Введение к работе
Актуальность темы диссертации
Широкая распространенность вируса краснухи, высокая восприимчивость человека, преимущественное поражение детей, подростков и молодых взрослых, в том числе женщин детородного возраста, риск возникновения врожденных патологий при инфицировании беременных, определяют значение своевременной диагностики краснухи как актуальную проблему для здравоохранения многих стран мира.
Согласно программе Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), краснуха отнесена к числу нозологий, ликвидация которых возможна в ближайшем будущем. Региональный комитет ВОЗ для Европы признал элиминацию краснухи и предотвращение случаев врожденной краснушной инфекции приоритетной задачей программы “Здоровье для всех в XXI веке”, а так же Стратегического плана Европейского региона ВОЗ 2005–2010 гг.
Известно, что симптомокомплекс, характерный для краснухи (полилимфаденопатия, синдром сыпи) может наблюдаться при заболеваниях, вызванных другими возбудителями, такими как вирус кори, парвовирус В19, аденовирусы, энтеровирусы. Инаппарантная форма краснухи среди взрослых составляет более чем 50% от всех случаев заболевания, при этом во время беременности доля этой формы достигает 75-80%. Учитывая разнообразие и неспецифичность клинических проявлений краснухи, наличие острых и стертых форм заболевания, повсеместную распространенность, риск возникновения врождённой патологии плода, своевременная, доступная лабораторная диагностика данного заболевания приобретает особое значение.
Традиционно первостепенную роль в лабораторной диагностике краснухи отводят серологическим методам, направленным на обнаружение специфических антител, в частности иммуноферментному анализу (ИФА). Но данные методы получили распространение преимущественно в акушерской практике. Причём, первичное инфицирование определяется путем выявления вирусоспецифических антител класса IgM, сероконверсии или 4–кратного и более увеличения титра антител класса IgG в парных сыворотках периферической крови. Для уточнения срока давности развития инфекционного процесса, дифференциации первичной инфекции от вторичной, проводится определение авидности антител класса IgG к антигенам вируса краснухи. Однако при анализе результатов тестирования часто возникают затруднения в расшифровке полученных данных. Это может быть обусловлено парадоксально ранним появлением краснушных антител класса IgG, возможностью длительного персистирования антител класса IgM в периферической крови в течение многих месяцев и даже лет (особенно после вакцинации), а также наличием перекрестных, неспецифических реакций. В этих ситуациях в различных диагностических и научно–исследовательских центрах развитых стран мира в качестве подтверждающего теста успешно применяются молекулярно–биологические методы (ПЦР), направленные на прямое обнаружение РНК вируса краснухи (Rubella virus) .
Необходимость улучшения клинической и лабораторной диагностики заболевания краснухой становится всё более значимой, учитывая изменяющиеся условия окружающей среды, полиморфизм клинических проявлений краснухи, трудности в дифференциально-диагностическом поиске. Наиболее перспективным является применение на практике молекулярно-генетических методов диагностики и, прежде всего полимеразной цепной реакции, которая позволяет выявлять наличие РНК вируса краснухи с первых дней острого периода заболевания. Количество исследований, посвященных изучению характера клинико-лабораторных проявлений краснухи в зависимости от стадии инфекционного процесса у взрослых пациентов в нашей стране очень ограничено. Нуждается также в уточнении диагностическая значимости при краснухе специфических методов ИФА и ПЦР диагностики на различных стадиях инфекционного процесса.
Всё это определяет актуальность изучения роли ПЦР-диагностики в верификации и ранней постановке диагноза краснухи, что позволит своевременно выявлять, изолировать больных и предпринимать необходимые меры профилактики.
Цель исследования: изучение у больных краснухой в разные сроки заболевания информационной значимости выявления РНК Rubella virus методом ПЦР в различных биологических средах (плазма, лейкоциты периферической крови, слюна, мазки из носоглотки и ротоглотки) в сопоставлении с рутинными серологическими методами исследования.
В соответствии с целью работы были сформулированы следующие задачи.
Задачи исследования:
-
Изучить у больных краснухой в динамике инфекционного процесса в различных биологических средах (плазма, лейкоциты периферической крови, слюна, мазки из носоглотки и ротоглотки) наличие РНК Rubella virus по данным молекулярно-генетического исследования (ПЦР).
-
Исследовать продолжительность персистенции вируса краснухи в различных биологических средах организма в динамике заболевания.
