Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы. Возможные пути влияния жидкостей с раз-личным ОВП на органы ЖКТ . 11
1.1. Роль биогенной воды и пути воздействия ей на различные состоя-ния органов ЖКТ 11
1.2. Принципы строения и функционирования огранов ЖКТ и методы их фармакологической коррекции . 20
Глава II. Материалы и методы исследования. 46
2.1 Лабораторные эксперименты in vitro. 47
2.2 Исследование общебиологического действия жидкостей с различным ОВП. 55
2.3 Моделирование патологий органов желудочно-кишечного тракта . 78
Глава III. Исследование действия жидкостей с различным ОВП in vitro . 85
3.1. Измерение ОВП и рН желудочного сока при разбавлении жидкостями с различным ОВП. 85
3.2. Измерение слизистого барьера желудка при действиижидко-стей с различным ОВП. 87
3.3. Действие жидкостей с различным ОВП на желчные камни . 89
Глава IV. Исследование длительного действия жидкостей с различным ОВП на здоровый организм . 93
4.3 Макроскопическое исследование. 95
4.4. Микроскопические исследования. 97
4.5. Исследования периферической крови. 102
4.6. Исследование морфофункционального состояния органов ЖКТ. 105
Глава V. Моделирования патологий органов ЖКТ на фоне приёма жид-костей с различным ОВП . 108
5.1 Бутадионовая (парентеральная) модель язвенного поражения желудка белых неинбредных крыс 108
5.2 Индометациновая (энтеральная) модель язвенного поражения желудка белых неинбредных крыс . 109
5.3 Моделирование хронического тетрахлорметанового гепатоза на белых неинбредных крысах. Комбинированное лечение с препаратом сравнения карсил 111
Глава VI. Возможные механизмы влияния жидкостей с различным ОВП на ЖКТ (обсуждение результатов исследования) 121
Заключение 130
Выводы 132
Практические рекомендаци 133
Список литературы 135
- Принципы строения и функционирования огранов ЖКТ и методы их фармакологической коррекции
- Моделирование патологий органов желудочно-кишечного тракта
- Действие жидкостей с различным ОВП на желчные камни
- Индометациновая (энтеральная) модель язвенного поражения желудка белых неинбредных крыс
Введение к работе
Актуальность темы. Органы пищеварения наряду с кожей и дыхательными путями являются той системой, которая чаще других подвергается воздействию чрезвычайных раздражителей, в связи с чем, патология желудочно-кишечного тракта является наиболее распространенной. В последнее время во всем мире отмечается неуклонный рост заболеваемости пищеварительной системы, особенно, гастритов, гастродуоденитов, язвенной болезни, заболеваний поджелудочной железы, холециститов, гепатитов, энтероколитов, дисбактериозов. (Волков А.И., 2009). Одними из самых распространенных заболеваний у лиц трудоспособного возраста являются хронические болезни пищеварительной системы. В настоящее время отмечается стойкая тенденция к дальнейшему росту их частоты. По данным 2011 года заболевания органов пищеварения в России занимают 3-е место в структуре общей заболеваемости, а 37 % больных, страдающих этой патологией, обратившихся за медицинской помощью, являются лицами трудоспособного возраста, которым ежегодно на оплату больничных листов необходимо не менее 5 миллиардов рублей (Ивашкин В.Т., 2004). По официальным данным Росстата (с учетом предварительных итогов ВПН-2010 за 2010 г.) зарегистрировано с диагнозом, установленным впервые в жизни, болезней органов пищеварения 5 % от заболеваемости по основным классам диагнозом и составили 33,4 случая на 1000 населения. По сравнению с 2000 годом (без учёта ВПН) прирост заболеваемости составил 1,1 случая на 1000 населения или 1% от заболеваемости по основным классам. На долю гастроэнтерологической патологии приходится 10% всех госпитализаций. Для заболеваний желудочно-кишечного тракта характерна многогранность патогенетических механизмов повреждения пищеварительной системы, что диктует необходимость дальнейшего совершенствования терапевтических схем. Недостаточная эффективность стандартных методов лечения, растущая аллергизация населения, и неблагоприятное влияние длительной лекарственной нагрузки на организм придают особую актуальность разработке и дальнейшему совершенствованию способов терапевтической коррекции (Шкляев А.Е., 2007). Поиск новых источников субстанций для получения лекарственных средств, способных усиливать регенераторные процессы в печени, внедрение их в медицинскую практику, является важнейшей задачей, решение которой позволит удовлетворить в полном объёме запросы здравоохранения (Ивашкин В.Т. 2005; Подымова С.Д., 2005).
