Введение к работе
Актуальность проблемы
Злокачественные заболевания системы крови - одна из важнейших проблем
современной биологии и медицины. Особое место среди них занимают гемобластозы,
сопровождающиеся выраженной эозинофилией в периферической крови (Ackerman
S.J. et al., 2007). Механизмы развития эозинофилии при различных патологических
процессах неоднозначны. При разделении по типу эозинофилия может быть
симптоматической, клональной и идиопатической. Эозинофилия может
сопровождать любой вариант злокачественного заболевания крови, быть при этом
реактивной или клональной. Наличие эозинофилии оказывает влияние на
клинические проявления острых лейкозов, лимфом, хронических
миелопролиферативных заболеваний. Клональные эозинофилии отражают процесс вовлечения эозинофилов в пролиферацию лейкозного клона клеток и являются частью общего процесса (Афанасьев Б.В., 2009). В соответствии с классификацией Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ, 2008) клональные эозинофилии включают состояния - хронический эозинофильный лейкоз и опухоли миелоидной и лимфоидной ткани с эозинофилией и наличием мутаций а/р рецептора фактора роста тромбоцитов (platelet-derived growth factor -PDGFR) или 1 рецептора фактора роста фибробластов (Tefferi A et. al, 2009). Гиперэозинофильный синдром является частью идиопатической эозинофилии, при этом эозинофилия может иметь черты моноклональности и трансформироваться в миелопролиферативное заболевание с образованием соединения с тирозинкиназной активностью FIP1L1/ PDGFRA (Klion А. 2009). Реактивная эозинофилия является фактором прогноза при развитии реакции «трансплантат против хозяина» после аллогенной трансплантации гемопоэтических клеток.
Проведение дифференциального диагноза при наличии эозинофилии в ряде случаев затруднено. Принципиально новые подходы к диагностике и лечению заболеваний, протекающие с гиперэозинофилией, являются актуальными и могут быть оптимизированы на основе изучения клеточных и молекулярных механизмов их возникновения и развития. В настоящее время отсутствуют данные о комплексном анализе вігутриклеточньїх и мембраноассоциированных маркеров эозинофилов при клональных и реактивных эозинофилиях. Исследование цитотоксических белков эозинофилов, химических медиаторов тучных клеток и мембраноассоциированных маркеров эозинофилов при клональных и реактивных эозинофилиях может внести определенный вклад в изучение патогенетических механизмов развития эозинофилии и способствовать определению новых диагностических критериев гиперэозинофильных состояний. Эти положения определили цель и задачи исследования.
Цель работы:
Изучить содержание внутриклеточных маркеров и особенности экспрессии мембраноассоциированных антигенов эозинофилов с целью оптимизации дифференциальной диагностики клональных и реактивных эозинофилии.
Задачи работы:
-
Определить содержание растворимых маркеров эозинофилов и тучных клеток (эозинофильный катионный белок, триптаза) в сыворотке крови у пациентов с клональными и реактивными эозинофилиями.
-
Изучить особенности экспрессии и интенсивности флюоресценции мембраноассоциированных маркеров эозинофилов CD13, CD15, CD33, HLA-DR у пациентов с клональными и реактивными эозинофилиями.
-
Разработать иммунологические критерии дифференциальной диагностики клональных и реактивных эозинофилий.
Научная новизна работы
-
Впервые проведено комплексное исследование мембраноассоциированных CD 13, CD33, CD15, HLA-DR и внутриклеточных маркеров (ЕСР) эозинофилов у пациентов с клональными (миелопролиферативные заболевания, гиперэозинофильный синдром) и реактивными (БА, РТПХ, солидные опухоли, лимфопролиферативные заболевания) эозинофилиями.
-
Впервые показано, что критериями реактивной эозинофилий являются повышенное содержание ЕСР (<15мг/л), низкая интенсивность флюоресценции экспрессии мембраноассоциированных маркеров эозинофилов CD33, CD13 и высокая интенсивность флюоресценции CD15 и HLA-DR.
-
Впервые предложены критерии дифференциальной диагностики клональных и реактивных эозинофилий на основе изучения мембраноассоциированных маркеров CD33, CD13, CD15 и HLA-DR и внутриклеточного маркера эозинофилов (ЕСР).
