Введение к работе
Актуальность проблемы. Заболевания людей и животных,
зозбудителями которых являются микроорганизмы распространенных видов рода Yersinia, особенно Y.enterocolitica и Y.pseudotuberculosis, зарегистрированы во многих странах мира. Несмотря на достигнутые успехи в изучении многих аспектов проблемы иерсиниозов актуальность этих инфекций сохраняется (Ющенко Г.В., 2000; Ценева Г.Я и соавт., 2000). Стабильные показатели заболеваемости (данные официальной статистики) по Российской Федерации псевдотуберкулезом (7,1 на 100 тыс. нас.) и иерсиниозом (3,0 на 100 гыс. нас.) в последние 5 лет не отражают истинного распространения инфекций. При обеих нозоформах наблюдается неравномерное распределение заболеваемости по отдельным регионам. Наиболее часто вспышки и спорадические случаи псевдотуберкулеза регистрируются в Сибири, на Дальнем Востоке, в Северо-Западном регионе страны, включая Санкт-Петербург. Показатели заболеваемости псевдотуберкулезом в 2001г. в Кемеровской, Архангельской, Томской, Новосибирской областях составили 37,0; 51,0; 45,0 и 48,0, соответственно, на 100 тыс. нас. Заболеваемость иерсиниозом заметно ниже, что в значительной степени обусловлено этсутствием унифицированных методов лабораторной диагностики и принадлежностью Y.enterocolitica к 4-ой группе условно-патогенных бактерий. Последнее обстоятельство снижает объем исследований и показаний к ним.
Важной особенностью возбудителей указанных заболеваний является изменение их биологических свойств, а также пейзажа циркулирующих Y. cnterocolitica, снижение доли ранее доминировавших серотипов и выявление новых серо-биотипов, ранее считавшихся непатогенными (Ценева Г.Я. и соавт., 2002).
В этиологии иерсиниозов людей на территории Северо-Западного экруга, в том числе Вологодской области, ведущее значение принадлежит y.enterocolitica. Многие теоретические и практические аспекты іабораторного обеспечения системы эпидемиологического надзора за іерсиниозньши инфекциями, равно как и организационно-методические составляющие системы микробиологического мониторинга, остаются неразработанными. С этим связано отсутствие информации об истинной распространенности иерсиний среди людей, животных, объектов внешней среды и их этиологической значимости.
Ухудшение эпидемической и эпизоотической обстановки по пищевым зоонозам в ряде регионов России в последние годы (Черкасский Б.Л. и соат.,1995; Шурыгина И.А. и соавт., 2003), угроза их распространения в ранее благополучные территории требуют совершенствования системы эпидемиологического надзора и, в первую очередь, обеспечения его эффективными методами и средствами контроля за циркуляцией иерсиний.
Все вышеизложенное определило цель настоящего исследования: зпределение и характеристика этиологически значимых иерсиний,
циркулирующих в условиях сельскохозяйственного региона и
усовершенствование методов лабораторного обеспечения
эпидемиологического надзора за иерсиниозами. Задачи исследования:
Повысить диагностическую эффективность бактериологического метода в результате разработки и применения новой питательной среды для накопления иерсиний в сочетании с новыми условиями обработки исследуемых проб щелочением. Определить оптимальную тактику применения экспрессных методов для мониторинга за иерсиниями.
Изучить серо-биотипную структуру иерсиний, циркулирующих среди людей, мелких млекопитающих, сельскохозяйственных животных, во внешней среде; определить варианты, имеющие этиологическое значение.
Оценить информативность показателей серологического скрининга у людей и животных при проведении микробиологического мониторинга за иерсиниями.
4. Определить биологические характеристики иерсиний,
циркулирующих на территории с развитым сельскохозяйственным
производством, разработать оптимальную тактику лабораторного контроля за
их распространением и включить ее в качестве дополнения в систему
эпидемиологического мониторинга за иерсиниозами.
Научная новизна работы. Предложена новая жидкая питательная пептонно-калиевая среда (ПК) для накопления бактерий рода Yersinia. Ее применение позволяет сократить продолжительность бактериологического исследования и с наибольшей частотой установить распространенность иерсиний среди людей и животных, выявить объекты различной степени микробиологической опасности. Разработаны условия применения среды для мониторинга за иерсиниями при контроле материала различного происхождения.
Объекты животного и растительного происхождения на территории изучения в подавляющем большинстве инфицированы Y.enterocolitica биотипа 1, подтипа 1А серотипов 0:3; 0:4,33; 0:5,27; 0:6,30. Впервые установлена вирулентность иерсиний указанных серотипов и доказано их этиологическое значение в развитии иерсиниозов у людей и животных.
Научно обоснована тактика унифицированного микробиологического мониторинга за иерсиниями в условиях крупного сельскохозяйственного региона и использование серологического мониторинга в системе эпидемиологического надзора за иерсиниозами. Предложены организационно-методические рекомендации по проведению микробиологического мониторинга на территории с развитым сельскохозяйственным производством.