В 1975 г. было открыто явление электрохимической активации водных растворов (ЭХАВ). ЭХАВ - совокупность электрохимического и электрофизического воздействия на воду в двойном электрическом слое электрода (либо анода, либо катода) электрохимической системы. В результате образуются жидкости с различным ОВП (окислительно-восстановительный потенциал) - католит и анолит (Бахир В.М., 1995). В 1985 г. ЭХАВ была официально признана ВАК СССР в качестве нового класса физико-химических явлений. Поручением правительства РФ от 15 января 1998 г. № ВЧ-П12-01044 даны рекомендации министерствам и ведомствам использовать указанные технологии в медицине, сельском хозяйстве, промышленности. Это обусловлено не только их высокой эффективностью, но и небольшой стоимостью: 0,12 руб./л. (Рябов А.Г., 2005)
Перспективной для изучения гастро- и гепатопротекторных свойств является жидкость с отрицательным ОВП, иначе называемая католит (Алехин С.А.; Байбеков И.М.; Гариб Ф.Ю.; Гительман Д.С.: -1998).
Жидкости с различным окислительно - восстановительным потенциалом обладают рядом фармакологических свойств (В.И. Прилуцкий, 1999; Сабитова Е.Б., 2009; Резников К.М., 2011). Установлена малая токсичность этих жидкостей как при приёме внутрь, так и при инъекционном введении (Брездынюк А.Д., 2007; Левченко Ю.А., 2008). Они широко применяются при лечении заболеваний, но их действие на органы желудочно-кишечного тракта не изучено, что диктует необходимость детального изучения их влияния на органы желудочно-кишечного тракта.
Цель исследования: установить эффекты действия жидкостей с различным ОВП на здоровый организм и при моделировании заболеваний органов пищеварения.
Задачи исследования:
-
-
In vitro исследовать влияние жидкостей с различным ОВП на показатели ОВП и рН желудочного сока, массу слизистого барьера желудка и желчные конкременты.
-
Установить возможные проявления длительного действия жидкостей с различным ОВП на общее состояние и продолжительность жизни белых крыс.
-
Изучить морфологические, морфометрические изменения слизистых оболочек полости рта, пищевода, желудка, кишечника, печени и поджелудочной железы экспериментальных животных при длительном введении жидкостей различным ОВП.
-
Исследовать биохимические, цитологические, антирадикальные и некоторые электролитные показатели крови при хроническом действии жидкостей с различным ОВП.
-
Исследовать лечебные свойства жидкостей с различным ОВП в условиях экспериментального повреждения желудка и печени.
Научная новизна исследования
Впервые получены данные о том, что in vitro жидкости с различным ОВП почти не влияют на желчные камни при сравнении с водой. Однако, жидкость с положительным ОВП, при сравнении с водой достоверно увеличивает объём, массу и снижает прочность камней преимущественно пигментно-бактериальной природы. В условиях in vitro установлено, что жидкость с положительным ОВП, оказывает фазное действие на ОВП желудочного сока в зависимости от разведения, тогда как жидкость с отрицательным ОВП существенно снижает этот показатель. Жидкость с отрицательным ОВП не нарушает потенциал секреции желудочной слизи после десятидневного приёма, а при непосредственном действии на интактный желудок в условиях in vitro не влияет на массу пристеночной слизи. Жидкость с положительным ОВП также не влияет на потенциал секреции слизи, но при непосредственном действии в условиях in vitro увеличивает массу пристеночной слизи. Обе жидкости при шестимесячном применении не вызывают повреждающего действия на слизистую оболочку желудка.
Уточнены полученные ранее рядом авторов (В.М. Бахир, 1999; Прилуцкий В.И., 1999) о том, что жидкость с отрицательным ОВП при не стандартизованных значениях ОВП может продлевать продолжительность жизни лабораторных животных. Оказалось, что большинство животных контрольной группы при двухлетнем наблюдении погибают к концу первого года наблюдений, тогда как при замене питьевой воды на жидкость с отрицательным ОВП (- 500-520 мВ) смертности на первом году жизни не наблюдается, и к концу второго года наблюдений смертность составила 40%. Жидкость с положительным ОВП в меньшей степени снижает смертность животных при сравнении с животными контрольной группы. Исследованы основные биохимические, цитологические и антирадикальные характеристики крови, морфофункциональное состояние слизистых оболочек и тканевых базофилов ЖКТ. Впервые получены данные о том, что при длительном употреблении жидкости с отрицательным ОВП в крови снижается содержание малонового диальдегида- конечного продукта перекисного окисления липидов, свидетельствующее об усилении антирадикальных свойств крови, при этом зафиксировано снижение активности гаммаглютаминтранспептидазы, амилазы и щелочной фосфатазы. Также дополнены полученные ранее рядом авторов данные (А.Д. Брездынюк, 2006; Сабитова Е.Б., 2007 и др.) о хронической токсичности жидкостей с различным окислительно-восстановительным потенциалом. Впервые получены материалы о гепатопротекторных, гепаторегенераторных свойствах исследуемых жидкостей. Результаты, полученные в модели НПВС - индуцированных язв выявили отсутствие гастропротекторных свойств наряду с отчетливыми регенеративными свойствами у католита. При этом обе жидкости не утяжеляют НПВС - индуцированный процесс язвообразования в желудке.
