Содержание к диссертации
Введение
Глава 1.
1.1. Роль соматической патологии матери на развитие потомства 9
1.2. Роль патологи гепатобилиарной системы матери на развитие потомства 21
Глава 2. Материалы и методы исследования 31
2.1 .Общая характеристика экспериментальных животных 31
2.2. Экспериментальные модели хронических поражений печени 31
2.2.1 .Модель хронического токсического поражения печени 32
2.2.2. Модель хронического .аутоиммунного поражения печени 33
2.3. Описание методов исследования 35
2.3.1 .Биологическая оценка экспериментальных животных 35
2.3.2.Морфологические методы исследования яичников экспериментальных животных 36
2.3.3. Гистохимические методы исследования яичников экспериментальных животных 37
2.3.4.Оценка эндокринной функции яичников 39
2.3.5.Иммуноморфологические методы исследования 40
2.3.6.Статистические методы исследования 41
Глава 3. Результаты собственных исследований 42
3.1. Биологическая характеристика потомства экспериментальных животных 42
3.2. Морфологическая характеристика яичников потомства самок крыс с хроническим поражением печени различного генеза 51
3.2.1. Характеристика весовых параметров яичников экспериментальных животных 51
3.2.2.Морфологический анализ яичников экспериментальных животных 56
3.2.3.Характеристика волокон яичников экспериментальных животных 67
3.2.4. Характеристика процесса атрезии фолликулов 70
3.2.5. Характеристика процесса фолликулогенеза 71
3.3. Содержание холестерина, суммарных липидов и аскорбиновой кислоты в фолликулярных и интерстициальных клетках яичника экспериментальных животных. 82
3.4. Оценка эндокринной функции яичников экспериментальных животных 93
3.5. Характеристика тучных клеток яичников потомства самок крыс 99
3.6. Анализ содержания рецепторов в структурных компонентах яичников к половым гормонам 115
Глава 4. Обсуждение полученных результатов118
Выводы 158
Список литературы 160
- Роль соматической патологии матери на развитие потомства
- Гистохимические методы исследования яичников экспериментальных животных
- Биологическая характеристика потомства экспериментальных животных
- Характеристика процесса фолликулогенеза
Введение к работе
Актуальность настоящего исследования . определяется важной ролью
материнского организма в решении проблемы воспроизводства полноценного
потомства, снижении перинатальной и ранней заболеваемости и смертности,
которые остаются достаточно ' высокими (Брун Б.ГІ, Дмитриев Б.И.,1998;
Зубкова Н.З., Чичерин Л.П., 1994; Кулаков В.И., Фролова О.Г.,1997; Фролова
О.Г., Пугачева Т.Н., 1994). ;,
Демографическая ситуация в Российской Федерации характеризуется существенным падением рождаемости, уровень которой за последние пять лет снизился на 36,1% (Кулаков В.И.и соавт., 2000). По оценке экспертов, современная медико-демографическая ситуация в стране наиболее неблагоприятная за все послевоенные годы и ставит перед учеными разных специальностей задачу поиска выхода из сложившейся ситуации. Анализ причин создавшегося положения показывает, что на формирование негативных процессов, происходящих в демографии, влияет сложный комплекс неблагоприятных факторов (социально-экономический кризис, экологическая напряженность, ухудшение условий труда и др.). Даже при очень низких уровнях рождаемости наблюдается рост заболеваемости детей сахарным диабетом, анемией, бронхиальной астмой, болезнями почек, врожденными аномалиями и др. Так, если в 1987 году^ по данным центра медико-экологических проблем охраны репродуктивного здоровья семьи, в России родилось 25% здоровых детей, то в 1997 году в эту группу могли быть отнесены лишь 2% новорожденных (Кулаков В.И. и соавт., 2000). Как свидетельствуют данные официальной статистики, ухудшение показателей воспроизводства населения России происходит на фоне понижения качества здоровья беременных женщин.
