Введение к работе
Актуальность проблемы.
Острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ) является наиболее частым онкологическим заболеванием у детей. Использование современной программной химиотерапии в последние годы позволяет достичь выхода в ремиссию более чем у 90% больных, а пятилетней безрецидивной выживаемости у 77-80% детей [Harms DO at al.,2000; Schrappe M at al., 2000].
Несмотря на достигнутые успехи в лечении острого лимфобластного лейкоза у детей, сохраняется группа больных, у которых проведение современной комплексной химиотерапии неэффективно. Это «первично рефрактерные» к лечению больные (2-3% пациентов), а также дети, у которых развиваются рецидивы заболевания. Результаты лечения этих больных остаются неудовлетворительными.
Рефрактерность лейкемических клеток к высокодозной химиотерапии, а также развитие рецидивов может быть обусловлено особенностями биологии резидуальных клеток и/или нарушениями противоопухолевого иммунитета. В механизме нарушений противоопухолевого иммунитета важную роль может играть изменение функции лимфоцитов и, в частности, нарушение синтеза таких цитокинов, как интерферон-гамма (IFN-y), фактор некроза опухоли-альфа (TNF-a) и интерлейкин-2 (IL-2), участвующих в клеточном противоопухолевом иммунитете.
Имеются данные о прямой зависимости уровня фактора некроза опухоли-альфа в плазме крови и абсолютного и относительного содержания лейкемических клеток в периферической крови [Потапнев М.П., 2003]. Предполагается, что данный цитокин участвует в миграции лейкемических клеток из костного мозга в периферическую кровь.
Однако, особенности внутриклеточного синтеза цитокинов интерферона-гамма, фактора некроза опухоли-альфа и интерлейкина -2 лимфоцитами крови у детей в разные периоды острого лимфобластного лейкоза изучены мало. Имеющиеся данные противоречивы.
При остром лимфобластном лейкозе у детей выявлено снижение интерферон-гамма и интерлейкин-2 продуцирующих клеточных популяций Т-хелперов и Т-супрессоров, причем наиболее низким был уровень синтеза IL-2. Для восстановления нормального количества IL-2-синтезирующих клеток требовалось 2-3 года после прекращения химиотерапии (Хао-Li Z. et al, 2000). В других исследованиях обнаружено повышение уровня синтеза IFN-y в течение периода терапии и снижение после прекращения лечения (Duan Y. at al., 2001). Имеются данные о нормализации IL-2 и IFN-y синтезирующих клеточных популяций Т-хелперов и Т-супрессоров через 6 месяцев после прекращения химиотерапии (Zhang XL at al., 2000).
В связи со всем изложенным представляется актуальным проведенні исследований особенностей клеточного иммунитета у детей в разные периодь острого лимфобластного лейкоза с применением иммуноцитологических МЄТ0Д0І оценки фенотипа и функциональных свойств клеток, в частості цитокинсинтетической активности лимфоцитов крови.
Цель исследования.
Целью исследования являлось изучение цитокинсинтетической активності лимфоцитов крови у детей в дебюте острого лимфобластного лейкоза и і различные периоды ремиссии заболевания.
Задачи исследования.
Изучить внутриклеточный синтез цитокинов: интерферона-гамма, факторг некроза опухоли-альфа и интеряейкина-2 лимфоцитами крови j практически здоровых детей.
Определить основные субпопуляции лимфоцитов крови и внутриклеточный уровень интерферона-гамма, фактора некроза опухоли-альфа и интерлейкина-2 в лимфоцитах крови у детей в дебюте остроге лимфобластного лейкоза.
Изучить иммунофенотип лимфоцитов крови и их цитокинсинтетическук: активность у детей в разные периоды ремиссии острого лимфобластногс лейкоза на фоне химиотерапии.
Определить основные субпопуляции лимфоцитов крови и их цитокинсинтетическую активность в периоде ремиссии остроге лимфобластного лейкоза у детей после прекращения программной химиотерапии.
Научная новизна.
Впервые определен внутриклеточный синтез цитокинов TJFN-y, TNF-ct и IL-2 лимфоцитами крови у детей в различные периоды острого лимфобластногс лейкоза.