Научно-практическая значимость работы. Материалы, полученные в ходе исследования дополняют знания о токсичности жидкостей с различным ОВП, уточняют знания о фармакологических эффектах стандартизованных жидкостей со стандартным отрицательным и стандартным положительным ОВП, расширяют понимание о роли воды в организме. Данное исследование затрагивает вопросы о физиологичности любых жидкостей принимаемых внутрь и вводимых парентерально, поскольку роль величины ОВП только начинает исследоваться. Это исследование касается большинства смежных с фармакологией наук, что может послужить фундаментом для новых исследований, учитывающих роль воды и показателя ОВП в организме, а также позволит пересмотреть некоторые научные положения с учетом роли показателя ОВП. Применение жидкостей с различным окислительно-восстановительным потенциалом растворов в клинической практике позволит в ряде случаев оптимизировать лечение, снизить дозировки применяемых препаратов, улучшить качество жизни больных, уменьшить затраты на лечение. Ранее неизвестные материалы, полученные в диссертационной работе, могут быть дополнением учебных курсов фармакологии, физиологии.
Внедрение результатов научных исследований. Материалы исследования используются в образовательном процессе кафедр фармакологии и внутренних болезней ВГМА им. Н.Н. Бурденко, Тверской государственной медицинской академии, Ижевской государственной медицинской академии, Башкирского государственного медицинского университета.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Жидкости с различным ОВП в условиях in vitro изменяют рН желудочного сока подобно воде, но модифицируют показатель ОВП, вызывая не однозначные изменения физических свойств желчных камней.
-
Жидкости с различным ОВП не влияют на потенциал секреции слизи при приёме внутрь, но в условиях in vitro жидкость с положительным ОВП увеличивает массу пристеночной слизи.
-
Длительный приём жидкостей с различным ОВП не влияет на морфофункциональную картину желудка и кишечника, не ухудшает биохимические показатели крови, оказывая благоприятное действие на некоторые из них, при этом количественные изменения популяций тканевых базофилов ЖКТ не имеют признаков функциональной напряженности и являются вариантом нормы; жидкость с отрицательным ОВП увеличивает продолжительность жизни животных.
-
Жидкость с отрицательным ОВП в моделях патологий ЖКТ не обладает гастропротективными свойствами, ускоряет регенерацию язвенных дефектов слизистой оболочки желудка и проявляют гепатопротекторные свойства при хроническом тетрахлорметановом поражении печени.
Связь с планом НИР ГБОУ ВПО ВГМА им. Н.Н. Бурденко. Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Воронежская государственная медицинская академия имени Н.Н. Бурденко» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации в соответствии с планом научно-исследовательских работ ВГМА, номер государственной регистрации 01.200.700012.
Личный вклад автора: Автору принадлежит ведущая роль в выборе дизайна исследования, определения целей задач работы и подбор методик, позволяющих достичь поставленных целей. Автором проведены все экспериментальные работы, кроме анализа крови, приготовления срезов и окрашивания микропрепаратов. Автором работы проведена статистическая обработка полученного материала.
Соответствие паспорту специальности. Содержание диссертации соответствует паспорту специальности фармакология, клиническая фармакология по пунктам 3, 4, 5, 8, 10, 12, 14.
Апробация диссертации. Апробация диссертации проведена на совместном заседании кафедр фармакологии, гистологии и нормальной физиологии ГБОУ ВГМА им. Н.Н. Бурденко (2012 г).
Материалы диссертации докладывались и обсуждались на II и III Всероссийском научно - практическом семинаре молодых учёных «Методологические аспекты экспериментальной и клинической фармакологии» в ВолГМУ в 2010-2011г, Национальном конгрессе «Человек и лекарство» в 2010-2011г, на IV Всероссийской конференции молодых учёных «Комплексный подход к диагностике, лечению и профилактике в медицине» (2011 г.), V, VI и VII Всероссийской Бурденковской студенческой научной конференции (г. Воронеж, 2009-2012 г); на XI и XII международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке, научные и прикладные аспекты концепции здоровья и здорового образа жизни» (РУДН, 2009-2011г.), XIX, XX, XVIII и Международных конференциях «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (Украина, Ялта-Гурзуф, 2008, 2011 и 2012 г).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 16 печатных работ, в том числе 5 статей в журналах, рекомендуемых ВАК.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 193 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, трёх глав собственных результатов исследований, главы обсуждения результатов, заключения, выводов, научно-практических рекомендаций и списка использованной литературы, включающего 229 отечественных и зарубежных источников. Работа иллюстрирована 26 таблицами и 36 рисунками.
