Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Литературный обзор по вопросам гормональной регуляции созревания ШБ 9.
1. Состояние метода гормональной стимуляции созревания половых клеток и его значение для промышленного рыбоводства 9.
2. Реакция половых желез и гипофиза рыб на введение препаратов гипофиза и резервирование при нерестовой температуре 36.
ГЛАВА II. Материал и метоли . 51.
ГЛАВА III. Морфологические изменения в полошх железах и гипофизе самок плотш и воблы при резервировании и различных вариантах гормонального воздействия 58.
1. Функциональное состояние яичников плотвы в зимний период, при резервировании рыб и гормональных воздействиях 59.
2. Функциональное состояние яичников и гипофиза воблы при резервировании в преднерестовый период и после гипофизарных инъекций 74.
ГЛАВА ІV. Совершенствование методики гормональной стимуляции созревания осетрошх при их разевдении 94
1. Тестирование гипофизарных препаратов для промышленного рыбоводства 96.
2. Эффективность разных доз гипофизарного препарата при стимуляции созревания производителей русского осетра 101
3. Эффективность разных доз и схем введения гипофизарного препарата при стимуляции созревания севрюги 126.
ГЛАВА V. Совершенствование метода гормональшх воздействий при разведении полупроходных карповых рыб 151.
1. Стимуляция созревания производителей сазана и леща разными дозами тестированного гипофизарного препарата карповых рыб 151.
2. Применение тестированного гипофизарного препарата кеты для стимуляции созревания самок леща и воблы 158.
ГЛАВА VI. Перспективы использования и пути эффективности метода гормональной стимуляции созревания производителей в промышленном рыбоводстве 169.
Практические рекомендаций 181.
Приложения 182.
Список литературы 183.
- Реакция половых желез и гипофиза рыб на введение препаратов гипофиза и резервирование при нерестовой температуре
- Функциональное состояние яичников плотвы в зимний период, при резервировании рыб и гормональных воздействиях
- Эффективность разных доз гипофизарного препарата при стимуляции созревания производителей русского осетра
- Стимуляция созревания производителей сазана и леща разными дозами тестированного гипофизарного препарата карповых рыб
Введение к работе
Решениями ХХУІ съезда КПСС, Продовольственной программой СССР и Основными направлениями экономического и социального развития СССР на I98I-I985 годы и на период до 1990 года предусмотрено интенсифицировать рыбоводство и значительно увеличить вылов рыбы во внутренних водоемах СССР и прилегающих морях. В связи с этим перед ихтиологами, рыбоводами, научными и инженерно-техническими работниками, занятыми в области рыбного хозяйства, встает сложная и многогранная задача разработать комплекс мер по повышению эффективности рыбоводства и существенному увеличению рыбопродуктивности внутренних водоемов СССР и прилегающих морей.
В условиях быстрого увеличения масштабов водопотребления различными отраслями народного хозяйства происходит нарушение гидрологического режима многих важных в рыбхозяйственном отношении водоемов. Это нарушение в ряде случаев привело к невозможности или снижению эффективности размножения ценных видов рыб. Одним из важных и действенных мероприятий, обеспечивающих сохранение численности ценнейших видов рыб на необходимом промысловом уровне и способствующих дальнейшему увеличению рыбных запасов, является промышленное (заводское) рыбоводство. В настоящее время популяции некоторых рыб, в частности осетровые, в значительной степени пополняются молодью, полученной и выращенной в условиях рыбоводных заводов. В связи с этим возникает необходимость изучения репродуктивной системы рыб с различной экологией размножения в изменяющихся условиях и закономерностей развития рыб в раннем онтогенезе (Баранникова, 19756, 19786, 19796, 1981; Баранникова и др., 1979; Вяасенко, 1980).
До настоящего времени в основе наиболее прогрессивного, заводского способа воспроизводства большинства видов промысловых рыб лежит метод гипофизарных инъекций (ЩИ) (Гербильский, 1941). Однако эффективность гормонального воздействия при стимуляции созревания производителей не одинакова и определяется их физиологическим состоянием. Повышение эффективности промышленного рыбоводства является одной из важнейших народнохозяйственных задач, которую можно решить лишь на основе широкого, комплексного использования современных отечественных и зарубежных достижений в области биохимии, физиологии, ихтиологии и рыбоводства (Баранникова, 19786).
