Содержание к диссертации
Введение
Обзор литературы. Дрожжи - таксономия, идентификация, рольв экологии и патологии Человека .
Глава 2.1. Современные представления о таксономии и классификации дрожжей 15
2.1.1. Коротко об истории дрожжей 15
2.1.2. Зимология как раздел микологии 16
2.1.3. Современное определение понятия "дрожжи" 18
Глава 2.2. Дрожжевая микрофлора в норме и при патологии. Значение в экологии Человека .23
2.2.1. Клинически значимые дрожжи 23
2.2.2. Дрожжи Candida albicans и Malassezia spp 31
Глава 2.3. Дрожжи и аллергия 38
2.3 1. Аллергические заболевания, ассоциированные с дрожжевой микрофлорой 38
2.3.2. Дрожжевые аллергены - природа, способы получения и использование 41
Глава 2.4. Идентификация клинически значимых дрожжей 48
2.4.1. Современные методы идентификации дрожжей 48
2.4.2. Схема видовой идентификации липофильных дрожжей рода Malassezia 57
2.4.3. О схемах и тест-системах для идентификации клинически значимых нелипофильных дрожжей 61
Глава 2.5. Противогрибковые препараты для элиминации дрожжевой микрофлоры 65
2.5.1. Традиционные антифунгальные препараты - группы и механизмы действия на клетки дрожжей 65
2.5.2. Новые антимикотики и способы элиминации дрожжевой микрофлоры
Глава 2.6. Заключение по обзору литературы,
3. Экспериментальные исследования
Глава 3.1. Материалы и методы исследования 78
Глава 3.2. Схема родовой идентификации клинически значимых дрожжей 85
3.2.1. Схема идентификации 85
3.2.2. Описание основных тестов 86
Глава 3.3. Разработка алгоритма обследования пациентов на дрожжевую флору кожи и бронхиального секрета 94
3.3.1. Методы посева и учета микрофлоры кожи, режимы культивирования на плотных средах 94
3.3.2. Методы посева и учета микрофлоры бронхиального секрета, режимы культивирования на плотных средах 98
3.3.3. Метод микроскопии материала ногтевых пластинок 99
3.3.4. Оценка эффективности двух стандартных питательных сред 100
3.3.5. Методы коллекционирования и хранения изолятов 103
Глава 3.4. Исследование дрожжевой микрофлоры у пациентов с аллергическими заболеваниями: частота встречаемости и обсемененность 106
3.4.1. Родовой и видовой состав дрожжевой флоры кожных покровов в норме и при атопическом дерматите 106
3.4.2. Родовой и видовой состав дрожжевой микрофлоры
бронхиального секрета при аллергическом бронхо легочном микозе и бронхиальной астме 119
Глава 3.5. Оценка чувствительности дрожжей к ряду
противогрибковых препаратов: минимальные ингибирующие концентрации; фунгицидный и фунгистатический эффект: 126
3.5.1. Аскомицетные дрожжи рода Candida 126
3.5.2. Нелипофильные базидиомицеты - Rhodotorula, Cryptococcus, Trichosporon 136
3.5.3. Липофильные базидиомицеты Malassezia 146
3.5.4. Новый метод определения целостности цитоплазматической мембраны клеток эукариот 149
Глава 3.6. Новые свойства дрожжей рода Malassezia 156
3.6.1. Экстремальная галотолерантность и способность к росту в микроаэробных условиях 157
3.6.2. Устойчивость к детергентам и термотолерантность 163
3.6.3. Киллерная активность 166
Глава 3.7. Микробиологические основы технологии получения аллергенсодержащего препарата из дрожжей Malassezia 170
3.7.1. Разработка синтетических питательных сред и скрининг быстро растущих штаммов 170
3.7.2. Разработка метода избирательной экстракции аллергенных белков и проверка их сенсибилизирующей активности 179
4. Заключение. 195
5. Выводы 215
6. Литература
- Зимология как раздел микологии
- Схема видовой идентификации липофильных дрожжей рода Malassezia
- Методы посева и учета микрофлоры бронхиального секрета, режимы культивирования на плотных средах
- Устойчивость к детергентам и термотолерантность
Зимология как раздел микологии
Использование дрожжей человеком насчитывает несколько тысячелетий, хотя систематическое изучение этих микроорганизмов началось сравнительно недавно. Во многих языках термин «дрожжи» происходит от слов, обозначающих образование пены (газа) и осадка при виноделии, подъемом теста в хлебопечении. Приготовление слабоалкогольных напитков за счет самопроизвольного брожения практиковалось еще у кочевников, а переход к оседлому образу жизни ознаменовался профессионализацией процесса и выведением чистых культур [Голубев В.И., 1992].