Принципы строения и функционирования огранов ЖКТ и методы их фармакологической коррекции
Известно, что молекулы воды являются интегральной частью молекул многих белков, метаболическая активность которых является результатом функционирования всего комплекса биомолекула-вода [1](Абатуров, Д.А.1997). Однако вода не только участвует в организации пространственной структуры биологических мембран, но и активно действует на происходящие в них процессы [134](Katragadda M. 2004)-. Изменение гидратации мембран существенным образом меняет равновесие сил в пределах тройной системы белок-липид (детергент) - вода и вызывает глубокую перестройку [44] (Кар-гополов А.В. 2006) В результате меняется лабильность всей системы в целом и ее способность к выполнению своих биологических функций [100](Castano S.2002). Высказывается мнение, что в качестве одного из основных механиз-мов регуляции метаболических реакций в клетке можно рассматривать про-цессы сорбции-десорбции белков на мембранах и других клеточных и суб-клеточныхструктурах под действием биологически активных веществ, ионов, ионов кальция, различных метаболитов, поступления субстратов, а также ле-карственных веществ (анестетиков, нейролептиков и др.)
Определенная часть воды организма может связываться с растворен-ными в ней веществами и с поверхностью биополимерных макромолекул с помощью как водородных связей, так и сил ион-дипольного взаимодействия. Это может приводить к изменению свойств мембран, ионов и других частиц, находящихся как вне- так и внутриклеточно. По мнению Зенина С.В., вода по своему физическому состоянию может быть представлена в виде гетероген-ной системы, состоящей из свободной жидкости и ион- кристаллических ас-социатов (кластеров связанной воды) [36-40] 3енин С.В. 1997.;Зенин С.В. 1994.; Зенин С.В. 1993.;Зенин С.В. 2007;Зенин С.В.- 1994.;Зенин С.В 1997. В организме образуются пятиугольные и шестиугольные кольца из молекул во-ды, дипольные моменты которых направлены наружу. Электрическое поле молекул воды этихколец может быть значительными способно поляризовать органические молекулы или удерживать их в одном из конформационных со-стояний с наибольшим дипольным моментом. Пяти - и шестичленные коль-цамолекул воды могут образовывать трехмерные структуры, способные объ-единяться в цепочки и существовать в виде спиралей, чтоделает возможным реализацию механизма протонной проводимости [182]Smith C.W. Water,1985. Молекулы воды контактируют между собой посредством дальне-го кулоновского взаимодействия без образования водородных связей между гранями элементов, что позволяет рассматривать структурированное состоя-ние воды в виде исходной информационной матрицы [35-40] .3енин С.В.1997;Зенин С.В.1994;Зенин С.В.1993.;Зенин С.В. 2007.;Зенин С.В.1994.;Зенин С.В.1997 Следовательно, структурированная вода организма может обладать не только памятью, но и быть средством переноса информа-ции между всеми клетками организма. Конформационные особенности био-молекул мембран определяются структурой связанной с ними воды, поэтому снижение степени структурной упорядоченности водного раствора приводит к существенному изменению конформации и, соответственно, функциональ-ных свойств белков, при этом предполагают, что может меняться третичная и четвертичная структура белка [22] Бунятян Н.Д., Герасимова О.А., Сахарова Т.С., Яковлева Л.В. 1999.. Показано, что энергия кванта света инфракрасной и видимой области электромагнитного излучения (1-2 эВ) оказалась доста-точной для изменения состояния водных структурных комплексов [85] Чер-касов А.В. 1994. Следовательно, различные факторы, включая электромаг-нитное воздействие, могут посредством изменения структурной упорядочен-ности биогенной воды передавать информацию биомолекулам клеток орга-низма, в частности, возможны изменения течения биохимических реакций [85] Черкасов А.В.1994. Изложенное позволяет допустить существование в организме разветвленной информационно-энергетической системы структу-рированной воды, обеспечивающей мгновенную передачу информации ко всем клеткам [66] Резников К.