, а наличие контрольной пробирки в диагностической карте подтверждает достоверность полученных данных.

В зависимости от силы реакции агглютинации в солевой среде принята следующая оценка полученных результатов: - сильноположительный (++++) - образовавшиеся агглютинаты эритроцитов задержались на поверхности геля; - положительный (+++) - агглютинаты располагаются в верхней трети столбика геля; - слабоположительный (++) - агглютинаты фиксированы в верхней двух третях геля; - очень слабоположительный (+) - агглютинаты располагаются в нижней трети геля; отрицательный (-) - эритроциты формируют на дне микропробирки компактный осадок. Титрование естественных антител системы АВО.

Титрование естественных АВО антител проводили при комнатной температуре на плоскости в солевой среде, для чего 0,1 мл исследуемой сыворотки последовательно разводили изотоническим раствором хлорида натрия, получая разведения от 1:2 до 1:256. Затем в каждое разведение добавляли 0,01 мл 5% взвеси соответствующих стандартных эритроцитов А(П) и/или В (III) (в зависимости от группы крови АВО) и через 5 минут визуально учитывали результат. За титр агглютининов принимали то наибольшее разведение сыворотки, при которой еще наблюдалась агглютинация стандартных эритроцитов.

Определение иммунных анти-А, анти-В IgG-антител групповой системы АВО. Выявление иммунных IgG-антител системы АВО в сыворотке затруднено из-за одновременного присутствия в сыворотке естественных анти-А, анти-В IgM-антител. IgG-антитела класса системы АВО дифференцировали от IgM-антител после редукции последних сульфидредуцентами (унитиол) с применением стандартных эритроцитов О, А, В.

Унитиол применяли в виде 5% раствора (готовая лекарственная форма в ампулах 5% раствор). Унитиол после вскрытия использовали в течение 5 дней, хранили при температуре +5+8 С.

Редукцию антител анти-А и анти-В проводили путем смешивания равных объемов раствора редуцента с исследуемыми сыворотками. Пробы инкубировали в термостате при 37 С в течение 1 часа. Сыворотки, обработанные редуцентами, исследовали со стандартными эритроцитами групп А и В на плоскости методом прямой агглютинации при комнатной температуре. О присутствии IgG-антител системы АВО судили по способности редуцированных сывороток агглютинировать соответствующие стандартные эритроциты.

В качестве контроля выступала тест-система анти-D Супер, содержащая только IgM-антитела, ее параллельно редуцировали и далее исследовали в тех же условиях. Полноту устранения IgM-антител контролировали эритроцитами группы О.

Методы исследования иммуносерологических характеристик крови

Из приведенных данных видно, что между эмпирическими и вычисленными в соответствии с законом Харди-Вайнберга частотами фенотипов системы АВО нет полного совпадения.

Расчет х2"кРитеРия который оказался значительно ниже критического значения fot2 (исходя из 5-процентного уровня значимости), показал, что различия между фактическими и теоретически ожидаемыми равновесными частотами фенотипов системы групп крови АВО у татар, украинцев и русских носят случайный характер.

Следовательно, распределение частот фенотипов системы АВО у исследуемых новопоселенцев следует нормальному закону и не определяется какими-либо закономерностями, такими как миграция, экологические условия и др.

Интерес к групповым факторам крови со дня их открытия не ослабевает. Происхождение иммунных антител в организме человека имеет полигенный характер. Группоспецифические вещества А и В, подобные антигенам групп крови, приводят к индукции иммунного ответа, с переключением синтеза IgM-антител на иммуноглобулины IgG класса.

В результате социально-экономических преобразований советского и постсоветского периода, во время интенсивного освоения Севера произошли изменения в традиционном укладе жизни аборигенов, произошло увеличение этнически смешанных браков, что приводит к изменениям иммуносерологических особенностей крови ханты.

Нами были исследованы сыворотки 371 ханты и 960 новопоселенцев различной групповой принадлежности и пола.