После открытия ван Левенгука (1680 г.) человечество получило возможность увидеть клетки дрожжей под микроскопом, однако обнаруженные в осадке из-под пива «сферические частицы» не были ассоциированы с процессом брожения. Все последующие столетия брожение рассматривали лишь как физико-химический процесс. В 30-х годах XIX столетия ученые Каньяр-де-ла-Тур, Кютциг, Шванн и Тюрпен выразили мнение, что дрожжи - это одноклеточные живые существа (водоросли или грибы), деятельность которых и вызывает брожение [Шандрль Г., 1967]. Эта точка зрения на тот момент развития естествознания не была признана правильной, и понадобился гений Пастера, чтобы в 70-х годах, наконец, восторжествовала биологическая теория брожения.
В 1839 году Шванном было обнаружено образование круглых телец внутри дрожжевых клеток, которые, благодаря работам де Сенеза, Рееса и Энгеля, были признаны аналогами аскоспор сумчатых грибов. С этого момента во взглядах ученых наметилось следующее противоречие. С одной стороны отнесение сахаромицетов к аскомицетным грибам было поддержано одним из основоположников микологии - де Бари. Причем ученый придерживался мнения о таксономической самостоятельности дрожжей. С другой стороны, под влиянием дарвиновских идей плеоморфизма, многие исследователи, включая Брефельда, Пастера, Кютцига, рассматривали дрожжи лишь как стадию развития мщелиальных грибов [Голубев В.И., 1992]. Это противоречие во взглядах оказалось самым принципиальным: в зависимости от точки зрения объем данной группы микроорганизмов резко менялся.
Большое практическое значение дрожжей и накопленная к концу XIX века научная информация об этих одноклеточных грибах послужили предпосылками для появления в микологии обособленной специальности - зимологии - науки о дрожжах. Основоположником зимологии стал датский ботаник Хансен. Ученый усовершенствовал и внедрил в практику исследований асептические методы работы, получение монокультур дрожжей, расширил набор диагностических признаков, таких как образование асков, форму и количество аскоспор, морфологию колоний. Кроме того им впервые в микологии было предложено использовать в качестве таксономической характеристики физиологические свойства, например, способность к утилизации ряда Сахаров. На основании комплекса морфо-физиологических признаков Хансеном были дифференцированы многие роды и виды дрожжей, известные по сей день. Однако именно использование физиологических признаков еще резче обозначило обособление зимологии от общей микологии, базирующейся до настоящего времени на применении морфологических характеристик.
В 1904 г. в Нидерландах была создана Центральная коллекция культур грибов (Centralbureau voor Schimmelcultures - CBS), где с 1922 года под руководством Клюйвера начал функционировать и до сих пор существует Отдел дрожжевых культур. Накопленная к тому времени информация о новых видах дрожжей, выделяемых из пищевых продуктов и клинических изолятов, была крайне разрозненной, изобилующей многочисленными синонимами. Создание централизованной коллекции дало возможность под руководством Клюйвера провести таксономическую ревизию почти всех описанных к тому времени видов дрожжей. Проведенная «дельфтской школой» ревизия сыграла большую роль в упорядочении таксономии дрожжей.
В 1952 году впервые вышла всеобъемлющая монография Лоддер и Крегер-ван-Рай «Дрожжи. Таксономическое исследование» [Loader J., Kreger-van Rij, 1952]. Интересно, что авторы издания пришли к выводу о невозможности удовлетворительного определения данной группы одноклеточных грибов из-за ее большой гетерогенности. Дрожжи рассматривались ими как примитивные формы аско- и , предположительно, базидиомицетов.
В целом зимологию первой половины XX века можно охарактеризовать как «научную дисциплину, исследующую микологические объекты бактериологическими методами» [Голубев В.И., 1992]. Подобная автономность этой области науки трансформировалась у многих зимологов в стремление выделить дрожжи из всех остальных грибов в систематическом отношении, внести в понятие "дрожжи" таксономический смысл.
Схема видовой идентификации липофильных дрожжей рода Malassezia
Проверку устойчивости к циклогексимиду и рост при разных температурах проводили в пробирках на скошенном агаре ГПД. Для определения уреазной активности использовали среду Закса (см. Главу 3.2). Морфо-цитологические тесты осуществляли путем посева на кукурузный агар с твином 80 [Бабьева И.П., 1979], подробное описание см. в Главе 3.2.