М. 2006. В работах итальянских ученых было высказано предположение о существовании так называемого когерентного и некогерентного состояний воды [160]On the “unreasonable”.). Согласно дан-ной теории, вода самоорганизуется в шарообразные домены когерентности, размеры которых составляют от долей микрона до нескольких микрон. В та-ких доменах миллионы молекул воды осцилируют с одной и той же частотой и в одной и той же фазе с генерируемым этим доменом электромагнитным полем. Такие образования соответствуют состояниям с минимальной энерги-ей и очень устойчивы. Пространство между доменами заполнено множест-вом молекул воды, находящимся в обычном некогерентном состоянии, коле-бания которых ни-как не связаны друг с другом. Когерентные колебания чув-ствительны к дей-ствию сверхслабых электромагнитных полей низкой часто-ты, при чем это имеет место при температурах, близких к комнатной [45,160,202]. Каркищенко Н.Н.2007;On the “unreasonable” ;Zhadin M. 2006
В работах Шеныпина А.И. с соавт. [23] Бунятян Н.Д., Герасимова О.А., Сахарова Т.С., Яковлева Л.В. 1999 было установлено, что изменения кванто-во-электродинамических свойств воды являются первичной мишенью для действия сверхнизких концентраций фармакологически активных веществ [23] Бунятян Н.Д., Герасимова О.А., Сахарова Т.С., Яковлева Л.В. 1999 Та-ким образом, уникальные свойства воды делают ее необходимым компонен-том метаболических и информационных процессов организма, обеспечи-вающих полноценную структуру и функцию. Если через обычную воду про-пустить электрический ток, то поступление электронов в воду у катода, так же, как и удаление электронов из воды у анода, сопровождается целой цепью электрохимических реакций, в результате чего меняется система межмолеку-лярных взаимодействий и свойств такой воды. При наличии между электро-дами диафрагмы, вода у катода (католит) приобретает щелочный характер и ее окислительно восстановительный потенциал (ОВП) резко снижается, уменьшается поверхностное натяжение, уменьшается электропроводность, изменяется структура не только гидратных оболочек ионов, но и свободного объема воды. При анодной электрохимической обработке кислотность воды увеличивается и ее ОВП возрастает (анолит), уменьшается поверхностное натяжение, увеличивается электропроводность, изменяется структура воды [11,32,65]Бахир В.М.2001;«Живая» вода - мифы и реальность;Прилуцкий В.И. Электрохимически активированные растворы, полученные в специаль-ных установках, в зависимости от силы пропускаемого тока могут быть не-скольких видов [11]Бахир В.М. 2001
Моделирование патологий органов желудочно-кишечного тракта
Забор венозной крови для исследования осуществляли в пробирки «Vacuette», «Greiner bio-one», Австрия, для получения сыворотки (определе-ние биохимических параметров и оценка антиоксидантного статуса) и цит-ратной плазмы (определение общего анализа крови и тиоловых групп). Ис-следование проводили в день забора биоматериала.
Общий анализ крови проводили на микроскопе МикМед, вар.5-20 («ЛОМО», Россия), определения уровня гемоглобина и оценку антиокси-дантного статуса осуществляли на полуавтоматическом биохимическом ана-лизаторе Clima MC-15 («RAL», Испания). В ходе работы использовали набо-ры реагентов для определения глюкозы и ЛПНП, калибраторы и стандарты для клинической лабораторной диагностики: сыворотка контрольная и стан-дартная (Trucal U, Trulab N, Trulab P) компании «Diasys (Диасис)» Россия. 2,4-динитрофенилгидразин – «Panreac», Испания. Все остальные наборы реа-гентов производства «Витал Диагностикс СПб», Россия. Определение уров-ня кальция, натрия и хлоридов проводили на анализаторе электролитов серии АВЛ (AVL 9180; «Roche Diagnostics», Швейцария).
Все методы исследования и расчеты проводили в соответствии с инст-рукцией производителя готового коммерческого набора для определения то-го или иного аналита. В связи с этим далее мы укажем принципы исследова-ния. 2.2.6.2.1. Определение активности аланинаминотрансферазы ки-нетическим методом.
Аланинаминотрансфераза катализирует в присутствии - кетог-лутарата переаминирование L - аланина с образованием пирувата. В присут-ствии лактатдегидрогеназы происходит окисление НАДН. Скорость окисле-ния НАДН прямо пропорциональна активности аланинаминотрансферазы и измеряется фотометрически при длине волны 340 нм. 2.2.6.2.2. Определение активности аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови человека кинетическим методом.