В ходе исследования нами был проведен анализ частоты встречаемости иммунных IgG-антител системы АВО в зависимости от титра естественных IgM системы АВО антител у ханты и новопоселенцев (мужчин и женщин) [141]. Распределение антител иммунных IgG-антител системы АВО среди ханты сравнивали с таковым среди доноров г. Нижневартовска (табл. 19-21).

При анализе частоты встречаемости естественных IgM-антител с различными титрами (1:2 - 1:32 и 1:64 - 1:128) среди ханты 0(1) группы крови по сравнению с таковой новопоселенцев г. Нижневартовска достоверных различий выявлено не было (табл.19). Среди коренных народов было отмечено достоверно значимое снижение частоты встречаемости IgG-антител при титре 1:64 - 1:128 по сравнению с таковой новопоселенцев (31,2±8,7% и 82,8±3,85 соответственно).

Обращает на себя внимание тот факт, что у ханты нет достоверных различий частоты встречаемости IgG-антител в зависимости от титра естественных IgM-антител (42,6±9,3% - 1:2 — 1:32 и 31,2±8,7% - 1:64 — 1:128), тогда как у новопоселенцев достоверно чаще встречались IgG-антитела при титре естественных IgM-антител 1:64-1:128 (82,8±3,8%) по сравнению с титром 1:2 - 1:32 (49,3±3,4%). В ходе нашей работы не было выявлено достоверных различий по частоте встречаемости IgG-антител между мужчинами и женщинами с одинаковым титром IgM-антител, как среди ханты, так и среди новопоселенцев. Таблица 19 Выявление IgG-антител системы АВО в O(I) группе крови среди ханты г. Нижневартовска в зависимости от групповой принадлежности и пола (М±т)

Примечание: Р 0,01; - Р 0,001 - достоверность различий частоты встречаемости IgG-антител между ханты и новопоселенцами; DDD Р 0,001 -достоверность различий частоты встречаемости IgG-антител в зависимости от титра IgM-антител; ААА Р 0,001 - достоверность различий частоты встречаемости IgM-антител в зависимости от титра; п - количество человек в выборке

Среди ханты и нопоселенцев с А(П) группой крови была отмечена высокая встречаемость естественных IgM-антител с титром 1:2 — 1:32 (ханты - 84,7±3,5%, новопоселенцы - 87,8±1,8%) (табл.20). Среди женщин-новопоселенцев с титром естественных IgM-антител с титром 1:2 - 1:32 по сравнению с данными мужчин-новопоселенцев встречаемость иммунных IgG антител была достоверно выше (Р 0,01). Была выявлена высокая частота встречаемости IgG-антител у лиц с А(П) группой крови (ханты - 25,0±10,8%, новопоселенцы - 41,0±7,9%) при титре естественных IgM антител 1:64 -1:128 (табл. 20).

Таблица 20 Выявление IgG-антител системы АВО в А(П) группе крови среди ханты г. Нижневартовска в зависимости от групповой принадлежности и пола (М±т)

Примечание:00 Р 0,01; Р 0,001 - достоверность различий частоты встречаемости IgG в зависимости от титра IgM-антител; ААА Р 0,001 -достоверность различий частоты встречаемости IgM-антител в зависимости от титра; 00 Р 0,01 - достоверность различий между мужчинами и женщинами с одинаковыми тирами IgM-антител; п - количество человек в выборке В ходе анализа частоты встречаемости естественных IgM-антител среди лиц В(Ш) группы крови (табл. 21) было выявлено, что у ханты и новопоселенцев г. Нижневартовска данные антитела встречаются с практически одинаковой частотой: при титре 1:2 - 1:32 - 88,8±2,3% среди ханты; 85,6±21,0% - среди новопоселенцев.

