Введение к работе
Актуальность проблемы. В настоящее время интерес к проблеме функциональной дифференцировки клеток, протекающей в отсутствие антигенного стимула, в значительной степени связан с изучением межмолекулярнцх взаимодействия различных антигенных структур, расположенных на мембранах иммунокомпетентных клеток.. Существенную роль в, этих взаимодействиях играот антигены I и II класса ГКГ (главного комплекса гистосовместимости). Установлено, что эти антигены принимают непосредственное участие в реализации многих иммунных реакция, таких как: представление процессированного антигена, активация Т-лиыфоцитов, и играют главную роль в обеспечении эффекторных механизмов Т-клеточного звена иммунитета /Emarlch F..1966s Benacerr&i В., 1961/. Антигени ГКГ также вовлечены в процессы безантигенноя дифференцировки клеток иммунной системы. Они принимают непосредственное участие в формировании МШЬрестрикции /Miller J. et.al.,1989/ и толерантности "к своему" /Sprent D. et.al., 1988/, в реакции смешанной аутологичноя культуры лимфоцитов /Innes J.et.al.,1959/, в регуляции процессов хоминга лимфоцитов и аллогенноя ингибции , в индукции эффекторов РТПХ (реакция "трансплантат против хозяина") /Анфалова т. и др.,1984/. Все перечисленные свойства характерны для мембраносвязанных форм антигенов ГКГ, однако, помимо представленных на мембранах клеток существуют и свободные формы антигенов ГКГ. Они обнаружены в межклеточной среде, в крови, лимфе и других жидких средах организма /Sing P. et.al.,1969/. Накопление растворимых антигенов ГКГ является активным регулируемым процессом. Тем не менее функциональная роль растворимых антигенов ГКГ до настоящего времени остается неопределенной.
- г-
Ранее было показано, что при совместном культивировании сингенных макрофагов и тимоцитов в культуральноя среде накапливается гуморальный Н-2К-рестриктированныя фактор с молекулярной, массой 60 кДа, вызывающий функциональную дифференцировку тимоцитов в зрелые эффекторы РТПХ. Гуморальная индукция Т-эффекторов наблюдалась только при идентичности по Н-2К-локусу макрофагов, продуцентов фактора, и тимоцитов /Галактионов В. и др.,19в7/. Приведенные, данные позволили предположить, что в роли Н-2К-рестриктированного фактора может выступать растворимая форма продуктов Н-2К-локуса ГКГ, что и определило направление
нашей работы.
Цель исследования - провести сравнительное исследование
биохимических свойств и иммунобиологической активности
Н-2К-рестриктированного фактора макрофагов и Н-2К-антигенов.
Основные задачи исследования:
!. Разработать схему выделения биологически активного Н-2К-рестриктированного фактора макрофагов из супернатанта совместной культуры-макрофагов и сингенных тимоцитов.
-
Выделить Н-2К-антигеиы из мембран клеток селезенки мыши.
-
Провести сравнительный анализ биохимических и физико-химических параметров Н-2К-рестриктированного фактора макрофагов и Н-2К-антигенов.
-
Провести сравнительное исследование влияния Н-2К-рестрик-тированного фактора макрофагов и Н-2К-антигенов на процессы функциональной дифференцировки тимоцитов.
5. Исследовать влияние Н-2К-рестриктированного фактора
макрофагов и Н-2К-антигенов на экспрессию фенотипических маркеров
тимоцитов.
Научная новизна. Разработана схема очистки биологически активного Н-2К-рестриктированного фактора макрофагов, вызывающего дифференцировку клеток тимуса. Впервые показано, что аутологичные Н-2К-антигены, полученные методой папаинового гидролиза мембран клеток селезенки мыши, и Н-2К-рестриктированный фактор макрофагов вызывают in vitro функциональную дифференцировку клеток тимуса. Установлено, что незрелые тимоциты. после инкубации с аутологичньши Н-2К-антигенами или Н-2К-рестриктированным фактором приобретают способность индуцировать РТПХ, усиливают ФГА-зависиыую пролиферативную активность, продукцию ИЛ-2, пролиферативный ответ в ауто-СКЛ. Впервые показано, что Н-2К-рестриктированныя фактор макрофагов и аутологичные Н-2К-антигени не вызывают пролиферации клеток тиыуса в отсутствие костиыуляции. Установлено, что поыиио изменения функциональных свойств клеток тимуса, под влиянием Н-2К-рестриктированного фактора макрофагов и Н-2К-антигеноз наблюдается усиленно экспрессии фенотипических маркеров Lyt-2 и L3T4 , а так ate Н-2К-антигенов.
Теоретическая н практическая значимость работы. Результаты исследования значительно расширяют наши представления о формах взаимодействия макрофагов и тимоцитов. Наиболее важен неизвестный ранее и вскрытый нами факт, касающийся установления новой функциональной роли антигенов I класса ГКГ, как фактора дифференцировки клеток тимуса. Вместе с тем эти данные имеют важное значение для практического здравоохранения, так как могут быть рекомендованы в качестве теоретической предпосылки для клинического изучения и разработки схем практического применения при индивидуальной иммунокоррекции врожденных или приобретенных ;шмунодефицитов, гиперплазии клеток тиыуса и компенсаторной
терапии при заболевании СПИД. Результаты работы по данной теме внедрены в педагогическую практику на кафедре биохими ЦОЛИУВ с сентября 1936 года.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и ибсужцены на I Всесоюзном симпозиуме по препаративной хроматографии (Ленинград, 1987), на I Всесоюзном иммунологическом съезде (Сочи, 19S9), на Всесоюзной симпозиуме "Биохимия рецепторних систем" (Таллинн, 1990), на Всесоюзном симпозиуме "Система иакрофагов в норме и патологии" (Новосибирск, 1990), на совместном семинаре отделов клеточного иммунитета, биотехнологии и биологического контроля Института иммунологии Минмедпроыа. Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ.
Основные полохения, выносимые ил защлту:
1. Н-2К-рестриктированныя фччтор макрофагов и аутологичные
Н-2К-антигены вызывают функциоьг/ьную и фенотипическую дифферен-
цировку клеток тимуса in viV' .
2. Н-2К-рестриктиро'.>'..кный фактор макрофагов обладает
биохимическими и иы-г-нобислогическими свойствами схожими со
. свойствами аутологичных Н-2К-антигенов, получэчкых методом
папаинового гидролчза мембран селезенок мыши.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из