Теоретическая и практическая значимость работы. Разработана и внедрена в практику жидкая пептонно-калиевая среда (ПК) накопления для выделения бактерий рода Yersinia. Предложена среда позволяет сократить срок подращивания исследуемого материала на 2-3 дня. При испытаниях в полевых условиях показано, что она на 18 % эффективнее буферно-казеиново-
дрожжевой среды (БКД), широко используемой в практике. Среда ПК внедрена в практических лабораториях городов Москвы, Санкт-Петербурга, Архангельска, Вологды. Получена приоритетная справка на заявку о выдаче патента на состав среды Российского агентства по патентам и торговым знакам Российской Федерации от 21.0б.2003г. №2003119471/13(020596).
Для повышения эффективности бактериологического метода при массовых исследованиях, рекомендовано однократное щелочение исследуемого материала животного и растительного происхождения на этапе первичного посева на жидкую питательную среду, позволившее увеличить количество изолятов и сократить продолжительность бактериологического исследования на 3 суток.
Предложена унифицированная тактика эпидемиологического мониторинга за иерсиниями для территорий с развитым сельскохозяйственным производством, включающая дифференцированный подход к обследованию на инфицированность иерсиниями объектов, пищевых продуктов по степени эпидемиологической опасности и определенных контннгентов людей, сроков проведения обследований, использования эффективных методов и средств. Содержание микробиологического мониторинга изложено в аналитическом обзоре (2002), подготовленном совместно с сотрудниками лаборатории бактериальных инфекций Санкт-Петербургского НИИЭМ им. Пастера и одобренном Департаментом Госсанэпиднадзора Минздрава России.
В результате многолетних микробиолого-эпидемиологических исследований, проведенных в условиях крупного сельскохозяйственного региона, получены данные о формировании хозяйственных очагов распространения иерсиний, инфицированное людей в группах «риска» и животных, факторов распространения иерсиний и усовершенствована система лабораторного обеспечения эпидемиологического надзора за иерсиниозами. Опыт использования научно обоснованной системы микробиологического мониторинга за иерсиниями включен в программу обучения врачей-интернов кафедры организации санэпидслужбы, эпидемиологии и гигиены Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова на базе ЦГСЭН в Вологодской области и специалистов санитарно-эпидемиологической службы области. В целях подготовки студентов факультета ветеринарной медицины Вологодской государственной молочнохозяйственной академии им. Н.В. Верещагина и внедрения микробиологического мониторинга за иерсиниями разработаны методические рекомендации "Псевдотуберкулез и кишечный иерсиниоз (этиология, эпизоотология, лабораторная диагностика у сельскохозяйственных животных)", Вологда, 2003.
Положения выносимые на защиту:
1.Новая жидкая питательная среда для диагностики иерсиниозов
(пептонно-калиевая) существенно повышает эффективность
бактериологического исследования. Её использование в сочетании с
однократным щелочением исследуемых проб (материала) обеспечивает более полное и раннее выявление иерсиний.
2.0бъекты животного и растительного происхождения на территории изучения в подавляющем большинстве инфицированы Y.enterocolitica биотипа 1, подтипа 1А серотипов 0:3; 0:4,33; 0:5,27; 0:6,30. Установлена вирулентность иерсиний указанных серотипов и их этиологическое значение в развитии иерсиниозов у людей и животных.
З.Многолетний микробиологический мониторинг за иерсиниями с
применением новых средств и методов экспрессной диагностики на территории
с развитым сельскохозяйственным производством определил
дифференцированный подход к выбору обследуемых объектов, сельскохозяйственной продукции с учетом частоты, периода года и длительности их инфицирования.
Апробация работы. Диссертация апробирована на заседании Ученого Совета Санкт-Петербургского НИИЭМ им. Пастера 5 ноября 2003г. Материалы работы представлены на международной научно-технической конференции «Проблемы экологии на пути к устойчивому развитию регионов» (Вологда, 2001); на заседаниях Санкт-Петербургского и Вологодского отделений Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (2002); на 8-м международном симпозиуме по Yersinia (Turku, Финляндия, 2002); на международном конгрессе «Ликвидация и элиминация инфекционных болезней - прогресс и проблемы» (Санкт-Петербург, 2003); на региональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы диагностики и профилактики распространенных инфекций» в НИИЭМ им. Пастера (2003); По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ, в том числе в иностранных изданиях - 1, аналитический обзор «Микробиологический мониторинг за иерсиниозами» (Санкт-Петербург, 2002).
Структура и объем диссертации. Диссертация написана по обычному плану и состоит из введения, обзора литературы и 6 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы, включающего 221 источник, в том числе 122 отечественных и 99 зарубежных авторов. Работа изложена на ШЄстраницах компьютерного текста и иллюстрирована 23 рисунками, 27 таблицами.
