Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор Литературы 10
1.1. Строение и функции тимуса 10
1.2. Современные представления о тимомегалии и о некоторых особенностях детей с увеличенной вилочковой железой 20
1.3. Герпесвирусы 32
1.3.1. Цитомегаловирус 33
1.3.2. Вирус Эпштейна - Барр 35
ГЛАВА 2. Материал и методы исследования 63
2.1. Оценка величины вилочковой железы у детей 63
2.2. Забор материала для молекулярно-генетических исследований 64
2.3. Получение ДНК-матрицы из периферической крови 64
2.4. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 65
2.5. Концентрирование ДНК 67
2.6. Электрофорез в полиакриламидном геле 68
2.7. Окраска полиакриламидного геля серебром 68
2.8. Клинико - генеалогический метод 69
2.9. Статистический анализ данных 69
ГЛАВА 3, Результаты и обсуждение 71
3.1. Заболевания, ассоциированные с тимомегалией 71
3.2. Вирусная инфекция, ассоциированная с тимомегалией 81
Приложения 90
Выводы 94
Список литературы 95
- Современные представления о тимомегалии и о некоторых особенностях детей с увеличенной вилочковой железой
- Забор материала для молекулярно-генетических исследований
- Электрофорез в полиакриламидном геле
- Вирусная инфекция, ассоциированная с тимомегалией
Введение к работе
Актуальность темы
Тимомегалия - это явление, сущность которого не выяснена до сих пор. В настоящее время термин «тимомегалия» употребляется для обозначения врожденного или приобретенного варианта увеличения вилочковой железы при сохранении ее нормальной гистоархитектоники. Сведения о частоте встречаемости тимомегалии достаточно противоречивы: по данным различных авторов ее выявляют у 10-50% детей, а наибольшая частота регистрируется у детей первого года жизни [16, 60]. Согласно данным, полученным Кузьменко Л.Г. с соавт. [56], тимомегалия выявляется у 35% детей первых трех месяцев жизни, Однако, до сих пор нет единого мнения среди педиатров, считать ли увеличение тимуса у детей нормой, патологией или пограничным состоянием.
Как известно, выраженность иммунных реакций организма и возникновение аутоиммунных заболеваний зависят от состояния и функционирования тимуса. При тимомегалии вследствие сопровождающих ее эндокринных нарушений и дефицита Т-системы иммунитета, особенностью которого является сочетание повышенной пролиферативноЙ активности Т-лимфоцитов с их недостаточным созреванием в условиях дефицита тимических гормонов, наблюдается дисфункциональное состояние как иммунной так и эндокринной системы. Так, у детей, имеющих увеличенную вилочковую железу неоднократно фиксировалась повышенная
5 чувствительность (вплоть до наступления внезапной смерти) к различным
неблагоприятным внешним воздействиям. Существует мнение, что
внезапная смерть детей с тимомегалией связана с имеющейся у них тимусно-
надпочечниковой недостаточностью [45]. Общая недостаточность
тимусзависимого иммунитета обусловливает высокую частоту и тяжесть
заболеваний, а также резистентность к терапии. [19, 35, 36, 56].
Согласно литературным данным [35, 56], у детей с увеличенной вилочковой железой, а также у их родственников чаще наблюдаются пороки сердца, ревматизм, онкологические заболевания, туберкулез, хронические заболевания почек. По отягощенности злокачественными новообразованиями семьи детей с тимомегалией конкурируют только с семьями детей с острым лимфоидным лейкозом, а по частоте встречаемости эндокринных заболеваний - с семьями детей с сахарным диабетом. Кроме того, в семьях детей с тимомегалией отмечается ряд аутоиммунных заболеваний таких, как системная красная волчанка, гломерулонефрит, рассеянный склероз, аутоиммунный тиреоидит. Несмотря на интерес, проявляемый к проблеме, и полученные в последние годы новые сведения по данному вопросу, сущность патологии тимуса остается до конца неясной.
Вместе с тем, известно, что вирусы обладают особым влиянием на организм человека. Продукты вирусных генов могут индуцировать или блокировать различные процессы в зараженной клетке, осуществляя, таким образом, регуляцию пролиферации и апоптоза. Немалую роль играют вирусы, непосредственно поражающие иммунную систему. Следовательно,
одним из факторов, вовлеченных в патогенез тимомегалии и ассоциированных с ней нарушений, может выступать вирусная инфекция.
