Введение к работе
Актуальность работы Гранулоцитарный колониестичулирующий фіактор (Г-КСФ) уже почти 15 лет является одним из наиболее распространенных ростовых факторов, используемых в трансплантотогии для мобилизации гемопоэтических стволовых клеток (CD34+K,ieTOK), а также при лечении медикаментозной депрессии кроветворения у онкогематотогических ботьных Но, не смотря на столь широкое применение механизм действия Г-КСФ остается до конца не из> ченным
Многочисленными исследованиями показано, что рецептор к Г-КСФ имеется лишь у небольшого числа гемопоэтических ствотовых клеток (ГСК) костного мозга и периферической крови (Shimoda К et al ,1992, Shmjo К et al, 1995) Его плотность на CD34+ клетках очень низкая, увеличивается по мере созревания гранулоцитов, достигая максимума на зрелых нейтрофилах и моноцитах Так, известно, что количество рецепторов на нормальных нейтрофилах возрастает соответственно с их степенью зрелости с 500 до 3000 на клетку (ASHamblra,1993)
Действитетыю, наибольший эффект Г-КСФ отмечается при уровне нейтрофилов более 2000 кпеток в 1 мкл( Румянцев С А ,2002) В таком случае остается неясным мобилизирующий эффект Г-КСФ в условиях индуцированной гипоплазии кроветворения после химиотерапии, когда абсолютное число гранулоцитов в периферической крови менее 500 в 1 мкл
Кроме того, анализ кинетического статуса циркулирующих CD34+ клеток показал, что CD34+ клетки, мобилизованные Г-КСФ, находятся в основном в GO/'Gl-фазе клеточного цикла, в то время как в костном мозге до назначения Г-КСФ большинство CD34+ клеток пребывают в 3+С2/М-фазе (Fruehauf S et al ,1998) Было доказано, что пролиферация CD34+ клеток в костном мозге при введении Г-КСФ не усиливается наоборот, происходит снижение колнчесіва CD34+ клеток в периферической крови при повторных сеансах цитафереза (Kiel К et al, 1998, Abe Т et al ,1998, Р>мянцев С А с соавт 2002)
Таким образом, вопрос о непосредственном влиянии Г-КСФ на
гемопоэтические стволовые клетки остается дискутабельным, в свете чего
становится актуальным исследование, направленное на поиск факторов
способствующих мобилизирующему действию Г-КСФ /
Целью работы явилось изучение механизмов мобилизации клеток крови под действием Г-КСФ при использовании его в клинической практике Для достижения этой цели поставлены следующие задачи 1. Изучить зависимость эффективности мобилизации от клеточного состава крови перед началом применения Г-КСФ
Определить уровень экспрессии рецептора к Г-КСФ и IL-8 на кроветворных клетках разных уровней дифференцировки в динамике терапии Г-КСФ
Оценить уровень IL-8, ММР-9, ММР-2, TIMP-1, TIMP-2 в сыворотке больных в динамике терапии Г-КСФ
Определить влияние сывороточных концентрации IL-8, ММР-9, ММР-2, TIMP-1, TIMP-2 на эффективность Г-КСФ индуцированной мобилизации ГСК
Изучить пролиферацию клопогонных кроветворных предшественников при назначении Г-КСФ
Научная новизна. В работе впервые на клиническом материале изучен механизм мобилизирующего эффекта Г-КСФ Показано, что эффективность применения Г-КСФ при лечении медикаментозной цитопении, также как и при мобилизации ГСК, находится в прямой зависимости от количества граиулоцитов перед началом применения препарата. В настоящем исследовании также показано, что уровень экспрессии рецептора к Г-КСФ на поверхности CD34+mieTOK минимален, а рецептор к IL-8 на поверхности С034+клеток не экспрессируется Наибольший уровень экспрессии рецепторов к Г-КСФ и IL-8 отмечается па поверхности зрелых граиулоцитов и моноцитов и в процессе применения Г-КСФ не увеличивается Определены концентрации IL-8, матрикс металлопротеиназ (ММР-9 и ММР-2) и их естественных ингибиторов (TIMP-I, TIMP-II) у здоровых доноров и пациентов с онкогематологическими заболеваниями Показано, что концентрация IL-8 и ММР-9 после применения Г-КСФ возрастает, а ММР-2, TIMP-I и ТІМР-ІГ не изменяется
Практическое значение работы в том, что показана зависимость эффективности использования Г-КСФ от степени роста концентрации IL-8 и ММР-9 в сыворотке крови, который, в свою очередь, зависит от количества эффекторных клеток - іранулоцитов и моноцитов, имеющих рецепторы к Г-КСФ и IL-8
Эффективность мобилизации ГСК также зависит от степени роста сывороточной концентрации IL-8 и ММР-9 Показана возможность использования уровня экспрессии CD 114 и CD 128 для прогнозирования эффективности мобилизации ГСК
Апробация работ
Диссертация апробирована на совместной научно-практической конференции клинических и лабораторных отделов ФГУ ФНКЦ детской гематологии, онкологии и иммунологии Росздрава. По материалам диссертации опубликованс^печатных работ
Структура и объем диссертации
Материал диссертации изложен на нас! /страницах машинописного текста, содержит? V таблицы и проитлюстрирован Ту рисунками Указатель литературы включает в себя 'оС источников отечественной и 'ЭЬ источников зарубежной литературы Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, 3 глав, излагающих результаты собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, списка литературы
Работа выполнена в лаборатории регуляции кроветворения (зав - д б н Осипова Е Ю) отдела молекулярной и экспериметалыюй гематологии, онкологии и иммунологии (зав - к м н Румянцев С А) ФГУ Федерального научно-клинического центра гематологии, онкологии и иммунологии Росздрава (директор ФГУ ФНКЦ ДГОИ - чл -корр РАМН, д м и профессор Румянцев А Г), на базе клинических отдетсний опкогематочогии и полихимиотерапии (зав - к м н Литвинов Д В ), онкогематологии (зав -дми Мякова II В ) общей гематочогии (зав - Масчан М А ), трансплантации костного мозга (зав - д м н Скоробогаюва ЕВ)
