Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Общие ботанические сведения о растении, химическом составе, биологической активности, методах стандартизации и технологии получения лекарственных форм из растительного сырья 13
1.1 Общие ботанические сведения о растении 13
1.2 Химический состав растений рода сушеницы 15
1.3 Сушеница как средство фитотерапии 18
1.4 Методы идентификации и количественного определения действующих веществ сушеницы 25
1.4.1 Способы выделения действующих веществ из сырья сушеницы --25
1.4.2 Идентификация действующих веществ сырья сушеницы 27
1.4.3 Методы количественного определения флавоноидов 33
1.5 Технологии получения экстракционных лекарственных форм из растительного сырья 38
1.5.1 Изготовление водных извлечений 38
1.5.2 Производство настоек. 42
1.5.3 Перспективы развития экстракционных лекарственных форм ----48
Глава 2. Материалы, объекты и методы исследования 55
2.1 Материалы и объекты исследования 55
2.2 Характеристика методов исследования 56
2.3. Изучение технологических показателей сырья сушеницы топяной и обоснование выбора способов создания фитопрепаратов 57
2.4 Методы исследования лекарственных препаратов из сырья сушеницы топяной 61
2.4.1 Характеристика методов исследования настойки и жидкого экстракта сушеницы топяной 62
2.4.2 Подбор условий качественного определения флавоноидов в сырье и изучаемых лекарственных препаратах 63
2.4.3. Исследования по разработке методов количественного определения флавоноидов в экстракционных препаратахсушеницы топяной 70
Глава 3. Совершенствование оценки качества травы сушеницы топяной 75
3.1 Микроскопическое исследование травы сушеницы топяной 75
3.2 Выбор методик количественного определения флавоноидов в траве сушеницы топяной 82
3.3 Исследование микробиологической чистоты травы сушеницы топяной 87
3.4 Радиологический контроль сырья сушеницы топяной 89
3.5 Определение стабильности травы сушеницы топяной при хранении 92
Глава 4. Разработка технологии получения экстракционных форм из травы сушеницы топяной 97
4.1 Характеристика настоя сушеницы топяной 97
4.2 Изучение технологических показателей сырья сушеницы топяной . -98
4.2.1 Измельченность сырья 98
4.2.2 Поглощающая способность сырья и его набухаемость 100
4.2.3 Коэффициент вымывания 101
4.3 Подбор экстрагента для извлечения действующих веществ сушеницы топяной 104
4.4 Определение количества сливов вытяжки из экстрактора при получении настойки сушеницы топяной 106
4.5 Изучение режима экстрагирования как фактора в технологии жидкого экстракта 107
4.6. Оптимизация процесса экстрагирования травы сушеницы топяной с помощью метода однофакторного дисперсионного анализа 109
4.7 Очистка полученного извлечения в процессе приготовления настойки сушеницы топяной 112
4.8 Разработка показателей качества настойки сушеницы топяной --- 115
4.9 Исследование стабильности настойки сушеницы топяной при длительном хранении и оценка показателей качества 118
4.10 Технологическая и аппаратурная схема получения настойки сушеницы топяной 123
4.11 Технология получения жидкого экстракта сушеницы топяной --- 126
4.12 Определение показателей качества жидкого экстракта сушеницы топяной 132
Выводы 139
Список литературы 141
Приложения
- Методы идентификации и количественного определения действующих веществ сушеницы
- Изучение технологических показателей сырья сушеницы топяной и обоснование выбора способов создания фитопрепаратов
- Выбор методик количественного определения флавоноидов в траве сушеницы топяной
- Изучение технологических показателей сырья сушеницы топяной
Введение к работе
Актуальность темы. Несмотря на достигнутые успехи в области синтеза лекарственных веществ, лекарственные растения остаются важным источником для получения медицинских препаратов. Более 30 % применяемых в современной медицине препаратов получают из растительного сырья. Для некоторых фармакотерапевтических групп доля гораздо выше, так для лечения сердечно сосудистой недостаточности доля фитопрепаратов составляет 80 %, а для лечения заболеваний печени и желудочно - кишечного тракта – 75 %.