Учитывая все вышеизложенное, целью настоящего исследования явилось изучение молекулярных механизмов, вовлеченных в развитие тимомегалии и ассоциированных с ней заболеваний иммунологического характера.
Для этого нами были поставлены следующие задачи:
Выявить наличие наследственной предрасположенности к возникновению тимомегалии, а также возможную ассоциированность тимомегалии с другими заболеваниями, для которых также характерна та или иная степень наследственной предрасположенности.
Исследовать корреляцию между тимомегалией и инфицированностью вирусом Эпштейна-Барр и цитомегаловирусом детей раннего возраста.
Научная новизна
Впервые исследована корреляционная структура заболеваний, ассоциированных с тимомегалией.
Впервые выявлена достоверная корреляция между тимомегалией и инфицированностью вирусом Эпштейна-Барр и цитомегаловирусом.
Практическая значимость
Полученные результаты могут быть использованы в практике для прогнозирования развития ассоциированных с тимомегалией заболеваний у
7 детей с увеличенным тимусом и ранней ВЭБ-инфекцией, а также у их
родственников.
Апробация работы
Работа выполнена на кафедре биологии и общей генетики (зав. каф. проф. Иткес А.В.) и на кафедре детских болезней (зав. каф. проф. Кузьменко Л.Г.) Российского университета дружбы народов.
Основные положения работы доложены на XI международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации» (Москва, 2003г), III Конгрессе педиатров-инфекционистов России (8-Ю декабря 2004г), заседании кафедры биологии и общей генетики РУДН (2004 г.).
По результатам исследования опубликованы 4 печатные работы.
Структура и объем диссертации
Диссертация изложена на 116 страницах машинописного текста, иллюстрирована 10 рисунками, 8 таблицами, 4 электрофореграммами.
Диссертационная работа состоит из введения, трех глав, выводов, приложений и списка литературы. Список цитированной литературы включает 175 источников, из них 69 - на русском и 106 - на других языках.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
Современные представления о тимомегалии и о некоторых особенностях детей с увеличенной вилочковой железой
Увеличение тимуса у детей вот уже около 400 лет волнует ученых мира. Впервые состояние, расцененное как тимическое удушье (asthma thymica) было описано в 1614 г. профессором базельского университета Феликсом Платтером [56]. Концепция о тимической астме послужила мощным толчком для изучения тимуса. Однако в течение последующих двух столетий достаточно подробно была изучена только анатомия этого органа. База для изучения нормы и патологии вилочковой железы начала появляться только с середины XIX в. В 1849 г. A. Hassal обнаружил в тимусе особые образования с концентрической слоистой капсулой по периферии и с различным содержимым в центре, названные тельцами Гассаля (в настоящее время именуемые тимическими тельцами), значение которых до настоящего времени остается неясным. Через 10 лет после этого был опубликован классический труд А. Фридлебена «Die Physiologie des Thymusgrusein in Gesundheit und Krankheit vom Standpunkte experimenteller Forschung mid klinisher Erfahrung», явившийся прочным фундаментом для последующих экспериментальных исследований [56]. Вместе с тем, дискуссии вокруг проблемы увеличенного тимуса продолжали сохраняться. Так, несмотря на волну большого интереса к изучению проблемы тимомегалии, на XXIII конгрессе педиатров Италии в 1954г. было принято решение прекратить изучение вопросов, связанных с увеличением тимуса, поскольку функции
этого органа оставались неизвестными [75, 91]. И в настоящее время, несмотря на определенные успехи в выявлении особенностей детей, имеющих увеличенный тимус, постоянно раздаются призывы прекратить разработку несуществующей проблемы.
До начала 70-х годов XX века увеличенную вилочковую железу, содержащую большое количество тимических лимфоцитов (преимущественно в корковой зоне) при нормальной ее архитектонике, называли гипертрофированной или гиперплазированной. Однако, и гипертрофия, и гиперплазия органа сопровождаются его гиперфункцией, при увеличении же тимуса с указанной выше характеристикой, этого не наблюдается. Более того, у большинства детей с тимомегалией выявляется 22 снижение функциональной активности тимуса [35, 45, 62]. В связи с этим Т.Е. Ивановской было сделано предложение заменить термины «гипертрофия тимуса» и «гиперплазия тимуса» на термин «тимомегалия» [23, 24, 25]. В настоящее время термин «тимомегалия» морфологами употребляется для обозначения врожденного или приобретенного варианта увеличения вилочковой железы при сохранении ее нормальной гистоархитектоники.