Примечание: - Р 0,05; - Р 0,001 достоверность различий частоты встречаемости IgG-антител между ханты и донорами; - Р 0,05; DD Р 0,01; DPDP 0,001 - достоверность различий частоты встречаемости IgG в зависимости от титра IgM-антител; АА& - Р 0,001 -достоверность различий частоты встречаемости IgM-антител в зависимости от титра IgM-антител;000 -Р 0,001 - достоверность различий между мужчинами и женщинами с одинаковыми тирами IgM-антител; п - количество человек в выборке Отмечено, что при титре 1:64 - 1:128 иммунные IgG-антитела как среди ханты, так и среди новопоселенцев встречаются достоверно выше (Р 0,001). При этом частота встречаемости иммунных антител среди ханты значительно ниже по сравнению с частотой встречаемости среди новопоселенцев независимо от титра естественных IgM-антител (титр IgM-антител 1:2-1:32 встречаемость IgG-антител среди ханты 11,5±2,2%, среди новопоселенцев 41,6±3,0%; при титре IgM-антител 1:64-1:128 - 40,9±10,5% и 86,9±5,0%, соответственно). Обращает на себя внимание тот факт, что не было выявлено достоверных различий по частоте встречаемости IgG-антител между мужчинами и женщинами ханты с одинаковым титром естественных IgM-антител, тогда как IgG-антитела среди женщин-новопоселенцев встречались чаще, независимо от титра IgM-антител (Р «3,001).

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что лица с различными группами крови системы АВО имеют различную способность к иммунизации групповыми субстанциями А и В.

Было выявлено, что наибольшая частота встречаемости иммунных анти-А и/или анти-В IgG-антител среди лиц с O(I) и В (III) группами крови, наименьшая частота встречаемости - среди лиц с А(П) группой крови, потому что антиген А обладает более выраженными антигенными свойствами по сравнению с антигеном В. В природе наиболее часто встречаются вещества, подобные антигену А. В ходе исследования нами было выявлено, что иммунные IgG-антитела чаще встречаются при высоком титре (1:64 - 1:128) естественных IgM-антител, независимо от групповой принадлежности, хотя среди ханты O(I) группы крови не было достоверных различий по частоте встречаемости иммунных антител в зависимости от титра естественных IgM-антител. Отмечено, что среди коренного населения не выявлено достоверных различий между мужчинами и женщинами по частоте встречаемости иммунных IgG-антител. Встречаемость у ханты иммунных IgG-антител была реже по сравнению с новопоселенцами. Выявленный факт может быть объяснен тем, что проживание различных популяций в привычных условиях среды обитания указывает на минимальную антигенную нагрузку на иммунную систему.

При изучении особенностей частоты встречаемости IgG-антител к антигенам эритроцитов системы АВО среди ханты (табл. 22), было выявлено, что иммунные IgG-антитела встречались среди женщин-новопоселенцев, чаще (49,8±2,3%), чем среди мужчин-новопоселенцев (35,8±2,2%) (Р 0,001), что может объясняться сенсибилизацией организма во время гетероспецифической беременности у женщин. Обращает на себя внимание тот факт, что у ханты 0(1), А(П), В(III) среди мужчин и женщин отсутствуют достоверные различия частоты встречаемости иммунных антител IgG-антител, хотя при сравнении общего числа ханты (мужчин и женщин) с иммунными IgG-антителами было выявлено, что у женщин они встречались чаще (21,0±3,0% ), чем у мужчин (13,3±2,4%) (Р 0,05).

При анализе частоты встречаемости иммунных IgG-антител системы АВО было обнаружено, что среди ханты они встречаются достоверно реже, среди новопоселенцев, независимо от групповой принадлежности и пола (Р 0,05; Р 0,001).

В ходе дальнейшего исследования было выявлено, что среди лиц 0(1) группы крови наиболее высокая встречаемость иммунных антител: среди ханты - 40,0±5,8%), среди новопоселенцев - 59,7±2,7%. Средняя частота среди ханты и новопоселенцев В(Ш) группы крови -14,8±2,5% и 45,0±2,8% соответственно.

Характеристика серологических систем крови у обследованных с различными заболеваниями

В частности, увеличение частоты встречаемости антигена Е (Rh") системы Rhesus как в гомозиготе, так и в гетерозиготе может объясняться длительной изолированностью аборигенов Севера, проявлением физиологической адаптации к условиям Севера, близкородственными браками, что проявляется в снижении антигенного разнообразия.

