Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 9
1.1. Взаимоотношения между сочленами микропаразитоцеиозов и организмом хозяина 9
1.2. Состояние иммунитета при микстинвазиях 13
1.3. Терапия и профилактика микстинвазий кур 20
2. Собственные исследования 27
2.1. Материалы и методы 27
2.2. Основные гельминтозы кур в Липецкой области 30
2.2.1. Зараженность цыплят гельминтами и кокцидиями по данным копроскопии и вскрытия 31
2.2.2. Зараженность кур нематодами по данным вскрытия 33
2.2.3. Паразито-хозяинные взаимоотношения при аскариди озе и гетеракидозе кур 34
2.3. Влияние микстинвазий на физиологические показатели и иммунобиологическую реактивность птиц 35
2.4. Фармакотоксикологические свойства и терапевтическая эффективность препарата альбамелин 49
2.4. . Острая токсичность альбамелина 49
2.4.2. Кумулятивные свойства альбамелина 51
2.4.3. Влияние альбамелина на антитоксическую функцию печени 55
2.4.4. Оценка терапевтической эффективности препарата альбамелин при нематодозах кур 56
2.5. Фармакотоксикологические свойства и тераппсвтическая эффективность препарата альбен (гранулят) 58
2.5.1. Острая токсичность препарата альбен 58
2.5.2. Кумулятивные свойства альбена 61
2.5.3. Влияние альбена на антитоксическую функцию печени 63
2.5.4. Оценка терапевтической эффективности альбена (гранулят) при нематодозах кур 64
2.6. Сравнительная терапевтическая эффективность альбамелина и альбена 69
2.7. Влияние альбена гранулята и альбамелина на организм цыплят 70
2.8. Влияние альбамелина и альбена на иммунный статус цыплят, спонтанно зараженных аскаридиями и гетеракисами 81
2.9. Производственные испытания препаратов альбамелин и альбен 87
2.10. Экономическая эффективность от применения альбена и альбамелина 89
Заключение 91
Выводы 96
- Состояние иммунитета при микстинвазиях
- Основные гельминтозы кур в Липецкой области
- Фармакотоксикологические свойства и терапевтическая эффективность препарата альбамелин
- Сравнительная терапевтическая эффективность альбамелина и альбена
Введение к работе
Актуальность проблемы. Одной из основных задач птицеводства является увеличение поголовья птиц, повышение их продуктивности и снижение себестоимости. Выполнение этих задач связано наряду с обеспечением полноценного кормления птиц и проведением ветеринарных мероприятий по ликвидации различных болезней, в том числе и паразитарных.
Многочисленные исследования отечественных и зарубежных авторов свидетельствуют, что в организме животного одновременно может локализоваться несколько видов паразитов, составляющих паразитоценоз. В кишечнике могут одновременно обитать различные виды бактерий, грибков, простейших, гельминтов. Эти взаимоотношения могут быть индифферентными, антагонистическими или синергетическими, оказывающими определенное влияние на развитие и патогенность паразитов (Е.Н.Павловский, 1937, 1959; Е.Н.Павловский, В. Г, Гнездилов, 1949, Д.И. Панасюк, М.М.Шахмурзов, М.А.Сидоров, 1981).
Е. Н. Павловский (1937) писал, что изучение взаимоотношений различных видов гельминтов, кокцидий и других паразитов имеет не только теоретическое, но и практическое значение. Это важно знать при изучении патогенеза, иммунитета, терапии и профилактики паразитарных болезней. "Логическим последствием изучения структуры паразитоценозов является исследование влияния его компонентов порознь и в различных комбинациях на организм; именно в этой стороне дела скрыт ключ к правильному пониманию патогенеза паразитарных заболеваний и, далее, к рациональной постановке лечения паразитоценозов и к осуществлению действенной их профилактики".