С момента внедрения в медицинскую практику рентгенологического, а затем и ультразвукового методов исследования появилась возможность прижизненного выявления увеличенной вилочковой железы. Однако применение указанных методов не дает права судить о гистоархитектонике органа. Вместе с тем, с учетом частоты встречаемости данного состояния в раннем детском возрасте и казуистической редкости опухолей тимуса и другой его патологии, можно полагать, что при прижизненном выявлении увеличенного тимуса в подавляющем большинстве случаев речь идет о его «невинном» увеличении, при котором сохранена нормальная архитектоника органа.
К середине 60-х годов XX века М.С. Масловым в «Многотомном руководстве по педиатрии» [43] были обобщены основные клинические проявления, наблюдаемые у детей с увеличенной вилочковой железой. Описывая клинические проявления в разделе «Лимфатические аномалии конституции», он отметил, что при этой аномалии увеличение тимуса встречается не более чем у 2,5-6% детей. Однако, в последующем Л.Г. 23 Кузьменко, занимаясь проблемой тимомегалии у детей первых трех лет жизни, обратила внимание на то, что у детей этого возраста, особенно первого года жизни, при лимфатической конституции тимомегалия выявляется у всех 100% пациентов. Наблюдение за этими детьми на протяжении последующих 12-15 лет позволило отметить, что по мере увеличения возраста детей, тимус рентгенологически переставал визуализироваться при сохранении у детей лимфатического habitus a [35, 38]. Это позволило данному автору сделать заключение, что тимус у детей с лимфатической конституцией может подвергаться возрастной инволюции, но все остальные проявления этой конституции сохраняются.
Сведения о частоте встречаемости тимомегалии в популяции достаточно противоречивы: по данным различных авторов ее выявляют у 10-50% детей, а наибольшая частота регистрируется у детей первого года жизни [60, 16]. Согласно данным, полученным Кузьменко Л.Г. с соавт. [56], тимомегалия наиболее часто выявляется у детей первых трех месяцев жизни: у 40% мальчиков и 30% девочек (в среднем в группе 35%). У детей в возрасте 6-15 мес, увеличенный тимус регистрируется у 12-8%, в возрасте 16-36 мес. его частота находится в пределах 2%, а после 3 лет - не превышает 0,5%.
Специфические фенотипические черты у детей с тимомегалией отчетливо видны с первых месяцев жизни. Вместе с тем, можно отметить, что по фенотипической характеристике эта группа детей гетерогенна, и в ней можно выделить две неравные по численности подгруппы, 90% детей с тимомегалией отличаются мягкими округлыми формами тела, относительно 24 крупными чертами лица, более значительной длиной и массой тела, увеличением окружности головы и живота. Около ЪЛ детей этой подгруппы отличаются бледной, слабо пигментированной кожей, светлой окраской волос и глаз, слабым развитием мускулатуры и сниженной физической активностью. У детей второй подгруппы отмечаются слабое жироотложение, невысокий рост, длинная шея, тонкая розовая или смуглая кожа. Дети живо воспринимают окружающее, отличаются хорошей физической активностью, но у них также наблюдается слабое развитие мускулатуры [35, 45]. Согласно данным, полученным Кузьменко Л.Г. с соавторами [56], у детей на фоне тимомегалии достоверно чаще диагностируется ряд нарушений.
Наибольшую по численности группу представляют аномалии развития - стигмы дизэмбриогенеза, анатомические и биохимические дефекты. Пороки развития чаще проявляются гипоплазией органов и тканей. Обращают на себя внимание также особенности нервной системы у детей с увеличенным тимусом. У них в 1,5-6 раз чаще встречаются такие синдромы, как гипертензионно-гидроцефальный, фебрильных судорог, мышечной гипотонии и вегетативно-висцеральных дисфункций.
