Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12-39
1.1. Молекулярные основы этиологии и патогенеза преэклампси 12-18
1.2. Цитокины, их молекулярно-биологические характеристики и медико-биологическое значение 19-31
1.3. Генетические исследования преэклампсии 31-39
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 40-51
2.1. Характеристика групп беременных с преэклампсией и популяционного контроля 40-41
2.2. Молекулярно-генетические методы 41-49
2.3. Биометрические и генетико-статистические методы 49-51
ГЛАВА 3. Исследование роли полиморфных вариантов цитокинов в формировании преэклампсии 52-95
3.1. Исследование распределения полиморфных генетических маркеров у беременных с преэклампсией и в контрольной группе 52-57
3.2. Исследование роли гентических полиморфизмов в формировании ПЭ в зависимости от наследственной отягощенности 57-64
3.3. Изучение распределения генетических вариантов цитокинов среди беременных в зависимости от степени тяжести преэклампсии 64-71
34. Анализ вклада сочетаний генов цитокинов и генов сосудистых реакций в генетическую предрасположенность к преэклампсии II и III степени тяжести 71-74
3.5. Генетические полиморфизмы и клинико-лабораторные показатели беременных 75-87
3.6. Прогнозирование риска развития преэклампсии II и III степени тяжести с использованием генетических данных 87-95
Обсуждение 96-110
Выводы 110-111
Список литературы
- Генетические исследования преэклампсии
- Молекулярно-генетические методы
- Исследование роли гентических полиморфизмов в формировании ПЭ в зависимости от наследственной отягощенности
- Анализ вклада сочетаний генов цитокинов и генов сосудистых реакций в генетическую предрасположенность к преэклампсии II и III степени тяжести
Генетические исследования преэклампсии
Преэклампсия (ПЭ) – это осложнение гестационного периода беременности, возникающее во второй ее половине. В основе патологии лежат расстройства функций эндокринной, сердечно-сосудистой центральной и вегетативной нервной систем, а также нарушения обменных процессов, микроциркуляции, иммунного ответа и других функций организма [Стрижаков А.Н., и др., 2001; Сидорова И.С. и др., 2009]. В настоящее время общепринятым считается полиэтиологичность ПЭ. Это специфичное для беременности осложнение и развитие его связано с особенностями самого гестационного процесса. Несмотря на высокий интерес к проблеме, генез данной патологии остается малоизученным. Предложена двухэтапная модель развития ПЭ [Сидорова И.С., 2003].
На первом этапе развивается уменьшение плацентарной перфузии в связи с недостаточной адаптивной функцией спиральных артерий. На втором этапе присоединяется реакция материнского организма, характеризующаяся нарушением функционирования эндотелия и мультисистемным воспалительным ответом [Сидорова И.С. и др., 2007]. Принимая во внимание сложность и многообразие патофизиологических процессов, определяющих развитие клинического симптомокомплекса при ПЭ основные патогенетические механизмы можно представить в виде рис. 1 [Баранов В. С., 2010].
Первый этап развития ПЭ характеризуется развитием острого повреждения эндотелия в мелких артериальных сосудах и мембранах форменных элементов крови, в результате которого появляются нарушения реологических и коагуляционных свойств крови. Основная и ведущая роль в развитии ПЭ принадлежит плаценте и плоду. Нарушения в плаценте начинаются с задержки второй волны сосудистой инвазии цитотрофобласта (16-18 неделя гестации) [Сидорова И.С., 2003]. Цитотрофобласт не только внедряется в эндометрий и спиральные артерии, но и доходит до внутренней Рис.1. Основные патогенетические механизмы преэклампсии [Баранов В. С., 2010] трети миометрия. Колонизация цитотрофобластом материнских артерий сильно увеличивает диаметр сосудов и изменяет их физиологию: спиральные артериолы становятся гибридной структурой, в которой фетальный цитотрофобласт замещает материнский эндотелий и значительную часть средней оболочки. Постепенно цитотрофобласт прекращает деление и приобретает поверхностные характеристики эндотелиальных клеток [Сухих Г.Т. и др., 2010]. По мере увеличения срока беременности морфологические особенности спиральных сосудов матки предрасполагаются к развитию спазма, снижению межворсинчатого кровотока в плаценте и гипоксии. Именно гипоксия оказывает повреждающее действие на эндотелий сосудов с нарушением и изменением вазоактивных свойств, что инициирует выделение ряда медиаторов, которые обуславливают нарушение сосудистого тонуса и микроциркуляции [Сидорова И.С., 2003].