В связи с этим, актуальной задачей является проведение работ по созданию и исследованию готовых лекарственных форм из растительного сырья, в том числе для лечения сердечно - сосудистых заболеваний.
В качестве объекта исследования нами выбрано официнальное лекарственное растительное сырье – сушеницы топяной трава (Gnaphalii uliginosi herba), которое обладает сосудорасширяющим и гипотензивным действием, антибактериальной активностью, способностью ослаблять тонус гладкой мускулатуры, обладает ранозаживляющим действием. Сырье содержит комплекс таких биологически активных веществ, как флавоноиды, дубильные вещества, фенолкарбоновые кислоты, каротиноиды и др.
В настоящий момент готовая экстракционная лекарственная форма из сушеницы топяной травы отсутствует. На фармацевтическом рынке сушеницы топяной трава представлена в виде фасованного лекарственного растительного сырья в пачках для приготовления водных извлечений, согласно инструкции на упаковке.
Цель и задачи исследования. Основной целью являлось создание и исследование готовой экстракционной лекарственной формы, содержащей биологически активные вещества сушеницы топяной травы.
Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:
провести информационно-аналитическое исследование, посвященное вопросам химического состава, биологического действия, стандартизации сушеницы топяной травы, получению экстракционных препаратов из лекарственного растительного сырья.
изучить технологические свойства травы сушеницы топяной, необходимые при разработке экстракционных форм.
провести исследование по совершенствованию показателей качества травы сушеницы топяной, обусловленное технологическими особенностями сырья.
изучить факторы, влияющие на экстрагируемость действующих веществ из травы сушеницы топяной.
разработать состав, технологию, технологическую и аппаратурную схемы производства настойки и жидкого экстракта травы сушеницы топяной.
разработать методики качественного и количественного определения флавоноидов в настойке и жидком экстракте травы сушеницы топяной.
обосновать и экспериментально подтвердить показатели качества настойки и жидкого экстракта сушеницы топяной, изучить их стабильность при длительном хранении.
на основе полученных результатов разработать проекты фармакопейных статей на траву сушеницы топяной, настойку и жидкий экстракт сушеницы топяной для включения в ГФ XII издания.
Решение поставленных задач осуществлялось путем обобщения данных литературы и проведением экспериментальных исследований.
Научная новизна. Впервые созданы и экспериментально обоснованы лекарственные формы – сушеницы топяной настойка и жидкий экстракт, на которые разработаны проекты фармакопейных статей.
Проведено углубленное анатомическое изучение сушеницы топяной травы с расширением анатомо-диагностических признаков. Усовершенствована методика количественного определения флавоноидов в пересчете на гнафалозид А в сушенице топяной траве. На основании проведенных исследований разработан проект новой фармакопейной статьи на траву сушеницы топяной.
Впервые изучены технологические свойства травы сушеницы топяной и факторы, влияющие на экстрагируемость из неё действующих веществ.
Разработаны состав, технология, технологические и аппаратурные схемы производства настойки и жидкого экстракта травы сушеницы топяной.
Разработаны методики качественного и количественного определения флавоноидов в полученных настойке и жидком экстракте сушеницы топяной, с помощью которых изучена их стабильность при хранении.
Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработаны проекты двух фармакопейных статей: «Сушеница топяная трава», «Сушеницы топяной настойка». Нормативная документация принята к рассмотрению Центром стандартизации лекарственных средств ФГУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» на предмет включения в ГФ XII издания. Результаты диссертационного исследования внедрены в учебный процесс кафедры фармацевтической технологии ГБОУ ВПО РязГМУ Минздрава России.
