Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Обзор литературы 14
1.1 Механизмы подавления иммунитета и уклонения микроорганизмов от факторов защиты хозяина 16
1.2 Состояние естественной резистентности и иммунитета хозяина при бактерионосительстве 52
Глава 2 Материалы и методы 61
Глава 3 Биохимические критерии биологических жидкостей человека, определяемые при бактерионосительстве 72
3.1 Определение уровня лактоферрина в сыворотке крови бактерионосителей 72
3.2 Определение уровня интерлейкинов 8 и 10 в сыворотке крови и спермоплазме бактерионосителей 74
3.3 Прогностические маркеры иммунного статуса бактерионосителей, основанные на реакции преципитации 78
3.4 Бактерицидная активность сыворотки крови бактерионосителей
3.5 Бактерицидная активность спермы бактерионосителей 88
Глава 4 Биохимические критерии микроорганизмов, определяемые при бактерионосительстве 93
4.1 Адгезивная активность микроорганизмов 93
4.2 Антииммуноглобулиновая активность микроорганизмов 95
4.3 Липазная активность микроорганизмов 97
4.4 Синтез лактоферриноподобного белка бактериями и определение устойчивости микроорганизмов к лактоферрину 98
4.5 Определение устойчивости микроорганизмов к спермину и спермидину. 105
4.6 Способность микроорганизмов противостоять бактерицидной активности сыворотки 108
4.7 РНКазная активность микроорганизмов 109
4.8 Лизоцимная и антилизоцимная активность микроорганизмов 113
Глава 5 Изменения биопрофиля бактерий в антропогенных условиях 117
Глава 6 Воздействие поллютантов на выживаемость микроорганизмов 123
Глава 7 Изменение факторов персистенции под воздействием поллютантов 127
7.1 Воздействие диэтаноламина на персистентные свойства микроорганизмов 127
7.2 Воздействие фенола на персистентные свойства микроорганизмов 130
7.3 Воздействие азотной и серной кислот на персистентные свойства микроорганизмов 132
Глава 8 Конструирование питательной среды для выделения Klebsiella pneumoniae и ее апробация 136
8.1 Подбор индикаторной системы и ингибиторов посторонней флоры 136
8.2 Апробация среды 142
Обсуждение 146
Выводы 173
Практические рекомендации 175
Список использованной литературы
- Состояние естественной резистентности и иммунитета хозяина при бактерионосительстве
- Определение уровня интерлейкинов 8 и 10 в сыворотке крови и спермоплазме бактерионосителей
- Антииммуноглобулиновая активность микроорганизмов
- Воздействие фенола на персистентные свойства микроорганизмов
Состояние естественной резистентности и иммунитета хозяина при бактерионосительстве
В организме бактерионосителей происходит селекция особой разновидности возбудителя - носительских штаммов - со специфическим набором биохимических свойств (факторов метаболизма, экологии, патогенности, персистенции, иммуногенности и т. д.), позволяющих преодолеть колонизационную резистентность хозяина и обеспечить персистирование в организме [190, 209, 210, 215]. Как правило, при бактерионосительстве персистируют штаммы с пониженной вирулентностью. В межэпидемический период в стадии резервации у длительных носителей стрептококка среди последних выделяли штаммы с пониженной вирулентностью. [177, 202]. Уставлено, что штаммы стафилококка, выделенные от больных хронической пиодермией со слизистой оболочки носоглотки, чаще, чем штаммы из очагов поражения, проявляли полирезистептность к антибиотикам, одновременно они имели большие размеры и толщину клеточной стенки [136, 159, 207].
Переход микробной популяции менингококка от фазы эпидемии к фазе резервации сопровождался изменением антигенности и вирулентности возбудителя: это проявлялось в утрате капсулы и поверхностных полисахаридов, что вызывало снижение вирулентнсти, полиагглютинабельности, позволяя возбудителю длительно персистировать в организме [246, 343]. Штаммы менингококка, выделенные от бактерионосителе образовывали мутные колонии (штаммы от больных — прозрачные колонии), были менее устойчивы к бактерицидной активности сыворотки (БАС) и сильнее связывались с клетками слизистой оболочки, чем штаммы от больных [130, 131].
Бактерионосительство нетоксигенных штаммов дифтерийных бактерий более длительно, чем токсигенных. У здоровых лиц преимущественно циркулируют нетоксигенные, серологически не типируемые (73 %) культур Cor. diphtheriae. Штаммы S. typhi, выделенные от больных, оказались более вирулентными, с более выраженной гетерогенностью по вирулентности по сравнению со штаммами от хронических бактерионосителей. [10, 11, 20, 120].
