Введение к работе
Актуальность исследования
С возрастом изменяются многие функции организма, в том числе и иммунной системы [Семенков В.Ф., Карандашов В.И., Ковальчук Л.В. 2005]. Экспериментальные и клинические исследования в геронтологии показали, что иммунная защита организма является первой системной функцией, которая нарушается при старении [Хавинсон В. Х. и Анисимов В.Н. 2003]. Симптомы старости появляются уже в конце репродуктивного периода и становятся более интенсивными по мере дальнейшего старения [Хавинсон В.Х. и Анисимов В.Н., 2009].
Иммунная и эндокринная системы находятся в тесной взаимосвязи, направленной на поддержание постоянства внутренней среды организма [Ширшев С.В. 2002; Olsen N.J. and Kovacs W.J. 1996]. Нарушение этого взаимодействия ведет к развитию ряда заболеваний [Olsen N.J. and Kovacs W.J., 1996; Elmore S., 2007]. На современном этапе доказано, что изменение уровня половых стероидных гормонов отражается на функциональном состоянии иммунной системы [Bebo, B.F., e.a., 2001; Pfelscifter J., e.a., 2002].
Следующим периодом в жизни женщины после фертильного является климактерический период. Падение уровня циркулирующих эстрогенов и прогестерона в пременопаузальном периоде и крайне низкий их уровень в постменопаузальном периоде определяет возникновение симптомов эстрогендефицитного состояния [Minici F., e.a., 2007] и приводит к нарушению функции иммунной системы [Kamada M., e.a., 2000; Kumru S., e.a., 2004]. Наступление климактерического периода сочетается с возникновением аутоиммунных, опухолевых и инфекционно-воспалительных процессов, что подтверждает нарушение функции иммунной системы [Effros R.B., 2003]. Как известно, данные патологические процессы, могут быть связаны с изменением апоптоза клеток иммунной системы [Reed J.S., 2000; Hakim F.T., e.a., 2004; Schmitt E., e.a., 2007; Elmore S., 2007]. Утверждается, что различие между старыми и молодыми многоклеточными организмами состоит, прежде всего, в количестве функционирующих клеток в органе или ткани: с возрастом это количество в большинстве органов уменьшается из-за стимуляции митохондриального пути апоптоза [Северин Ф.Ф. и Скулачёв В.П., 2009]. Поскольку уровень половых стероидных гормонов изменяется в зависимости от стадии климактерического периода, представляется целесообразным изучение параметров апоптоза как в пременопаузальном, так и в постменопаузальном периодах. Однако особенности апоптоза клеток иммунной системы у женщин как в пременопаузальном, так и постменопаузальном периодах остаются не изученными.
В настоящее время широко используется заместительная гормональная терапия (ЗГТ) у женщин климактерического периода, однако механизмы действия препаратов ЗГТ остаются недостаточно изученными. Более того, имеются данные, свидетельствующие об онкогенном потенциале препаратов ЗГТ [Chlebowski R.T., e.a., 2003; Prelevic G.M., e.a., 2005], Современные препараты ЗГТ, содержащие в своем составе эстрогены и прогестины, обладают положительным клиническим эффектом, элиминируя симптомы эстрогендефицитного состояния [Сметник В.П., и Кулаков В.И., 2001]. Известно, что экзогенные половые стероидные гормоны: эстрогены и прогестерон способны модулировать функцию иммунной системы и процессы апоптоза [Riggs B.L., e.a., 2002]. В связи с этим изучение влияния препаратов ЗГТ на апоптоз клеток иммунной системы и параметры его регуляции становится особенно актуальным. Однако, сведения о влиянии заместительной гормональной терапии на апоптоз клеток иммунной системы малочисленны.
Цель исследования
Установить особенности регуляции Fas-зависимого апоптоза клеток иммунной системы периферической крови и эндометрия женщин в пре- и постменопаузальном периоде и оценить влияние препаратов заместительной гормональной терапии на характеристики апоптоза.
Задачи исследования
-
Установить особенности апоптоза клеток иммунной системы на системном и локальном уровне у женщин в пременопаузальном и постменопаузальном периодах по сравнению с параметрами женщин репродуктивного возраста.
-
Выявить особенности сывороточного содержания регулирующих апоптоз факторов у женщин в пре- и постменопаузальном периодах.
-
Оценить экспрессию мРНК регулирующих апоптоз факторов в ткани эндометрия у женщин в пре- и постменопаузальном периодах.
-
Установить характер влияния препаратов заместительной гормональной терапии на апоптоз клеток иммунной системы периферической крови и эндометрия у женщин постменопаузального периода.
Научная новизна исследования
Впервые установлено, что у женщин в климактерическом периоде в отличие от женщин фертильного возраста снижается апоптоз лимфоцитов и моноцитов периферической крови преимущественно за счет снижения содержания клеток, находящихся на ранних этапах апоптоза, что сочетается со снижением уровня моноцитов, способных индуцировать апоптоз.