Апробация диссертации. Основные положения диссертации представлены на III Международной (XII Всероссийской) Пироговской студенческой научной медицинской конференции (Москва, 2008); научн. конф. с междунар. участием Яросл. гос. мед. академии (Ярославль, 2009, 2011); научн.-практ. конф. молодых ученых РязГМУ (Рязань, 2004 - 2006г.г.); ежегодной научн. конф. РязГМУ имени академика И.П. Павлова (Рязань, 2005, 2007, 2009, 2010, 2011); межкафедральном совещании кафедр фармацевтической технологии, фармакогнозии с курсом ботаники, фармацевтической и токсикологической химии, общей химии с курсом биоорганической и органической химии, фармакологии с курсом фармации и фармакотерапии ФДПО ГБОУ ВПО РязГМУ Минздравсоцразвития России (Рязань, 2012).
Личное участие автора. Данные, приведенные в диссертации, получены при непосредственном участии автора как на этапах постановки задач и разработки методических подходов к их выполнению, так и при наборе первичных фактических данных при проведении экспериментальных исследований, статистической обработке и анализе полученных результатов, написании публикаций, нормативной документации. Диссертация и автореферат написаны лично автором.
Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.01 – «Технология получения лекарств». Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 3, 4 паспорта технологии получения лекарств.
Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.02 – «Фармацевтическая химия, фармакогнозия». Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 2, 3 паспорта фармацевтическая химия, фармаконозия.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематикой и планом Рязанского государственного медицинского университета имени академика И.П. Павлова «Создание и исследование лекарственных форм, содержащих биологически активные вещества сушеницы топяной травы» (№ государственной регистрации 012001 19320).
Положения, выносимые на защиту:
- результаты по созданию и исследованию сушеницы топяной настойки;
- результаты по созданию и исследованию сушеницы топяной жидкого экстракта;
- результаты по совершенствованию оценки качества сушеницы топяной травы;
- методики качественного анализа и количественного определения флавоноидов и результаты анализа травы, настойки и жидкого экстракта сушеницы топяной.
Методы идентификации и количественного определения действующих веществ сушеницы
Трава сушеницы топяной содержит в своем составе витамины (витамин С, каротиноиды), алкалоид гнафалин, дубильные вещества, флавоноиды и др. Дубильные вещества — это смесь различных полифенолов, имеющих нередко сложную структуру, и очень лабильных, поэтому выделение и анализ индивидуальных компонентов представляет собой большие трудности [18, 96]. Дубильные вещества в растительном сырье определяют качественными реакциями, которые можно подразделить на две группы: реакции осаждения и цветные реакции [96]. К реакциям осаждения можно отнести следующие реакции: с раствором желатина, хинина хлоридом, с бромной водой. Более специфичной является реакция с железоаммонийными квасцами. Для идентификации гидролизуемых дубильных веществ используется их способность взаимодействовать с формальдегидом. Дубильные вещества обнаруживаются следующими цветными реакциями. К 1 мл извлечения добавляют 2 мл раствора кислоты уксусной 10% и 1 мл средней соли свинца ацетата 10 % — гидролизуемые дубильные вещества образуют осадок. При наличии конденсированных дубильных веществ фильтрат окрасится в черно-зеленый цвет от прибавления 5 капель раствора железоаммониевых квасцов 1 % и 0,1 г свинца ацетата. К 2 мл извлечения прибавляют несколько кристаллов натрия нитрата и 2 капли 0,1 н. кислоты хлористоводородной. При наличии гидролизуемых дубильных веществ появляется коричневое окрашивание.
Для обнаружения алкалоидов в растительном сырье чаще всего используют общие (осадочные) реакции и хроматографию. Кроме того, учитывают еще некоторые свойства алкалоидов: их растворимость в кислотах и выпадение в осадок после подщелачивания, щелочную реакцию спиртовых растворов оснований алкалоидов и др. С целью идентификации алкалоидов проводят специфические (цветные) реакции, микрокристаллоскопические реакции и хроматографический, спектроскопический, люминесцентный анализы и т. д.