Повреждению эндотелия в развитии ПЭ в настоящее время принадлежит одно из существенных значений. Дополнительным подтверждением дистрофических изменений в эндотелии при ПЭ является выявленное снижение концентрации в сыворотке крови ингибитора сывороточных протеаз, который находится в мембранах эндотелия, оберегая их от повреждающего влияния протеаз. С одной стороны, происходящие в эндотелии изменения на ранних стадиях заболевания, приводят к выделению токсичных для эндотелия – эндотелина и циркулирующего фактора ПЭ, а также к уменьшению синтеза вазодилятаторов: простациклина, эндотелиального релаксирующего фактора (оксид азота), брадикинина. В результате этого превалирует эффект вазоконстрикторов за счет тромбоксана, синтезирующегося в тромбоцитах. Преобладание вазоконстрикторов способствует вазоспазму и гипертензии [Савельева Г.М. и др., 2008].
Также маркерами дисфункции эндотелия при ПЭ являются фибронектин, фактор Виллебранда, циркулирующие в крови клетки эндотелия, тканевой активатор плазминогена. Уже на ранних сроках беременности концентрация простациклина снижается в 2-2,5 раза [Нагнибеда А.Н. и др., 2000, Фадеева Н.И. и др., 2001].
При увеличении срока гестации, количество циркулирующих в крови эндотелиоцитов увеличивается. В основе ПЭ лежат изменения эндотелия, которые способствуют увеличению проницаемости и чувствительность сосудов к вазоактивным веществам. Также в процессе гиперкоагуляции теряются их тромборезистентные свойства и создаются условия для генерализованного вазоспазма. В свою очередь вазоспазм приводит к гипоксическим и ишемическим изменениям в жизненно важных органах и нарушает их функции [Глухова Г.Н. и др., 2004].
На фоне спазма сосудов микроциркуляции отмечаются значительные изменения свойств текучести крови. В 1,5 раза происходит повышение вязкостных характеристик крови, агрегационных свойств эритроцитов и тромбоцитов. В результате образования клеточных агрегатов в кровотоке на фоне вазоспазма формируются локализованные области стаза, депонируются клеточные элементы крови, которые не участвуют в общей циркуляции. Коагуляционные свойства определяют изменения текучести крови, при этом развивается гиперкоагуляция и хроническая форма синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания (ДВС) крови. При этом причиной развития ДВС-синдрома является недостаток антикоагулянтов – антитромбина III и эндогенного гепарина. Основой хронического течения ДВС-синдрома при ПЭ является повсеместное внутрисосудистое свертывание крови с нарушением микроциркуляции в органах [Тезиков Ю.В., и др., 2001].
Наряду с нарушением коагуляционных, реологических свойств крови и развивающимся вазоспазмом важную роль в развитии гипоперфузии органов играет гиповолемия, за счет сниженного объема циркулирующей плазмы (ОЦП). Повышенная проницаемость сосудистой стенки, выход жидкой части крови в ткани, генерализованная вазоконстрикция и уменьшение сосудистого русла приводят к низким значениям объема циркулирующей крови при ПЭ. В свою очередь сосудистые и внесосудистые изменения обуславливают снижение тканевой перфузии и развитие гипоксических изменений в тканях [Панина О.Б., 2000]. Таким образом, плацентарная недостаточность является первым звеном в развитии ПЭ.
Молекулярно-генетические методы
Проведено молекулярно-генетическое исследование двух выборок женщин: 250 пациенток с ПЭ и 245 женщин контрольной группы. Общий объем исследуемой выборки составил 495 человек. Средний возраст пациенток с ПЭ равен 31,2±7,5 лет (варьирует от 18 лет до 42 лет), контрольной группы 30,2±6,3 лет (варьирует от 16 до 42 лет, р 0,05). Критериями включения в исследуемые выборки являлись: русская национальность, уроженцы Центрально-Черноземного района Российской Федерации не имеющие родства между собой. В группу пациенток с ПЭ включались индивидуумы с подтвержденным клиническими и клинико-лабораторными методами обследования диагнозом ПЭ. Контрольная группа формировалась из женщин с физиологическим течением беременности. Обследование беременных проводилось в Перинатальном центре Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа. Сбор клинического материала осуществлялся врачом – перинатологом, к.м.н. Добродомовой И.С.
