Введение к работе
Актуальность проблемы
Проблема генитального эндометриоза (ГЭ) актуальна до настоящего времени в связи с высокой частотой его распространения, прогрессированием эндометриоидных гетеротопий за пределами полости матки, болевым синдромом, бесплодием и другими последствиями, отражающимися на качестве жизни больных при отсутствии патогенетических методов лечения (Манухин И.Б. и соавт., 2010; . et al., 2010; Gupta S. et al., 2008; . et al., 2010; ., ., 2005; . et al., 2010; . et al., 2010; . et al., 2006; . et al., 2010).
Эндометриоз – мультифакторное заболевание, в развитии которого задействованы различные механизмы: генетические, иммунные, эндокринные, ангиогенные, ферментные, оксидативные и другие (Баранов В.С., 2004; Манухин И.Б. и соавт., 2010; . et al., 2010; Laschke M.W. и Menger M.D., 2007; . et al., 2009; May K., Becker C.M., 2008; ., 2008; Painter J.N. et al., 2011). Существуют различные трактовки патогенеза развития ГЭ. Основными гипотезами развития ГЭ являются: транспортировка тканей эндометрия путем ретроградного менструирования; трансформации мезотелия абдоминальной и тазовой брюшины (теория “целомической метаплазии”); проявления остатков эмбриональных тканей (эмбриологические клеточные гамартии), гипотезы вторичной системы Мюллерового протока (Адамян Л.В. и Кулаков В.И., 1998; . et al., 1999 и 2007; . et al., 2002; Koninckx P.R. et al., 1999,а; . et al., 1999; Matsuura K. et al., 1999; . et al., 2010; Redwine D.B., 2002; Sampson J. A., 1921, 1925, 1927, 1940). Тем не менее, это не объясняет полную картину патогенеза заболевания.
Исследования последних лет посвящены роли активных форм кислорода и оксидативного стресса в развитии ГЭ, в них подтверждаются высокий уровень сывороточных аутоантител к маркерам оксидативого стресса. (Bukulmez O. et al., 2008; Marini M.G. et al., 1997; Mayani A., 1997; G. Polak et al., 2001). Выявлено наличие корреляционной связи между нарушением структуры железотранспортного белка (ЖТБ) трансферрина (ТФ) и дефектом его связи с рецепторами при ГЭ (Л.В. Адамян и соавт., 2007). Обнаружена высокая концентрация нетрансферринсвязанного железа (НТСЖ) в тканях, окружающих очаги ЭГ на фоне снижения концентрации общего пула свободного железа, как в тканях, так и в цитозоле. При этом дефект связывания ТФ с рецепторами приводит к образованию конгломератов белка, короткоцепочечных молекул и ионов двух- и трехвалентного железа вместо передачи ионов Fe3+ на ферритин. Такая форма железа не способствует нормальному его метаболизму в клетках эндометрия, что наблюдается в тканях больных с генетическими аномалиями обмена железа (R.C. Hider, 2002; R.W. Evans et al., 2008). В этих конгломератах повышается концентрация железа. Наряду с необходимыми для организма свойствами, ионы железа способны катализировать (посредством реакции Фентона) производство молекул и радикалов, содержащих кислород, таких, как супероксид-анион-радикал, перекись водорода, гидроксильный и пероксильный радикалы. Все эти производные объединяются под общим названием активных форм кислорода (АФК) и способны вызвать значительные деструктивные изменения в клетках и тканях. АФК участвуют в перекисном окислении липидных мембран, окисляют тиоловые группы переносчиков оксида азота, повреждают электронтранспортную цепь (ЭТЦ) митохондрий, вызывают мутации ДНК и нарушают антиоксидантную защиту организма. Следствием этих массивных цепных разветвленных реакций становится состояние организма, называемое «оксидативный стресс» (ОС). ОС сопровождает все реакции в организме, является последствием многих физических воздействий, как, например, лазерное и радиационное облучения. Для защиты от поражения ОС в организме существует антиоксидантная система, одним из звеньев которой являются система церулоплазмин/трансферрин (ЦП/ТФ) и тиоловые группы белков (А.Ф. Ванин, 1998; В.К. Казимирко, В.И. Мальцев, 2004; Н.П. Чеснокова, 2006; В.П. Скулачев, 2009; S. et al., 2006; J.C. et al., 2009).
Таким образом, несмотря на огромное количество исследований, посвященных различным аспектам эндометриоза, в том числе и патогенезу, роль оксидативного стресса и нарушение функции антиоксидантной системы организма при данном заболевании остаются невыясненными, поэтому научный интерес представляет комплексное клинико-экспериментальное изучение роли локального ОС и системной АОЗ организма в патогенезе развития ГЭ. Современные исследования позволяют по-новому взглянуть на роль в нем оксидативного стресса и необходимость разработки современных критериев ранней диагностики этого патологического процесса.