Преобладание среди ханты В(Ш) групп крови как в гомозиготе, так и в гетерозиготе, высокая частота резус-положительных лиц сводят к минимуму несовместимость по данным системам, например, при беременности.

В настоящее время в соответсвии с научной программой Гематологического научного центра «Уточнение геногеографической карты России» наша работа вносит свой вклад в это исследование.

Сравнительный анализ наших результатов с данными других авторов (Н.Н. Меркулова, 1999; Е.А. Хромова, 2003) свидетельствует о неоднородости особенностей распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев даже в условиях одного административного округа.

В ходе нашей работы было отмечено меньшее количество выработки IgG-антител системы АВО у ханты независимо от половой и групповой принадлежности, при сравнении данного показателя с пришлым населением. Возможно данные исследования показывают наличие у коренного населения наличие иммунологической толерантности к группоспецифическим факторам А и В присутствующих в окружающей среде.

Системы АВО и Rhesus являются важными изосерологическими системами. Антигены данных систем имеют определенные аллоспецифические варианты, в частности антиген А2 системы АВО, антиген Du системы Rhesus. Антиген Du не был выявлен в нашем исследовании, но был выявлен случай A2B(IV) группы крови, что не характерно для данного этноса.

В целом полученные данные характеризуют ханты, как самостоятельный этнос, антигенный полиморфизм которых возник в течение длительного периода, является элементом физиологической адаптации к условиям проживания. Однако урбанизация увеличивает метисацию коренных жителей за счет этнически смешанных браков. У детей, выросших в данных семьях национальность, как правило, определяют по родителю коренной народности, что приводит к размыву этнической общности. Все это увеличивает актуальность медико-биологического изучения ханты.

Город Нижневартовск имеет многонациональный состав, население представлено в основном русскими, украинцами, татарами. В связи с промышленным освоением Ханты-Мансийского автономного округа неуклонно возрастала доля приезжего населения и, как следствие, увеличения межнациональных браков происходило «генное разбавление». Проведенные нами популяционные исследования среди ханты и новопоселенцев г. Нижневартовска уточняют геногеографическую карту России.

Под воздействием экологических факторов Севера организм новоселенцев вынужден прежде всего адаптироваться к холоду, он становится уязвим, в нем происходит перестройка гомеостаза, адекватная конкретным условиям нейрорегуляторных механизмов способствующих оптимальному уровню развития в новых условиях обитания. Это проявляется по-разному, но чаще всего в хронизации заболеваний желудочно-кишечного тракта, сердечно-сосудистой системы. В ходе нашей работы были продемонстрированы ассоциации различных фенотипов систем АВО и Rhesus с заболеваниями сердечнососудистой системы и патологиями желудочно-кишечного тракта.

Наличие связей фенотипа по системам АВО, Резус хотя и отмечались в литературе, однако целенаправленных исследований данной проблемы на территории Ханты-Мансийского автономного округа носят единичный характер. Групповая принадлежность крови различна у лиц с различными заболеваниями, так группа А(Ы) чаще встречалась у больных холециститом и патологиями сосудистой системы, у лиц имеющих O(I) группу крови чаще встречались заболевания язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, реже заболевания сосудистой системы. Эритроцитарные антигены являющиеся независимыми маркерами предрасположенности к раличным заболеваниям служат опорой для разработки долгосрочных стратегий оказания медицинской помощи населению. Сведения о чстотах встречаемости эритроцитарных антигенов, особенно слабых вариантов, также являются необходимыми для изучения общебиологических проблем исследования процессов расселения человечества, его генетического единства, механизмов формирования этносов.

Знание частоты распределения групповых факторов крови (с учетом АВО-принадлежности, резус-принадлежности, минорных антигенов эритроцитов) по регионам, необходимо для научно-обоснованного планирования заготовки крови при чрезвычайных ситуациях. Мы полагаем эти сведения полезными и в условиях северных территорий, на которых сосуществуют коренные малочисленные народности и большое число новопоселенцев.

Похожие диссертации на Особенности распределения иммуносерологических характеристик крови ханты и новопоселенцев северного города