Средняя вирулентность шигелл Зонне, выделенных от бактерионосителей, в 10 раз ниже, чем штаммов от больных. В организме бактерионосителей происходит селекция авирулентных особей популяции. При среднетяжелой форме дизентерии было выделено больше высоковирулентных штаммов, чем от бактерионосителей [49, 104, 332]. При бактерионосительстве может существенно меняться метаболическая активность бактерий. Бактериостаз в организме рассматривается как один из показателей персистенции, причем это может быть истинный бактериостаз либо динамическое равновесие между числом погибающих и накапливающихся бактериальных клеток. Однако до сих пор не ясно, каковы взаимоотношения факторов вирулентности и персистенции популяционнои структуры патогена по факторам вирулентности и персистенции в условиях колонизации хозяина при разных типах инфекции [179, 192, 212, 221, 265, 357].
Известно, что затяжные формы инфекционного процесса обусловливаются резервационной фазой развития популяций микроорганизмов, при которой отмечается снижение численности возбудителя и его вирулентности. Изучена связь антилизоцимной активности стафилококка с факторами патогенности, а также динамика маркеров патогенности и антилизоцимной активности (АЛА) в ходе инфекционного процесса. Выявилась обратная корреляционная зависимость между уровнем АЛА клонов стафилококка и количеством клонов с факторами патогенности: гемолитической, фибринолитической и лецитовителлазной активностью [53, 166]. При острой форме инфекции отмечена прямая зависимость между развитием факторов патогенности и динамикой числа низкоантилизоцимных субпопуляций. При персистирующей форме инфекционного процесса динамика факторов патогенности стафилококка обратно пропорциональна динамике количества высокоантилизоцимных субпопуляций [159].
Выявленное закономерное снижение в популяции золотистого стафилококка количества патогенных особей при инфекции, но с нарастанием количества персистентных вариантов, вероятно, имеет определенный биологический смысл. Возбудителю нет смысла «губить» своего хозяина, так как он лишится экологической ниши. Гораздо выгоднее создать себе устойчивое равновесие с организмом, обеспечить персистирование, снизив свою вирулентность [28]. Одна из наиболее серьезных работ по систематизации персистенции бактерий - исследование Н. Smith (1984), где определяются семь основных тактических решений для бактериальной клетки, борющейся за выживание в организме хозяина [333]. Автор представляет их в следующем виде. 1. Продукция вирулентных детерминант со слабой антигенностью. 2. Антигенный сдвиг компонентов поверхности. 3. Гидролиз антител бактериальными протеазами. 4. Секвестрация в клетках, не являющихся профессиональными фагоцитами. 5. Выживание в макрофагах, у которых механизмы уничтожения нарушены факторами бактериальной вирулентности. 6. Убежище в иммунодефицитных сайтах. 7. Образование дефектных клеточных стенок (L-форм). В принципе, данная классификация построена на обширной эмпирической основе известных способов переживания патогенных бактерий в организме и определяется, с одной стороны, физиологическими особенностями микроорганизмов, а с другой - дефектностью защитных механизмов хозяина.
Эта же эмпирическая основа просматривается и в обзоре А. А. Обгольца (1992), посвященном обсуждению механизмов персистенции бактерий [27].
Относя к персистирующим свойствам бактерий «комплекс различных признаков атакующего и защитного характера, обеспечивающих возбудителю длительное выживание в организме хозяина», автор резонно отмечает, что в ходе инфекции лишь ограниченная часть популяции патогена удерживается в организме, тогда как основная часть микроорганизмов элиминируется из организма в результате гибели или бактериовыделения. Именно эта ограниченная часть популяции и закрепляется у хозяина, используя два основных механизма: уклонение от факторов защиты и подавление их, что обуславливает и две соответствующие формы клинического проявления персистирования - бессимптомное или манифестное, которые могут переходить друг в друга в зависимости от состояния участников процесса.
Определение уровня интерлейкинов 8 и 10 в сыворотке крови и спермоплазме бактерионосителей
Напряженный антитоксический иммунитет против дифтерии у детей не является препятствием для циркуляции вирулентных штаммов дифтерии в иммунных коллективах, уровень бактерионосительства зависит только от состояния антибактериального иммунитета [27, 131, 325].