Аспартатаминотрансфераза катализирует в присутствии - ке-тоглутарата переаминирование L-аспартата с образованием оксалоацетата. В присутствии малатдегидрогеназы и оксалоацетата происходит окисление НАДН. Скорость окисления НАДН прямо пропорциональна активности ас-партатаминотрансферазы и измеряется фотометрически при длине волны 340 нм. -Амилаза катализирует реакцию гидролиза субстрата 4,6-этилиден-глюкоза7-п-нитрофенил-глюкоза1--D-мальтогептазида (ЭПС-Г7) с образованием п-нитрофенилолигомальтозидов, которые с участием -глюкозидазы расщепляются до глюкозы и п-нитрофенола. Скорость образо-вания п-нитрофенола прямо пропорциональна активности -амилазы в пробе и измеряется фотометрически при длине волны 405 нм. 2.2.6.2.4. Определения активности гамма-глутамилтрансферазы кинетическим методом. Гамма-глутамилтрансфераза катализирует реакцию переноса глу-таминовой кислоты на акцептор - глицил-глицин, с образованием 5-амино-2-нитробензоата. Скорость образования 5-амино-2-нитробензоата, сопровож-дающаяся повышением оптической плотности образца, прямо пропорцио-нальна активности гамма-глутамил-трансферазы и измеряется фотометриче-ски при длине волны 405 нм.
Щелочная фосфатаза катализирует реакцию гидролиза п-нитрофенилфосфата с образованием эквимолярного количества п-нитрофенола и фосфата. Скорость образования п-нитрофенола прямо про-порциональна активности щелочной фосфатазы и измеряется фотометриче-ски при длине волны 405 нм.
Определения общей активности лактатдегидрогеназы кинетическим методом. Лактатдегидрогеназа катализирует реакцию образования лактата из пирувата с одновременным окислением НАДН. Скорость образования НАД, сопровождающаяся понижением оптической плотности образца, прямо пропор-циональна активности лактатдегидрогеназы и измеряется фотомет-рически при длине волны 340 нм.
Общий билирубин (прямой и неконьюгированный) в присутствии диа-зотированного дихлоранилина вступает в реакцию азосочетания и образует окрашенный в красный цвет комплекс азокрасителя в кислом растворе, ин-тенсивность окраски которого прямо пропорциональна содержанию билиру-бина в пробе и измеряется фотометрически при длине волны 546 нм.
При гидролизе эфиров холестерина холестеринэстеразой образу-ется свободный холестерин. Образовавшийся в результате гидролиза и имеющийся в пробе холестерин окисляется кислородом воздуха под действи-ем холестериноксидазы с образованием эквимолярных количеств перекиси водорода. Под действием пероксидазы перекись водорода окисляет хромо-генные субстраты с образованием окрашенного соединения, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации холестерина в про-бе и измеряется фотометрически при длине волны 500 (480-520) нм.
Действие жидкостей с различным ОВП на желчные камни
Снижение массы пристеночной слизи свидетельствует о нарушениях в процессах синтеза и деградации гликопротеинов пристеночного слизистого слоя, важнейшего защитного механизма желудка (Кривова Н.А.,1994.). В ре-зультате нарушений в процессах биосинтеза гликопротеинов пристеночного слизистого слоя (изменение активности трансфераз) образуются так назы-ваемые незрелые гликопротеины, для которых характерны не полностью сформированные олигосахаридные цепочки, поэтому они не обеспечивают необходимого уровня межмолекулярных взаимодействий и гелеобразования. Эти биосинтетические нарушения становятся причиной несостоятельности защитной функции пристеночного слизистого слоя, нарушения целостности слизистой оболочки желудка и провоцируют развитие острой язвы, которая является симптоматическим поражением и может развиваться в том числе в результате воздействия токсических веществ.
Таким образом, не выявлено достоверного снижения ОВП в массе при-стеночной слизи желудка при приёме внутрь жидкостей с разным окисли-тельно- восстановительным потенциалом в течение 30 дней. Эти данные сви-детельствует о нормальных процессах синтеза и деградации гликопротеинов пристеночного слизистого слоя. Приём анолита или католита не вызывает снижения или увеличения потенциала секреции пристеночной слизи. Масса слизи желудков, помещённых в водопроводную воду меньше чем масса сли-зи желудков, находившихся в физиологическом растворе. Не выявлено дос-товерных отличий в массе пристеночной слизи желудка, помещённого в ка-толит в сравнении с водопроводной водой, а в анолите масса пристеночной слизи достоверно повышена в сравнении с контрольной группой, помещён-ной в водопроводную воду, что свидетельствует о усилении защитного барь-ера желудка
Поскольку изменение ОВП желчи может повлиять на формирование желчных камней, предстяло выяснить прямое длительное (57 суток) влияние жидкостей с разной величиной ОВП на физические свойства таких камней: массу объём, прочность. Эти данные представлены в таблице 2.