В структуре материнской заболеваемости и смертности, во многом определяющей повышенный уровень перинатальных потерь, особое место занимают экстрагенитальные болезни, в том числе патология гепатобилпарной
5 системы (Бодяжина В.И., 1987; Крутских Е.В., 1976; Логинов А.С. и соавт., 1985; Логинов А.С, Блок Ю.Е., 1987; Михайленко Е.Т. и соавт., 1990; Подымова С.Д., 1984; Фарбер Н.А. и др., 1990; Шерлок Ш., Дули Дж., 1999; Andey Е.К., Cohen A.M., 1990; Oney Т. Weitzel H., 1990).
Многочисленными клиническими- наблюдениями (Каримова Д.Ф. 1981, Кусаинова И.З. 1985; Михайленко Е.Т. и соавт., 1990; Фарбер Н.А. 1990) и экспериментальными исследованиями (Бояков А.А. 2001; Брюхин Г.В., 1990-2001; Евченко'Е.В. 2001; Николина О.В., 2000; Савченков Ю.И., Лобынцев К.С, 1980; Пашнина Е.Н., 2003; Пивень Г.В. 1996; Учаев Д.А., 2002; Федосов А.А., 2003) показано, что заболевания гепатЪбилиарной системы у матери обусловливают отставание детей в физическом развитии, предрасположенность к инфекционным болезням, нарушение иммунного ответа по клеточному и гуморальному типу, нарушение становления гастроассоциированной и бронхоассоциированной лимфоидных систем, а также макрофагальной и эндокринной систем.
Приведенные выше данные, а также практически полное отсутствие
1 Y
сведений о постнатальном развитии женской репродуктивной системы у потомства матерей с патологией гепатобилиарной системы определили цель и задачи настоящего исследования.
Цель исследования: изучить особенности структурно-функционального становления яичников в постнатальном периоде у потомства самок с экспериментальным поражением печени различного генеза.
Задачи исследования: »'
Оценить общефизическое развитие потомства от самок с экспериментальным поражением печени токсической и аутоиммунной природы.
Изучить особенности морфологии яичников потомства самок с хронической патологией печени.
»'
і'
3. Проанализировать особенности становления фолликулогенеза в
, » яичниках потомства самок в условиях моделирования патологии
гепатобилпарной системы.
4. Оценить эндокринную функцию яичников у потомства самок крыс с
экспериментальным поражением гепатобилиарной системы.
Научная новизна.
На адекватных экспериментальных моделях, воспроизводящих различные формы поражения печени у матери (аутоиммунную и токсическую), впервые установлены общие механизмы нарушения развития потомства.
Впервые проведено комплексное исследование особенностей
постнатального морфогенеза яичников потомства самок крыс с хронической
патологией гепатобилиарной системы в различные сроки постнатального
периода. '
Новыми являются данные по особенностям процессов фолликулогенеза в яичниках животных от матерей с экспериментальным хроническим поражением печени.
Новыми являются данные об особенностях становления эндокринной функции яичников потомства самок крыс с экспериментальным поражением печени.
'| * ' ' ''
Практическое и теоретическое значение.
Диссертационное исследование относится к фундаментальным. Полученные результаты содержат новые сведения о влиянии хронических поражений гепатобилиарной системы различного генеза (токсического, аутоиммунного) у самок на некоторые показатели физиологической зрелости потомства. В частности, у подопытных животных установлены высокие показатели мертворождения, ранней неонатальной смертности, нарушение весовых индексов в период раннего постнатального онтогенеза, а также запаздывание сроков исчезновения признаков физиологической незрелости.,
Проведенное исследование, выявившее общие и специфические механизмы неблагоприятного влияния гепатобилиарной» патологии различного генеза матери на структурно-функциональное становление яичников их потомства, может быть использовано для патогенетического обоснования медикаментозной коррекции функциональных нарушений репродуктивной системы.