Среди 495 беременных 245 пациенток было с физиологическим течением гестации и 250 беременных женщин с ПЭ: 95 беременных с ПЭ I степени тяжести, 100 - с ПЭ II степени тяжести и 55 – с III степенью тяжести ПЭ. Степень тяжести ПЭ оценивалась по шкале Goecke в модификации Г.М. Савельевой [Савельева Г.М., 2000]
Все исследования беременных женщин с ПЭ и контрольной группы осуществлялись согласно стандартам этического комитета с информированного согласия обследуемых на использование конкретных материалов в научно-исследовательской работе.
У каждой беременной с ПЭ тщательно собирался анамнез (наличие вредных привычек, психо-эмоциональных перенапряжений, наличие ПЭ у родственников, данные о менструальном цикле, возраст начала половой жизни, наличие ЗППП до беременности и во время данной беременности, наличие гинекологических заболеваний, возраст наступления первой беременности, количество и исход предыдущих беременностей, наличие осложнений после родов, медицинских абортов, вид контрацепции до наступления данной беременности). Регистрировались наличие белка в моче, отеков, и прибавки в весе у беременных, показатели артериального давления до беременности и в конце беременности (на сроке родоразрешения), показатели коагулограммы (ПТИ, фибриноген, ТВ, АЧТВ), общего анализа крови и мочи, состояние плода (данные УЗИ, кардиотокографии) и новорожденного (рост, вес, оценка по шкале Апгар).
Всем пациенткам с ПЭ и индивидуумам контрольной группы проводилось типирование восьми генетических полиморфизмов цитокинов: фактор некроза опухоли альфа (-308 G/A TNFa, rsl800629), лимфотоксин альфа (+250 A/G Lta, rs909253), рецептор фактора некроза опухоли первого типа (+36 A/G TNFR1, rs767455), регулятор активности нормальной экспрессии и секреции Т-клеток (-403 G/A RANTES, rs2107538), интерферон индуцибельный -хемоаттрактант Т-клеток (A/G I- ТАС, rs 4512021), фактор стимулятор роста предшественников -клеток (-801 G/A SDF1, rsl801157), моноцитарный хемоаттрактантный протеин-1 (C/G МСР-1, rs 285765), макрофагальный воспалительный протеин-1 (+193 А/Т МІРІ ft, rsl719153). Данные локусы были выбраны для исследования в связи с их вероятным вовлечением в патогенез ПЭ, за счет возможности изучаемых генетических полиморфизмов изменять экспрессию соответствующих генов цитокинов [Pridjian G. et al., 2005; Gluba A. et al., 2009].
Молекулярно-генетическое исследование выполнялось в лаборатории "Молекулярной генетики человека" медицинского института НИУ БелГУ
Материалом для исследования послужила ДНК, выделенная из венозной крови исследуемых индивидуумов. Выделение геномной ДНК из периферической крови производилось методом фенол-хлороформной экстракции [Mathew, 1984]. Этапы выделения ДНК включали: 1. Лизирование осажденных в PBS (pH=8.4) лейкоцитов в ТЕ-буфере протеиназой К в течении 20 часов при 37С. 2. Отмывка ДНК лизированных лейкоцитов. Сначала 1:1 фенолом, забуференным HCl (pH=7.4), потом забуференных в соотношении 1:1 объемами фенола и хлороформа на два объема надосадочной жидкости и после этого хлороформом (1:1). 3. Затем ДНК преципитировалась этанолом (-20С), высушивалась, растворялась ТЕ-буфером и замораживалась (-20С) (табл.2). Методом ПЦР синтеза ДНК проводили анализ исследуемых генетических полиморфизмов -308 G/A TNFa (rsl800629), +250 A/G Lta (rs909253), +36 A/G TNFR1 (rs767455), A/G I- TAG (rs 4512021), -801 G/A SDF 1(rsl801157), C/G MCP-1 (rs 285765), +1931 A/T MIP1/3 (rs!719153) на амплификаторе IQ5 (Bio-Rad). Использовали стандартные олигонуклеотидные праймеры и зонды (табл. 4) с дальнейшим анализом полиморфизмов методом дискриминации аллелей. При проведении ПЦР реакционная смесь объемом 25 мкл включала:
Исследование роли гентических полиморфизмов в формировании ПЭ в зависимости от наследственной отягощенности
Важной задачей практической медицины является прогнозирование риска развития ПЭ. С целью разработки математической модели прогнозирования риска развития ПЭ мы использовали полученные в нашей работе данные о полиморфных вариантах генов цитокинов, а также других возможных факторах риска развития ПЭ. Для решения этой задачи нами применялся метод многомерной статистики – дискриминантный анализ, а для прогнозирования уровня артериального давления у беременных – метод множественной регрессии [Реброва О.Ю., 2006].