Несомненно, теоретический и практический интерес представляет изучение особенностей взаимоотношения распространенных патогенных паразитов, таких как аскаридии, гетеракисы и кокцидии. Определение причин возникновения связей между сочленами паразитоценоза расширит паши представления о патогенезе паразитарных заболеваний и позволит наметить новые пути их лечения.
Особую актуальность в наши дни приобретают пути формирования иммунной системы при различных микстинвазиях и изыскание путей их коррекции.
В качестве антипаразитарных препаратов мы использовали альбамелин и альбен. Наши исследования по изучению антипаразитарной эффективности, безвредности, иммунотропной активности альбена - препарата для кур явились фрагментом комплексной работы.
Цель и задачи исследований. Изучить эффективность отечественных препаратов альбамелин и альбеп против гельминтозов кур, определить их фармакотоксикологические свойства и безвредность при микстинвазиях.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: - изучить микстинвазии спонтанно инвазированньтх цыплят и - установить взаимоотношения гельминтов в кишечнике кур; дать оценку Т- и В-системам иммунитета при микстинвазиях птиц; изучить фармакотоксикологические свойства альбамелипа и альбена; - установить терапевтическую дозу и определить эффективность альбамелина и альбена; изучить влияние альбамелина и альбена на физиологические и иммунологические показатели птиц; установить экономическую эффективность панакура, альбена и альбамелина; разработать нормативно-техническую документацию на применение препарата альбен (гранулят).
Научная новизна. Впервые дана оценка иммунному статусу птиц, зараженных микстинвазиями, всесторонне изучены и предложены ветеринарной практике препараты альбен и альбамелин.
Впервые изучено влияние альбамелина и альбена на физиологические и иммунологические показатели птиц.
Результаты исследований по терапии птиц вошли в Наставление по применению препарата альбен (гранулят).
Практическая значимость. Экономический ущерб, наносимый микстинвазиями, послужили научной основой для разработки мероприятий по борьбе с паразитозами кур.
Данные показателей крови и иммунного статуса при микстинвазиях могут быть использованы при оценке физиологических и иммунологических сдвигов, происходящих в организме зараженных птиц и под действием препаратов.
Впервые ветеринарной практике птицеводства после всестороннего изучения предложены препараты широкого спектра действия альбен и альбамелин.
Результаты диссертации вошли в Наставление по применению препарата альбен для дегельминтизации сельскохозяйственных животных, пушных зверей и кур (утверждено Департаментом Минсельхоза России 27.03. 2002 г. № 13-3-04/0385).
Основные положения, выносимые на защиту:
Изучить распространение кишечных гельминтов кур.
Оценить иммунный статус птиц при микстинвазиях.
Изучить фармакотоксикологические свойства альбамелина и альбена.
Определить терапевтическую эффективность альбамелина и альбена при микстинвазиях кур.
Изучить безвредность альбена и альбамелина для организма кур.
Пути реализации. Результаты исследований могут быть использованы при корректировке противогельминтозных мероприятий и в педагогическом процессе при подготовке специалистов ветеринарной профессии.
Апробация работы* Материалы диссертации доложены на заседании профессорско-преподавательского состава кафедр эпизоотологии и инфекционных болезней; паразитологии, общей биологии и ветсанэкспертизы; микробиологии, вирусологии и биотехнологии Нижегородской Государственной сельскохозяйственной академии в 2002, 2003, 2004 годах, на международных научно-практических конференциях в г. Ставрополь (2003г.), г. Уфе (2004), г. Москве (2004).
Внедрение. Результаты исследований под авторским надзором с положительным эффектом в 2000 - 2003 гг. внедрены в птицехозяйствах и госветучреждениях Липецкой области. Материалы исследований включены в нормативно-техническую документацию по применению препарата альбен (гранулят) (МСХ РФ, 2001)
Публикации. По материалам исследований опубликовано 4 научные работы, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемому вопросу.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы по изучаемым вопросам, собственных исследований, состоящих из описания материалов, методов и объема исследований, результатов, обсуждения, выводов и практических предложений. Список литературы включает 124 источника, в том числе 101 отечественных и 23 иностранных. Работа иллюстрирована 27 таблицами, 14 рисунками. Приложение на 3 страницах.