Забор материала для молекулярно-генетических исследований
Для выявления наличия вирусной инфекции у детей использовали цельную кровь, взятую в количестве 200 мкл. После забора кровь наносили на хроматографическую бумагу «Ватман 3 ММ» и высушивали. 1. Образцы на хроматографической бумаге помещали на 10 минут в 50мМ раствор NaOH. 2. Переносили образцы на 40 минут в 10 мМ раствор НС1. 3. Помещали образцы на 10 мин в дистиллированную воду, 4. Образцы высушивали. В таком виде материал хранится при комнатной температуре. ПЦР проводили с использованием амплификатора ДНК (Progene, Techne) На первом этапе работы при выявлении генома ВЭБ для усиления специфичности нами был применен специальный режим с внутренними праймерами - NESTED ПЦР. Две пары использованных олигонуклеотидных праймеров имели следующую структуру: EBV-1L (5 ) AACCGGTTCCAGTCAAGCCT EBV-1R (5 ) CCCAGTATCCGAAGGACTCA EBV-lnL (5 ) AGAAGGGGAGCGTGTGTTGT EBV-lnR (5 ) GGCTCGTTTTTGACGTCGGC Реакцию проводили в объеме 50 мкл. Реакционная смесь на 4 пробы содержала: Праймер L - 10 мкл Праймер R - 10 мкл Смесь dNTP - 22 мкл Буфер 1 Ох («Бион») - 30 мкл Вода дистиллированная -122 мкл Taq-полимераза («Бион») - 6 мкл В каждую пробирку, содержащую ДНК-матрицу (размер образца 3x4 мм), добавляли по 50 мкл реакционной смеси. При проведении NESTED ПЦР в качестве внешних праймеров использовались EBV-1L и EBV-1R. Этой паре праймеров соответствовал фрагмент 228 пн. Для второго этапа NESTED ПЦР продукт, полученный после первого этапа, в объеме 5 мкл использовался в качестве матрицы для следующей реакции амплификации, где праймерами служили EBV-lnL и EBV-lnR. При этом длина фрагмента сокращалась до 154 пн.
Программа амплификации состояла из 35 циклов, каждый из которых имел следующие параметры: 94СС - 40 с, 58С - 30 с, 72С - 1мин 30 с. На втором этапе NESTED ПЦР температура отжига составляла 60С. Следующим шагом в работе было выявление генома ВЭБ с помощью ПЦР с использованием альтернативной пары праймеров и в ином режиме амплификации: 45 циклов, 94С - 40 с, 56С - 30 с, 7 ГС - 1мин 30 с. Длина получаемого фрагмента составляла 225 пн. Реакционная смесь на 4 пробы содержала: Праймер L - 16 мкл Праймер R - 16 мкл Смесь dNTP - 20 мкл Буфер 1 Ох («СибЭнзим») - 40 мкл Вода дистиллированная - 100 мкл Taq-полимераза («СибЭнзим») - 6 мкл С целью выявления ЦМВ-инфекции проводилась полимеразная цепная реакция с использованием пары олигонуклеотидных праимеров, имевших следующую структуру: CMV L (5 ) TGTACCTGAGGATAAGCGGG CMV R (5 ) CACTGAGGCAAGTTCTGCAA Реакционная смесь на 4 пробы содержала: Праймер L - 4 мкл Праймер R - 4 мкл Смесь dNTP - 20 мкл Буфер 10х («СибЭнзим») - 40 мкл Вода дистиллированная - 124 мкл Taq-полимераза («СибЭнзим») - 8 мкл Программа амплификации: 45 циклов, 94С - 40 с, 56С - 30 с, 71 С -1мин 30 с. Длина получаемого фрагмента составляла 248 пн. 1. ДНК осаждали тремя объемами этилового спирта с инкубацией в течение ночи при температуре -20С. 2. Пробы центрифугировали при 10000 об/мин в течение 10 минут. Супернатант отбрасывали. 3. Полученный осадок высушивали до полного испарения спирта. 4. Сухой осадок растворяли в 10 мкл дистиллированной воды для нанесения на полиакриламидный гель.