Для получения результатов идентификации использовали компьютерную программу "Yeast identification program. Version 4" [Barnett J. et al, 1996]. Для этого вводили полученные в эксперименте признаки и получали результат в виде родового и видового названия дрожжей с рассчитанной для этого результата вероятностью идентификации. Например: Candida albicans 0.975. В случаях, когда вероятность идентификации была ниже 0.85, увеличивали количество тестов.
Видовую идентификацию липофильных дрожжей Malassezia проводили по методу Guillot и Gueho [Guillot J., Gueho E, 1996]. Для этого в теплую агаризованную среду Сабуро, содержащую антибиотик, добавляли суспензию клеток Malassezia до конечного содержания 105 клеток/мл, быстро перемешивали и заливали в чашку Петри. После застывания горячей пастеровской пипеткой делали в агаре лунки, в который вносили по 5 мкл твинов 20, 40, 60 и 80, а также кремофор EL (касторовое масло). Определенные сочетания дискообразного или кольцеобразного роста на данных субстратах были присущи определенным видам Malassezia (Глава 2.4). Определение чувствительности дрожжей к антимикотикам Проводили в полистироловых планшетах на 96 лунок, в которых готовили ряд концентраций препарата методом двукратных разведений [Espinel-Ingroff, 1995]. Подробное описание модификации см. в Главе 3.5.
Гель-электрофорез препаратов из дрожжей рода Malassezia проводили в 10% полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия по Леммли в модификации Гальченко [Гальченко В.Ф., Нестеров А.И., 1981]. Экстракты смешивали с буфером для образцов в соотношении 1:1 и прогревали 5 минут при 100 С. В канавки геля вносили 5-25 мкл образца. В качестве стандарта молекулярных масс использовали набор белков («Sigma»): миозин - 205 кДа, галактозидаза - 116 кДа, фосфорилаза b - 97 кДа, фруктозо-6-фосфат киназа - 84 кДа, альбумин -66 кДа, глутамат дегидрогеназа - 55 кДа, овальбумин - 45 кДа, глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназа - 36 кДа. По окончании электрофореза белки фиксировали в 50% трихлоруксусной кислоте в течение 18 часов и затем окрашивали в 0.01% растворе Coumassi Brilliant Blue R-250. Гели отмывали в 7% уксусной кислоте до обесцвечивания фона и сканировали на сканере для прозрачных пленок. Полученное изображение просматривали в программе Adobe PhotoShop5.
Дот-блот анализ на наличие аллергена в экстракте из клеток дрожжей проводили следующим образом. На нитроцеллюлозу наносили по 1 мкл концентрированных экстрактов и отрицательного контроля (БСА, 1 мг/мл) и высушивали в течение ночи. После этого нитроцеллюлозу с нанесенными экстрактами блокировали в течение 1 час в ЗФР, содержащем 10% фетальной сыворотки, и затем инкубировали с сыворотками больных АД (а также с нормальной сывороткой человека, не содержащей IgE-антител к грибковым аллергенам - отрицательный контроль), 16 час при комнатной температуре. После этого полоски нитроцеллюлозы были обработаны по методу Towbin [Towbin Н. et al, 1979] моноклональными антителами к IgE человека IgE/11-1 [Смирнова Е.Я. с соавт., 1990; Цыциков Э.Н. с соавт., 1988] или Le 27 [Hong C.S. et al, 1986], конъюгированными с пероксидазой; в качестве хромогена в ферментативной реакции использовали 4-хлоро-1 -нафтол. Иммуноблоттинг проводили следующим образом. Электрофорез методом Лэммли [Laemmly U.K., 1970] в присутствии додецил-сульфата натрия в градиенте 5-20% полиакриламида: образец готовили в невосстанавливающих условиях (без меркаптоэтанола и без нагревания): к экстракту аллергена Malassezia sp., содержащему 2 мг/мл белка, добавляли равный объем буфера для образца; образец наносили на гель в расчете примерно 10 мкл на полоску. После электрофореза перенос белков на нитроцеллюлозу осуществляли в аппарате для полусухого переноса "Novablot" (фирма Amersham-Pharmacia, Швеция) в соответствии с инструкцией к прибору. После электропереноса нитроцеллюлозу блокировали в ЗФР с 10% сыворотки плода коровы в течение 1 часа при комнатной температуре (все дальнейшие инкубации также проводили при комнатной температуре). Затем разрезали на полоски и инкубировали в неразбавленных сыворотках больных в течение ночи. Утром полоски промывали 3 раза ЗФР с 1% Твина-20 и 1 раз - ЗФР, а затем инкубировали 1,5 часа с пероксидазным конъюгатом антител к IgE (см. ниже) в ЗФР с 1% БСА. После инкубации с конъюгатом полоски снова промывали, как описано выше, и окрашивали 4-хлор-1-нафтолом .