Установлено, что холестериновые желчные конкременты после пре-бывания в католите в течение 57 дней массу и объём не меняют. У билиру-бино-холестериновых камней масса возрастает от 1 до 13% , объем возрас-тает от 30 до 100% . Пигментно- бактериальные камни увеличивают свою массу от 8 до 9%, при этом их объем уменьшается от 5 до 14 %. Сложные камни - масса возрастает от 9 до 11% , объем не изменяется. В анолите у холестериновых камней масса возрастает от 5 до 6% (p 0,05), объем не меняется. У билирубино-холестериновых камней масса возрастает от 2 до 5%, объем уменьшается от 11 до 50%. В группе пигмент-но- бактериальных камней масса возрастает от 6 до 13% , объем уменьшает-ся до -14 %. У сложных камней масса возрастает от 4 до 25% , объем увели-чивается от 10 до 40%. Бактериальные камни разрушаются более чем на 50%, что сделало невозможным проведение замеров.
В воде у холестериновых камней масса и объем не меняются. У били-рубино-холестериновых камней масса возрастает от 2 до 24%, объем умень-шается от 0 до 20%. У пигментно- бактериальных камней масса возрастает от 35 до 55%, объем уменьшается от 0 до 17%. У сложных камней масса воз-растает от 6 до 36%, объем увеличивается от 0 до 67%. Бактериальные камни разрушаются более чем на 50%, что сделало невозможным проведение заме-ров. В физиологическом растворе масса и объем у холестериновых камней не меняется. У билирубино- холестериновых камней масса возрастает от 2 до 7% , объем уменьшается от 25 до 33%. Пигментно- бактериальные камни: масса возрастает от 16 до 17% , объем уменьшается от 0 до 25%. Сложные камни - масса убывает на 19 % , объем уменьшается на 10%. Как и в преды-дущих группах бактериальные камни разрушаются более чем на 50%, что де-лает невозможным проведение замеров. Для исследования влияния жидкостей с различным ОВП на структур-ные и качественные характеристики камней была исследована прочность на разрушение. Результаты представлены в таблице 3.
Отличия достоверны, p 0, Из таблицы 3 следует, что достоверных отличий в прочности на разру-шение у жидкостей с различным ОВП нет. При визуальном осмотре разру-шенных объектов было выяснено, что конкременты радиально-слоистой структуры представлены в центральной части пластинчато-радиальным, а во внешней — слоистым строением. Такой переход обусловлен трансформаци-ей размеров зерен холестерина от крупно- до мелкопластинчатых. Слоистое строение обусловлено чередованием концентров, состоящих из игольчатых радиально направленных кристаллов холестерина и чешуйчатого холестери-на, ориентированного по напластованию. В большинстве камней билирубин сконцентрирован к центральным и периферийным частям камня, в камнях же слоистой структуры наблюдается его равномерное распределение по всему объему конкремента. Такая неравномерность структуры объясняет большие различия в прочности на разрушение в различных группах. Таким образом, в результате исследования было выявлено отсутствие влияния на прочность всех видов конкрементов. Большие различия в прочно-сти на разрушение как в группах обусловлены многообразием как морфоло-гических, так и структурных особенностей желчных камней, обусловленное сложностью формирования данных конкрементов. Сложность формирова-ния, в свою очередь, зависит, видимо, от различной периодичности отложе-ний слоев желчных конкрементов. Строение кристаллов холестерина отлич-ных друг от друга (пластинчатые, игольчатые, чешуйчатые) может быть обу-словлено изменением физико-химических параметров камнеобразующей среды. Резюме: при изучении изменений объёма и массы камней инкубиро-ванных в жидкостях с различным ОВП в отличие от воды установлено: 1) у холестериновых камней, помещённых в анолит масса возрастает на 5-6%; 2) у билирубино-холестериновых камней в католите масса возрастает на 3±6%, а объём на 13±5%; 3)у пигментно - бактериальных камней в анолите, физ. растворе и католите увеличение массы меньше в среднем на 10%; 4) у бакте-риальных камней наблюдалась равномерная самопроизвольная деструкция во всех растворах. Кроме того, выявлено отсутствие влияния жидкостей с раз-личным ОВП на прочность всех видов конкрементов.
Индометациновая (энтеральная) модель язвенного поражения желудка белых неинбредных крыс
Исследование проводилось на 60 белых крысах (m=240-340г); Для индуцирования хронического гепатита CCl4 50% масляный вводи-ли из рассчета 1мл/кг массы крысы в течении 5 недель (2 раза в неделю). Од-новременно животные получали «лечение» препаратом карсил, католитом, анолитом и комбинациями жидкостей с различным ОВП с карсилом. Живот-ные контрольной группы не получали лечения.