Несмотря на определенную условность экстраполяции экспериментальных
данных на клинические ситуации, результаты исследования позволяют
расценивать наличие патологии гепатобилиарной системы у матери как фактор
риска в отношении становления репродуктивной функции у потомства. Отсюда
вытекает целесообразность организации диспансерного наблюдения за
девочками, рожденными от матерей, имеющих в анамнезе заболевания
гепатобилиарной системы. ;-
Внедрение.'
Результаты проведенного исследования внедрены в лекционный курс кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии Челябинской государственной медицинской академии (разделы "Органы репродукции" и "Нарушения внутриутробного развития").
Апробация диссертационного материала.
Материалы диссертации доложены и сообщены: на конференции молодых ученых (Челябинск, 2000), межвузовской конференции молодых ученых "Актуальные, проблемы патофизиологии" (С-Петербург, 2001), на научной конференции "Морфологические основы гистогенеза и регенерации тканей" (С-Петербург, 2001), на совместном заседании кафедр гистологии и эмбриологии Челябинской государственной медицинской академии и кафедры физиологии человека и животных Челябинского государственного педагогического университета (Челябинск, 2003).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ.
Объем и структура диссертации. »
* '/
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания использованных моделей и методов исследования, глав с изложением результатов собственных исследований и обсуждения, выводов и списка используемой литературы, который включает 272 наименования, из них 210 отечественных и 62 иностранных. Объем диссертации 188 страниц машинописного текста. Иллюстративный материал представлен 12 таблицами, 37 графиками и рисунками.
Положения, выносимые на защиту:
Хронические поражения гепатобилиарной системы матери являются существенным фактором риска, неблагоприятно влияющим на исход беременности и родов, антенатальное и постнатальное развитие потомства.
Формирование аутоиммунного и токсического синдромов при поражении гепатобилиарной системы у матери сопровождается нарушением структурно-функционального становления яичников потомства в постнатальном периоде.
Основными механизмами изменения структурно-функционального
1 » : ;
становления репродуктивной системы у потомства самок с хронической
патологией печени является нарушение процессов фолликулогенеза и
эндокринной функции яичника.
Роль соматической патологии матери на развитие потомства
В последнее десятилетие наблюдается негативная тенденция в показателях здоровья женщин и детей России (Зубкова Н.З., Чичерин Л.П., 1994; Фролова О.Г., Пугачева Т.Н., 1994). Это подтверждается высоким уровнем младенческой смертности 52,7 на 100000 живорожденных (Кулаков В.И., Фролова О.Г.,1997), что в 5-10 раз превышает данный показатель в экономически развитых странах (Стародубов В.И., 1999), снижающимся уровнем рождаемости (Брун Б.П., Дмитриев Б.Й.Ц998; Кулаков В.И., Фролова О.Г.,1997), ухудшением состояния здоровья беременных женщин и рожениц. За 1990-1994 гг. среди беременных России в 2,8 раза возросла частота анемии, в 2 раза - заболеваемость мочеполовых органов, в 1,5 раза- системы кровообращения, в 1,7 раза больше стало гестозов беременных. В 1994 году нормальные роды были зафиксированы только у 37,9% беременных. Вместе с тем, экстрагенитальные заболевания женщин в 14% случаев являются причиной гибели новорожденных (Зубкова Н.З., Чичерин Л.П., 1994).