Разделение фрагментов проводили в 10% полиакриламидном геле (ПААГ). ПААГ готовился на трис-боратном буфере. Электрофорез проводили при 20 мА и 250 V в течение 1 часа. Образцы перед нанесением на гель окрашивали бромфеноловым синим, разведенным в 50% глицерине. В качестве маркера использовали фрагменты плазмиды pUC 18, полученные при обработке рестрикционной эндонуклеазой Msp I (размер фрагментов от 501 до 34 пн). Гель окрашивали бромистым этидием или серебром. 1. Гель помещали в 40% раствор этилового спирта на ночь (после окраски бромистым этидием). 2. ПААГ промывали в дистиллированной воде в течение 30 минут. 3. Помещали гель в 7,5% раствор уксусной кислоты на 30 минут. 4. Трехкратно промывали дистиллированной водой в течение 2 минут. 5. Выдерживали гель 30 минут в растворе нитрата серебра (на 150 мл воды 270 мг AgNC 3 и 320 мкл 37% раствора формальдегида). 6. Дважды промывали гель холодной дистиллированной водой (+4С) в течение 2 минут. 7. Проявляли гель в холодном растворе тиосульфата натрия (+4С) до появления полос (на 400 мл раствора 12г ЫагСОз, 1500 мкл 37% раствора формальдегида и 80 мкл раствора тиосульфата натрия с концентрацией 10мг/мл). 8. Останавливали реакцию холодным раствором 7,5% уксусной кислоты (+4С) с последующей фиксацией в 40% растворе этилового спирта. 1. Методом опроса собирали данные о состоянии здоровья родственников обследуемого ребенка по линии отца и матери. 2. Строили родословную. 3. Анализировали полученные данные.
Электрофорез в полиакриламидном геле
Материал для исследования составили описания состояния здоровья членов 410 семей, разделенных на три группы: I группа - 255 семей детей с 70 тимомегалией, II группа - 95 семей детей с аллергическими заболеваниями, в том числе с бронхиальной астмой и Ш группа - контрольная - 60 семей практически здоровых детей.
Исходными данными для статистической обработки материала являлись наличие или отсутствие следующих заболеваний в семьях: злокачественных и доброкачественных новообразований, аллергических заболеваний (без бронхиальной астмы), бронхиальной астмы, аутоиммунных заболеваний, ревматизма, туберкулеза, инфекционно-воспалительных заболеваний, эндокринных заболеваний, язвенной болезни желудка и / или двенадцатиперстной кишки, эпилепсии, псориаза, сердечно-сосудистых заболеваний, алкоголизма.
Из числа стандартных биометрических методов для оценки достоверности различий между частотами заболеваний в выборках был применен t - критерий Стьюдента. [59]. Корреляционная структура заболеваний в группах исследована с помощью кластерного анализа, где в качестве меры расстояний между заболеваниями использована величина К, которая вычислялась по формуле К = Рху/(РххРу), где Рху - доля семей, в которых встречаются заболевание X и заболевание Y; Рх - частота встречаемости заболевания X в группе; Ру — частота встречаемости заболевания Y в группе.
Вычисления выполнены на компьютере с использованием пакета статистического анализа «AGROS версия 2.08».На первом этапе работы были определены частоты встречаемости заболеваний (злокачественные и доброкачественные новообразования, аллергические заболевания (без бронхиальной астмы), бронхиальная астма, аутоиммунные заболевания, ревматизм, туберкулез, инфекционно-воспалительные заболевания, эндокринные заболевания, язвенная болезнь желудка и / или двенадцатиперстной кишки, эпилепсия, псориаз, сердечнососудистые заболевания, алкоголизм) в 410 семьях: 255 семьях детей с тимомегалией (I группа), 95 семьях детей с аллергическими заболеваниями, в том числе с бронхиальной астмой (II группа) и 60 семьях практически здоровых детей (III группа, контрольная).
За частоту встречаемости заболевания принималась доля семей, в которых было выявлено данное заболевание хотя бы у одного члена семьи. Как видно из таблицы 3.1, частоты встречаемости ряда заболеваний значительно различались в исследованных группах. С использованием критерия Стьюдента было выявлено, что у родственников детей с тимомегалией достоверно чаще, чем во II и III группах встречаются злокачественные и доброкачественные новообразования, аутоиммунные заболевания, ревматизм и эпилепсия. При этом существенных отличий в частотах встречаемости данных заболеваний в II и III группах нами не обнаружено. Достоверно наименьшие частоты встречаемости инфекционно-воспалительных и эндокринных заболеваний были зафиксированы в контрольной группе (по сравнению с I и II группами). В семьях детей с тимомегалией частоты встречаемости указанных заболеваний превышают приблизительно в два раза соответствующие показатели III группы, тогда как во II группе являются промежуточными. Более высокая частота встречаемости аутоиммунных заболеваний в I группе может быть обусловлена возникновением в тимусе клеток иммунологически активных по отношению к собственным тканям [7]. Как показали наши расчеты, 74 частота встречаемости аллергических заболеваний значительно выше в семьях детей II группы по сравнению с I и III группами. Однако частоты встречаемости бронхиальной астмы в I и II группах были приблизительно равны, но достоверно выше, чем в III группе.
