Изучение влияния [Г]-D-глутаминил-L-триптофана (Бестима) на дифференцировку и функциональную активность лимфоцитов Петров Александр Владимирович

Содержание к диссертации

ВВЕДЕНИЕ 6

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 11

1. Иммуномодуляторы на основе коротких пептидов 12

2. Пептиды тимуса и их аналоги 13

1.3. Иммуномодулирующие эффекты Бестима 23

1. Эффекты Бестима в эксперименте 23

2. Клиническое применение Бестима 25

1.4. Современные представления о дифференцировке Т-лимфоцитов 28

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 34

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ БЕСТИМА НА ДИФФЕРЕНЦИРОВКУ И
ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ ЛИМФОЦИТОВ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ
ПУТЯХ ВВЕДЕНИЯ ПРЕПАРАТА ИНТАКТНЫМ ЖИВОТНЫМ 49

3. Изучение влияния Бестима на экспрессию маркеров дифференцировки клетками костного мозга и тимуса 49

4. Изучение влияния Бестима на функциональную активность клеток тимуса и селезенки 53

5. Анализ фармакокинетики Бестима при различных путях введения 59

ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ
БЕСТИМА В МОДЕЛИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ТУБЕРКУЛЁЗНОГО
ПРОЦЕССА 61

6. Исследование терапевтического эффекта Бестима 61

7. Изучение влияния Бестима на фагоцитарную активность макрофагов ....72

4.3. Изучения влияния Бестима на показатели Т-клеточного звена

иммунитета 79

ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ
БЕСТИМА В МОДЕЛЯХ АЛЛЕРГИИ 97

8. Исследование влияния Бестима на уровень антиген-специфических IgE .97

9. Исследования иммуномодулирующего действия Бестима в модели экспериментальной аллергической астмы 98

ГЛАВА 6. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ БЕСТИМА НА
КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ Т-КЛЕТОК
ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ВИРУСНЫМ
ГЕПАТИТОМ С 106

ГЛАВА 7. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 111

ВЫВОДЫ 130

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 131

4 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ПРИНЯТЫХ В ДИССЕРТАЦИИ

AT — антитела

АПК - антиген-представляющая клетка

БАЛ - бронхоальвеолярный лаваж

ЗФР - забуференный фосфатом физиологический раствор

ИЗФ - индекс завершенности фагоцитоза

ИЛ — интерлейкин

ИНФ - интерферон

ИС - индекс стимуляции

ИФА - иммуноферментный анализ

КонА - конканавалин А

КОЕ - колониеобразующие единицы

ЛПС - липополисахарид

МНПК — мононуклеары периферической крови

мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота

Мф - макрофаги

НК - натуральные киллеры

ОвА - куриный альбумин (овальбумин)

ПЗФ - показатель завершенности фагоцитоза

СПК - сыворотка плодов коровы

Тх-1, Тх-2 - Т-хелперы 1 и 2 типа

ТЭС - телячья эмбриональная сыворотка

ТГФ - тимический гуморальный фактор

ФА - фагоцитарная активность

ФГА - фитогемагглютинин

ФР - физиологический раствор

ФЧ - фагоцитарное число

СФТ - сывороточный фактор тимуса

5 BCG — Mycobacterium bovis BCG FITC - флюоресцеинизотиоцианат Ig - иммуноглобулины NO — оксид азота РЕ — фикоэритрин SPF - specific pathogen-free (беспатогенные животные)

Введение к работе

Актуальность проблемы.

В течение последних двух десятилетий, благодаря интенсивному развитию иммунологии, молекулярной биологии, биотехнологии и медицины, были достигнуты существенные успехи как в исследованиях развития иммунного ответа на различные виды антигенов," так и в изучении иммунопатогенеза заболеваний инфекционной и неинфекционной природы. Это в значительной степени стимулировало интерес к иммуномодулирующим препаратам.

