Введение к работе
Актуальность темы
Диагноз рак шейки матки занимает второе место в мире как причина смерти от онкологических заболеваний среди женщин. Для создания устойчивого иммунного ответа предлагается использовать ранние белки вируса папилломы человека Е7, так как они играют решающую роль в репликации вируса, малигнизации клеток и присутствуют на всех стадиях жизненного цикла вируса папилломы человека (ВПЧ). По данным эпидемиологических исследований самыми распространенными типами ВПЧ в Европе и России являются 16 и 18. Для усиления иммунного ответа целесообразно использование совместно с белком Е7 ВПЧ белка теплового шока 70 из М.tuberculosis, которые являются прекрасными адъювантами и способны повышать титры антител.
В качестве лекарственной формы было решено выбрать вагинальные лекарственные формы - суппозитории и мягкие желатиновые капсулы, обеспечивающие непосредственный контакт со слизистой оболочкой в месте введения, прямое воздействие композиции рекомбинантных белков, высокую биологическую доступность, что обеспечит терапевтической эффективности.
Всё вышеизложенное определило цели и задачи исследования.
Цель исследования
Разработать и исследовать вагинальные лекарственные формы с рекомбинантными белками, состоящих из аминокислотных последовательностей белка Е7 вируса папилломы человека 16 и 18 типов c Hsp 70 из М.tuberculosis, для стимуляции гуморальных реакций иммунитета, применяемых для лечения рака шейки матки.
Задачи исследования
-
Изучить способность рекомбинантных белков, состоящих из аминокислотных последовательностей белка Е7 вируса папилломы человека 16 и 18 типов с Hsp 70 из М.tuberculosis стимулировать гуморальные реакции иммунитета на экспериментальных животных;
-
Разработать состав и технологию вагинальных лекарственных форм (суппозитории, мягкие желатиновые капсулы) с композицией рекомбинантных белков, состоящих из аминокислотных последовательностей белка Е7 вируса папилломы человека 16 и 18 типов c Hsp 70 из М.tuberculosis, обеспечивающих терапевтическую эффективность в месте введения;
-
Разработать методы идентификации и количественного определения композиции рекомбинантных белков, состоящих из аминокислотных последовательностей белка Е7 вируса папилломы человека 16 и 18 типов c Hsp 70 из М.tuberculosis, в субстанции и готовых лекарственных формах;
-
Изучить фармакокинетические характеристики разработанных лекарственных препаратов, содержащих композицию рекомбинантных белков, состоящих из аминокислотных последовательностей белка Е7 вируса папилломы человека 16 и 18 типов c Hsp 70 из М.tuberculosis, на экспериментальных животных.
Научная новизна результатов исследования
В результате проведенных исследований выявлено, что введение рекомбинатных белков, состоящих из аминокислотных последовательностей белка Е7 вируса папилломы человека 16 и 18 типов с Hsp 70 из M.tuberculosis (pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub.) вызывает увеличение титра антител в крови экспериментальных животных в 12-16 раз в зависимости от типа белка.
На основании полученной комбинации рекомбинантных белков разработаны составы и технология вагинальных лекарственных форм в виде суппозиториев и мягких желатиновых капсул. Разработаны методики качественного и количественного анализа композиции рекомбинантных белков pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub. в субстанции, так и в вагинальных лекарственных формах: суппозиториях и мягких желатиновых капсулах, содержащих композицию рекомбинантных белков pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub. Изучены фармакокинетические показатели лекарственной формы рекомбинантных белков pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub.
Подана заявка в ФИПС и получено положительное решение о выдаче патента на изобретение № 2008146809 «Вагинальные суппозитории для лечения рака шейки матки».
Практическая значимость полученных результатов
Разработанные методики качественного и количественного определения композиции рекомбинантных белков pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub. могут быть использованы при проведении качественного и количественного анализа субстанции и вагинальных лекарственных форм, полученных на ее основе. Данные методики внедрены и применяется в НИИ молекулярной медицины ГОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова.
Положения, выносимые на защиту
-
Составы и технология вагинальных лекарственных форм (суппозитории, мягкие желатиновые капсулы) с композицией рекомбинантных белков pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub., обеспечивающих терапевтическую эффективность в месте введения.
-
Методы идентификации и количественного определения композиции рекомбинантных белков pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub. в субстанции и готовых лекарственных формах.
Апробация работы
Апробация работы проведена на межкафедральной научно-методической конференции НИИ молекулярной медицины ММА им. И.М.Сеченова и кафедры технологии готовых лекарственных форм фармацевтического факультета ММА им. И.М.Сеченова 19 мая 2010.
Основные положения работы и практические результаты работы доложены на методической конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность (Москва, 2008 г.), Х международном конгрессе «Здоровье и образование в ХХI веке» (Москва, 2009 г.).
Связь задач исследования с проблемным планом
Диссертационная работа является частью исследований, которые проводятся в НИЦ ГОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова, № Государственной регистрации – № 01.2.006 06352.
Публикации
По результатам диссертационного исследования опубликовано 4 печатные работы, в том числе две статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ. Подана одна заявка на патент № 2008146809 от 27.11.08.
Объем и структура диссертации
Диссертационная работа изложена на 151 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: Введение; Обзор литературы; Материалы и методы исследования; Идентификация композиции рекомбинантных белков pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub. в субстанции и оценка их способности стимулировать гуморальные реакции иммунитета; Разработка технологии получения вагинальных суппозиториев, содержащих композицию рекомбинантных белков pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub. Оценка качества и изучение стабильности полученных вагинальных суппозиториев; Разработка технологии получения вагинальных мягких желатиновых капсул, содержащих композицию рекомбинантных белков pE7/16-Hsp70 M.tub. и pE7/18-Hsp70 M.tub. Оценка качества и изучение стабильности; Результаты исследований на биологических объектах и микробиологических исследований; Общие выводы; Список литературы, включающий 184 источников (43 отечественный, 141 зарубежных); Приложения. Работа иллюстрирована 17 рисунками и 35 таблицами.