Одним из путей интенсификации промышленного рыбоводства является совершенствование метода гормональных воздействий при стимуляции созревания производителей. Накопленные к настоящему времени экспериментальные данные показывают, что в ряде случаев можно существенно повысить эффективность использования производителей и качество получаемой икры путем инъецирования рыбам оптимальных доз гипофизарного препарата или подбора наиболее благоприятного режима гормонального воздействия (Гербильский, 1966; Баранникова, Буренин, 1971; Баранникова и др., 1975а; Боев, Артюхин, 1978; Боев, 1979; Дуварова, 1980 и др.). При этом, как правило, существенно снижается и расход дефицитного и дорогостоящего гипофизарного препарата.
Работы по совершенствованию методики гормональных воздействий в рыбоводстве получили возможность успешно развиваться благодаря организации в Астрахани в 1970 году централизованного производства препарата ацетонированных гипофизов осетровых и карповых рыб и разработке методики тестирования препарата по го-надотропной активности.
- б -
Цель настоящей работы заключается в изучении состояния воспроизводительной системы рыб различных таксономических групп при выдерживании в преднерестовый и нерестовый периоды и при гормональных воздействиях и на этой основе разработка путей повышения эффективности МГЙ в рыбоводстве.
Для выполнения поставленной цели решались следующие задачи:
разработка методики тестирования гипофизарного препарата для промышленного рыбоводства и способа повышения точности дозирования препарата при разных схемах его введения;
изучение состояния репродуктивной системы самок воблы и плотвы при разных сроках выдерживания в условиях нерестовой температуры и после гипофизарных инъекций;
исследование созревания и качества зрелых половых клеток осетровых и карповых с различным физиологическим состоянием в результате введения разных доз гипофизарного препарата;
определение оптимальных доз и схем введения тестированных гипофизарных препаратов для стимуляции созревания производителей осетровых и карповых .
В работе впервые проанализированы и обобщены материалы по изучению состояния репродуктивной системы некоторых видов осетровых и карповых рыб в результате выдерживания их при нерестовой температуре и после введения различных по гонадотропной активности доз тестированного гипофизарного препарата. На основании проведенных исследований разработаны биологически обоснованные оптимальные по величине гонадотропной активности дозы препаратов гипофиза для стимуляции созревания производителей некоторых видов осетровых и карповых при заводском методе их воспроизводства. Получены дополнительные сведения об особенностях гонадотропного эффекта препарата
кеты при использовании его для стимуляции созревания самок воблы и леща.
Впервые с момента введения в практику осетроводства МГИ (Гербильский, 1941) пересмотрены и с 1980 года на осетровых рыбоводных заводах дельты Волги применяются новые биологически обоснованные оптимальные дозы тестированного гипофизарного препарата при стимуляции созревания осетра и севрюги. Использование этих доз при инъекциях позволило почти в 2 раза сократить расход дорогостоящего гипофизарного препарата осетровых рыб, это способствует также повышению результатов созревания производителей и улучшению качества зрелых половых клеток осетра и севрюги в дельте Волги - наиболее важном районе промышленного осетроводства. Показана перспективность применения глицеринового гипофизарного препарата при решении вопроса о повышении эффективности использования производителей севрюги на рыбоводных заводах дельты Волги, когда необходима повышенная точность дозирования препарата при инъекциях и при применении различных схем введения.
При воспроизводстве леща заводским методом и дефиците гипо-физарных препаратов карповых рыб рекомендована замена этих препаратов препаратом ацетонированных гипофизов кеты.