Цель работы - оптимизация ранней диагностики генитального эндометриоза на основе изучения проявлений оксидативного стресса и нарушений активности антиоксидантной системы
Задачи исследования:
1. Провести анализ преморбидного фона, сопутствующих заболеваний, менструальной и репродуктивной функции у больных генитальным эндометриозом.
2. Оценить действие антиоксидантов на очаги эндометриоза при экспериментальном моделировании на животных.
3. Выявить окисление электроннотранспортной цепи митохондрий (ЭТЦ) в очаге аденомиоза, как прямого подтверждения наличия окислительного стресса на локальном уровне.
4. Изучить соотношение концентрации активных центров церулоплазмина и трансферрина, концентрацию вакантных тиольных групп белков крови как показателей активности антиоксидантной системы организма на системном уровне.
5. Определить клиническое значение показателей оксидативного стресса в диагностике генитального эндометриоза.
Научная новизна.
Полученные в работе результаты показывают значение окисления ЭТЦ митохондрий в развитии аденомиоза, роль церулоплазмина и трансферрина в антиоксидантной защите организма на системном и локальном уровнях.
Определено значение маркеров оксидативного стресса для диагностики и прогнозирования рецидивирования генитального эндометриоза.
Доказана эффективность применения антиоксидантных средств (динитрозильный комплекс железа с глутатионом) в лечении экспериментального эндометриоза.
Практическая значимость
На основе полученных сведений предложен алгоритм диагностики генитального эндометриоза, включающий в себя исследование соотношения активных центров церулоплазмина и трансферрина, концентрации тиольных групп белков, окисления ЭТЦ митохондрий.
Исследование маркеров оксидативного стресса позволяет проводить раннюю диагностику и прогнозирование вероятности рецидива генитального эндометриоза после оперативного лечения.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Генитальный эндометриоз развивается на фоне неблагоприятного преморбидного фона, нарушений менструальной и генеративной функции.
2. Применение антиоксидантов (динитрозильные комплексы железа с глутатионом) уменьшают размеры эндометриоидных цист у животных при экспериментальном моделировании эндометриоза и подтверждает роль оксидативного стресса в формировании этого процесса.
3. Окисление электроннотранспортной цепи митохондрий является прямым подтверждением наличия оксидативного стресса в очаге поражения.
4. Нарушение функции антиоксидантной системы при генитальном эндометриозе проявляется изменением соотношения церулоплазмина и трансферрина, снижением концентрации тиольных групп белков крови.
5.Совокупность диагностически значимых показателей окисления электронтранспортной цепи митохондрий, соотношения церулоплазмин/трансферрин, снижения вакантных тиольных групп белков крови является критерием диагностики и прогнозирования рецидива генитального эндометриоза.
Внедрение результатов исследования в практику
Основные результаты работы внедрены в практическую деятельность МУЗ «Городская клиническая больница № 4» г. Ставрополь, МУЗ «Клиническая поликлиника № 6» г. Ставрополь, педагогическую практику кафедры акушерства и гинекологии факультета последипломного и дополнительного образования ГОУ ВПО «Ставропольская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России.
Публикации по теме диссертации
По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ, из них 1 - в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки.
Апробация диссертации
Материалы и основные положения диссертации представленыы на XV международной конференции «Новые технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (Украина, Ялта-Гурзуф, 2007), VII международной конференции «Биоантиоксидант» (Москва, 2006), на ежегодной краевой конференции акушеров-гинекологов (Ставрополь, 2006), на Международном конгрессе по эндоскопии (Москва, 2008), на V национальной научно-практической конференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2009), на Европейском обществе гинекологов (Париж, 2010), VI национальной научно-практической конференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2010).
Апробация диссертации состоялась 23 января 2011 года на совместной конференции кафедры Акушерства и гинекологии института последипломного образования ГОУ ВПО «Ставропольской государственной медицинской академии» МинЗдравсоцразвития России.
Личный вклад автора
Автором лично было проведено обследование пациенток, включенных в исследование. В ходе сбора материала для диссертационной работы соискателем были освоены методики верификации диагноза, спектроскопии электронного парамагнитного резонанса; методика экспериментального моделирования эндометриоза на лабораторных животных (крысах) – аутотрансплантация фрагмента эндометрия с миометрием к поверхности брюшины передней брюшной стенки. Все исследования проводились соискателем лично с участием сотрудников соответствующих лабораторий.
Объем и структура работы
Диссертация изложена на 135 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: список сокращений, введение, аналитического обзора литературы (I глава), материалы и методы собственных исследований (II главы), результаты исследования и обсуждения (III и IV главы), выводы, практических рекомендации, список литературы. Список литературы включает 57 отечественных и 141 на иностранных источников. Работа содержит 21 таблицы и проиллюстрирована 14 рисунками.