Не вызывает сомнений тот факт, что состояние здоровья матери определяет здоровье последующих поколений и прежде всего новорожденных детей. Здоровые дехи (28%о) в подавляющем большинстве случаев родились от матерей с низким риском перинатальной патологии, а дети, выписанные из стационара с диагностированным заболеванием (31% ), родились преимущественно (83%) от матерей с высоким риском перинатальной патологии (Кулаков В.И., Фролова О.Г., 1997). В структуре причин смертности детей в возрасте до года преобладаюті состояния, возникающие в перинатальный период (от 28 недели беременности, включая роды и первые 7 дней жизни ребенка), и врожденные аномалии (Брун Б.П., Дмитриев Б.И., 1998). В настоящее время наблюдается отчетливое возрастание значимости патологии плода, приводящей К нарушению или невозможности адаптации ребенка к внеутробной жизни. Это иммуноконфликтная беременность, врожденные инфекции, синдром дыхательных расстройств, аномалии развития (Самсыгина Г.А. и соавт., 1999). В динамике младенческой смертности не происходит существенных устойчивых положительных сдвигов в уровне этого показателя. Более того, отставание по уровню младенческой смертности России от развитых стран продолжает увеличиваться (Баранов А.А., 1995). Несмотря на то, что в последние годы появилась тенденция к снижению младенческой смертности с 17,2 на 1000 родившихся в 1997 году до 14,6 в 2001 году, эти показатели не могут удовлетворять педиатров. Повышается общая заболеваемость новорожденных: в 1990 г. в России рождался больным или заболевал каждый седьмой младенец, в 1992 г - уже каждый пятый, в 1995 г. -каждый четвертый, в 1994 - почти каждый третий (Брун Б.П., Дмитриев Б.И., 1998). По данным Самсыгиной Г.А., в 1999 году почти каждый второй ребенок заболевает в первые часы или дйи жизни. Возрос показатель инвалидности, на 35% возросло число детей с функциональными расстройствами. Характерным для нашего времени становится "трофологический синдром", характеризующийся дисгармоничным физическим развитием, снижением функциональных резервов, задержкой полового развития (Баранов А.А., 1999). Наблюдается явление децелерации, заключающееся в отставании физического развития детей от их возрастных характеристик со всеми сопутствующими атрибутами - белковым и витаминным голоданием, ухудшением памяти и умственных способностей, снижением иммунной и нервно-психической резистентности организма (Тишук Е.А., 2001). Увеличивается число детей, предрасположенных к развитию различных заболеваний. Факторы окружающей среды играют существенную роль в состоянии здоровья населения в целом и особенно отдельных возрастных групп (Тимофеев В.П., Семенова В.В., 1993). Наиболее чувствительны к воздействию факторов окружающей среды группы населения со сниженными адаптационными возможностями (Кутепов Е.Н. и соавт., 1999). Таким контингентом являются беременные женщины, поскольку у них значительно изменен гормональный профиль, а также организм женщины подвергается воздействию продуктов обмена плода (Кутепов Е.Н. и соавт., 1999; Schardem L, 1983J. Группу высокого риска развития предпат;ологических и патологических состояний представляют собой новорожденые и дети грудного возраста, рожденные от матерей, проживающих вблизи источников загрязнения окружающей среды тяжелыми металлами (Кулаков В.И. и соавт., 1993; Паранько Н.М. и соавт., 2002; Стрижова Н.В., Машаева Л.Л., 1996). Их токсическое действие на фетоплацентарный; комплекс является одной из причин нарушения состояния здоровья детей на ранних этапах онтогенеза (Гончарук Е.И., Сидоренко Г.И., 1988; Динерман Д.А., 1980). Низкая эффективность плацентарного барьера и выраженные кумулятивные свойства тяжелых металлов приводят к хроническому k воздействию этих веществ на систему мать - плод, что обусловливает высокий риск перинатальной патологии (Мищенко П.П., 1997; Ярушкин В.Ю., 1992). К числу экологических факторов, определяющих уровень перинатальных потерь, относится качество питьевой воды. У беременных, потребляющих маломинерализованную воду, чаще имеет место анемия, патологическая прибавка в массе и гипертензия, а в родах неполное отделение последа и стремительное течение родов, выше численность группы риска по внутриутробному инфицированию плода (Лутай Г.Ф., 1992). Водный фактор определяет и качество молока, генотоксичность которого превышает контрольные образцы в 1,5-2 раза (Кулакова В.И., Кирбасова Н.П., 1993). Экспериментальные работы подтверждают эмбриотоксический эффект ионизирующего излучения (Гаврилюк Ю.И. 1987, Литвинов Н.Н. Козачков В.И., 1988).