Обнаружено значительное снижение классов IgG и IgA в сыворотке вибрионосителей при холере в отличие от больных. Приводятся и противоположные: в сыворотке крови вибрионосителей — высокое содержание IgM, IgG, IgA; есть антитела против О-антигена и энтеротоксина; по концентрации антител выздоровевшие от холеры и носители не различаются. Вместе с тем у вибрионосителей имеет место нарушение антиферментного иммунитета — не образуются антитела против ключевых ферментов метаболического цикла V. cholerae, что способствует выживанию патогена в экологической нише (тонкой кишке, желчном пузыре) [114, 249] .
Носительство гемолитического стрептококка, как и стафилококка, дифтерийной палочки, развивается обычно на фоне напряженного антитоксического иммунитета. Однако у стрептококковых бактерионосителей обнаружены не столько количественные изменения отдельных иммунологических тестов, сколько разный характер их соотношения друг с другом, т. е. формируется, как и при других этиологических формах бактерионосительства, иммунологический дисбаланс. Например, нарушена взаимосвязь между гуморальными показателями неспецифической резистентности и уровнем IgG, IgM, IgA, а также между гуморальными тестами (БАСК, лизоцим, классы иммуноглобулинов) и фагоцитарной активностью нейтрофилов [160].
При хроническом бактерионосительстве, как правило, развивается гиперчувствительность замедленного типа — проявление специфической иммунологической реактивности организма. В формировании брюшнотифозного бактерионосительства, особенно его хронической формы, имеет значение выраженная аллергия, уровень которой выявляется по нарастанию показателя повреждения нейтрофилов (ИНН). Гиперчувствительность замедленного типа формируется у всех носителей как патогенных, так и условно-патогенных видов стафилококков. У детей при хронических заболеваниях носоглотки в 2 раза чаще формируются затяжные формы дифтерийного, стрептококкового и стафилококкового бактерионосительства, чем без патологии. При этом развивается аллергия к данным возбудителям [17, 160, 169,262,274].
Особенности иммуногенеза при длительном бактерионосительстве, персистенции возбудителя были изучены на моделях экспериментальной инфекции. Они подтверждают данные клинико-лабораторных исследований. На примере стафилококковой и сальмонеллезной экспериментальной инфекции показано, что при ослаблении иммунитета увеличивается число клонов бактерий с максимальным набором признаков вирулентности и, наоборот, в иммунном организме происходит селекция клонов с пониженной вирулентностью, что способствует их персистенции [28].
При персистентной форме экспериментальной, стафилококковой инфекции происходят значительные изменения иммунного статуса: возрастает титр специфических антител, формируется ГЗТ, значительно снижается активность лизоцима сыворотки крови; уровни БАСК и комплемента существенно не меняются. В организме новорожденных крысят развивалось состояние иммунологической толерантности к стафилококку за счет трансплацентарной передачи стафилококковых антигенов, в результате у крысят формировалась псрсистенция индикаторных стафилококков в кишечнике [27].
На формирование микробного биоценоза и условия колонизации слизистых оболочек оказывают существенное влияние факторы местного иммунитета. Наличие высоконапряженного антитоксического иммунитета не препятствует колонизации слизистой носоглотки токсигенным штаммом дифтерийной палочки. Для предотвращения дифтерийного бактерионосительства необходим высокий уровень местного иммунитета. Титры лизоцима сыворотки крови не различались у носителей и неносителей патогенных стафилококков, однако содержание лизоцима в слюне было выше у носителей лизоцимобразующих стафилококков, чем у здоровых лиц: 1567,2 и 982,9 мгк/мл соответственно [177].
Описана GALT-система — взаимодействие иммунных клеток кишечника с нормальной микрофлорой. Эта система включает комплекс факторов, регулирующих микробный биоценоз: секреторные иммуноглобулины, лактоферрин, лизоцим, комплемент, пропердин, интерферон, лимфоциты. Дефицит этих факторов создает условия к формированию бактерионосительства [21, 27].
Полагают, что в патогенезе резидентного стафилококкового бактерионосительства важную роль играет формирование недостаточности местного иммунитета слизистых оболочек верхних дыхательных путей, в частности нарушение синтеза секреторного IgA. Дефицит секреторного IgA способствует формированию длительного бактерионосительства при сальмонеллезах [261, 356]. Как известно, в основе биологической природы патогенности лежит конкурентный характер взаимодействия возбудителя с организмом хозяина. На начальном этапе инфекционного процесса возбудителю необходимо реализовать функцию самозащиты не только от нормальной микрофлоры организма, но и от факторов местного иммунитета. У паразитов есть ферменты-антипротеазы, направленные на инактивацию протеолитических ферментов хозяина. При стафилококковом носительстве снижена концентрация IgA в носовом секрете, изменяется активность антимикробных ферментов: ДНКазы, РНКазы, мурамидазы и пероксидазы. Например, у 47,3 % бактерионосителей отсутствует пероксидаза в одной либо в обеих половинах полости носа [17,19, 31, 98].