Общие реакции на алкалоиды (реакции осаждения). Реакции осаждения позволяют установить наличие алкалоидов даже при незначительном их содержании. Основаны они на том, что алкалоиды при взаимодействии с некоторыми веществами образуют нерастворимые в воде соединения. Это главным образом соли тяжелых металлов, комплексные иодиды, комплексные кислоты и некоторые органические соединения кислотного характера. Для проведения качественных реакций из растительного сырья обычно готовят кислотное извлечение. При добавлении соответствующих реактивов в присутствии алкалоидов тотчас или через некоторое время образуется осадок. Обилие осадка зависит как от количественного содержания алкалоидов, так и от чувствительности их к реактиву. Однако следует учитывать, что с общими реактивами образуют осадки еще и некоторые другие органические соединения, которые могут содержаться в неочищенных извлечениях (холин, бетаин, белки, продукты их разложения и др.). Поэтому, чтобы получить более достоверные результаты, общие реакции проводят еще и с очищенными извлечениями.
Ввиду того, что чувствительность различных алкалоидов к «осадочным реактивам» неодинакова, реакции обычно проводят не с одним каким-либо реактивом, а с несколькими (5—7) различными реактивами. Наиболее часто используются следующие реактивы: Майера (раствор ртути дихлорида и калия иодида), Вагнера и Бушарда (растворы иода в растворе калия иодида), Драгендорфа (раствор висмута основного цитрата и калия иодида с добавлением уксусной кислоты), Марме (раствор кадмия иодида в растворе калия иодида); раствор танина, растворы кремневольфрамовой, фосфорномо-либденовой, фосфорновольфрамовой, пикриновой кислот и др.) Основной группой действующих веществ в траве сушеницы топяной являются флавоноиды. Флавоноиды и ксантоны являются соединениями, имеющими в своих молекулах группы -С=О, -ОН, -С=С-, -С-Н, а также такие основные фрагменты как -пироновый цикл и бензольные кольца. Наличие в молекуле общих и специфических групп, а в ряде случаев и сахарных компонентов, обусловливает проявление этими соединениями общих физико-химических свойств: слабо выраженные кислотные свойства, плохая растворимость в воде, способность вступать в реакции комплексообразования, окисления, восстановления, люминесценции и способность поглощать при различных длинах волн [18]. Для идентификации флавоноидов используют их физико-химические свойства: 1. Определение температуры плавления. 2. Определение удельного вращения. 3. Сравнение УФ, ИК, ПМР, масс-спектров со спектрами стандартных образцов. С раствором аммиака флавоны, флаваноны, флавонолы, флаванонолы дают желтое окрашивание, при нагревании переходящее в оранжевое или красное. Тем не менее, существуют качественные реакции, которые могут подвердить наличие флавоноидных соединений в исследуемом растительном сырье или фитопрепарате. К таким реакциям относят: 1. Цианидиновая проба. К 2 мл извлечения прибавляют 5-7 капель концентрированной кислоты хлористоводородной и 10-15 мг металлического магния и цинка, через 3-5 минут наблюдается красное, оранжевое, розовое окрашивание. Для ускорения реакции и усиления окрашивания рекомендуется (2-3 мин) подогреть смесь на кипящей водяной бане. 2. Реакция с раствором основного свинца ацетата. К 1 мл извлечения добавляют 3-5 капель раствора основного свинца ацетата 2 %. Появление желто-оранжевого окрашивания свидетельствует о наличии флавоноидов [153].
Изучение технологических показателей сырья сушеницы топяной и обоснование выбора способов создания фитопрепаратов
Измельченность сырья оказывает большое влияние на процесс экстрагирования. При измельчении сырья придается структура, необходимая для быстрейшего экстрагирования действующих веществ из него. Измельченность исследуется с помощью ситового анализа и выражается в количествах (процентах) фракций разной степени измельченности. Набухаемость сырья и его поглощающая способность Исследуя скорость набухания растительного сырья в спирто-водных смесях, было выявлено, что наибольшая скорость наблюдается в первые 10 минут, затем происходит замедление процесса [104]. С точки зрения экономичности процесса, стадия набухания излишняя, так как в период времени, затраченный на набухание, из сырья можно проэкстрагировать определенное количество веществ. В ряде случаев сырье необходимо подвергнуть набуханию, если предусматривается его плотная укладка в перколяторы во избежание последующего запрессовывания в результате увеличения объема сырья. При набухании сырья можно отметить два процесса: а) продвижение экстрагента внутрь кусочков растительного сырья; б) увеличение кусочков сырья в объеме вследствие их набухания. Для выявления поглощаемости сырье замачивали экстрагентом и настаивали до прекращения прироста в массе. Прирост в массе определяли после подсушивания поверхности кусочков фильтровальной бумагой. Коэффициент поглощения сырья определяли по формуле: Р1 – масса сырья до набухания; Р2 – масса сырья после набухания.