Гистохимические методы исследования яичников экспериментальных животных
Общепризнанно, что исходным материалом для синтеза биологически активных соединений эндокринными клетками гонад .являются аскорбиновая кислота, холестерин, липиды. Исходя из этого, для оценки эндокринной функции яичников использовались гистохимические методы исследования.
Для выявления липидов в эндокринных клетках гонад использовалась окраска Суданом черным В по Лизону (Саркисов Д.С., Перова Ю.Л., 1996). Метод Бакхуса с использованием азотнокислого серебра использовался нами для анализа содержания аскорбиновой кислоды в фолликулярных клетках, интерстициальных клетках t. interna, клетках атретических фолликулов яичника (Пирс Э., 1960). Метод поляризационной микроскопии использовался нами для выявления холестерина (Пирс Э, 1960). Анализ реакции принтом оценивался полуколичественно с оценкой интенсивности свечения в каждом поле зрения.
Анализ результатов гистохимических реакций, использованных нами для выявления липидов, аскорбиновой кислоты, холестерина осуществлялся полуколичественным методом путем оценки интенсивности гистохимической реакции в 500. эндокринных клетках яичников с последующим вычислением среднего гистохимического показателя по формуле: О, 1, 2, 3, 4 - интенсивность гистохимической реакции (в баллах); а, б, в, г, д - число клеток с данной интенсивностью гистохимической реакции; К - средний гистохимический показатель реакции. В доступной нам литературе имеются единичные сведения о наличии и роли тучных клеток в яичниках (Быков В.Л., 2001; Яглов В.В. и соавт., 1990). В связи с этим нами использовались гистохимические реакции для выявления тучных клеток в яичниках. Для выявления тучных клеток серийные парафиновые срезы окрашивались 0,01% раствором толуидинового синего при рН=4,9, 0,05% нильским голубым в 1% серной кислоте при рН=0,9 0,1% водный раствор (Лилли Р., 1969), полихромной синькой (Роскин Г.И., 1946). Анализ содержания и функционального состояния тучных клеток в яичниках осуществлялся по общепринятой методике Линднер Д.П. с соавт. (1980). При этом определялось количество тучных клеток в органе. Кроме того, оценивалась степень метахромазии и количество гранул с последующим определением « индекса насыщения. По степени насыщения гранулярным материалом тучные клетки подразделялись на 4 группы: 1 - очень темные клетки, которые плотно заполнены интенсивными метахроматическими гранулами, в результате чего становятся неразличимыми ни отдельные гранулы, ни ядро; 2 - темные клетки плотно заполнены интенсивными метахроматическими гранулами, отдельные гранулы различимы, ядро не полностью замаскировано ими; 3 - светлые клетки, рыхло заполнены хорошо различимыми гранулами с менее интенсивной метахромазиёй и с отчетливым ядром; 4 - очень светлые клетки, с небольшим количеством слабо метахроматических гранул и опустошенные или с единичными гранулами и со слабой метахромазией цитоплазмы. Индекс Насыщения определялся как отношение суммы всех темных к сумме всех светлых тучных клеток. Кроме того, производили определение/ секреторной активности всех тучных клеток по индексу дегрануляции. При этом клетки также подразделяли на 4 группы: 0 - клетки с отсутствием признаком дегрануляции; 1 - клетки со слабой дегрануляцией, которые характеризуется небольшим количеством гранул, расположенных на незначительном ее протяжении; 2 - клетки с умеренной дегрануляцией. Гранулы находящиеся полностью или частично? за пределами клетки располагаются: по всей поверхности клеточной мембраны, однако контуры клетки сохранены на всем протяжении; 3 - клетки с сильной дегрануляцией, при этом стираются контуры клетки, которые частично представляются при световой микроскопии ядром, лежащим среди большого количества рассыпанных гранул. Индекс дегрануляции определялся по формуле: J=0 х а+1 х 6+2 х в+3 х г/п, где О, 1, 2, 3 - степень дегрануляции тучных клеток; а, б, в, г - число клеток с нулевой, слабой, умеренной, сильной дегрануляцией/ п - суммарное число тучных клеток в органе.