Проведено изучение исследуемых групп женщин – беременные с ПЭ II и III степеней тяжести и женщины с ПЭ I степени тяжести с помощью дискриминантного анализа с учетом более двадцати пяти признаков, характеризующих медико-биологический статус женщин до беременности (возраст возникновения беременности, показатели артериального давления, отягощенность соматопатологией, семейный анамнез и др.), наличие вредных привычек (курение, алкоголь), клинико-лабораторные характеристики беременных и генетические характеристики по исследуемым локусам -308 G/A TNF (rs1800629), +250 A/G Lt (rs909253), +36 A/G TNFR1 (rs767455), -403 G/A RANTES (rs2107538), A/G I- TAC (rs 4512021), -801 G/A SDF 1(rs1801157), C/G MCP-1 (rs 285765), +1931 А/Т MIP1 (rs1719153). Для этих двух выборок женщин получены две дискриминантные функции (табл. 13). Статистически значимыми оказались девять признаков (уровень фибриногена, наличие патологии сердечно-сосудистой системы, возраст, уровень диастолического артериального давления до беременности, место проживания, уровень креатинина и мочевины в крови, генетический вариант по локусу C/G МСР-1 (rs 285765),, генетический вариант по локусу +1931 А/Т МІРІ/] (rs!719153)), которые при анализе дискриминантной функции имели значение критерия Уилкса 0,715, при F (9,203)=8,9888 и р 0,00000.
Из полученных данных следует, что две рассматриваемые нами группы беременных с ПЭ по набору из девяти изученных признаков статистически значимо показывают закономерную межгрупповую вариацию. Полученные значения критериев Уилкса, F- критериев, вероятности Р, и показателей толерантности для всех выявленных в дискриминантном анализе признаков представлены в таблице 14. Точность дискриминации женщин, относящихся к группе беременных с ПЭ II и III степеней тяжести составляет 85,60%, а к группе женщин с ПЭ I степени тяжести - 63,09%. Средний процент правильной дискриминации в исследуемые группы беременных составляет 76,85%.
С помощью полученных коэффициентов дискриминантных функций, на основе значений конкретных показателей у беременных (уровень фибриногена, наличие патологии сердечно-сосудистой системы, возраст, уровень диастолического артериального давления до беременности, место проживания, уровень креатинина и мочевины в крови, полиморфных маркеров генов цитокинов) можно определить их вероятностную принадлежность к группе женщин с ПЭ II и III степеней тяжести или в группе женщин с ПЭ 1-ой степени тяжести. Уравнение линейной дискриминантной функции (ЛДФ) имеет следующий вид [Реброва О.Ю., 2006]: у= a1х1+а2х2+а3х3+… +аnхn+ C, где хi- информативные признаки, аi-коэффициенты для данных признаков, С- константа. Таблица 13 Коэффициенты линейных дискриминантных функций для исследуемых групп беременных с преэклампсией
Признаки Беременные с ПЭ I степени тяжести Беременные с ПЭII и III степенитяжести Уровень фибриногена 9,476 10,665 Наличие патологии сердечнососудистой системы (да-0;нет-1) 14,489 15,960 Возраст 1,095 1,189 Уровень диастолическогоартериального давления доберемености 1,406 1,479 Место проживания (город-1; село-0) 5.338 4,478 Уровент креатинина 0,710 0,654 Уровень мочевины 0,223 0,562 Генетический вариант по локусуC/G MCP-1 (rs 285765) ((GG+CG) -1; CC -0) 12,519 11,598 Генетический вариант по локусу+1931 A/TMIPlp (rsl719153)((АА+АТ) -1; ТТ-0) 35,017 33,703 Константа -168,389 -175,272 В нашем случае уравнения ЛДФ будут следующими: - для отнесения в группу беременных с ПЭ I степени тяжести y= -168,389+ 9,47x1+14,489x2+1,095x3+1,409x4+5,338x5+0,71x6+0,223x7+ 12,519x8+35,017x9, -для отнесения в группу беременных с ПЭ II и III степеней тяжести y= -175,272+10,665x1+15,960x2+1,189x3++1,479x4+4,478x5+0,654x6+ 0,562x7+11,598x8+33,703x9, где x1 – уровень фибриногена, г/л, x2- наличие сердечно-сосудистой патологии (да-0; нет-1), x3- возраст, лет, x4- уровень диастолического артериального давления до беременности, мм.ртст, x5 -место проживания (город-1, село-2), x6 - уровень креатинина, ммоль/л, x7- уровень мочевины, моль/л, x8- генетический полиморфизм C/G MCP-1 (rs 285765) ((GG+CG) -1; CC -0)), x9- генетический полиморфизм +1931 А/ТМ1Р1/3 (rsl719153) ((АА+АТ) -1; 7У-0).