Большую помощь в проведении экспериментов, сборе и обработке материала оказали сотрудники Центральной лаборатории по воспроизводству рыбных запасов Главрыбвода: Р.Н.Степанова, Б.Г.Травкин, В.И.Голубчикова, Е.Н.Артюхин, А.Е.Андронов, Н.А.Ефимова, Д.И.Преснов, А.Г.Романов. Этим товарищам я выражаю искреннюю благодарность. Содействие и помощь в проведении опытов в условиях производства оказали также начальники инкубационных цехов Ки-занского, Александровского, Бертюльского и Сергиевского осетровых рыбоводных заводов Севкаспрыбвода товарищи Г.И.Витенко,
Л.Ф.Рудометкин, А.П.Гречневиков, Г.И.Безруков, за что я выражаю им сердечную благодарность.
Глубокую и искреннюю благодарность за большую помощь и цен-ные советы при выполнении настоящей работы я приношу научному руководителю, доктору биологических наук, профессору, директору Центральной лаборатории по воспроизводству рыбных запасов Глав-рыбвода Ирине Алексеевне Баранниковой.
Реакция половых желез и гипофиза рыб на введение препаратов гипофиза и резервирование при нерестовой температуре
Изучение функционального состояния гонадотропних клеток гипофиза и половых желез рыб на завершающих этапах оогенеза представляет интерес в плане изучения сравнительной физиологии размножения и при разработке и совершенствовании метода гормональной регуляции репродуктивной функции рыб в связи с задачами рыбного хозяйства.
При изучении гипофиза рыб некоторую сложность представляет дифференцировка тиреотропных и гонадотропних клеток. Оба типа клеток дают ШИК положительную реакцию, секрет их окрашивается паральдегид-фуксином и алциановым синим. При окраске азан по Гейденгайну цитоплазма тиреотропных и гонадотропних клеток окрашивается в синий цвет. Основным критерием при идентификации гонадотропних клеток гипофиза различных видов рыб являются ярко выраженные различия в их функциональной активности, связанные с сезонными изменениями репродуктивной функции (Гербильский, 1941, 1947; Баранникова, 1949а, 1956, 1969, 1975в; Казанский, 1949; Pickford, Atz, 1957; van Oordt, 1968 , Моисеева, 1969, 1970, 1975 и др.).
Большое значение имеет изучение функций гипофиза и половых желез у осетровых в связи с воспроизводством значительной части популяции этих ценнейших рыб с применением МГИ в условиях рыбоводных заводов. Нейроэндокринная и эндокринная системы осетровых рыб отличаются значительным своеобразием по сравнению с аналогичными системами костистых рыб и изучены менее полно (Баранникова, 1975а,д). Все типы клеток гипофиза осетровых рыб изучены гистологически и на основании сопоставления этих данных с результатами экологогистофизиологического и экспериментального методов исследований рассмотрена локализация различных типов клеток в гипофизе осетровых. Показана также возможность гомологизации долей гипофиза осетровых и костистых рыб (Баранникова, 1969, 1975а,г).
Гонадотропний гормон в гипофизе осетровых вырабатывается базофильными клетками дистальной (главной) доли. Эти клетки расположены главным образом в вентральной и отчасти в дорзальной зонах дистальной доли гипофиза. У рыб с половыми железами Ш и IV стадий зрелости цитоплазма гонадотропних клеток заполнена секреторными гранулами, дающими ШИК положительную реакцию. Мак симальных размеров гонадотропные клетки и их ядра достигают в преднерестовый период, когда половые железы рыб находятся в ІУ завершенной стадии зрелости. В этот период некоторая часть го надотропних элементов у осетровых проявляет высокую функциональ ную активность, выражающуюся в секреции по голокриновому типу. V рыб непосредственно перед нерестом (на нерестилищах) голокри новой секрецией охватывается большинство гонадотропоцитов, в ре зультате образуются потоки базофильного коллоида, выводящегося из гипофиза (Гербильский, 1941, 1947; Баранникова, 1949а,б, 1950, 1954, 1955, 1957, 1975а, 19786; Зайцев, 1959; Молодцов, 1973; Артюхин, 1975). Показано, что уже в ранний посленерестовый период в дистальной доле гипофиза у осетровых почти не остается базофильных клеточных элементов и ШИК положительных скоплений секрета. Вентральная зона дистальной доли гипофиза в этот период состоит в основном из мелких, слабо ацидофильных и хромофобных клеток с часто наблюдающимися митотическими делениями ядер (Гербильский, 1941; Баранникова, 1949а,б, 1975в). Тестирование гипофизов, донорами которых были отнерестившиеся рыбы также показало чрезвычайно низкий уровень их гонадотропной активности по сравнению с гипофизами рыб, имевшими половые железы в ІУ стадии зрелости (Баранникова, 1955, 1969). Эти данные хорошо согласуются с результатами радиоиммунологического определения содержания гонадотропного гормона (ГТГ) в крови осетра и севрюги на разных этапах полового цикла. Показано, что у самок осетра и севрюги с половыми железами в ІУ стадии зрелости уровень ГТГ в крови составляет 11-13 нг/мл. В период нереста содержание ГТГ в крови рыб резко повышается и составляет 25,5-107 нг/мл. После нереста содержание ГТГ в крови самок снижается до 0-0,7 нг/мл (Баранникова и др., 1981; Буковская, 1981а,б).