Для выявления специфического IgE, связавшегося с аллергенами, применяли смесь конъюгатов моноклональных aHTH-IgE-антител Le 27 и BSU 17 (вариант 1: любезно предоставленных ранее профессором А. De Week, Швейцария ; вариант 2: входящих в состав набора для выявления специфических IgE-антител «Иммунодот» производства фирмы CMG-HESKA, Швейцария). Определение специфических антител классов Е и G к антигену из дрожжей Malassezia spp.
Для определения специфических IgE использовали метод твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА), разработанный в лаборатории аллергодиагностики НИИВС им.Мечникова РАМН [Гервазиева В.Б. с соавт, 1986; Овсянникова И.Г., 1985]. На планшеты фирмы "Nunc" сорбировали белковый препарат, полученный из поверхностных слоев клеток Malassezia (см.Главу 3.7), в концентрации 200 мкг/мл. Иммобилизацию проводили в карбонат-бикарбонатном буфере рН 9.6 ±0.1 при температуре 37С в течение 1 часа, затем 16 часов при 4С. В качестве отрицательного контроля в лунки первого ряда вносили фосфатно-солевой буфер (ФСБ) рН 7.4 ±0.1. В лунки 2-3 рядов вносили в дублях восемь двукратных разведений IgE-стандарта с исходной концентрацией 100 кЕ/л. В лунки остальных рядов вносили исследуемые сыворотки (в дублях) в разведении 1:1. Образцы инкубировали в течение 1 часа при 37С с последующей 3-кратной отмывкой ФСБ. Далее вносили конъюгат пероксидазы с моноклональными антителами к IgE человека и выдерживали 1 час при 37С. После 3-кратной отмывки ФСБ в течение 15 мин проводили реакцию с субстратной смесью, состоящей из цитратного буферного раствора рН 4.2 ±0.2, хромогена ортофенилендиамина и 33% перекиси водорода. Реакцию останавливали внесением в лунки 50% серной кислоты и учитывали результаты на спектрофотометре АКИ-Ц-01 при длине волны 490-492 нм. Содержание аллергоспецифических IgE антител в исследуемых сыворотках выражали в единицах оптической плотности.
Методы посева и учета микрофлоры бронхиального секрета, режимы культивирования на плотных средах
Оценка жизнеспособности клеток дрожжей после обработки мирамистином приведена в таблице 21. Очевидно, что при концентрации препарата 100 мкг/мл живых клеток Candida оставалось на два порядка меньше, чем в контроле, тогда как количество живых клеток Malassezia в данных условиях снижалось лишь на порядок по сравнению с контролем. Обработка мирамистином в концентрации 1000 мкг/мл приводила к полной потере жизнеспособности у Candida и лишь на два порядка понижала численность живых особей у Malassezia, что подтверждает данные, полученные путем измерения интенсивности окраски ВСР (рис. 13). Коэффициент корреляции Пирсона, отражающий наличие линейной зависимости между поглощенным клетками красителем и числом жизнеспособных особей, для клеток Candida составил г = - 0.763, а для Malassezia г = - 0.650. То есть, чем больше красителя вошло в клетки, тем меньше жизнеспособных особей было в суспензии.