В вышеописанные уравнения ЛДФ подставляются показатели конкретного индивидуума и рассчитываются новые признаки - у. Исследуемую женщину неободимо отнести в ту группу индивидуумов, для которой новый признак у является максимальным [Боровиков, 2001].
К примеру у беременной Ю., имеющей ПЭ легкой степени выявлены показатели: уровень фибриногена - 5,2 г/л, наличие патологии сердечно-сосудистой системы - да, возраст - 32 года, уровень диастолического артериального давления до беременности - 60 мм.ртст, место проживания -город-1, уровень креатинина-90 ммоль/л, уровень мочевины -6,8 ммоль/л, генетический вариант по локусу C/G МСР-1 (rs 285765) -CC, генетический вариант по локусу +1931 А/Т МР1/3 (rsl719153) - AA+AT. Подставляем эти значения признаков в два вышеуказанных уравнения ЛДФ и находим в каждом уравнении новый признак у. у (группа беременных с ПЭ I степени тяжести) = -168,389+9,47 5,2+14,489 0+1,095 32+1,406 60+5,338 1+0,71 90+ 0,223 6,8+12,519 0+35,017 1=42,12; у (группа беременных с ПЭ II и III степеней тяжести) = -175,272+10,665 5,2+15,960 0+1,189 32+1,479 60+4,478 1+0,654 90+ +0,562 6,8+11,598 0+33,703 1=104,83
Наибольший показатель нового признака у для этой беременной выявлен при расчтах в уравнении ЛДФ для беременных с ПЭ II и III степени тяжести, что позволяет отнести данную женщину в группу беременных с ПЭ II и III степени тяжести. При дальнейшем наблюдении за этой пациенткой у нее была зарегистрирована ПЭ II степени тяжести. Таблица 14 Показатели критериев отбор для признаков и генов, вовлеченных в анализ дискриминантной функции
Для беременной Л., имеющей ПЭ легкой степени тяжести были определены следующие показатели: уровень фибриногена - 2,5 г/л, наличие патологии сердечно-сосудистой системы - нет, возраст - 18 лет, уровень диастолического артериального давления до беременности - 77 мм.ртст, место проживания -село-0, уровень креатинина-100 ммоль/л, уровень мочевины -3,5 ммоль/л, генетический вариант по локусу C/G МСР-1 (rs 285765) - GG+GC, генетический вариант по локусу +1931 А/Т МІР 1/3 (rsl719153) - TT. Подставляя эти значения признаков в два вышеуказанных уравнения ЛДФ, при расчетах мы выявили максимальное значение у для беременных: y (для беременных с ПЭ I степени тяжести) -168,389+9,47 2,5+14,489 1+1,095 18+1,406 77+5,338 0+0,71 100+ +0,223 3,5+12,519 1+35,017 0=82,06; у (для беременных с ПЭ II и III степеней тяжести) = -175,272+10,665 2,5+15,960 1+1,189 18+1,479 77+4,478 0+0,654 100+ +0,562 3,5+11,598 1+33,703 0=81,61 Это дало возможность определить беременную Л. в группу беременных с ПЭ I степени тяжести. При дальнейшем наблюдении за этой пациенткой ее состояние не утяжелилось.
Таким образом, данная модель прогнозирования риска развития ПЭ II и III степени тяжести позволит формировать среди женщин при прегравидарной подготовке и на ранних сроках беременности группы риска по развитию этого осложнения беременности. Результаты прогнозирования будут способствовать более эффективному осуществлению лечебно-профилактических мероприятий по предупреждению развития ПЭ среднетяжелого и тяжелого течения.
