Введение к работе
Актуальность темы. Белок р53 дикого типа (wtp53) содержится в нормальных клетках в латентном состоянии и не выявляется обычными методами, но оказывает противоопухолевое действие. Более половины всех случаев рака у человека сопровождаются мутациями р53 гена, во многих других случаях выявляется потеря функциональной активности р53 белком без мутации в гене. И в том и в другом случае р53 накапливается в злокачественно трансформированной клетке в значительных количествах. р53 подходит для заместительной генной терапии, так как он является мощным индуктором апоптоза раковой клетки. Однако, терапия с использованием р53-гена имеет существенные ограничения. Учитывая это, для лечения опухолей, содержащих нормальный или мутантный р53 белок, становятся более актуальными иммунологические подходы. Возможно проведение иммунотерапии путем введения р53 белка. Однако, как аутоантиген, он слабо иммуногенен, даже в своей мутантной форме. Остается открытым вопрос о противоопухолевой эффективности введения самого белка р53 или анти-р53-антител, действие которых может быть опосредовано выработкой и противоопухолевым действием антиидиотипических антител. Канцерогенез сопряжен с серьезными повреждениями иммунной системы, лимфоидной ткани с нарушениями функций Т- и В-лимфоцитов.
Опухолевый рост, как правило, идет на фоне выраженного иммунодефицита. В связи с этим представляло интерес изучение влияния иммунизации белком р53 и введения антител против р53 на лимфоидную ткань в условиях химически индуцированного канцерогенеза. Актуальность настоящего экспериментального исследования связана с поиском новых путей иммунотерапии опухолей с использованием антител, направленных против белка р53, и изучением иммунологических механизмов их противоопухолевого действия.
Цель исследования. Изучить роль иммунологических механизмов в развитии противоопухолевого эффекта антител, направленных против белка р53.
Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:
-
Изучить экспрессию белка р53 в кишечнике крыс в динамике химически индуцированного канцерогенеза.
-
Оценить влияние введения крысам р53 антиген-липосомного комплекса или анти-р53-иммуноглобулина на интенсивность химически индуцированного канцерогенеза.
-
Изучить иммуноморфологические изменения в селезенке животных, получивших р53 антиген-липосомный комплекс или анти-р53-иммуноглобулин на фоне химически индуцированного канцерогенеза.
. *ОС. НАЦИОНАЛЬНА!)
| ВМЫИОТЕКА і
~>
-
Оценить влияние введения крысам р53 антиген-липосомного комнлс-са или анти-р53-иммуноглобулина на экспресси.о белка р53 и пока!.пели, косвенно отражающие активность канцерогенеза и нропниюпухолевого действия в органах-мишенях канцерогенного действия
-
Изучить экспрессию промотора р53 у трансгенных мышей на фоне химически индуцированного канцерогенеза и введения анти-р53-антител.
Научная новизна.
Впервые было проведено комплексное изучение противоопухолевого действия аши-р53- антител Впервые показано увеличение содержания белка р53 в )пиіе.іиальньіх клетках толстого кишечника крыс в процессе химически индуцированного канцерогенеза в ответ на введение анти-р53-имм)1юпюбулина. На модели трансгенных мышей впервые показано, что введение анти-р53-антител усиливает экспрессию промотора р53 и увеличивает содержание белка р53 в клетках кишечника. В экспериментах зарсі исгрирован выраженный противоопухолевый эффект введения крысам р^З ашиген-липосомного комплекса или анти-р53- иммуноглобулина.
Теоретическая и практическая значимость результатов работы.
Выявленное в экспериментах резкое возрастание содержания белка р53 в июкачественных тканях при введении анти-р53-антител представляет интерес для обсуждения гипотезы о роли антиидиотипических антител, соо і во і ствующих «внутреннему образу» антигена.
Зарегистрированное параллельное увеличение выраженности апопгоза, экспрессии р53 белка и количества Т лимфоцитов в инфильтратах и примыкающих к опухолям тканях можно рассматривать как результат активации иммунной системы в ответ на введение р53 антиген-липосомного комплекса или анти-р53-антител.
Полученные экспериментальные данные могут служить основой для разрабоїки принципиально новых методов иммунотерапии злокачественных опухолей.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту.
-
Показано возрастание уровня экспрессии белка р53 в эпителиальных клсікііх толстого кишечника крыс в процессе химически индуцированного канцерогенеза.
-
В ответ на введение анти-р53-антител на фоне химически индуцированного канцерогенеза усиливается экспрессия промотора р53 и повышается содержание белка р53 в эпителиальных клетках кишечника.
-
При введении крысам р53 антиген-липосомного комплекса или анти-рхЗ-ашшел на фоне химически индуцированного канцерогенеза іареї исірирован выраженный противоопухолевый эффект.
-
При введении крысам анти-р53 -антител на фоне химически индуцированного канцерогенеза предотвращалось ра^ви'ие В-иммунодефицита, характерного для крыс-опухоленосителей, и возрастало количество дендритных клеток и макрофагов в селезенке.
-
При введении крысам анти-р53-антител на фоне химически индуцированного канцерогенеза отмечено усиление локальной инфильтрации опухолей CD25+ клетками и процесса апоптоза в опухолях.
Личный вклад автора в проведенное исследование. Личным вкладом автора в выполненную работу является самостоятельное выполнение всех иммунологических и молекулярно-биологических исследований, интерпретация полученных результатов. Вклад соавторов ограничивается предоставлением в его распоряжение ряда оригинальных моноклональных антител и трансгенных мышей.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы были представлены на 15 международных научных конференциях и доложены на научной конференции с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург, 2002г.). Диссертационная работа апробирована на научной конференции отдела иммунологии НИИЭМ РАМН 05 октября 2004 г.
Публикации. По теме диссертационного исследования опубликовано 16 печатных работ, в том числе 14 статей в научных журналах и 2 тезисов конференций.
Объем и структура диссертации. Объем работы составляет 121 страницу машинописного текста, включая 22 таблицы и 12 рисунков. Список литературы состоит из 168 наименований, из них 20 работ принадлежат отечественным авторам и 148 - зарубежным.
