Введение к работе
Актуальность проблемы
Сенсибилизация к инсектным аллергенам может иметь место при разных аллергических заболеваниях: бронхиальной астме, аллергодер-матозах и др. Укусы насекомых могут играть роль триггера в формировании бронхиальной астмы, анафилактического шока, крапивницы и других аллерогопатологий.
Среди больных атопической бронхиальной астмой (АБА) — жителей Москвы гиперчувствительность (ГЧ) к аллергенам тараканов выявлена у 33% пациентов (Т.Г. Федоскова, 1996), в Санкт-Петербурге -до 41% пациентов с бронхиальной астмой (БА). Распространенность аллергии к комарам составляет 15-20% среди больных, страдающих атопическими заболеваниями. Проблема инсектной аллергии к так называемым нежалящим насекомым актуальна и для многих регионов мира (С. Perez-Santos, 1995; S.M.J. Sienra-Monge, 2001).
Отсутствие отечественных диагностических и лечебных аллергенов из нежалящих насекомых (тараканов, комаров, жуков, моли и др.) является препятствием к своевременной диагностике, профилактике и специфической терапии (СИТ) аллергических состояний, обусловленных сенсибилизацией к указанным инсектным аллергенам.
Вышеизложенное определяет актуальность разработки эффективных диагностических и лечебных аллергенов из тараканов и комаров.
Разработка технологий получения диагностических и лечебных форм должна осуществляться в направлении снижения токсических и аллергических свойств нативных препаратов и повышения их имму-ногенной активности.
Опыт предшествующих исследований по модификации пыльцевых аллергенов показывает, что наиболее оптимальным способом снижения аллергенных свойств и повышения иммуногенности нативных экстрактов является их химическая модификация с использованием фор-мальдегида для получения аллергоидов (D.G. Marsh 1970). Формальдегид достаточно успешно применяется какдетоксицирую-щее средство при создании анатоксинов. Учитывая высокую степень токсичности аллергенных фракций тараканов и комаров в качестве модификатора аллергенов был выбран формальдегид.
Цель и задачи исследования
Цель работы состояла в создании технологий получения диагностических и лечебных (аллергоидных) форм аллергенов из тараканов
(Blattella germanica, Periplaneta americana, Blatta orientalis) и комаров (Aedesaegypti).
В соответствии с постановленной целью были определены следующие задачи:
-
исследовать характеристики инсектного сырья из тараканов (Blattella germanica, Blatta orientalis, ftriplaneta americana), из комаров (Aedes aegypti) и осуществить паспортизацию экспериментальных образцов сырья;
-
выделить и изучить характеристики аллергенных фракций в составе инсектных аллергенов;
3. разработать технологию получения диагностической формы аллер-
гена из тараканов;
4. усовершенствовать существующую модель диагностической фор
мы аллергена из комаров;
-
разработать технологии получения лечебных аллергоидных форм аллергенов из тараканов и из комаров;
-
получить аллергоидные формы аллергенов из тараканов и из комаров по разработанной технологии;
-
оценить токсические свойства инсектных аллергенов и аллергоидов;
-
оценить специфическую аллергенную и гипосенсибилизирующую активность аллергоидных форм;
-
оценить иммуногенные свойства аллергоидов.
Научная новизна
Впервые охарактеризованы по ряду иммунохимических характеристик аллергены тараканов вида: Blatta orientalis. Показано, что наиболее выраженная аллергенная активность этого вида тараканов ассоциируется с фракцией, имеюшей М.м.=67 Ш, которая квалифицирована как главный аллерген Blatta orientalis. Фракции с М.м.=40,92-98 kD, квалифицированы как минорные (малые) аллергены.
Изучение характеристик аллергенных компонентов в составе суммарных аллергенных фракций тараканов (САФ-Т) и комаров (САФ-К) позволило выделить оптимальные композиции главных и малых аллергенов для создания высокоэффективных лечебных форм аллергенов - инсектных аллергоидов.
Показано снижение специфических IgE связывающих свойств у инсектных аллергоидов, в сравнении с их нативными аналогами, что свидетельствует и о сниженном «риске» реакций анафилактического типа
при введении аллергоидов в организм. Результаты патоморфологичес-
ких исследований позволили установить безопасность введения животным суммарных гипосенсибилизирующих доз инсектных аллергоидов. Выявлена высокая иммуногенная активность аллергоидов, что является оптимальным показателем эффективности СИТ.
Научно-практическая значимость
Научно-практическая значимость настоящего исследования заключается в разработке новых отечественных технологий лечебных форм аллергенов (аллергоидов) из тараканов и из комаров, для специфической терапии аллергических заболеваний, обусловленных сенсибилизацией к указанным аллергенам.
1. На разработанный аллерген из комаров вида Aedes aegypti полу
чено «Регистрационное удостоверение № 98/283/7 МЗ РФ». Препарат
разрешен к медицинскому применению, промышленному выпуску.
Получен «Регистрационный № 2001102525 от 19.03.2001 в Российс
ком Агентстве по патентам и товарным знакам на препарат: Аллерген
из комаров вида Aedes aegypti для диагностики».
2. Разработаны технологии получения:
-
отечественного диагностического аллергена из тараканов;
-
лечебной формы - аллергоида из тараканов;
-
лечебной формы - аллергоида из комаров.
Внедрение в практику
На основе разработанной технологии получения диагностического аллергена из комаров (Реестр МЗ - регистрационное удостоверение № 98/283/7), который внедрен в практику НКО Института иммунологии Федерального управления «Медбиоэкстрем» при МЗ РФ, Института педиатрии МЗ РФ (аллергологическое отделение), аллергологи-ческого отделения 1-й городской клинической б-цыим. Н.И. Пирогова
Препарат диагностического аллергена из тараканов внедрен также в практику клинико-лабораторных работ Института иммунологии, для специфического обследования в тестах in vitro больных респиратор-но-аллергическими заболеваниями с ГЧ к аллергенам тараканов.
По результатам доклинического испытания диагностической формы аллергена из тараканов, составлена научно-техническая документация (НТД) для предоставления в ГИСК им. Л.А. Тарасевича МЗ РФ.
Положения, выносимые на зашиту
1. Разработанные технологии инсектных аллергоидов на основе главных и малых аллергенов тараканов и комаров, обладают преиму-
ществом при создании лечебных форм - инсектных аллергоидов для гипосенсибилизирующей терапии.
-
Доклинические испытания на животных аллергоидов из тараканов и из комаров, свидетельствуют о безопасности этих препаратов.
-
Специфическая IgE-связывающая активность аллергоидов снижена соответственно в 1,3 (аллергоид из комаров) и 1,5 раза (аллерго-ид из тараканов), по сравнению с немодифицированными формами аллергенов.
-
Иммуногенность аллергоидов из тараканов и из комаров превосходит в 3,0-3,2 раза показатели их нативных аллергенов (р<0,05).
Публикации
Основные результаты исследований изложены в 9 научных публикациях и доложены на: 1-ом Национальном конгрессе РААКИ «Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и им-мунофармакологии» (Москва, 1997); И-ом Национальном конгрессе РААКИ «Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии» (Москва, 1998).
Объем и структура диссертации