На следующем этапе нашей работы проведено математическое моделирование факторов, влияющих на уровень АД у беременных с ПЭ (п=255), с использованием множественной регрессии.
Выявлен ряд факторов (генетические полиморфизмы генов цитокинов, медико-биологические характеристики беременных и др.), влияющие на уровень систолического и диастолического артериального давления беременных с ПЭ.
Регрессионная модель для прогнозирования уровня систолического АД включает четыре предиктора: возраст (t=3,59; р=0,004), вес женщины до беременности (t=2,44; р=0,015), генетический вариант по локусу +1931 А/Т МІРІ/] (rsl719153) (t=-2,36; р=0,01), генетический вариант по локусу -403 G/A RANTES (rs2107538) (t=-2,18; р=0,03). Данные факторы определяют =15,52% изменчивости уровня систолического артериального давления у женщин на сроке родоразрешения F(4,221)=10,148; р 0,0000. Установлено, что при однофакторных моделях вклад данных предикторов в вариабельность систолического АД у беременных на сроке родоразрешения, оцененный с помощью простой регрессии значительно ниже и составляет h =8,44% для возраста (t=4,78; р 0,00003), h2=6,80% доя вес женщины до беременности (t=4,23; р 0,00003). Уравнение множественной регрессии для прогнозирования уровня систолического АД у женщин на сроке родоразрешения имеет следующий вид: Y!=141,6284 +( -6,3903х1)+(-3,5414х2)+0,5044х3+0,1338х4, где X! - генетический полиморфизм +1931 А/Т МІРІ/] (rsl719153) ((AA+ATJ-1, ТТ-0), х2 - генетический полиморфизм -403 G/A RANTES (rs2107538) ((AA+AGJ-1, GG-0), х3 - возраст, лет, Х4 - вес женщины до беременности, кг.
Определена регрессионная модель прогнозирования уровня диастолического АД, включающая три предиктора: возраст (t=2,93; р=0,003), наличие ПЭ у родственников (t=3,04; р=0,002), генетический полиморфизм +1931 А/Т МІРІ/] (rsl719153) (t=-2,84; р=0,004) которые обуславливают 7,71% изменчивости уровня диастолического АД у женщин в конце беременности F(3,242)=6,74; р 0,0002. Однофакторные влияния этих предикторов составляют h2=3,56% для возраста (t=3,024; р=0,0027), h2=3,70% доя наличия ПЭ у родственников (1=3,084; р 0,0002).
Анализ вклада сочетаний генов цитокинов и генов сосудистых реакций в генетическую предрасположенность к преэклампсии II и III степени тяжести
Эти патогенетические механизмы имеют важное значение при формировании ПЭ [Direkvand-Moghadam A., 2012; Садекова О.Н., 2012]. Следует отметить, что в группе женщин с ПЭ, имеющих отягощенную наследственность, изучаемые полиморфизмы не вовлечены в формирование ПЭ.
Выявлены особенности «генетической конституции» беременных с ПЭ различных степеней тяжести. Во-первых, «своеобразными» для беременных с ПЭ I степени тяжести являются комбинации генетических полиморфизмов, оказывающие протективное влияние на формирование ПЭ. Это сочетания +1931 A MPip, +250 A Lta, -403 G RANTES и -308 G TNFa (OR=0,42), +1931 AMP 1/3, -801 G SDF1, +250 A Lta, -308 G TNFa и +1931 A MP1/3 ,+250 A Lta, -308 G TNFa (OR=0,43), +1931 A MIPlp, +250 A Lta и -408 G RANTES (OR=0,44), +1931 A MLPlfi, -801 G SDF1, +250 A Lta (OR=0,46) (рис. 23).
Во-вторых, фактором риска развития ПЭ II - III степеней тяжести является сочетание генетических полиморфизмов -308 A TNF, +36 GG TNFR1 и -801 A SDF1 (ОR=3,95). Тогда как комбинация полиморфных вариантов генов цитокинов -801 G SDF1, G MCP (rs 28576) имеет протективную направленность при развитии ПЭ II - III степеней тяжести (OR=0,59) (рис.24).