Антииммуноглобулиновая активность микроорганизмов
В отличие от сыворотки крови, не имеющей микрофлоры в норме, различные бактерии достаточно часто выделяются из многих биологических жидкостей, но антимикробные свойства этих сред не позволяют развиться восходящей инфекции. В частности, в процессе набора культур их значительная часть была выделена нами из спермы субфертильных мужчин. В связи с этим мы решили установить наличие, либо отсутствие бактерицидной активности спермы (БАСп), которую можно было бы отнести к факторам естественной резистентности организма контролирующую выживание бактерий в урогенитальном тракте мужчин [72].
Бактерицидная активность спермы определялась предлагаемым нами методом, который включает два способа определения бактерицидной активности спермы (БАСп) Способ 1. 1. Готовится взвесь тест-культуры в концентрации 1x10" . 2. В первую пробирку вносят 0,2 мл спермы и 0,3 мл питательного бульона (контроль № 1). 3. Во вторую пробирку вносят 0,2 мл питательного бульона и 0,3 мл бактериальной взвеси (контроль № 2). 4. В третью пробирку вносят 0,2 мл спермы и 0,3 мл взвеси тест-культуры. Данная пробирка является опытной. 5. Инкубируем пробирки в течение 30 мин при 37С. 6. Останавливаем бактерицидную реакцию разведением по всем пробам 5 мл питательного бульона. 7. Инкубируем при 37С 2ч 20 мин. 8. Для выявления выживших бактерий определяем оптическую плотность на фотоэлектрокалориметре. 9. Обозначаем полученный результат в контроле №1 как А. В контроле №2 как В. В опыте как С. 10. Бактерицидная активность спермы рассчитывается по формуле: БАСп = (С-(А + В))х 100 Способ 2 1. В качестве контроля № 1 проводим посев 0,1 мл спермы. 2. По стандарту мутности приготовляется взвесь микроорганизмов в 0,5% растворе хлорида натрия в концентрации 1,0x109 м.т./мл (микробных тел в 1 мл). 3. Разводится взвесь бактерий до концентрации 1,0x103 м.т./мл 4. В пробирку помещают ОД мл спермы и ОД мл взвеси. Параллельно проводится постановка контроля №2 - ОД мл взвеси инкубируют с ОД мл питательного бульона. 5. Смеси инкубируют в термостате при 37С в течение 30 минут. 6. Проводится высев бактерий на агаровую среду для выделения тест культуры, разлитую в чашки Петри. 7. Инкубация посева при 37С в течение 24 ч. 8. Подсчет колоний. Число колоний в контроле №1 обозначаем А. Число колоний в контроле №2, обозначаем как Б. Число колоний в опыте обозначаем как С. 9. Бактерицидная активность спермы рассчитывается по формуле: БАСп = (С - (А + В)) х 100 В процессе работы было установлено, что сперма обладает бактерицидными свойствами, но не у всех обследованных. У 50 % пациентов сперма достоверно подавляла рост тест-культуры в сравнении с контролем. В связи с тем, что эякулят оценивался по 16 параметрам, мы постарались выявить существующие взаимосвязи между БАСп и каким-либо из них.
Было выявлено, что наибольшей бактерицидной активностью обладала сперма молодых мужчин: среди доноров в возрасте 32 лет и моложе, половина и более клеток тест-культуры была инактивированна в 70 % случаев. В то время как среди доноров старше 32 лет, высокая бактерицидная активность спермы установлена только в 35,7 % случаев. Однако нельзя утверждать, что с возрастом БАСп исчезает вовсе. Она встречается примерно одинаково в обеих возрастных группах: у 46,5 % доноров в возрасте 32 года и моложе и у 56 % доноров старшего возраста. Таким образом, в старших возрастных группах, бактерицидная активность спермы сохраняется, но активность систем, ее обеспечивающих, судя по всему, постепенно снижается.