Об эндокринной функции яичников 30- и 60-дневных крысят от самок-крыс с хроническим экспериментальным поражением печени судили на основании концентрации в сыворотке крови эстрогенов, прогестерона, тестостерона. Кроме того, производился анализ концентрации в сыворотке крови экспериментальных животных фолликулостимулирующего (ФСГ) и лютеинизирующего (ЛГ) гормонов гипофиза. Анализ концентрации гипофизарных гормонов и половых гормонов яичников определяли в сыворотке крови 30- и 60-дневных крысят методом твердофазного иммунноферментного анализа, используя наборы реактивов" Dia.Metra S.r.l. (Италия), стероид ИФА-прогестерон, стероид ИФА тестетерон, гонадотропин ИФА-ЛГ, гонадотропин ИФА-ФСГ (Санкт-Петербург)
В лунки с иммобилизованными на внутренней поверхности моноклональными антителами к гормону добавляли исследуемую сыворотку и коньюгат пероксидазу. Инкубировали 1,5 часа при комнатной температуре (эстрадиол 2 часа при температуре 37 градусов). После окончания инкубации удаляли содержимое лунок, промывали буфером. Вносили субстратную смесь и инкубировали в темноте 15-30 минут. Добавляли 10% раствор серной кислоты для остановки ферментной реакций. Измеряли оптическую плотность на фотометре. На основании калибровочной кривой рассчитывали концентрацию гормонов.
Биологическая характеристика потомства экспериментальных животных
Одним из показателей функционального состояния органа является его масса. В связи с этим нами проводилось исследование абсолютного и относительного веса яичников у крысят от самок с хроническим поражением гепатобилиарной системы в различные сроки постнатально го периода (15-й, 30-й, 45-й и 60-й день жизни) (таблица 4). Анализ абсолютного веса яичников экспериментальных животных позволил выявить следующую закономерность (рис. 7). У интактных крысят в период с 15 по 60-й день постнатальной жизни отмечается постепенный рост массы яичника. Так, если у 15-дневных крысят интактной группы абсолютный вес яичников составил 3,22±0,088мг (правый яичник), 3,17±0,067 мг (левый яичник), то у 45-дневных крысят этот показатель составил 9,75±0,834 мг (правый яичник), 8,92±0,611 мг (левый яичник). К 60 дню исследуемый показатель изменяется незначительно и составляет 11,11±0,790 мг (правый яичник), 10,44±0,941 мг (левый яичник). Обращает на себя внимание, что на всех србках исследования масса правого яичника несколько превышает данный показатель левого яичника (таблица 4), что согласуется с данными литературы (Кобозева Н.В., Гуркин Ю.А., 1986; Вихляева Е.М., 2000).
При исследовании данного показателя у крысят токсической и аутоиммунной групп нами установлена та же закономерность (рис. 7). В период постнатального развития происходит постепенное увеличение массы яичников, достигающая максимальной величины на 60-й день жизни. Так, если у 15-дневных крысят токсической и аутоиммунной групп абсолютный вес яичников соответственно составил 3,21±0,109 мг и 3,09±0,061 мг (правый яичник) и 3,21 ±0,101 мг и 2,94±0,106 мг (левый яичник), то к 60 дню этот показатель увеличивается и составляет соответственно 7,061 ±1,167 мг и 7,81±0,298 мг (правый яичник) 6,69±1,134 и 7,5 ±0,567 (левый яичник). Вместе с тем обращает на себя внимание тот факт, что на всех сроках исследования абсолютный вес яичников у крысят интактной группы превышает таковой у крысят токсической и аутоиммунной групп (таблица 4).