Материалы данного диссертационного исследования свидетельствуют, что фактором риска развития ПЭ II - III степеней тяжести является генетический вариант -308 A TNFa, а протективное значение при ПЭ I степени тяжести имеют генетические варианты -308 G TNFa и +250 А Lt. В соответствии с литературными данными [Fеrnаndеz Н. еt. al., 2003; Sallakci N. еt. al., 2005; Gogасz М. еt. al., 2008], аллельные варианты -308 G TNFa и +250 A Lta являются низкопродуктивными, тогда как генетический вариант -308 А TNFa отвечает за повышенную продукцию фактора некроза опухоли а. Так в работе Fеrnаndеz Н. еt. al. (2003) показано, что клетки доноров, гомозиготных по полиморфному аллелю -308 А TNFa синтезирует фактор некроза опухоли в 3 раза активнее, чем клетки индивидуумов с генотипом -308 GG TNFa.
Вовлеченность генов цитокинов в генетическую предрасположенность к преэклампсии II и III степеней тяжести
Согласно данным Majetshak M. et. al. (2002) наличие высокопродуктивного аллеля -308 A TNFa в генотипе обуславливает 6 - 7 кратное увеличение индуцируемого уровня транскрипции гена TNFa. При этом у беременных с повышенной продукцией TNFa можно ожидать и более выраженные его медико-биологические эффекты, среди которых важное место занимают провоспалительное действие и участие в апоптозе [Carregaro V., 2008; Ebert E, 2009].
Наличие ассоциаций генетических полиморфизмов хемокинов+7937 А/Т MPip, C/G МСР1 (rs 2857657), -801 G/A SDF1 с развитием ПЭ определенных степеней тяжести, может свидетельствовать об их возможной вовлеченности в патогенез ПЭ. Следует отметить, что при анализе литературных материалов, мы не обнаружили работ, в которых рассматривается роль комбинаций полиморфных вариантов генов хемокинов, включенных в наше исследование, в формирование преэклампсии.
На следующем этапе нашей работы мы проанализировали ассоциации сочетаний генов цитокинов и генов сосудистых реакции с развитием ПЭ среднего и тяжелого течения. Данные по распределению полиморфных вариантов генов сосудистых реакций в исследуемой группе беременных с ПЭ были получены нашим коллективом исследователей ранее и представлены в работах Добродомовой И.С. (2012) и Елыковой А.В.(2013).
Выявлены сочетания генетических вариантов, отличающие беременных с ПЭ II и III степеней тяжести от группы беременных с ПЭ I степени тяжести. В их формировании участвуют тринадцать из двадцати двух проанализированных генетических полиморфизмов: -308 G/A TNF, -403 G/A RANTES, A/G I- TAC, -801 G/A SDF 1, C/G MCP-1; +6986 G/A CYP3A5, S311C PON2, 4a/4b eNOS, -344 С/Т СYP11B2, +46 G/A ADRB2; I/D АСЕ, -4063 C/T REN, -1166 А/С ATIIR1 (рис 25).
Установлено, что сочетания аллелей -403 G RANTES и D АСЕ (ОR=3,87); MCP-1, -308 G TNF, D АСЕ, -4063 C REN, -344 Т СYP11B2 (ОR=2,80); -403 G RANTES, D ACE, +6986 G CYP3A5 (ОR=3,85) являются факторами риска развития ПЭ II и III степеней тяжести. Комбинаций генетических вариантов -801 G SDF1, G MCP1, S311 PON2, +46 AADRB2 (OR=0,36); G MCP1, I ACE, 4b eNOS, –1166 AATIIR1 (OR=0,35); A IAC, -344C СYP11B, –1166 C ATIIR1 (OR=0,42); A IAC, 4a4b eNOS (OR=0,43) имеют протективное значение при развитии ПЭ среднетяжелого и тяжелого течения.
Наши результаты согласуются с литературными данными [Serrano N.C. et. al., 2006; Uma R. еt. al., 2010; Salimi S. еt. al., 2011]. Исследователями в латиноамериканской популяции показано, что при незначительном повышении концентрации аллеля D ACE повышается риск развития ПЭ [Serrano N.C. et al., 2006]. В работе иранских исследователей Salimi S. еt. al. (2011), выявлено, что риск развития ПЭ значительно выше у беременных с аллелем D АСЕ. Аналогичные результаты получены и учеными в Румынии [Procopciuc L.M. et. al., 2011] - у беременных с генотипами DD ACE и -4063 TT REN ПЭ развивается в 5 и 3,8 раз чаще, соответственно. В США ученые установили более раннее развитие ПЭ у беременных с генотипом DD ACE [Uma R. et al., 2010].