Уровень БАСп при различных видах бактерионосительства представлен в таблице 9. Установлено, что существует определенная зависимость между наличием БАСп и вязкостью эякулята. У пациентов, вязкость спермы которых превышала отметку 6,5 см, сперма бактерицидными свойствами не обладала. Таблица 9 Уровень БАСп при различных видах бактерионосительства (М±т, в %) Вид носительства Кол-вообследованных(п) БАСп(% выжившихклеток) % от нормы Достоверностьразличий с нормальными показателями Не носители 50 88,6±3,1 S.aureus резидентный ПО 28,4±2,27 32,5 0,01 S.aureus транзиторный 124 58,1±2,56 65,6 0,05 S.epidermidis резидентный 116 14,2±0,27 16,03 0,001 S.epidermidis транзиторный 126 39,7,0±1,6 44,8 0,01 Следует заметить, что носительство всех видов стафилококков сопровождалось целым рядом изменений параметров, входящих в стандартную, по рекомендации ВОЗ, спермограмму и отражающих репродуктивное здоровье человека.
Резидентное носительство S.aureus сопровождалось выраженным лейкоцитозом — 2,125 млн/мл, что с достоверностью (р 0,001) превышает нормальные показатели, незначительным увеличением патологических форм сперматозоидов (в среднем до 44%), сперматозоидов с цитоплазматической каплей (до 4,5), появлением агглютинатов (до 2) и некоторым увеличением времени разжижения эякулята. Транзиторное носительство так же характеризовалось выраженным лейкоцитозом 1,917 млн/мл р 0,01 по сравнению с нормой и увеличением общего- количества сперматозоидов — в среднем до 112 млн/мл при 40 - 60 млн/мл у здоровых мужчин (р 0,01 ).
При резидентном носительстве S.epidermidis обращает внимание уменьшение до нижних границ нормы объема эякулята (в среднем до 2,9 мл) и общего количества сперматозоидов (до 41,8 млн/мл), наличием агглютинатов, агрегатов и так же повышенного по сравнению с нормой количеством лейкоцитов - 1,55 млн/мл (р 0,05). Так при транзиторном носительстве S.epidermidis, лейкоциты сохраняются в пределах нормы. Это может свидетельствовать о том, что ответственны за выработку интерлейкинов в репродуктивной системе, скорее всего эндотелиальные клетки и другие продуценты, а не только лейкоциты, либо имеет место сильная индуцированная реакция. Наряду с этим отмечено увеличение объема эякулята (до 5,9 мл), общего количества сперматозоидов (до 84,5 млн/мл), наличием агглютинатов и агрегатов, но с меньшей достоверностью (р 0,05), чем при резидентном носительстве этого же вида стафилококков. Наиболее же существенно отличается от нормы показатель вязкости, составляющий у не носителей 0,1 — 0,2, а у транзиторных носителей S.epidermidis - 1,05.
Воздействие фенола на персистентные свойства микроорганизмов
Этаноламиньт — органические соединения алифатического жирного ряда содержащие в молекуле амино- и гидроксильную группу.
Вторым представителем гомологичного ряда первичных аминоспиртов является диэтаноламин - С4Н11NO или 2,2-дигидроксидиэтиламин. В настоящее время ДЭА широко используется в нефте- и газоперерабатывающей промышленности как поглотитель кислых газов, в первую очередь, сероводорода, С02, диоксида серы S02, в синтезе лекарственных препаратов, производстве моющих средств. Содержится в выбросах производств: нефтехимических, формацевтических, органического синтеза, ПАВ, резинотехнических, текстильных, парфюмерных, пестицидов, ингибиторов коррозии.
Установлена ПДК ДЭА для водоемов общего водопользования - 0,8 мг/л, лимитирующий фактор - органолептический и ПДК для воды рыбохозяйственных водоемов - 0,01 мг/л. Сведения о токсических свойствах для живых организмов этого химического соединения практически отсутствуют. Однако, в связи с особенностями производственных процессов различные искусственные и, что более важно, естественные водоемы подвергаются контакту с ним, в то время как воздействие ДЭА на водную экосистему нельзя считать однозначным [39].
Мы изучали влияние этого весьма важного и перспективного в различных производствах вещества на биохимические свойства микроорганизмов, являющихся, как известно, наиболее многочисленными сочленами водной экосистемы [103, 115, 126, 135].
Определялись липазная активность, адгезивная (индекс адгезии микроорганизмов, коэффициент адгезии и средний показатель адгезии бактерий), антииммуноглобулиновая, РНК-азная, лизоцимная и антилизоцимная активности, способность микроорганизмов противостоять бактерицидному действию сыворотки, способность бактерий к синтезу лактоферриноподобного белка и чувствительность бактерий к ЛФ (Таблица 22).