Определенная таким образом поглощаемость сырья является мерой внутреннего сока и поэтому ее следует называть «внутренней поглощаемостью». В реальных условиях большое значение имеет «полная» поглощаемость, представляющая собой сумму влаги, поглощенную сырьем и удержанную на поверхности и между кусочками сырья [70, 82, 105]. Коэффициент вымывания При разрушении структуры сырья часть клеток вскрывается и при последующем экстрагировании вещества, содержащиеся во вскрытых клетках, легко вымываются экстрагентом. Относительное значение количества веществ, проэкстрагированных в период быстрой экстракции, может служить важной технологической характеристикой сырья – количества вымываемых веществ (коэффициент вымывания). В наших исследованиях мы использовали упрощенный способ расчета коэффициента вымывания. В этом случае за величину коэффициента вымывания принимали количество вещества в вытяжке, полученное в течение 1 часа экстрагирования сырья при перемешивании [105]. Критерием коэффициента вымывания мы принимали содержание биологически активных веществ сушеницы топяной – флавоноидов в пересчете на гнафалозид А. Определение объемной и насыпной массы, пористости и порозности сырья Величина плотности (dy), объемной (do) и насыпной (dn) массы лекарственного сырья имеет определенное технологическое значение. Относительная плотность растительной ткани дает представление совместно с объемной массой о пористости сырья. При расчетах нами использовалась средняя плотность растительного сырья – 1,53 г/см3 [105, 150]. Пористость сырья (величина пустот внутри растительного материала) в этом случае определяется по формуле: dy - d Pd dy Разница между объемной и насыпной массой дает представление о порозности сырья, то есть о величине пустот между кусочками измельченного материала и рассчитывается по следующей формуле: d-d o n zz m P o do Пористость сырья связана прямой зависимостью с количеством внутреннего сока, порозность – с количеством внешнего сока. Для расчета пористости и порозности необходимо определить величины объемной и насыпной массы травы сушеницы топяной. Объемную массу находили, определяя объем взвешенной порции травы. Для предотвращения смачивания поверхность предварительно гидрофобизировали. Затем погружали навеску в воду и измеряли вытесненный объем.
Насыпную массу определяли методом свободного насыпания сырья с условным уплотнением. В мерный цилиндр на 100 мл свободно насыпали траву сушеницы топяной со стандартным уплотнением до постоянного объема. После достижения постоянного объема траву взвешивали и рассчитывали величину насыпной массы. Определение внутреннего трения сырья травы сушеницы топяной Внутреннее трение возникает между частицами растительного материала и характеризует их способность к передвижению относительно друг друга. Величину внутреннего трения принято изображать через величину угла естественного откоса , определяющего геометрические параметры конуса, образующего при свободном насыпании частиц на ровную поверхность. Эта величина показывает степень сыпучести растительного материала и имеет значение при расчете загружающих устройств в экстракционных аппаратах.
Задачей проведенных исследований являлась разработка настойки и жидкого экстракта сушеницы топяной. Для создания фитопрепаратов, их контроля качества и стандартизации необходимы надежные методы исследования. Физические методы были взяты из нормативной документации: общих фармакопейных статей, частных фармакопейных статей. Физико-химические и химические методы исследования данных лекарственных фитопрепаратов не разработаны. Следовательно, необходимо было разработать методы определения подлинности и количественного определения основных действующих веществ.