У костистых рыб ГТГ продуцируется базофильными клетками проксимальной зоны дистальной доли или мезоаденогипофиза (по терминологии (Pickford, Atz, 1957), расположенными обычно группами. Цитоплазма этих клеток у рыб с половыми железами в Ш и ІУ стадиях зрелости в разной степени заполнена ШИК положительными гранулами секрета. По мере созревания половых желез усиливается грануляция цитоплазмы гонадотропних клеток и возрастает их базо-филия. Значительно расширяется область мезоаденогипофиза, занимаемая гонадотропними элементами в связи с увеличением размеров клеток (Гербильский, 1947; Казанский, 1949; Статова, 1974; Моисеева, 1975; Фалеева, 1975; Моисеева, Золотницкий, 1978 и др.).
У самок костистых рыб с единовременным типом нереста в большинстве гонадотропных клеток гипофиза в нерестовый период секреторный процесс проходит по голокриновому типу (Гербильский, 1941, 1947; Казанский, 1949). У костистых рыб с порционным типом нереста секреция гонадотропних клеток в нерестовый период осуществляется асинхронно. Процесс голокриновой секреции распространяется постепенно по всей зоне гонадотропных клеток по мере выметывания отдельных порций икры и спермы. В результате вывода секрета из железы уменьшается объем мезоаденогипофиза (Кузнецова, 1947; Казанский, 1949; Моисеева, 1969, 1970, 1975; Hoar, 1969; Breton е. а., 1972; Crim е. а., 1973; Фалеева, 1975; Моисеева, Золотницкий, 1978; Христофоров, 1978).
В исследованиях, выполненных с помощью радиоиммунологического метода установлено, что у исследованных рыб в период, предшествующий овуляции и нересту, резко возрастает уровень ГТГ в плазме крови (Breton е. а., 1972, 1975; Crim е. а., 1973,1975; Singh, Singh, 1980). Эти данные хорошо согласуются с результатами гистологических исследований секреции гонадотропных клеток гипофиза в преднерестовый и нерестовый периоды.
Путем применения иммунологического анализа для определения гонадотропной активности гипофиза порционно нерестящегося бычка-кругляка показано, что максимум гонадотропной активности гипофиза приходится на ІУ и ІУ-У стадии зрелости половых желез, У отнерестившихся рыб, после вымета последней порции икры, гонадотропная активность гипофиза отсутствовала (Апекин, Моисеева, 1973; Моисеева, 1975).