Наибольший интерес представляет другой показатель - весовой индекс яичника, представляющий собой отношение массы органа к массе животного, выраженное в процентах. Нами установлено , что у всех экспериментальных животных, контрольной и подопытных групп весовой индекс яичников в период постнатального развития постепенно снижается и достигает минимальной величины к периоду половой зрелости (рис.8). Обращает на себя внимание тот факт, что на большинстве сроков исследования весовой индекс яичников у подопытных крысят несколько снижен по сравнению с интактной группой. Так если, у 15-дневных интактных крысят исследуемый показатель составил 0,024±0,0006 %(правый яичник), 0,024±0,0006 % (левый яичник), то к периоду половой зрелости он снижается до 0,014±0,0009 % (правый яичник), 0,013±0,0011 % (левый яичник). У 15-дневных крысят токсической группы весовой индекс яичника составил 0,02±0,0011 % (правый яичник), 0,022±0,0014 % (левый яичник). К 60 дню постнатальной жизни этот показатель снижается до 0,013±0,0024 % (правый яичник), 0,013±0,0024 % (левый яичник). Аналогичная закономерность выявлена у крысят аутоиммунной группы. У 15-дневных крысят аутоиммунной группы весовой индекс яичника составил 0,024±0,0008 % (правый яичник), 0,022±0,0009 % (левый яичник). К 60 дню постнатальной жизни этот показатель снижается до 0,013±0,0003 % (правый яичник), 0,013±0,001 % (левый яичник).
Таким образом, анализ полученных результатов позволяет констатировать, что у подопытных крысят токсической и аутоиммунной групп абсолютный вес яичников на большинстве сроков исследования снижен до сравнению с интактными крысятами соответствующего возраста. Кроме того у потомства самок крыс с хроническим поражением печени токсического и аутоиммунного генеза выявлена тенденция к снижению и весового индекса яичников по сравнению с контролем. Одним из важнейших показателей структуры яичников являются площади коркового и мозгового вещества органа. Прежде всего, нами установлено, что у интактных животных в постнатальном периоде происходит постепенное увеличение общей площади яичника (таблица 5), представляющую собой среднюю площадь яичника, определяемую с помощью серийных срезов органа. Так, если у новорожденных крысят исследуемый показатель был равен 0,1275±0,0005 мм2. К периоду половой зрелости общая средняя площадь яичника составила 2,819±0,0433 мм2. Аналогичная закономерность выявлена нами у животных токсической и аутоиммунной группы (таблица 5).
Характеристика процесса фолликулогенеза
Общепризнанно, что состояние яичников во многом определяется характером его кровоснабжения. Анализ особенностей кровоснабжения мозгового вещества яичников подопытных животных позволил выявить следующую закономерность. Прежде всего, у интактных животных количество кровеносных сосудов в мозговом веществе- в период с 15 по 30-й день постнатальной жизни стабилизировано и колеблется в пределах 6,25±0,248 и 6,5±0,220. К 45 дню количество сосудов у интактных крысят существенно увеличивается (20,5±1,188) и стабилизируется (19,1±0,555 - на 60-й день).
В период постнатального развития меняется и средний диаметр кровеносных сосудов. Нами установлено, что у интактных крысят диаметр кровеносных сосудов достигает наибольшего уровня к 30 дню постнатальной жизни (40,84±0,41). В то время как. у 15-дневных животных этот показатель был равен 28,24±1,373. К периоду половой зрелости средний диаметр кровеносных сосудов несколько снижается (35,24±0,349). Аналогичная закономерность выявлена у животных аутоиммуннЬй группы. Так, если у крысят аутоиммунной группы на 15-й день постнатальной жизни количество кровеносных сосудов составляет 3,67±0,329у то к 45-у дню этот показатель увеличивается до 19,00±0,288. К 60-у дню исследуемый показатель меняется незначительно 16,8±0,489. При этом средний диаметр кровеносных сосудов первоначально снижается с 53,75±2,495 (на 15-ый день) до 37,94±0,501 (на 30-ый день). К 45-у дню средний диаметр сосудрв вновь существенно возрастает (65,68±0,667), а затем к 60-у дню постнатального периода средний диаметр вновь уменьшается до 23,72±0,099.