Состояние иммунитета при микстинвазиях
Большой вклад в развитие паразитоценологии внесли известные отечественные ученые Е.Н. Павловский (1955), предложивший термин «паразитоценоз» и вирусолог Л.А. Зильбер (1937), указавший на особую биологическую значимость смешанности и взаимодействия биологических форм. Паразитоценология как наука обусловлена объективной реальностью и возникла она на стыке: биологии, экологии, медицинской и ветеринарной паразитологии, эпизоотологии, эпидемиологии, вирусологии. Переход животноводства на промышленную основу способствовал высокой концентрации животных на ограниченной территории, что и привело к появлению «малых» инфекций, характеризующихся длительным течением, стертой клинической картиной и значительной смертностью. Характер этих болезней резко меняется при одновременном появлении нескольких возбудителей. Большинство ассоциированных заболеваний имеют более тяжелое проявление по сравнению с моноинвазиями. К настоящему времени литература по смешанным болезням животных довольно обширна и прекрасно освещена в работах М.М. Шахмурзова (1980)Д.И. Панасюка с соавт. (1981); В.В. Филиппова и Э.Х. Даугалиевой (1991) и других авторов. Нас проблема паразитоценоза заинтересовала в связи с изучением иммунного статуса животных, поэтому мы приводим работы, касающиеся только этого вопроса. Р.С. Шульц, Н.К. Андреева (1948, 1959) установили, что у мышей с повышенной резистентностью к гименолепидозу снижается устойчивость к инвазированию их стронгилидами. В.Г. Гнездилов (1951) констатировал существование определенного взаимозависимости между различными видами гельминтов (аскариды карликовый цепень) и лямблизми, паразитирующими в тонком отделе кишечника. N. Broody, Y. Siskin g (1989), считают, что выделением гельминтами иммунодепрессантов, подавляющих иммунные реакции организма хозяина при сочетанном паразитировании гельминтов с эймериями, последние усиливают вирулентность первых. А.Е. Сабо (1978), П.В. Радиопов (1980), считают, что паразитирующие в желудочно-кишечном тракте гельминты, провоцируют у них клостридиозы, а при фасциолезе крупного рогатого скота возникают вторичные эшерихиозы. К. Shope (1957), Н. Sen et al. (1971), D. Nayak et al. (1975), Д.И. Панасюк с соавт. (1981) считают, что при диктиокаулезе телят и метастронгилезе мышей, активизируются латентные формы инфлюэнцы у свиней, и пастереллы у телят. Н.М. Вовченко (1981), Ю.Ф. Петровым (1988) установлено угнетение иммуногенеза под влиянием гельминтов при роже свиней, сальмо неллезе, пастереллезе и местериозе ягнят.