Для контроля качества и стандартизации настойки и жидкого экстракта сушеницы топяной необходимо было определить и установить показатели качества: описание, подлинность, содержание тяжелых металлов, содержание спирта, сухой остаток, объем содержимого упаковки, микробиологическая чистота, количественное содержание основных действующих веществ, условия хранения и срок годности.
Выбор методик количественного определения флавоноидов в траве сушеницы топяной
Для количественного определения содержания флавоноидов используют такие методы, как гравиметрическое определение, кислотно-основную титриметрию, фотоэлектроколориметрию, спектрофотометрию, хроматоденситометрию и другие [63, 68, 73, 74, 103, 122, 153]. В настоящее время большое распространение получили физико-химические методы анализа, которые обладают рядом преимуществ перед титриметрическими и гравиметрическими методами. В нашем исследовании для количественного определения флавоноидов в сырье сушеницы топяной использовали методику ГФ XI изд., а также модифицированную нами методику [24, 126]. В траве сушеницы топяной количественное определение содержания флавоноидов в пересчете на гнафалозид А проводят, согласно методике ГФ XI изд., спектрофотометрическим методом.
Согласно данной методике из 5 г растительного сырья (травы) сушеницы топяной методом циркуляционной экстракции 95% спиртом этиловым получают извлечение (раствор А). Данное извлечение упаривают на водяной бане до сухого остатка. Полученный остаток растворяют в 10% растворе натрия хлорида и переносят на колонку с полиамидным сорбентом. С полиамидного сорбента флавоноиды элюируют 95% спиртом этиловым со скоростью 4 мл/мин. Когда темно-желтая зона (в УФ-свете) подходит к нижней части сорбента, элюат собирают в мерную колбу вместимостью 50 мл. Объем извлечения доводят до метки 95 % спиртом этиловым и тщательно перемешивают.
Из спиртового элюата берут 1 мл раствора, переносят в мерную колбу на 50 мл и доводят объем до метки 95% спиртом этиловым (раствор Б). В качестве раствора сравнения используют раствор калия бихромата. Для его приготовления около 0,03 г (точная навеска) калия бихромата, высушенного до постоянной массы, растворяют в растворе серной кислоты (0,005 моль/л). Для приготовления 0,05 молярного раствора кислоты серной к 1 л воды очищенной добавляют 0,28 мл концентрированной кислоты серной и перемешивают. Оптическую плотность раствора Б измеряют на спектрофотометре Lambda-35 Perkin Elmer в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 338 нм по сравнению с контрольным раствором. Контрольный раствор получают путем пропускания 50 мл 95% этилового спирта через колонку с полиамидным сорбентом в мерную колбу. Объем раствора в колбе доводят до 50 мл. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора стандартного вещества сравнения калия бихромата по сравнению с 0,005 мол/л серной кислоты. Спектр извлечения из сырья сушеницы топяной травы представлен на рис. 10. Рисунок 10. УФ спектр поглощения извлечения травы сушеницы топяной Как видно из рисунка 10, спектр поглощения извлечения травы сушеницы топяной характеризуется двумя максимумами поглощения при длине волны 210нм и 338нм и минимумом поглощения при 260нм. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на гнафалозид А и абсолютно сухое сырье в процентах (Х) вычисляли по формуле: Dx0,2020x50x50xl,03xm0xl00 100 D0хmх1х1000 X(\00-W) , где D - оптическая плотность испытуемого раствора; D0 - оптическая плотность стандартного образца калия бихромата; m - масса травы сушеницы топяной, г; щ, - масса калия бихромата; W - потеря влаги при высушивании сырья, %; 0,2020 - коэффициент пересчета калия бихромата на гнафалозид А; 1,03 - поправочный коэффициент на неполное элюирование гнафалозида А с полиамидного сорбента. Согласно литературным данным, содержание гнафалозида А в общем количестве флавоноидов сушеницы топяной составляет 70%. Следовательно основной фармакологический эффект травы обеспечивается гнафалозидом А.