Функциональное состояние яичников плотвы в зимний период, при резервировании рыб и гормональных воздействиях
Материалом для настоящих экспериментов служили половозрелые самки плотвы, отловленные в середине февраля на удочку в озере Лемболовское (Ленинградская область). Масса рыб составляла 20-25 грамм. Рыфранспортировали в пластмассовой канне с водой в течение 3-4 часов при температуре 1-3С, после чего помещали в аквариумы с постоянной аэрацией воды, где температура составляла 3-4С. После 24 часовой адаптации к аквариальным условиям температуру воды стали плавно повышать на 3-4С в сутки. В течение 3 суток показатель температуры достиг 15С. При проведении всех дальнейших экспериментов температура колебалась в пределах І5-І6С. В аквариумах емкостью 150 литров находилось по 10 рыб. Всем рыбам раз в сутки давали живой корм (мотыль, трубочник) с некоторым избытком. Продолжительность светового периода соответствовала естественной и составляла 11-12 часов в сутки. Для стимуляции созревания плотвы использовали препарат ацетонированных гипофизов сазана с гонадотропной активностью 4 BE в I мг. Такие же самки плотвы, заготовленные в марте-апреле созревают от однократной инъекции гипофизарного препарата в дозе 0,2 мг (0,8 BE). Эту дозу приняли за основу при проведении экспериментов с плотвой, заготовленной в середине февраля. Для оценки состояния половых желез самок плотвы применяли гистологический метод. Методика фиксации яичников, приготовления препаратов и их фотографирования изложена в главе П.
Гистологическое исследование ооцитов половозрелой плотвы, полученной из естественного водоема в середине февраля показало, что гонады рыб находятся в этот период в ІУ стадии зрелости, Трофоплазматический рост ооцитов завершен, желточные гранулы разнообразные по величине и форме с округлыми краями заполняют почти всю цитоплазму ооцита за исключением неширокой зоны по периферии, в которой 3-4 слоями расположены кортикальные альвеолы. Ядро в обцитах занимает центральное или чуть эксцентричное положение, микропилярная воронка в этот период не сформирована. Ядрышки мелкие, многочисленные контактируют с ядерной мембраной. Оболочка ооцита ( zona radiata) при оветооптическом исследовании-однослойна, имеет четкую радиальную исчерченность. На внешней поверхности оболочки расположены ворсинки. Поверхности zona radiata, прилегающие к основанию ворсинок и цитоплазме ооцита имеют вид тонких, четких линий. Снаружи к ворсинчатой поверхности желточной оболочки плотно прилегает фолликулярная оболочка, состоящая из плоских клеток с вытянутыми в тангентальном направлении мелкими ядрами (рис.1).
На 4 сутки пребывания самок плотвы в аквариальных условиях состояние их ооцитов отличалось от исходного лишь тем, что часть ядрышек отошли от ядерной мембраны вглубь ядра. Самки плотвы с таким состоянием ооцитов явились исходным материалом для опытов и контроля. Все опыты с плотвой проводили параллельно в одни сроки.
При первой предварительной инъекции (на 4 сутки пребывания самок плотвы в аквариальных условиях) доза гипофизарного препарата составила 0,02 мг (0,08 BE), что соответствует 0,1 части оптимальной дозы при однократной инъекции для таких же рыб, полученных из водоема в марте-апреле. Через сутки после инъекции состояние ооцитов исследованных рыб , по сравнению с исходным, изменилось. Ядро заметно переместилось к периферии ооцита, большинство ядрышек от ядерной мембраны сдвинулись к центру ядра. Желточная оболочка ооцитов, кортикальные альвеолы и желточные гранулы не претерпели заметных изменений.
Через 24 часа после первой предварительной инъекции рыб проинъецировали вторично, при этом величина дозы введенного препарата составила 0,03 мг (0,12 BE). Через сутки после второй предварительной инъекции состояние ооцитов четырех рыб из пяти характеризовалось резко эксцентричным положением ядра, находящимся в непосрэдственной близости от сформированной микропиляр-ной воронки (рис.2), многие ядрышки сдвинуты к центру ядра (рис.3). Оболочка ооцитов, кортикальные альвеолы и глыбки желтка существенных изменений не претерпели. У пятой самки все описанные выше изменения в ооцитах были выражены в меньшей степени.