В ходе проведенного эксперимента было установлено, что бактерии, прошедшие предварительную инкубацию с ДЭА, по своим свойствам существенно отличаются от контрольных вариантов. Различия выявлены при сравнении проявлений антилизоцимной активности микроорганизмов (р 0,001), индекса адгезии микроорганизмов, коэффициента адгезии и среднего показателя адгезии (р 0,01). РНК-азной, липазной, антииммуноглобулиновой (Ig G) активностей, а также способность штаммов клебсиелл, прошедших инкубацию к преодолению бактерицидной активности сыворотки (р 0,05) с
Фенолы С6Н50Н и их замещенные производные широко применяют как дезинфектанты, в меньшей концентрации - как эффективные антисептики. Антибактериальные свойства фенола и его производных обусловлены тем, что эти препараты денатурируют белки и нарушают структуру клеточной стенки микроорганизмов [71, 82].
Влияние, оказанное раствором на уровне ПДК фенола (0,25 мг/л) на бактериальную клетку, выглядит следующим образом (Таблица 23).
Липазная активность существенно снизилась: достоверность различий составляет (р 0,01). РНК-азная активность культур после контакта с фенолом, напротив, повысилась (р 0,05). Так же возросла и способность клебсиелл противостоять бактерицидной активности сыворотки и их антииммуноглобулиновая активность (р 0,05). Адгезивная активность также возросла по всем параметрам (р 0,05). Продукция лизоцима бактериями из опытной группы различалась с контрольной (р 0,05) и антилизоцимной активностью опытные варианты обладали в большей степени (р 0,01). Аналогичные изменения выявлены и по отношению к БЛФ и ЛФ. Опытные варианты производили больше БЛФ, они же были устойчивее к ЛФ по сравнению с контрольными (р 0,05).
Полученные результаты свидетельствуют, что вещества, вызывающие наибольшее подавление жизнедеятельности микроорганизмов, могут, с другой стороны, вызывать у них изменения, не предполагавшиеся ранее. В нашем случае раствор фенола, известный как карболовая кислота и сильный антисептик, взятый на уровне ПДК, действует в некотором роде по принципу "все или ничего", т.е. либо абсолютно, вплоть до уничтожения, подавляет активность микроорганизмов, либо так деформирует их фенотипические свойства, что они приобретают дополнительную возможность подавлять защитные функции макроорганизма.
Соединения, возникающие после попадания азотной и серной кислот в воду, часто встречаются в природе. Вполне возможно, что после добавления в водопроводную воду азотной кислоты образующиеся вещества, которые могут являться еще одним дополнительным источником азота для бактерий. Наряду с этим известна целая группа микроорганизмов, активно использующая различные соединения серы в процессе своей жизнедеятельности [127, 128].
С другой стороны, и серная и азотная кислоты - компоненты кислотных дождей, которые, попадая в крайне динамичную в химическом плане водную среду, могут претерпевать различные изменения, ухудшающие существование биотических форм.
В связи с вышеперечисленным, воздействие азотной и серной кислот на патогенный потенциал бактерий в водной среде представляет, на наш взгляд, несомненный интерес.
Влияние, оказываемое азотной и серной кислотами на клебсиеллы, выглядит следующим образом: липазная активность снизилась в опыте с азотной кислотой (р 0,05) и повысилась в опыте с серной (р 0,05). Установление различий показало, что РНКазная активность культур после контакта с серной кислотой также существенно повысилась (р 0,05). РНКазная активность клебсиелл после контакта с азотной кислотой имеет ту же направленность (р 0,05). Возросла способность клебсиелл противостоять бактерицидной активности сыворотки (р 0,05) и их антииммуноглобулиновая активность после контакта с кислотами (р 0,05). Адгезивная активность также возросла (р 0,05). Продукция лизоцима бактериями из обеих опытных групп различалась с контрольной (р 0,01 в опыте с использованием серной кислоты и р 0,05 в опыте с использованием азотной кислоты); антилизоцимной активностью опытные варианты обладали значительно в большей степени (р 0,01). Аналогичные изменения выявлены и по отношению к БЛФ и ЛФ: опытные варианты продуцировали БЛФ больше (р 0,05 в обеих группах). Они же были устойчивее к ЛФ по сравнению с контрольными (р 0,05 также в обеих группах).
Таким образом, нами было установлено преимущественно стимулирующее влияние использованных в эксперименте растворов азотной и серной кислот на маркеры вирулентности изучаемых культур.
Похожие диссертации на Биохимические критерии бактерионосительства