Большинство исследователей, изучающих ассоциативные болезни животных, считают, что несмотря на значительную общность патогенетических факторов, вызываемых возбудителями инвазионных и инфекционных заболеваний, у гельминтов имеется и ряд существенных особенностей, определяющих своеобразие патогенеза, иммуногенеза и течения гельминтозов. G.M. Faubert (1982), НА. Благов (1986), А.С. Бессонов (1996) установили при микстинвазиях подавление Т- и В-клеточных звеньев иммунной системы. Считается доказанным, что роль явления иммунной супрессии в организме хозяина весьма неоднозначна. По мнению Э.Х. ДаугалиевоЙ с соавт. (1991) можно построить логичную гипотезу о том, что супрессия через Т-клетки контролирует устойчивость взаимоотношений хозяин-паразит. По ее мнению в отсутствие такого контроля иммунного ответа на внедрение гельминтов в организме хозяина чрезмерно развивается активная воспалительная реакция, способная нанести ущерб организму, повреждая его собственные ткани. Увеличение Т-супрессоров является одним из механизмов иммунорегуляции, ограничивающим продукцию антител и избыточное образование циркулирующих иммунных комплексов, которые играют большую роль в формировании иммунопатологических процессов при гельминтозах. Э.Х. Даугалиева (1991), К.Г. Курочкина (2000), А.В. Аринкин (1996) установили, что развитие инвазионного процесса при микстинвазиях вызывает и сопровождается снижением уровня неспецифической резистентности организма хозяина, наблюдается выраженный процесс ингибирования лизоцимной комплементарной активности сыворотки цыплят, развитием вторичных иммунодефицитов. Состояние иммунной системы организма хозяина и смешанных инвазий, является выражением взаимодействием по меньшей мере двух чужеродных организмов, оно трансформируется в форме нестерильного иммунитета, и приводит к нарушению в системе хозяин-паразит по отношению к другим генетически чужеродным агентам (А.В. Аринкин, 1996). По его мнению, степень угнетения В-системы наиболее выражена у больных, зараженных аскаридиями и гетеракисами на фоне поствакцинального иммунитета, чем при моноинвазиях. Павловский Е.Н. с соавт (1937 - 1959), анализируя литературные данные, отмечают, что исследователи, изучая процесс одновременного паразитирования гельминтов установили: 1. при заражении животных несколькими видами гельминтов угнетается развитие половозрелых гельминтов; 2. снижается или увеличивается интенсивность инвазии; 3. удлиняются сроки развития паразитов; 4. особи разных видов достигают меньших размеров; 5. меньшего веса; 6. максимальная приживаемость тех видов гельминтов, преимагинальный срок которых короче, имеются и работы, указывающие о синергическом действии гельминтов. Таким образом, вопрос о взаимодействии гельминтов очень важный в практическом отношении — имеем ли мы в определенных случаях ослабление иммунитета к одному виду под влиянием «вмешательства» другого и, следовательно, более сильное поражение более выраженными клиническими проявлениями или определенный симбиоценоз.
Вопрос о влиянии смешанных инвазий на иммунный статус птиц изучается сравнительно недавно. Э.Х. Даугалиева (1981), наблюдая взаимодействие аскаридий и гетеракисов на организм птиц, установила, что приживаемость гельминтов была от одной дозы почти одинакова, а в патологическом аспекте их эффект суммировался, о чем говорит большая задержка в весе, витаминном дефиците, нарушении белков и ферментов. В организме млекопитающих при гельминтозных инвазиях происходит многосторонняя иммунобиологическая перестройка, включающая различные ферменты клеточного и гуморального иммунитета, а также изменение активности факторов естественной резистентности (Е.С. Лейкина, 1976, 1985; Э.Х. Даугалиева 1981, 1986, 1990 и др.). Особенности проявления клеточного и гуморального иммунитета зависят от вида гельминта, дозы и кратности заражения, стадии развития инвазионного процесса. Смешанное инвазирование животных оказывает более патогенное действие, чем заражение одним из этих видов гельминтов (Е.С. Лейкина, 1976; Э.Х. Даугалиева, 1986; С.Н. Пономарь, 1990 и др.). Глубина нарушения в системе иммунитета коррелирует со степенью тяжести течения инвазионных болезней и связана с супрессивным действием на Т-систему (Н.И. Тумольская с соавт., 1967, 1983). Это приводит к нарушению клеточного звена и его регуляторного влияния, что обуславливает неконтролируемый иммунный ответ. Гиперпродукция специфических антител и продолжительная стимуляция антигенами создают благоприятные условия для образования иммунных комплексов Э.А. Кощуба с соавт. (1985); А. Capron et al. (1986); Е.С.Лейкина (1997). Предполагаются различные механизмы угнетающего действия антигенов гельминтов на иммунную систему. Broody N. et all. (1989) связывает это с изменением состава популяции Т-лимфоцитов3 в частности, с увеличением Т-супрессоров, подавляющих метаболизм других субпопуляций Т-лимфоцитов и дифференцировки В-лимфоцитов в плазматические клетки. Одним из важных механизмов иммуно супрессии является подавление пролиферации Т- и В-лимфоцитов особыми цитотоксическими веществами, продуцируемыми гельминтами (B.C. Ершов, Е.С. Лейкина, 1984; И.С. Каныгина, 1989; СИ. Пономарь, 1990; Э.Х. Даугалиева, К.Г. Курочкина, 1996).