Через сутки после второй предварительной инъекции рыб проинъецировали в третий раз, величина дозы препарата гипофиза составила 0,15 мг (0,6 BE). Гистологический анализ половых желез пяти рыб показал, что через 24 часа после третьей - разрешающей инъекции - у трех самок плотвы ооциты имели сформированную мик-ропилярную воронку, в непосредственной близости от которой лежал зародышевый пузырек. В некоторых ооцитах ядро имело признаки "растворения" в цитоплазме. Яичники двух других самок содержали зрелые, но не овулировавшие яйцеклетки, в которых отсутствовало ядро в виде зародышевого пузырька и ядрышки, цитоплазма в области микропилярной воронки окрашивалась более интенсивно в результате присутствия в этой области кариоплазмы.
Эффективность разных доз гипофизарного препарата при стимуляции созревания производителей русского осетра
На основании литературных данных, экспериментальных работ по тестированию гипофизарных препаратов различных видов рыб и анализа недостатков и преимуществ различных тест-объектов мы пришли к выводу, что наиболее приемлемым тест-объектом для промышленного тестирования многих партий препарата ацетонированных гипофизов осетровых и карповых рыб являются самцы бесхвостых амфибий и, в частности, для условий Астраханской области - одного из важнейших районов рыбоводства, озерная лягушка Rana ridibun-da . Этот вид амфибий широко распространен в низовьях Волги, часто образует большие скопления на территории нерестово-выростных хозяйств и рыбоводных заводов, поэтому легко доступен для массовой заготовки. Наиболее благоприятным временем заготовки лягушек является поздняя осень (ноябрь). В этот период животные образуют значительные скопления в местах зимовки: сбросных каналах, канавах, ямах на территории рыбоводных хозяйств. Четкий половой диморфизм амфибий способствует безошибочному отбору половозрелых самцов, а наличие большого количества животных облегчает заготовку одноразмерных, средних по величине самцов. Выполнение тестирования на одноразмерных тест-объектах имеет большое значение для повышения точности результатов тестирования.
Резервирование большого количества заготовленных лягушек в зимний период в течение 3-3,5 месяцев не представляет существенных трудностей. Животные хорошо переносят зимовку в бетонных бассейнах на рыбоводных заводах при условии слабой проточности и температуре воды 1-3С. Отход лягушек при таких условиях резервирования бывает, как правило, незначительным.
В период выполнения работы по тестированию гонадотропных препаратов амфибии хорошо переносят лабораторные условия, выдерживают высокие плотности посадки при весьма малом, по сравнению с многими рыбами, расходе воды. Перечисленные преимущества амфибий, а также четкость и быстрота реакции на введенный гонадотропний препарат, при условии соблюдения некоторых моментов тестирования, позволили нам рекомендовать лаборатории АПАС Севкасп-рыбвода самцов озерной лягушки в качестве тест-объекта (Боев, 1978). Для получения четких и сравнимых результатов тестирования необходимо строго соблюдать следующие условия. 1. В периоды зимнего резервирования тест-объектов, выведения их из зимнего состояния и выполнения работ по тестированию условия должны быть стабильными и оптимальными. Наиболее важное значение при этом имеют показатели кислородного режима, температуры и освещенности. 2. Работу по тестированию необходимо проводить строго в одни и те же календарные сроки, в течение 8-10 дней. 3. Тестирование каждой партии гипофизарного препарата необходимо проводить с 2-3 кратной повторностью, при использовании в каждом варианте тестирования не менее пяти тест-объектов. 4. единицей гонадотропной активности гипофизарного препара та, в частности, лягушачьей единицей (ЛЕ) следует считать такую минимальную весовую или объемную его дозу, которая устойчиво вы зывает реакцию спермиации у 80-100$ проинъецированных тест-объ ектов. Соблюдение рекомендуемых приемов работы с тест-объектами позволяет получать в разные годы достаточно точные и сравнимые показатели гонадотропной активности гипофизарных препаратов многих партий. Кроме рекомендованных основных условий тестирования препаратов гипофиза рыб имеет место еще ряд мелких, на первый взгляд несущественных моментов, недоучет которых может привести к нечетким или абсурдным