У животных токсической группы количество кровеносных сосудов продолжает увеличиваться до периода половой зрелости с 3,33±0,527 (на 15-й день) до 16,5±2,500 (на 60-й день). При этом средний диаметр кровеносных сосудов яичников достигает наибольшей выраженности на 30-й день (75,721±0,839), а затем заметно уменьшается, и на 60-й день исследования составил 32,48±0,643.
Таким образом, анализ полученных результатов позволяет сделать заключение, что у потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени в яичнике имеет место уменьшение по сравнению с контролем числа кровеносных сосудов и меняется их диаметр.
Другим критерием функционального состояния яичников является интенсивность процесса атрезии фолликулов. Нами установлено, что у интактных животных в период полового созревания, интенсивность процесса атрезии растущих фолликулов постепенно увеличивается с 16,71±0,665 на 30-й день постнатальной жизни до 19,00± 1,000 на 45-й день. Наибольшее количество атретических тел выявляется у интактных животных на 60-й день (32,33± 1,861): Наряду с этим меняется и площадь атретических фолликулов с 0,1541±0,003 мм2 на 30-й день до 1,245±0,121 мм2 на 60-й день.
У потомства самок с токсическим и аутоиммунным поражением печени количество атретических фолликулов в яичнике на всех сроках исследования повышено по сравнению с контролем. Так, если у животных токсической группы на 30-й день исследования количество атретических фолликулов составило 19,5±0,490, к 45-у дню этот показатель существенно увеличивается до 38,000±2,001 и стабилизируется 40,000±1,158 (на 60-й день).
Несмотря на увеличение числа атретических фолликулов, у животных токсической группы суммарная площадь, занимаемая ими на 45-й, 60-й дни исследования снижена по сравнению с контролем и составляет соответственно 0,5548±0,009 мм2 и 1,097±0,092 мм2. У 30-дневных животных аутоиммунной группы количество атретических фолликулов составило 33,00±1,000. К 45-у дню постнатального периода количество атретических фолликулов увеличивается до 41,33±0,667, а затем к 60-й дню этот показатель снижается (30,67±0,333). Площадь, занимаемая атретическими фолликулами, у животных аутоиммунной группы до периода полового созревания увеличивается с 0,236±0,029 мм2 на 30-й день до 0,992±0,058 мм2 на 60-й день.
Таким образом, анализ полученных результатов позволяет сделать заключение, что в период полового созревания и половой зрелости (45-й и 60-й день) у потомства самок крыс с токсическим и аутоиммунным поражением печени процессы атрезии растущих фолликулов протекают более интенсивно. Вместе с тем, меньшая суммарная площадь атретических фолликулов у подопытных животных позволяет предположить, что атрезии подвергаются фолликулы преимущественно на более ранних стадиях развития.
Важнейшим показателем структурно-функциональной зрелости яичников является содержание фолликулов. В связи с этим, нами проводилось определение суммарного пула фолликулов и числа фолликулов, соответству кшдих различным стадиям развития.
Прежде всего нами установлено (таблица 7), что у всех животных интактнои и подопытных групп до Периода полового созревания происходит постепенное снижение числа фолликулов, достигающее минимального содержания к периоду половой зрелости (рис.15). Как видно из рисунка, содержание, фолликулов в яичнике животных токсической / и аутоиммунной группы на всех сроках исследования снижена по сравнению с контролем, исключение составили 15-дневные крысята аутоиммунной группы, у которых исследуемый показатель превысил таковой в контроле.
Наибольший интерес представляют данные, отражающие содержание фолликулов различной степени зрелости. При оценке содержания фолликулов различной степени зрелости мы руководствовались общепринятыми критериями. Согласно классификации Petersen, Peters (1969), фолликулы подразделяются на 8 классов по диаметру фолликула и числу гранулезных клеток на .максимальном сечении фолликула. Фолликулы, имеющие в окружении менее 10 клеток, относили к стадии 1-2 (покоящиеся), За - 1 - 20 клеток, 36- 21-60, 4- 61-100, 5а-101 -.200, 56 - 201-400 (растущие), 6-401-600, 7-8 - больше 600 (полостные).