Мы сравнили действие мирамистина на дрожжи с таковым на эпителиальные клетки, выделенные со слизистой оболочки ротовой полости здорового человека. По оптической плотности суспензия эпителиоцитов была уравнена с суспензиями дрожжей. Исследовали действие используемой в клинике концентрации препарата 100 мкг/мл. Оказалось, что если процент ВСР, вошедшего в результате обработки в клетки Candida albicans и Malassezia spp., составлял соответственно
Итак, нами модифицирован метод определения МИК и оценена чувствительность дрожжей, полученных от пациентов с аллергическими заболеваниями, к ряду противогрибковых препаратов. Исследование 40 культур аскомицетных дрожжей рода Candida показало, что при длительной инкубации с антимикотиками они вырабатывают способы защиты, позволяющие понизить чувствительность к препаратам. Установлено, что фунгицидным эффектом в отношении Candida в наибольшей степени обладали мирамистин (57% всех культур не содержали живых клеток после 10 суток инкубации), пимафуцин (38%), нитрофунгин (26%) и дифлюкан (23%). Для базидиомицетных дрожжей родов Rhodotonila, Cryptococcus и Trichosporon были определены величины МИК 10 антифунгальных препаратов, а также оценен фунгистатический/фунгицидный эффект каждого из них. Показано, что данные рода дрожжей нечувствительны к азолам в концентрации = 256 мкг/мл. Наибольшим фунгицидным эффектом обладали пимафуцин и мирамистин. Определены величины МИК 10 антимикотиков для 7 культур Malassezia spp. Установлено, что, в отличие от нелипофильных базидиомицетов, Malassezia spp. нечувствительны к мирамистину в концентрации 100 мкг/мл, а при 500-6000 мкг/мл имел место лишь фунгистатичекий эффект.
Разработан простой и точный метод оценки целостности цитоплазматической мембраны эукариотических клеток, позволяющий количественно оценить степень повреждения изучаемым препаратом.
Уникальным и наиболее известным свойством Malassezia spp., принципиально отличающим данный род от других родов дрожжей, является их липофильность. Однако особенности экосистемы, в которой приходится выживать этим микроорганизмам, не ограничиваются наличием липидных компонентов. Такой орган, как кожа, интенсивно экскретирует аминокислоты, гормоны, соли и т.д. Кроме того, кожа человека периодически подвергается воздействию высоких и низких температур, низкого уровня доступного кислорода, облучения ультрафиолетом, различных моющих средств - детергентов, а также непосредственно контактирует с чужеродной, зачастую патогенной, микрофлорой. В этой связи большой научный интерес представляет изучение влияния некоторых из перечисленных факторов на способность дрожжей рода Malassezia сохранять численность популяции. Созданию экспериментальных условий, моделирующих таковые в естественной среде обитания Malassezia, посвящена настоящая глава.
В доступной литературе описано влияние ультрафиолетового облучения на рост 6 штаммов Malassezia furfur [Mayser P., 1998]. Авторами показано, что наличие в среде культивирования триптофана обеспечивало культурам дрожжей возможность синтеза производных данной аминокислоты, играющих роль флуорохромов (УФ-фильтров). Отсутствие триптофана приводило к снижению численности и даже гибели популяции. Это единственное на сегодняшний день сообщение о влиянии физических факторов на метаболизм Malassezia.
Устойчивость к детергентам и термотолерантность
Сопоставление данных литературы с собственными результатами привело нас к следующему выводу: многостадийные и сложные схемы для видовой идентификации хороши для исследовательской работы, но совершенно неприемлемы и дороги в клинической практике. Попытка использовать коммерческие тест-системы показала, что реальное видовое разнообразие богаче, чем заложенное в тест-систему. Кроме того, они имеют ограниченный срок хранения. В современных пособиях по клинической микологии, а также в тест-системах, предлагается определить вид получаемого изолята. Однако, проведенный нами анализ 5 схем ( см. главу 2.4) показал, что на основании 7- 43 проводимых тестов невозможно получить качественный результат по сравнению с классической схемой: на примере дрожжей С.albicans мы убедились, что ни одна из этих схем не дает однозначного ответа, а одна из них вообще не работает. По нашему мнению в условиях клинической лаборатории достаточно проводить родовую идентификацию, но на высоком уровне. Такой схемы в доступной литературе нами не обнаружено. Имея в виду ограниченный спектр оппортунистических родов по сравнению с остальными и при сопоставлении имеющихся классической и прочих схем видовой идентификации нами была создана удобная, достаточно точная и недорогая схема определения клинических изолятов дрожжей до уровня рода. Разработанная схема состоит из 4 стадий и позволяет, используя составленную таблицу, сравнительно быстро установить род полученного изолята. В схему заложена возможность идентификации родов Candida, Rhodotorula, Cryptococcus, Trichosporon, Geotrichum, Saccharomyces, a также вида C.albicans. Реализация схемы занимает около 1 часа, а считывание результатов проводится в течение 1-7 суток, в случае обнаружения C.albicans -1-2 суток. Для родовой идентификации дрожжей Malassezia spp. необходимо лишь проводить первичный посев на среду Диксона и убедиться в появлении колоний клеток характерной формы путем микроскопирования.