результатам. Многие исследователи, применяющие самцов бесхвостых амфибий в качестве тест-объектов отмечают, что интенсивность реакции спермиации находится в прямой зависимости от величины вводимой животным дозе препарата гипофиза, а выброс спермы в клоаку происходит через 60-180 минут от момента инъецирования (Алпатов, 1950; Алпатов, Строганов, 1950; Попова, 1951; Mester, Christian, 1965; Попова, 1971). Действительно, при тестировании свежеприготовленной суспензии ацето-нированных гипофизов рыб, время ответа на инъекцию у самцов озерной и травяной лягушек лежит именно в этих пределах, однако, как правило, отсутствует четкость реакции животных на минимальные (близкие к пороговым) дозы препарата. При тестировании водных экстрактов ацетонированных гипофизов, глицеринового гипофи-зарного препарата и очищенных гонадотропинов рыб учет реакции спермиации через 60 и более минут приводит к парадоксальным результатам. Наиболее четкая реакция в этом случае часто наблюдается у амфибий, получивших дозу гипофизарного препарата близкую к нижней пороговой, тогда как более высокие дозы этого же препарата не вызывают реакции спермиации или, если таковая и наблюдается, то выражена весьма слабо. Такие результаты вызваны тем, что при инъецировании самцов лягушек водными экстрактами гормональных препаратов, гонадотропины находятся в экстрагированном состоянии, легче и быстрее всасываются в кровь животного, в результате чего время, необходимое для осуществления реакции спермиации сокращается до 30-40 минут. При проверке тест-объектов через 1-3 часа от момента введения таких препаратов, отсутствие спермиев в пробе обусловлено залповым выбросом их в клоаку и выведением из организма с мочой до момента проверки тест-объекта на характерную реакцию. В случаях, когда самцам амфибий вводят не экстрагированный гонадотропин, а свежеприготовленную грубую суспензию ацетонированных гипофизов, в которой большая часть го-надотропина сконцентрирована в твердой фракции ацетонированного вещества, существенно увеличивается время, необходимое для наступления реакции спермиации. В этом случае бывает трудно уловить момент спермиации. От минимальных эффективных доз реакция спермиации происходит через 1,5-3 часа и выражена обычно весьма слабо. Большие дозы свежеприготовленной суспензии ацетонированных гипофизов способствуют сравнительно быстрому наступлению реакции спермиации (через 1-1,5 часа после инъекции) и выводу спермиев из организма.
Стимуляция созревания производителей сазана и леща разными дозами тестированного гипофизарного препарата карповых рыб
В связи с этим можно полагать, что относительно высокие дозы препарата алетонированных гипофизов, применяющиеся в осетроводстве, содержат и повышенные дозы нейрогормонов, по сравнению с гораздо более низкими испытанными нами эффективными дозами, что при определенном физиологическом состоянии рыб может тормозить процессы созревания и овуляции половых клеток. Изложенные данные работ, выполненных в 1974-1976 годах позволяют придти к заключению, что для стимуляции созревания производителей русского осетра после различных сроков резервирования в условиях неуправляемого температурного режима наиболее эффективными для самок являются дозы гипофизар-ного препарата, лежащие в пределах 70-80 ЛЕ, для самцов - 60-70 ЛЕ.
Необходимо остановиться на неточном толковании наших (Боев, Артюхин, 1978) данных Т.А.Детлаф с соавторами (1981, стр.25). Эти исследователи пишут: "В другом опыте тех же авторов все самки осетра созрели при введении им от 18 до 36 мг гипофиза (или от 60 до 120 ЛЕ). Однако при дозе 60 ЛЕ самки созревали медленнее, чем те, которые получили большие дозы. На основании этих данных авторы считают, что доза 60 ЛЕ является пороговой и что в настоящее время рыбоводные заводы применяют дозы примерно в 2 раза большие, чем минимальные эффективные (авторы называют их оптимальными)". В этой цитате прежде всего обращает на себя внимание несоответствие приведенных цифровых данных,нашим. Авторы приводят цифры 18-36 мг гипофиза, у нас (Боев, Артюхин, 1978) фигурируют данные 15-30 мг при удельной гонадотропной активности препарата 4 ЛЕ в I мг. Кроме того формулировка приведенной цитаты может натолкнуть читателя на мысль, что пороговые и оптимальные дозы гипофизарного препарата в нашем понимании одно и то же.