В связи с этим нам представлялось необходимым модифицировать методику количественного определения флавоноидов с целью повышения е селективности. Нами предлагается вместо показателя оптической плотности раствора сравнения калия бихромата использовать значение показателя удельного поглощения гнафалозида А [66]. Данная модификация позволит сделать методику более селективной и экономичной, потому что не будет необходимости в дополнительном приготовлении раствора стандартного вещества сравнения калия бихромата. Кроме того, данная модификация позволяет сделать методику определения флавоноидов более точной.
Для подтверждения использования модификации в количественном определении флавоноидов нами было проведено определение содержания флавоноидов в траве сушеницы топяной методом ГФ XI изд. и по модифицированной методике, результаты которого представлены в табл. 5 Таблица 5 Сравнительные результаты количественного определения суммы флавоноидов, определенные по стандарту калия бихромата и по стандарту гнафалозида А Серия сырья Содержание суммы флавоноидов, % По методике ГФ ХI, ст. 51 По модифицированной методике 020803 0,5554 0,4630 0,5479 0,4567 0,5538 0,4617 0,5291 0,4411 Окончание табл. n=4, f=3 n=4, f=3 X =0,5466 X =0,4556 S =0,006036 S =0,005028 P=95% ,t(95,3)= 3,18 P=95% ,t(95,3)= 3,18 =0,019 =0,016 A=3,51% A=3,51% Как видно из таблицы 5, использование в качестве стандартного образца значения показателя удельного поглощения гнафалозида А вместо показателя оптической плотности раствора сравнения калия бихромата делает методику количественного определения более селективной.
Сбор лекарственного растительного сырья, приведение его в стандартное состояние осуществляются в не стерильных условиях, что может привести к проникновению в организм больного различных инфекционных агентов. В связи с этим, проведение тестов на микробную чистоту представляется актуальной задачей на современном этапе [27, 51, 57, 98]. Лекарственные растительные средства, выпускаемые в пачках, брикетах, фильтр-пакетах, в Изменении №2 к ГФ XI, вступившем в действие с января 2002г, впервые выделены в отдельную категорию лекарственных средств по аналогии с Европейской фармакопеей. К этой же категории относится и лекарственное растительное сырье «ангро». В зависимости от способа применения лекарственные растительные средства разделены на 2 категории: 4А. Лекарственное растительное средство или лекарственное растительное сырье «ангро», применяемые в виде настоев или отваров, приготовленные с использованием термической обработки 4Б. Лекарственное растительное средство или лекарственное растительное сырье «ангро», применяемое без термической обработки. Так как для приготовления экстракционного препарата по технологии настоек и экстрактов нами не использовалась термическая обработка сырья, то микробиологическую чистоту определяли, согласно требований ГФ XI, вып. 2, изменение №3, категория Б.
Изучение технологических показателей сырья сушеницы топяной
При измельчении сырью придается структура, необходимая для быстрого и полного экстрагирования из него действующих веществ. Для каждого растительного сырья должна быть оптимальная степень измельчения. Известно, что при слишком тонком измельчении сырье в настойниках и перколяторах слеживается. В результате этого экстрагент через такой слой сырья плохо проникает и процесс экстрагирования происходит не полностью. Кроме того, при слишком тонком измельчении резко увеличивается количество разрушенных клеток, что приводит к вымыванию из них не только биологически активных, но и балластных (белки, пектины и другие высокомолекулярные вещества) веществ, которые переходят в вытяжку. Также в извлечение будет переходить большое количество взвешенных частиц исходного растительного сырья. В результате получается мутная, трудноосветляемая и плохо фильтруемая вытяжка. Для изучения влияния измельченности травы сушеницы топяной на степень е экстрагирования мы использовали траву, проходящую сквозь сита с диаметром от 1 до 7 мм.
Кроме того, в процессе приготовления настойки нами отмечалось, что процесс экстрагирования из травы, проходящей сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм, был более продолжительным, по сравнению с процессом экстрагирования травы со степенью измельчения 5 мм.
Исследуя скорость набухания растительного сырья в спирто-водных смесях, было выявлено, что наибольшая скорость набухания наблюдается в первые 10 минут, затем происходит замедление процесса.