Установлены закономерности апоптоза лимфоцитов и макрофагов эндометрия в пременопаузальном и постменопаузальном периодах, проявляющиеся в пременопаузе снижением уровня лимфоцитов на ранних этапах апоптоза и повышением количества апоптирующих макрофагов, а в постменопаузальном периоде - снижением апоптоза лимфоцитов и макрофагов.
Установлены особенности сывороточного содержания факторов, регулирующих апоптоз, в климактерическом периоде, характеризующиеся в пре- и постменопаузе снижением содержания sFasL и p53, дополнительно в пременопаузе – снижением уровня sFas по сравнению с параметрами женщин фертильного возраста.
У женщин в пременопаузальном периоде выявлено снижение экспрессии клетками эндометрия мРНК XIAP, а в постменопаузе - повышение экспрессии мРНК XIAP и р53 в ткани эндометрия.
Впервые установлены закономерности изменения содержания FasL+ моноцитов, снижение которого ассоциируется с наличием хронического эндометрита у женщин в климактерическом периоде.
Впервые установлено, что препараты заместительной гормональной терапии у женщин в постменопаузальном периоде оказывают влияние на апоптоз клеток иммунной системы периферической крови и эндометрия и регулирующие его факторы, усиливая апоптоз лимфоцитов периферической крови, снижая сывороточное содержание sFas и р53, а также уровень экспрессии мРНК р53 в ткани эндометрия.
Выявлены различия в действии препаратов заместительной гормональной терапии на параметры апоптоза клеток иммунной системы периферической крови и эндометрия: препарат «Климодиен» в большей степени усиливает апоптоз-индуцирующую способность периферических лимфоцитов и моноцитов, а препарат «Анжелик» усиливает апоптоз лимфоцитов эндометрия.
Практическая значимость работы
Разработаны нормативы параметров апоптоза периферических и эндометриальных клеток иммунной системы у женщин климактерического периода.
Разработан и предложен способ диагностики хронического эндометрита у женщин в постменопаузальном периоде (приоритетная справка № 2009115014 от 20.04.2009).
Выявлены особенности влияния препаратов заместительной гормональной терапии на параметры Fas-зависимого апоптоза у женщин климактерического периода, что может использоваться в обосновании выбора терапии.
Внедрение результатов исследования
Результаты диссертационной работы внедрены в практическую деятельность центра планирования семьи и репродукции ФГУ «Ив НИИ М и Д им. В.Н. Городкова Росмедтехнологий», консультативно-диагностической поликлиники ФГУ «Ив НИИ М и Д им. В.Н. Городкова Росмедтехнологий» и хирургического отделения НУЗ «Отделенческая больница на станции Иваново ОАО «Российские железные дороги».
Положения, выносимые на защиту
У женщин с наступлением менопаузы в отличие от женщин фертильного возраста на системном и локальном уровне нарушается Fas-зависимый апоптоз клеток иммунной системы и его регуляция, что проявляется угнетением апоптоза периферических и эндометриальных лимфоцитов, апоптоз-индуцирующей способности моноцитов, готовности к апоптозу макрофагов эндометрия и снижением сывороточного уровня sFasL и p53. Параметры апоптоза клеток иммунной системы зависят от стадии климактерического периода и в большей степени проявляются в постменопаузальном возрасте.
Препараты заместительной гормональной терапии восстанавливают апоптоз лимфоцитов, но снижают содержание факторов, регулирующих апоптоз, как на системном, так и на локальном уровне. В действии препаратов заместительной гормональной терапии на параметры апоптоза существуют различия, которые могут быть обусловлены особенностями содержания синтетических эстрогенов и прогестинов.
Снижение содержания в крови FasL-позитивных моноцитов может служить диагностическим критерием хронического эндометрита у женщин постменопаузального периода.
Апробация
Материалы диссертации доложены и обсуждены на научной конференции «Молодая наука – развитию Ивановской области» (Иваново, 2006), на научно-практической конференции студентов и молодых ученых ИвГМА «Неделя науки – 2007» в рамках областного фестиваля «Молодая наука – развитию Ивановской области» (Иваново, 2007), на научно-практической конференции студентов и молодых ученых ИвГМА «Неделя науки – 2008» в рамках областного фестиваля «Молодая наука – развитию Ивановской области» (Иваново, 2008), на научно-практической конференции молодых ученых, посвященной дню памяти основателя института В.Н. Городкова (Иваново, 2009), на научных чтениях, посвященных памяти академика В.И. Кулакова (Москва, 2009), на 13 Всероссийском форуме с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2009).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 17 печатных работ.
Объём и структура работы
Диссертация изложена на 130 страницах машинописного текста. Работа состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы исследования», трех глав собственных исследований, главы «Обсуждение полученных результатов», выводов, практических рекомендации и библиографического указателя включающего 221 источник отечественных и зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 22 таблицами и 11 рисунками.