Подобная интерпритация наших данных неправильно отражает суть весьма сложного вопроса об оптимальных дозах при стимуляции созревания рыб. В публикации 1978 г.мы не сделали окончательного вывода о величине оптимальной дозы при стимуляции созревания самок осетра в низовьях Волги.
Специального обсуждения заслуживают данные некоторых исследователей о том, что повышенные дозы препарата ацетонированных гипофизов не оказывают отрицательного влияния на созревание самок рыб и качество получаемой икры. Согласно экспериментальным данным, полученным на вьюне (Веригин, ГЛакеева, 1971), повышенные дозы гипофизарного препарата ускоряют созревание самок, а снижение качества икры обусловлено ее перезреванием в результате несвоевременного (слишком позднего) получения. Действительно и раньше было показано (Нусенбаум, 1949), что задержка икры в полости тела самок вьюна приводит к снижению ее качества. Однако, нельзя объяснить причин снижения качества икры в результате применения повышенных доз гонадотропних препаратов лишь явлением ее перезревания. Необходимо отметить, что при стимуляции созревания самок различных видов рыб неодинаковыми по величине дозами гона-дотропных препаратов, существенные различия в продолжительности созревания самок при одних и тех же показателях температуры имеют место лишь в том случае, когда созревание рыб происходит от доз близких к нижним пороговым. В случаях, когда рыбам вводят дозы гонадотропного препарата превышающие нижние пороговые, продолжительность созревания самок обычно не зависит от величины вводимой дозы (Казанский, Нусенбаум, 1947; Казанский, 1949а; Баранникова и др., 19756; Боев, Артюхин, 1978; Детлаф и др., 1981). В условиях современного промышленного рыбоводства для стимуляции созревания производителей гонадотропные препараты применяют вдозах, которые по величине значительно превышают нижний пороговый предел. Следовательно, сроки созревания производителей не зависят от величины вводимой дозы, а определяются в основном температурой в период созревания. При определении продолжительности созревания рыб специалисты используют соответствующие графики или таблицы, что позволяет почти полностью исключить возможность "перезревания" половых клеток. Поэтому нередко имеющие в рыбоводстве место случаи отрицательного влияния повышенных доз гипофизарных препаратов на созревание рыб и качество зрелых половых клеток нельзя объяснить лишь явлением "перезревания" яиц.
Обращают на себя внимание также данные Т.А.Детлаф с соавторами, где исследователи придерживаются мнения, что повышенные дозы гипофизарного препарата не оказывают отрицательного воздействия ни на процесс созревания половых клеток у рыб, ни на качество икры (Детлаф и др., 1981). При обсуждении этого вопроса исследователи ссылаются на данные экспериментальных работ, выполненных ими в 1962-1964 годах на самках осетра и севрюги (Гинзбург, Детлаф, 1969). Рассматривая вопрос о влиянии повышенных доз гипофизарных препаратов на созревание производителей и качество икры рыб мы согласны с высказыванием Б.Ф.Гончарова: "Вероятнее всего, что вред передозировки зависит в первую очередь от состояния гонад производителей" (Гончаров, 1981). Действительно, заметно ухудшившиеся результаты промышленного осетроводства в последние годы обусловлены изменением физиологического состояния рыб, используемых в качестве производителей. И.А.Баранникова (1979) отмечает, что в последние годы возникли значительные трудности в получении пригодных для рыбоводства производителей. Резко увеличилось число самок, не отвечающих созреванием на гипофизарные инъекции. Вследствие зарегулирования стока рек и изменения их гидрологического режима, изменилось миграционное поведение осетровых рыб и их физиологическое состояние. Возросли также потери икры и личинок осетровых рыб. Такую же ситуацию, сложившуюся в настоящее время в осетроводстве подтверждает Т.А.Детлаф (Детлаф и др., 1981).