При изучении частоты встречаемости злокачественных и доброкачественных новообразований в семьях детей с тимомегалией было установлено, что по линии матери данные заболевания встречались в 23,6%, по линии отца - в 13,4%, а по линии отца и матери одновременно - в 6,5% семей.
Несомненный интерес представляет факт обнаружения в I группе нескольких родословных с более чем одним случаем тимомегалии в семье. В их числе были семьи, в которых увеличение тимуса имело место как у родных, так и у двоюродных сибсов. Одна из таких родословных представлена на рисунке 3.1.
Также наблюдался случай рождения ребенка с тимомегалией от матери, имевшей в раннем детском возрасте увеличенную вилочковую железу. Полученные данные могут свидетельствовать о наличии наследственной предрасположенности к развитию тимомегалии. Рис.3.1. Родословная Миши Т., 3 лет: 1-опухоль мозга, 2-самоубийство, 3-сахарный диабет и ожирение, 4- ожирение, 5-психическая неуравновешенность, 6 -онкологическое заболевание, 7-тимомегалия; стрелкой указан пробанд. В ходе исследования была сделана попытка выяснить возможность ассоциированной предрасположенности к определенным заболеваниям. Для этого нами было предложено применить величину К (см. «Материалы и методы исследования»). Если К 1, присутствует сопряженность между заболеваниями, при К близком к 1, совместная встречаемость заболеваний носит случайный характер. Затем был проведен кластерный анализ с использованием величины К в качестве меры расстояния между заболеваниями. Этот метод позволяет объединять объекты (в нашем случае заболевания) в кластеры - группы объектов с меньшей внутритрупповои изменчивостью признаков по сравнению с вариабельностью в совокупности [59]. Результат анализа представлен в виде дендрограммы, характеризующей группировки объектов (рис.3.2).
Вирусная инфекция, ассоциированная с тимомегалией
Таким образом, анализ родословных показал, что хотя заболевания, ассоциированные с тимомегалией носят выраженный семейный характер, они не укладываются в рамки менделевского наследования (это было подтверждено во всех проанализированных нами случаях). Полученные результаты позволили нам выдвинуть гипотезу о возможном наличии в этих семьях латентной вирусной инфекции с заражением детей перинатально или в раннем детском возрасте. В соответствии с вышесказанным, а также учитывая имеющиеся в литературе данные об онкогенности и лимфотропности вируса Эпштейна-Барр и его ассоциации с аутоиммунными заболеваниями, в данной работе было проведено изучение инфицированности детей с тимомегалией ВЭБ и цитомегаловирусом (ЦМВ). Определение у детей ЦМВ-инфекции проводилось исходя из того, что оба вируса в популяции встречаются с приблизительно равной частотой, и ЦМВ, так же как и ВЭБ, способен поражать клетки иммунной системы и ассоциирован с иммунодефицитными состояниями.
На наличие ВЭБ-инфекции были обследованы 28 детей с тимомегалией (I группа) и 20 детей контрольной группы, отобранных случайно, величина тимуса которых была неизвестной (II группа). Параллельно 27 детей с увеличенным тимусом и 20 детей из контрольной группы были также обследованы на наличие цитомегаловирусной инфекции. Возраст детей с тимомегалией колебался от 2-х месяцев до 3-х лет, средний возраст в группе составлял 13,8 ±2,5 мес. Возраст детей контрольной группы не превышал 1 года. Результаты исследования приведены в рисунках 3.3, 3.4 и приложениях 1-4. С использованием критерия Стьюдента было выявлено, что частота встречаемости ВЭБ и ЦМВ у детей с тимомегалией достоверно выше, чем в контрольной группе (р 0,05). Также обнаружено, что дети с увеличенным тимусом значимо чаще инфицированы ВЭБ, нежели ЦМВ (р 0,05) (рис. 3.5.).