С точки зрения экономичности процесса, стадия набухания не рациональна. Однако, если предусматривается плотная укладка сырья в перколяторы, то его во избежание последующего запрессовывания подвергают набуханию. Для выявления поглощаемости сырье замачивали соответствующим экстрагентом (спирт этиловый 70%) и настаивали до прекращения прироста в массе. Прирост в массе определяли после подсушивания поверхности кусочков фильтровальной бумагой. Коэффициент поглощения сырья определяли по формуле: р2 – масса сырья после набухания; р1 – масса сырья до набухания. Определенная таким образом поглощаемость сырья является мерой внутреннего сока и поэтому ее следует называть «внутренней поглощаемостью». Практическое значение данной характеристики лекарственного растительного сырья очевидно. Так, только зная величину поглощаемости растения можно рассчитать необходимое количество экстрагента для приготовления определенного объема готового продукта. Для определения коэффициента поглощаемости травы сушеницы топяной нами взвешивалась определенная навеска травы, которую подвергали экстрагированию. По окончании экстрагирования после отжатия сырья образовавшийся шрот взвешивали и получали массу травы после набухания.
При разрушении структуры сырья часть клеток вскрывается и при последующем экстрагировании вещества, содержащие во вскрытых клетках, легко вымываются экстрагентом. Количество вымываемых веществ определяется коэффициентом вымывания.
В наших исследованиях использовался упрощенный способ расчета коэффициента вымывания. В этом случае за величину коэффициента вымывания принимали количество вещества в вытяжке, полученное в течение 1 часа экстрагирования сырья при перемешивании.
За значением коэффициента вымывания принимали содержание биологически активных веществ сушеницы топяной - флавоноидов в пересчете на гнафалозид А. Для травы сушеницы топяной он составил 0,04±0,0005%
Величина относительной плотности (dy), объемной (d0) и насыпной (dn) массы лекарственного сырья имеет определенное технологическое значение. Объемная масса совместно с относительной плотностью дает представление о пористости сырья. При расчетах нами использовалась средняя плотность растительного сырья - 1,53 г/см3 [105]. Пористость сырья (величина пустот внутри растительного материала) в этом случае определяется по формуле: d -d Pd = dy Разница между объемной и насыпной массой дает представление о порозности сырья, то есть о величине пустот между кусочками измельченного материала и рассчитывается по следующей формуле: d0 Пористость сырья связана прямой зависимостью с количеством внутреннего сока, порозность - с количеством внешнего сока. Для расчета пористости и порозности необходимо было определить величины объемной и насыпной массы травы сушеницы топяной. Объемную массу находили, определяя объем взвешенной порции травы сушеницы топяной. Для предотвращения смачивания поверхность предварительно гидрофобизировали. Затем обработанную навеску погружали в воду и измеряли вытесненный объем.
Насыпную массу определяли методом свободного насыпания сырья с условным уплотнением. В мерный цилиндр на 100 мл свободно насыпали траву сушеницы топяной со стандартным уплотнением до постоянного объема. После достижения постоянного объема траву взвешивали и рассчитывали величину насыпной массы.
Внутреннее трение возникает между частицами растительного материала и характеризует их способность к передвижению относительно друг друга. Величину внутреннего трения принято изображать через величину угла естественного откоса , определяющего геометрические параметры конуса, образующего при свободном насыпании частиц на ровную поверхность.
Результаты исследований приведены в табл. 13 и на рис. 12 Как видно из таблицы 12, при использовании в качестве экстрагента 70 % спирта этилового наблюдается максимальное содержание флавоноидов в пересчете на гнафалозид А в сушенице топяной топяной настойке (0,07%), применение 95 % этанола показало отсутствие в полученной настойке флавоноидов. Результаты количественного определения флавоноидов в настойках сушеницы топяной, полученных при экстрагировании травы 40 % и 90 % раствором спирта этилового показало в них содержание последних в количестве 0,04 % и 0,02 % соответственно.