В настоящее время значительно расширяется спектр иммунотропных лекарственных препаратов и показаний к их применению. Наиболее активно развиваются в этом направлении препараты тимического происхождения; Особое место среди них занимают синтетические препараты, такие как иммунофан, тимоген и другие (Карсанова М.И. и соавт, 2000; Лебедев В.В. и соавт., 1998, 1999; Нестерова И.В. и соавт., 2002; Старченко А.А., 2002). В последние годы спектр этих препаратов пополнился новым синтетическим иммуномодулятором Бестим, который был синтезирован в ГосНИИ ОЧБ (г. Санкт-Петербург) в середине 1990-х годов (Колобов А.А. и соавт., 1997).

Бестим (y-D-Glu-L-Trp) - дипептид, обладающий наибольшей активностью в ряду синтетических аналогов глутамил-триптофана. Первый этап исследований его свойств выявил ряд перспективных преимуществ препарата. При действии in vitro Бестим увеличивает продукцию ИЛ-2 лимфоцитами, усиливает их функциональную активность, активирует естественные киллеры. В экспериментах на животных было показано, что дипептид также стимулирует Т-клеточное звено иммунитета, преимущественно активируя Т-хелперы 1-го типа, влияет на дифференцировку лимфоцитов, активирует макрофаги (Пигарева Н.В., 2000). В то же время детали влияния Бестима на различные этапы дифференцировки Т-лимфоцитов остаются не до конца изученными.

Опыт применения Бестима в клинике продемонстрировал перспективность данного препарата для лечения широкого круга заболеваний, сопровождающихся дисфункцией Т-клеточного звена иммунитета (Абрамова Н.Н., 2005; Васильева Г.Ю. и соавт., 2002; Кукаркин Н.Ю., 2006; Лобзин Ю.В. и соавт., 2001; Нестерова И.В. и соавт., 2002; Позняк А.Л. и соавт., 2000; Фаст М.В., 2006).

Принимая во внимание это обстоятельство, актуальным является более глубокое исследование иммуномодулирующих эффектов препарата, в частности, его влияния на дифференцировку и функциональную активность Т-лимфоцитов.

Протективная активность дипептида в модели туберкулезной инфекции была продемонстрирована ранее (Заболотных Н.В., и соавт., 2001; Пигарева Н.В., 2000), однако механизмы иммуномодулирующего действия, в частности, влияние на антиген-специфический иммунный ответ остаются не до конца ясными. Кроме того, учитывая влияние Бестима на поляризацию Т-хелперов, представляется весьма актуальным изучение иммуномодулирующих свойств препарата в моделях аллергического иммунного ответа, в частности, при экспериментальной аллергической астме.

Цель исследования: Изучение влияния Бестима на дифференцировку и функциональную активность Т-лимфоцитов.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние Бестима на различные этапы дифференцировки Т-лимфоцитов у мышей.

2. Изучить иммуномодулирующую активность Бестима при различных путях введения у мышей.

3. Исследовать иммуномодулирующее действие Бестима в модели экспериментальной туберкулезной инфекции.

4. Исследовать иммуномодулирующее действие Бестима в модели аллергии.

5. Исследовать влияние Бестима на количественные и функциональные показатели Т-клеток у больных хроническим вирусным гепатитом С.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. На основании проведенных исследований установлено, что Бестим ускоряет дифференцировку ранних предшественников Т-лимфоцитов в костном мозге, а также дифференцировку Т-клеток в тимусе.

2. При пероральном введении Бестим в полном объеме проявляет иммуномодулирующую активность.

3. Механизм протективного действия Бестима при экспериментальном туберкулезном процессе связан с активацией антиген-специфического иммунного ответа и поляризацией Т-хелперов в направлении Txl.

4. В модели аллергической бронхиальной астмы Бестим подавляет местные и системные проявления аллергического иммунного ответа.

5. Иммуномодулирующее действие Бестима при хроническом гепатите С проявляется в поляризации иммунного ответа в направлении Т-хелперов 1-го типа.

Научная новизна работы.

В данной работе впервые с помощью многоцветной проточной цитофлюориметрии показано стимулирующее влияние Бестима на отдельные этапы дифференцировки Т-лимфоцитов.

