Введение к работе
Актуальность темы
Статистические данные о распространении РТМ также не являются утешительными Рак эндометрия занимает первое место в структуре онкогинекологических заболеваний в странах Европы и Северной Америки [Parkin М et al, 2001].
При раке тела матки (РТМ) особый интерес вызывают факторы естественной резистентности организма, в частности эффекторная функция естественных киллерных клеток (NK-клеток) Опухолеассоииированные антигены, являясь продуктами собственного генома, не могут быть распознаны иммунной системой, как чужеродные и не вызывают запуска иммунного ответа [Lanier L L , 1998] Особенностью эффекторной активности NK-клеток является отсутствие связи с распознаванием антигенных детерминант Однако, данная функция рестриктирована многими другими параметрами, как самой NK-клетки, так и ее мишенью.
В настоящее время благодаря повышению качества диагностики в 75% случаев выявляется первая стадия заболевания. Чаще всего производится радикальное хирургическое вмешательство (циторедуктивное). Однако даже в первой стадии заболевания существуют различия, как в клиническом течении заболевания, так и в гистопатологических вариантах опухоли
Основными классическими прогностическими критериям РТМ являются' степень дифференцировки ткани аденокарциномы, глубина инвазии новообразования в эндометрий и стадия процесса [Бохман Я. В, 2002].
По данным литературы выявлены и другие прогностически значимые критерии течения онкологических заболеваний, как-то уровень экспрессии про- и противоапоптотических белков в клетках опухоли, экспрессия CD95 антигенов, а также степень кариотипической гетерогенности опухолевых клеток Исследования параметров врожденного и приобретенного иммунитета становятся все более актуальными ввиду доказанных механизмов взаимодействия иммунокомпетентных клеток с клетками опухоли
В работах, посвященных изучению параметров иммунитета при РТМ, некоторыми исследователями ошечается снижение цитотоксической активности NK-клеток [Венсдиктова М Г. 2001].
Особый интерес представляет изучение взаимосвязи эффекторной активности NK-клеток, их количественных показателей с ведущими прогностическими критериям изучаемого заболевания, такими, как степень дифференцировки ткани аденокарциномы, глубина инвазии новообразования в эндометрий и стадия процесса. В связи с выше сказанным была сформулирована цель исследования.
Цель исследования: оценить взаимосвязь цитотоксической активности NK-клеток и их количественных характеристик с основными прогностическими критериями аденокарциномы эндометрия, степенью кариотипической гетерогенности, а также уровнем экспрессии клетками аденокарцином проапоптотических и противоапоптотических маркеров
fOC. НАЦИОНАЛЬНА*!
і БИБЛИОТЕКА I
з і S"STSfl \
Задачи исследования'
-
Изучить экспрессию поверхностных маркеров NK-клеток (0056*16", CD56"16*, CD56*16*) периферической крови пациентов с I стадией РТМ в сопоставлении с аналогичными параметрами в группе женшин без неопластических заболеваний (группой сравнения)
-
Оценить спонтанную и индуцированную цитотоксическую активность NK-клеток у пациентов с аденокарциномами эндометрия и сопоставить ее с группой сравнения
-
Определить спонтанный и индуцированный уровни продукции П.-2, IL-6, П-8, TNFa, IFNy мононуклеарами периферической крови (МНПК) пациентов, обследуемых групп и установить их взаимосвязь с цитотоксической активностью NK-клеток.
-
Исследовать влияние фармакопейного препарата П.2 (Ронколейкина) на эффекторную функцию NK-клеток m vitro.
-
Выявить взаимосвязь спонтанной и индуцированной цитотоксической
активности NK-клеток со стадией процесса, морфологией и гистологией аденокарцином у пациентов с I стадией РТМ.
6 Оценить относительное количество клеток аденокарцином, экспрессирующих bcl-2 и CD95 и
выявить взаимосвязь полученных значений с уровнем цитотоксической активности NK-клеток.
Научная новизна:
Разработан метод определения цитотоксической активности NK-клеток с использованием проточной
ДНК-цитометрии, обладающий воспроизводимостью, точностью, безопасностью
Разработанный метод позволил установить достоверное снижение эффекторной активности NK-клеток у
пациентов с I стадией РТМ в сопоставлении с группой сравнения.
Снижение цитотоксической активности NK клеток происходит по мере повышения стадии заболевания,
увеличения глубины инвазии опухоли в эндометрий и уменьшения степени дифференцировки
аденокарциноми.
Установлено, что снижение эффекторной активности NK-клеток связано с достоверным снижением
субпопуляции клеток с фенотипом CD16*CD56", обладающей высоким цитотоксическим потенциалом и
увеличением субпопуляции СШ6"56\ чьей основной функцией является регуляторная
Выявлены достоверные корреляционные связи между уровнями спонтанной цитотоксической
активности и спонтанной продукции TJL2 (прямая) и IL-8 (обратная).
Подтверждена эффективность EL-2 (препарата Ронколейкин) в повышении уровня цитотоксической
активности NK-клеток in vitro у пациентов с аденокарциномой эндометрия.
Практическая значимость:
Разработанный метод определения цитотоксической активности NK-клеток с использованием проточной ДНК-цитометрии позволяет еще в дооперационном периоде определить предположительный прогноз заболевания и оптимизировать послеоперационный мониторинг пациентов с РТМ. Определение Спонтанной и индуцированной цитотоксической активности NK-клеток позволяет выявить
потенциал цитотоксической активности клеток-эффекторов и принять своевременное решение о назначении иммуномодулируюшей терапии.
Определение повышенных уровней спонтанной продукции TL-8 и TNFa позволяет предположить наличие инвазии аденокарциномы в эндометрий.
Внедрение в практику: метод исследования спонтанной цитотоксической активности NK-клеток внедрен в практику НИЛ клеточного и гуморального ВЦЭРМ МЧС России.
Положения выносимые на зашиту:
^ 1 Снижение спонтанной цитотоксической активности NK-клеток обратно умеренно коррелирует с
основными прогностическими признаками РТМ' увеличением глубины инвазии, снижением степени дифференцировки и прогрессированим стадии заболевания, что позволяет рассма гривать этот параметр как дополнительный критерий прогноза РТМ.
-
Снижение спонтанной цитотоксической активности NK-клеток на фоне прогресса РТМ обусловлено преобладанием субпопуляции клеток-эффекторов с фенотипом CD16'56*.
-
Прирост клеток-эффекторов с фенотипом CD16*56' в группах пациентов с 1а стадией РТМ и/или высокой степенью дифференцировки ткани аденокарцином обеспечивает поддержание референтных ліачений спонтанной цитотоксической активности NK-клеток в этих группах.
4 Под воздействием препарата Ронколейкин в условиях in vitro происходит повышение
цитотоксической активности NK-клеіок у пациентов с I стадией РТМ до референтных значений
Апробация работы.
Основные положения диссертации доложены:
на VII научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-
| Петербурге-2003»
на VIII научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-
Петербурге-2004»
на объединенном иммунологическом форуме в Екатеринбурге 2004г.
на семинаре «Современные лабораторные технологии» (Псков 2004 г)
Публикации:_по теме диссертации опубликовано 5 работ.
Объем и структура диссертации.
Диссертация изложена на страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы,
описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований,
Обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Текст диссертации
проиллюстрирован таблицами и рисунками . Библиографический список включает источников