-
Изучить динамику серологических маркеров у больных краснухой (антитела класса IgM и IgG, авидности антител класса IgG ) на различных этапах заболевания.
-
Определить диагностическую значимость серологической и ПЦР диагностики (выявление РНК Rubella virus) у больных краснухой в различные периоды инфекционного процесса в биологических средах организма.
-
Проанализировать клинические и лабораторные данные у больных краснухой в сопоставлении с данными серологических и молекулярно-генетических (ПЦР) исследований на различных этапах заболевания.
Научная новизна.
Впервые методом ПЦР у больных краснухой определена длительность персистенции вируса краснухи в различных биологических средах организма (плазма, лейкоциты периферической крови, слюна, мазок из ротоглотки и носоглотки).
Доказана информативность выявления РНК Rubella virus в слюне больных методом ПЦР по сравнению с аналогичными исследованиями в плазме, лейкоцитах периферической крови, мазках из ротоглотки и носоглотки больных краснухой, что носит приоритетный характер.
Установлено, что диагностическая концентрация РНК вируса краснухи определяется в слюне уже с 1 дня появления сыпи и сохраняется до 10 дня, в то время как в плазме и лейкоцитах периферической крови данная концентрация сохраняется только до 6 дня после появления сыпи, что позволяет по новому взглянуть на эпидемиологические особенности распространения вируса краснухи.
Впервые, на основании комплексных исследований, установлено, что метод ПЦР может использоваться для верификации диагноза краснухи на ранних стадиях заболевания (1-2 сутки от появления сыпи) и при диагностически неясных случаях.
Практическая значимость.
На основании полученных результатов можно рекомендовать для своевременной диагностики в раннем периоде заболевания краснухой использовать информативный и неинвазивный метод лабораторной диагностики - исследование слюны на выявление РНК Rubella virus молекулярно-генетическим методом (ПЦР).
Для дифференциального диагноза первичного инфицирования вирусом краснухи от перенесенного ранее заболевания, учитывая вероятность парадоксально раннего появления антител к вирусу краснухи класса IgG и возможной длительной персистенции антител класса IgM можно рекомендовать определение авидности антител класса IgG для уточнения давности заболевания, что позволяет дифференцировать первичную инфекцию от перенесенной.
Проведенное исследование позволило установить сроки оптимального применения серологических и ПЦР методов для верификации диагноза краснухи.
Полученные результаты исследования позволяют рекомендовать использование ПЦР диагностики для верификации диагноза краснухи в практике врачей инфекционистов, врачей детских учреждений, а также акушеров – гинекологов.
Основные положения, выносимые на защиту диссертации.
-
Результаты молекулярно-генетического исследования у больных краснухой позволили выявить наличие РНК вируса краснухи в различных биологических материалах (плазме, клетках крови (лейкоциты периферической крови), слюне и мазках из ротоглотки и носоглотки) но наиболее продолжительно и с большей достоверностью в слюне.
-
Установлено, что выявление РНК Rubella virus в слюне возможно с 1по 10 день от появления сыпи, тогда как в плазме и лейкоцитах до 6 дня.
-
Выявлено, что диагностика краснухи методом ПЦР наиболее значима в первые 2 суток после появления сыпи, а значение серодиагностики растет после 2 дня от появления сыпи.
-
Результаты комплексного исследования больных краснухой позволили подтвердить значимость определение авидности антител класса IgG для установления давности инфекционного процесса.
Результаты внедрения в практику.
Результаты проведенного исследования и практические рекомендации используются на кафедре инфекционных болезней ПМГМУ им. И.М.Сеченова и ЦНИИЭ Роспотребнадзора города Москвы. Результаты исследования внедрены в лечебную деятельность инфекционных отделений инфекционной клинической больницы №2 г. Москвы
Апробация диссертации.
Апробация работы состоялась 3 июня 2010 г. на заседании кафедры инфекционных болезней медико-профилактического факультета ПМГМУ имени И.М. Сеченова.
Материалы диссертационной работы были доложены на заседании московского общества врачей-инфекционистов (11 мая 2010 года, ИКБ №1, г. Москва).
Публикации.
По теме диссертации опубликовано 3 научных работы.
Объём и структура диссертации.
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 3 глав по материалам исследования, заключение, выводы и практические рекомендации. Диссертация изложена на 135 листах машинописного текста. Библиографический указатель содержит 122 источника литературы (47 отечественных и 75 зарубежных авторов). Диссертация иллюстрирована 14 таблицами, 27 рисунками, 3 фотографиями.