Параллельно проводилась разработка алгоритма обследования больных АД, поскольку для данной категории пациентов нет единого способа посева и учета дрожжевой микрофлоры. При этом оказалось, что наиболее приемлемым способом посева нелипофильных дрожжей с кожи пациентов является метод отпечатков в собственной модификации [ Нобл У., 1986; Bergbrant I-M.et al, 1992], а для липофильных дрожжей рода Malassezia - модифицированный нами метод смыва [Korting Н. et al, 1991]. Для посева нелипофильных дрожжей впервые были использованы очень удобные и гигиеничные контейнеры -бакпечатки («Ленмедполимер»), что дало возможность исключить из обращения дорогостоящие и, на наш взгляд, не совсем корректные для количественного учета транспортные среды. Аналогично, минуя транспортную среду, производили посевы и бронхиального секрета от больных бронхиальной астмой и аллергическим бронхо-легочным микозом. Данную субстанцию предварительно разжижали дитиотрейтолом, что дало возможность более точно производить количественный учет обсемененности. Кроме того по мере необходимости проводили микроскопирование материала ногтевых пластинок (у пациентов с подозрением на онихомикоз) [Rebell G., Taplin D., 1971]. У медицинских микологов наибольшей популярностью в качестве среды для культивирования дрожжей пользуется среда Сабуро, тогда как в общей зимологии обычно для первичного высева используют сусло-агар либо глюкозо-пептон-дрожжевую среду (ГПД). После сравнительного изучения сред Сабуро и ГПД, оказалось, что последняя является более эффективной, так как содержит полный комплекс компонентов, необходимых для роста дрожжей. Используя среду ГПД и идентифицируя полученные изоляты с помощью разработанной схемы, мы определили нормы носительства нелипофильных дрожжей на коже здоровых людей - не более 4.7% носителей при обсемененности не выше 60 КОЕ/дм2 дрожжами родов Candida и Cryptococcus. Таким образом, оригинальными аспектами данного алгоритма являются: посев на плотные питательные среды минуя транспортные среды; применение бакпечаток вместо чашек Петри и др.; использование полученных количественных норм носительства дрожжей на коже у здоровых лиц; использование среды ГПД вместо среды Сабуро; использование метода Rebell для микроскопирования материала ногтевых пластинок.
В отношении липофильных дрожжей Malassezia получены следующие данные: в группе из 44 здоровых индивидумов (34 взрослых старше 14 лет и 10 детей) 63.6 % явились носителями дрожжей Malassezia, причем в количестве 100-500 КОЕ/см2. Преобладающим видом Malassezia был M.sympodialis (у 54% индивидуумов), хотя встречались также M.globosa ( у 6 %). Остальные изоляты не удалось идентифицировать до вида методом Guillot. Интересно отметить, что наибольшая частота встречаемости имела место у взрослых людей (82.4%). Самая высокая обсемененность отмечена у людей в возрасте 18-48 лет, тогда как у здоровых детей 6-14 лет даже при повторных посевах нам не удалось обнаружить дрожжи Malassezia. Такой феномен в отношении детей описан в литературе [Faergemann J, 1980] и может быть объяснен менее различиями в составе сального секрета у детей по сравнению со взрослыми [Де Люка К., 2002].
Используя разработанный алгоритм, мы обследовали несколько групп больных АД в стадии обострения. Видовой состав нелипофильных дрожжей изучали в группе, состоящей из 91 человека. Имея в виду полученные нами нормы носительства дрожжей мы установили, что у 27% пациентов наличие нелипофильных дрожжей на коже превышало норму. Видовое и родовое разнообразие оказалось гораздо богаче, чем это можно было себе представить из данных литературы - всего 18 видов 6 родов: из полученных 27 изолятов нелипофильных дрожжей 48% приходилось на долю рода Candida, 29% - Rhodotorula, 7.4% - Cryptococcus, 11%-Debaryomyces, 3.7% - Trichosporon. Видовой состав был представлен видами: С. albicans, C.apis, C.azyma, C.bombicola, C.haemulonii, C.terebra, C.versatilis; R.aurantiaca, R.glutinis, R.minuta, R.mucilaginosa, Cr.albidus, T.ovoides, D.hansenii, D.polymorphus, Интересно отметить, что C.albicans не являлся преобладающим видом у данной категории пациентов.
![Биологические свойства симбионтной микрофлоры кожи при первичной роже [Электронный ресурс]](/i/i/4593/204210.png "Биологические свойства симбионтной микрофлоры кожи при первичной роже [Электронный ресурс] Брагина Ирина Николаевна")