Впервые изучено влияние Бестима на антиген-специфический иммунный ответ в модели экспериментальной туберкулезной инфекции и выявлено его усиление с преимущественной активацией Т-хелперов 1-го типа.

Впервые показана иммуномодулирующая активность Бестима в модели аллергической бронхиальной астмы и показано подавляющее действие препарата на системные и местные проявления патологического процесса.

9 Впервые изучено иммуномодулирующее действие Бестима в комплексной- терапии больных хроническим гепатитом С и установлено, что препарат стимулирует функциональную активность Т-лимфоцитов, преимущественно активируя Т-хелперы 1 типа.

Научно-практическая значимость.

Продемонстрирована активность Бестима для* стимуляции Т-хелперов первого типа^ как в эксперименте, так и, в клинике. Показано,, что при пероральном введении препарат сохраняет иммуномодулирующую: активность, что существенно' расширяет возможности его применения в амбулаторных условиях. Выявлено; достоверное противоаллергическое действие препарата. Бестим, наряду с лечением иммунодефицитных, состояний и* некоторых инфекционных заболеваний, может быть применен:для лечения аллергической патологии, в частности — бронхиальной астмы.

і

Результаты диссертационной работы используются в; работе НИИ фтизиопульмонологии при разработке схем комплексной терапии туберкулёза, а также в ГосНИИ ОЧБ для разработки новых схем лечения инфекционных и; аллергических заболеваний.

Апробация работы.

Материалы диссертации были доложены на VIII и X Всероссийском научном Форуме с;международным участием имени акад. В_;И: Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (2004, 2006); Международном конгрессе «Иммунитет и болезни: от теории к терапии» (Москва, 2005); 6^th FOCIS-Annual Meeting (San Francisco, 2006); 29^th European Peptide Symposium (Gdansk, 2006); Всероссийской конференции молодых ученых, посвященной памяти профессора, Н.Н. Кеворкова «Иммунитет и аллергия: от эксперимента к клинике» (Пермь, 2006).

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ.

Объём и структура диссертации.

Диссертация изложена на 152 страницах машинописного текста и состоит из обзора литературы, главы материалов и методов, четырех глав собственных исследований, обсуждения, выводов, списка литературы, включающего 44 отечественных и 161 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 40 таблицами и 6 рисунками.

Похожие диссертации на Изучение влияния [Г]-D-глутаминил-L-триптофана (Бестима) на дифференцировку и функциональную активность лимфоцитов

Влияние бестима (Y-D-глутамил-L-триптофана) на клинические и иммунологические показатели больных с одонтогенными флегмонами лица и шеиПавлиенко Юлия Викторовна

Иммунофенотип и функциональная активность лимфоцитов, выделенных из печени, пораженной опухолевым процессомКузовлев Евгений Николаевич

Роль аденозина в изменении функциональной активности лимфоцитов и нейтрофильных лейкоцитов периферической крови здоровых доноров и больных бронхиальной астмойГаврилова, Елена Васильевна

Новые подходы к оценке функциональной активности лимфоцитов с помощью проточной лазерной цитометрииБахус Галина Олеговна

К механизму формирования колебаний экспрессии рецепторов Т-лимфоцитов и активности фагоцитоза у людейРизопулу, Анна Панаётисовна

Влияние микроокружения на функциональную активность в лимфоцитовДьяков Илья Николаевич

Влияние антигенов и штаммов чумного микроба с экспрессией различных детерминант иммуногенности и вирулентности на уровень бласттрансформации лимфоцитов и активность интерлейкинов (1 и 2) при формировании иммунитета к чумеЕмельянова, Наталья Вячеславовна

Характер изменения функциональной активности регуляторных лимфоцитов и синтеза иммуноглобулина Е у больных атопической формой бронхиальной астмыБусарова, Екатерина Анатольевна

Клиническое значение иммунологического фенотипа и пролиферативной активности опухолевых лимфоцитов при множественной миеломеНазарова, Ирина Николаевна

Адренергическая регуляция отдельных проявлений функциональной активности больших гранулярных лимфоцитовТанаева, Наталия Ивановна