Анализ экспериментальных данных показал, что такое введение CCl4 без последующего лечения повышает активность АлАТ и АсАТ в плазме со-ответственно в 2,4 и 1,2 раза при р 0,05 в сравнении с интактными живот-ными. Данное звено патогенеза при токсическом воздействии характеризует синдром цитолиза и обусловлено повышением проницаемости плазматиче-ских мембран гепатоцитов. Как следствие нарушения целостности белковых структур клетки изменяется внутри- и внеклеточный баланса электролитов. Интоксикация CCl4 характеризуется повышенным образованием билирубина эритроцитарного звена и ингибированием экскреции внутрипеченочного зве-на данного пигмента. В данной серии опытов отмечалось повышение уровня общего билирубина в сыворотке крови соответственно в 1,3 и 2,8 раза (при р 0,05) по сравнению с интактной группой животных. Уровень ЩФ возрас-тает в сыворотке крови в 1,6 раза по сравнению с интактными животными, что свидетельствует о нарушениях кальций — фосфорного обмена. Свободные радикалы являются активными участниками большого чис-ла химических реакций, протекающих в клетках. Они необходимы для под-держания гомеостаза аэробных организмов. Продукты ПОЛ в малых концен-трациях оказывают физиологическое действие и необходимы для проницае-мости клеточных мембран, стабильности липопротеиновых комплексов, об-новления фосфолигшдного состава мембран, а также регуляции фаго- и пи-ноцитоза. Из вышеизложенного следует, что свободнорадикальное окисление (СРО) при достаточно низкой его интенсивности относится к нормальным метаболическим процессам [Абрамченко В.В., 2001]. Однако в ряде случаев в результате воздействия на организм экзогенных или эндогенных факторов происходит инициация СРО, что сопровождается повышенным образования свободных радикалов, истощением эндогенной антиоксидантной системы и может быть непосредственной причиной развития многих патологических состояний или способствовать их формированию [Абдусаматов А.А., Азизо-ва С.С., 1989].
Как известно, в печени обезвреживаются токсические вещества экзо-генного происхождения (ксенобиотики). Поступление в организм ксенобио-тиков различной природы усиливает свободнорадикальные процессы и обу-словленное ими перекисное окисление липидов (ПОЛ). Это относится и к случаям отравления организма тетрахлоридом углерода [Гонский Я.И. с со-авт., 1996].
Морфометрический анализ нормальной и ТХМ измененной печени по-казал, что доля паренхимы при нормальной печени уменьшилась на 5%, а до-ля соединительной ткани увеличивалась в 4,2 раза по сравнению с нормой (табл. 15). В результате, паренхима в нормальной печени занимала 88%, а в ТХМ измененной - 83%. Таблица 16. Некоторые морфометричсские параметры печени крыс интактной и опытных групп (M±m, n = 5)
Как видно из таблицы 16, интоксикация тетрахлоридом углерода жи-вотных в контрольной группе инициировала увеличение соединительной ткани в 2 раза по отношению к показателю группы интактных животных (р 0,05). Как видно из таблицы, что в группе животных, которые получали вме-сто питьевой воды анолит, наблюдается резкое увеличение билирубина по сравнению с контрольной группой.
При анализе полученных при моделировании хронического гепатита и его лечения показателей крови (таб. 12) статистически достоверно в сравне-нии с контрольной группой: -группе животных которая получала вместо питьевой воды раститель-ный гепатопротектор карсил, который был выбран нами в качестве препарата сравнения, наблюдается уменьшение значений тимоловой пробы. -группе животных которая получала лечение жидкостью с отрицатель-ным ОВП (католит вместо питьевой воды) наблюдается увеличение уровня белка и увеличение активности щелочной фосфатазы, а также уменьшение тимоловой пробы. -группе животных которая получала лечение жидкостью с положи-тельным ОВП (анолит вместо питьевой воды) наблюдается увеличение уров-ня билирубина, и уменьшение тимоловой пробы и уровня холестерина. -группе животных которая получала комбинированное лечение карси-лом и жидкостью с отрицательным ОВП наблюдается снижение уровня холе-стерина и повышение уровня щелочной фосфатазы. -группе животных которая получала комбинированное лечение карси-лом и жидкостью с положительным ОВП наблюдается снижение активности АлАТ, АсАТ, холестерина, щелочной фосфатазы и тимоловой пробы, при этом выявлено повышение активности ЛДГ.
Похожие диссертации на Влияние жидкостей с различным окислительно-восстановительныи потенциалом на органы желудочно-кишесного тракта
-
![Иммунологические особенности больных с новообразованиями органов пищеварительного тракта, выявленными миниинвазивными хирургическими методами [Электронный ресурс]](/i/i/4478/202251.png "Иммунологические особенности больных с новообразованиями органов пищеварительного тракта, выявленными миниинвазивными хирургическими методами [Электронный ресурс] Рудаков Дмитрий Михайлович")