Впервые установлено, что уровень цитокинсинтезирующих лимфоцитоЕ тесно связан с количеством бластов в крови. Процент лимфоцитов, синтезирующих IFN-y, TNF-cx и IL-2, у больных с низким бластозом соответствовал показателям группы сравнения. При высоком бластозе в крови уровень цитокинсинтезирующих лимфоцитов был резко снижен.
Получены данные о чрезвычайно высокой интенсивности экспрессии изученных внутриклеточных цитокинов в остром периоде заболевания независимс от уровня бластоза в крови и процента цитокинсинтезирующих клеток, чтс отражает высокую функциональную активность лимфоцитов крови в дебюте острого лимфобластного лейкоза.
Показано, что процент цитокинсинтезирующих лимфоцитов крови охраняется на уровне показателей группы сравнения в различные периоды іемиссии заболевания на фоне химиотерапии, а также после окончания [рограммной химиотерапии.
Установлено, что у больных ОЛЛ с низким уровнем бластных клеток в рови в дебюте заболевания состав популяций лимфоцитов периферической крови оответствовал показателям нормы. Изменения в составе субпопуляций имфоцитов выявлялись лишь у детей при уровне бластных клеток более 49%. На )оне лейкоцитоза за счет леикемических клеток наблюдалось снижение как тносительных, так и абсолютных показателей содержания Т-лимфоцитов и их убпопуляций.
Установлено, что процентное содержание зрелых Т-лимфоцитов и их CD4+ CD8+ субпопуляций, а также NK-клеток нормализуется к окончанию нтенсивной химиотерапии.
Выявлено, что на фоне проведения программной химиотерапии отмечается езкое угнетение В-линейного звена иммунитета. Содержание В-лимфоцитов озвращается в пределы нормальных значений после окончания программной имиотерапии.
Ірактическая ценность.
Определена цитокинсинтетическая активность лимфоцитов периферической рови у практически здоровых детей, что может быть использовано в качестве ормативных показателей при оценке состояния иммунной системы.
Установлено, что в дебюте острого лимфобласгного лейкоза интенсивность люоресценции внутриклеточных цитокинов в лимфоцитах крови значительно ревышает показатели группы сравнения, что косвенно указывает на апряженность противоопухолевого иммунитета в остром периоде заболевания.
В различные периоды ремиссии В-линейного острого лимфобластного гйкоза процентный состав Т-лимфоцитов и их субпопуляций, а также нтенсивность экспрессии внутриклеточных цитокинов соответствует оказателям практически здоровых детей (группа сравнения). Полученные данные зидетельствуют о достаточной стабильности Т-клеточного иммунитета, что, зроятно, способствует поддержанию ремиссии В-ОЛЛ после окончания рограммной химиотерапии.
Выявлено значительное угнетение В-клеточного звена иммунитета, что гобходимо учитывать при выработке терапевтической тактики ведения данных зльных и при проведении вакцинации детей в период ремиссии ОЛЛ.
Полученные данные дают представление о функциональном состоянии ммунной системы при остром лимфобластном лейкозе.
Внедрение результатов работы в практику.
Результаты исследования, в частности определение функциональной активности лимфоцитов по юс способности к внутриклеточному синтезу цитокинов IFN-y, TNF-a и IL-2, внедрены в работу клинико-диагностической лаборатории ГУ НИИ педиатрии НЦЗД РАМН и могут быть использованы ъ работе иммунологических и гематологических лабораторий.
Материалы диссертации доложены на конференции молодых ученых НИИ педиатрии НЦЗД РАМН (Москва, 2002), на рабочем совещании по проточной цитометрии «BD FACS Users Meeting» (Санкт-Петербург, 2002), на VII Всероссийском научном Форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2003).
Структура и объем диссертации.
![Причины неудач терапии острого лимфобластного лейкоза у детей по данным мультицентрового проспективного рандомизированного исследования [Электронный ресурс]](/i/i/4240/188772.png "Причины неудач терапии острого лимфобластного лейкоза у детей по данным мультицентрового проспективного рандомизированного исследования [Электронный ресурс] Шамардина Анастасия Вячеславовна")