Исходя из данных литературы [28, 41, 58, 71], нами была построена кривая зависимости частоты встречаемости ВЭБ-инфекции в популяции от возраста обследуемых. Видно, что в популяции только у лиц старше 30-40 лет достигается уровень ВЭБ-инфицированности, характерный для детей с тимомегалией в возрасте 1 года (рис.3.6).
Как было указано выше, статистический анализ родословных показал наличие сопряженности между опухолевыми, аутоиммунными заболеваниями и бронхиальной астмой. Эта же группа заболеваний достоверно чаще встречалась в семьях детей с тимомегалией. Получив такие результаты, мы обратились к работам исследователей, прослеживавших катамнез детей с тимомегалией [34, 56]. Оказалось, что основные заболевания, возникавшие у детей, имевших в раннем детстве увеличенный тимус, можно разделить на 4 группы: болезни эндокринной системы, иммунопатологические состояния, онкогематологические и онкологические заболевания, острые заболевания органов дыхания. Из иммунопатологических состояний, отмеченных у детей после исчезновения тимомегалии, наиболее часто встречалась бронхиальная астма. У детей этой группы она наблюдалась в 15 раз чаще, чем в среднем в популяции. Частота других иммунопатологических состояний (тромбоцитопенической пурпуры, аутоиммунной гемолитической анемии и других заболеваний аутоиммунной природы), так же как и онкологических заболеваний, в том числе и лимфопролиферативных, в группе детей с тимомегалиеи в анамнезе была в десятки раз выше, чем в популяции. Обнаруженная нами столь высокая частота инфицированности вирусом Эпштейна - Барр детей с тимомегалиеи позволяет предположить, что ВЭБ является этиологическим фактором в развитии ассоциированных с тимомегалиеи заболеваний.
Как уже было указано в обзоре литературы, онкогенность ВЭБ на сегодняшний день не вызывает сомнений. С одной стороны, ВЭБ стимулирует пролиферацию инфицированных клеток, повышая экспрессию генов, продукты которых необходимы для прохождения S - фазы митотического цикла. С другой стороны, он способен пролонгировать жизнь инфицированных клеток путем ингибирования апоптоза. LMP-1 антиген вируса, подобно CD40, связывается с TRAF и TRADD, стимулируя таким образом пролиферативную активность В-лимфоцитов в отсутствие сигнала от активированных хелперных Т-клеток и подавляя гибель клетки, вызываемую фактором некроза опухолей. К аналогичному эффекту приводит активация вирусом NF-kB транскрипционного фактора и ингибитора апоптоза bcl-2. А вирусный белок BHRF-1 является функциональным гомологом bcl-2. Все перечисленное указывает на непосредственное участие ВЭБ в возникновении и поддержании опухолевого процесса.
У большинства здоровых индивидуумов в крови обнаруживаются малые концентрации антител против различных нормальных антигенных субстанций тех или иных тканей. Но в норме размножение клеток, продуцирующих антитела, сдерживается различными механизмами. В-клетки, иммуноглобулиновые рецепторы которых способны взаимодействовать с собственными антигенами, либо погибают в результате апоптоза, либо приходят в состояние ареактивности (анергии). Апоптоз развивается обычно при распознавании клеточного антигена, распознавание свободного (гуморального) антигена приводит к анергии [8]. Кроме того, В-лимфоциты после контакта с антигеном под влиянием Т-супрессоров (Ts) не трансформируются в плазматические клетки-продуценты антител, а впадают в состояние толерантности. Проникая в организм человека, вирус Эпштейна-Барр инфицирует В-лимфоциты, в том числе и аутореактивные. Они пролиферируют и становятся резистентными к апоптозу. A IL-6 и IL-10, выработка которых повышается при ВЭБ-инфекции, стимулируют превращение В-лимфоцита в антителопродуцирующую клетку, и в условиях дефицита Ts - клеток развивается аутоиммунное заболевание.
По мере развития гуморального иммунного ответа синтез антител переключается с одного изотипа на другой при сохранении их исходной специфичности. В самом начале иммунного ответа доминирующим изотипом является IgM. Позднее, по мере развития антителогенеза происходит замена синтеза IgM на IgG, IgA и IgE. Клинически была установлена корреляция между уровнем общего IgE и титрами антител к ВЭБ [12]. Таким образом, ВЭБ инфекция является фактором риска возникновения аллергического заболевания.