Практическая значимость работы
Определение уровня растворимых белков эозинофилов и выявление разной интенсивности флюоресценции маркеров эозинофилов при иммунофенотипировании миелопролиферативных и лимфопролиферативных заболеваний, ассоциированных с эозинофилией, может быть использовано для дифференциальной диагностики и мониторинга различных гиперэозинофильных состояний.
Показано, что диагностическими критериями клональной эозинофилий являются нормальное или пониженное содержание ЕСР, уменьшение интенсивности флюоресценции экспрессии CD 15, HLA-DR и увеличение интенсивности флюоресценции экспрессии CD13 и CD33 на мембране эозинофилов. Для реактивной эозинофилий характерно повышенное содержание ЕСР в сыворотке крови, увеличение интенсивности флюоресценции экспрессии CD15, HLA-DR и снижение интенсивность флюоресценции экспрессии CD 13 и CD33 на эозинофилах.
Основные положения, выносимые на защиту
1. У пациентов с реактивными эозинофилиями определяется повышенная концентрация эозинофильного катионного белка (>15мг/л) в сыворотке крови по сравнению с пациентами с клональными эозинофилиями (<15мг/л), что отражает разную способность эозинофилов к дегрануляции.
-
У пациентов с реактивными эозинофилиями отмечается более высокая интенсивность флюоресценции экспрессии мембраноассоциированных маркеров эозинофилов (CD 15 и HLA-DR) по сравнению с пациентами с клональными эозинофилиями, что может свидетельствовать о разной степени дифференцировки и стадии созревания эозинофилов при данных состояниях.
-
Интенсивность флюоресценции экспрессии мембраноассоциированных маркеров эозинофилов CD13 и CD33 у пациентов с клональными эозинофилиями выше, чем у пациентов с реактивными эозинофилиями, что может свидетельствовать о более ранней стадии дифференцировки клеток при клональных эозинофилиях.
-
Исследование антигенной характеристики и измерение интенсивности флюоресценции мембраноассоциированных маркеров эозинофилов CD13, CD33, CD15 и HLA-DR, определение уровня ЕСР позволяют предложить диагностические критерии гиперэозинофильных состояний.
Апробация
Основные положения диссертационного исследования были доложены на Российско-Норвежской конференции по гематологии (Санкт-Петербург, 2003), научной конференции «Болезнь Ходжкина», (Петрозаводск, 2004), «Актуальные вопросы в гематологии и трансфузиологии» (Санкт-Петербург,2004), межвузовской конференции Общества молодых ученых СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова «Санкт-Петербургские научные чтения» - 2004 и 2005, IV международной научной конференции (Санкт-Петербург, 2004,2005), Всероссийском научном форуме с международным участием имени акад. В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (2004,2005,2008), Российском Форуме "Актуальные проблемы в педиатрии» (Санкт-Петербург, 2005), на 5-ой международной Парнасовской конференции «Молекулярные механизмы клеточного сигналинга» (Киев,Украина, 2005), I международном симпозиуме «Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток», посвященном памяти P.M. Горбачевой (Санкт-Петербург, 2007), Европейском конгрессе ЕВМТ (Hamburg, Germany, 2006; Gothenburg, Sweden, 2009).
По теме диссертационного исследования были получены гранты Правительства Санкт-Петербурга Фундаментального Естествознания в 2004г., Правительства Санкт-Петербурга для студентов, аспирантов и молодых ученых в 2004, 2005 гг.
Личное участие автора в получении результатов
Данные, представленные в работе, получены лично автором. Автором использованы методы иммунофенотипирования с помощью проточной цитометрии для оценки мембраноассоциированных маркеров эозинофилов и иммунофлюоресцентный метод для выявления внутриклеточного катионного белка эозинофилов и фермента тучных клеток. Оценены фенотип эозинофилов при реактивных и клональных эозинофилиях и содержание концентрации эозинофильного катионного белка и триптазы в сыворотке крови. Предложены критерии для дифференциальной диагностики гиперэозинофильных состояний. Выполнена статистическая обработка, анализ полученных данных и обобщение результатов исследований.
Публикации
По теме диссертационного исследования опубликовано 8 работ, в том числе 3 публикации в изданиях, рекомендованных ВАК.
Структура и объем диссертации
Диссертация изложена на 102 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и обсуждения собственных данных, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа проиллюстрирована 17 рисунками и 14 таблицами. Список литературы включает 143 источника, из них 35 отечественных и 108 зарубежных источников.