Основные гельминтозы кур в Липецкой области
Исследования проводили в фермерских хозяйствах Липецкой области, где цыплята и куры находились на напольном содержании в течение 2001-2003 гг. До конца 80-х годов основное содержание кур на птицефабриках было клеточным, поэтому вопрос о гельминтозах не возникал. В связи с перестройкой в первой половине 90-х годов поголовье кур на птицефабриках снизилось на 30-40%, стали появляться фермерские хозяйства, т. е. расширилось поголовье кур в частном секторе. К концу 90-годов поголовье кур при напольном содержании увеличилось, что повлекло за собой гельминтозы и эймериозы. Возникла необходимость проводить антипаразитарные мероприятия, а для этого необходимо было выяснить зараженность птиц, которую мы определяли по данным копроскопии и данным гельминтологического вскрытия цыплят и кур. Количество яиц аскаридии варьировало от 10,3 ± 1,9 до 96,6 ± 8,2, количество яиц гетеракисов от 10,0 ± 0,2 до 80Д ± 10,2. Ооцисты кокцидий были в большом количестве в поле зрения микроскопа. Зараженность цыплят тремя видами паразитов обнаружили в 578 пробах фекалий, зараженность аскаридиями и гетеракисами - в 550 пробах; аскаридиями и кокцидиями - в 38 пробах. Полученные данные копроскопических исследований показали, что у цыплят при напольном содержании аскаридии чаще всего паразитируют совместно с кокцидиями и с гетеракисами. Зараженность цыплят нематодами по данным вскрытия. При вскрытии вынужденно убитых или павших цыплят в возрасте от 15 до 60 дней видно, что из 241 цыпленка аскаридии были найдены у 86,8%, гстеракисы - у 84,7%. У 145 цыплят обнаружили совместное паразитирование аскаридии и гетеракисов, у 66 - только аскаридии, у 42 - гетеракисы. Исходя из полученных данных, можно предположить, что между аскаридиями, гетеракисами и кокцидиями существуют сипергетические взаимоотношения. В связи с этим было интересно проследить и влияние смешанных инвазий на организм птиц, чему и посвящен следующий раздел работы. 2.3. Влияние микстинвазий на физиологические показатели и иммунобиологическую реактивность птиц Нами установлено, что в фермерских птицеводческих хозяйствах с различной технологией разведения птицы регистрируются смешанные формы инвазий довольно часто.
Кроме того, птица подвергнута повторному заражению этими же паразитами, что говорит о снижении иммунобиологической реактивности птиц. С целью изучения влияния смешанных инвазий на физиологические показатели и иммунный статус птицы провели опыты на экспериментально зараженных птицах. По принципу аналогов подобрали 60 цыплят в возрасте одного месяца и сформировали из них 4-е группы по 15 голов каждая. Птицу первой группы заражали яйцами аскаридий в дозе 5000+67 экз./гол., второй группы - яйцами гетеракисов в дозе 5000+82 экз./гол., третьей группы - одновременно яйцами аскаридий и гетеракисов по 1000+74 экз./гол., четвертая группа - служила контролем. Гематологические, иммунобиологические и гельминтологические исследования птицы проводили через 1, 3, 5, 10, 15, 20 и 30 дней после их заражения. Результаты исследований представлены в таблице 5. Установили, что цыплята третьей группа по сравнению с контрольными и двумя подопытными группами отстают в росте, они малоподвижны, видна бледность слизистых оболочек. За 30 дней прирост массы тела у цыплят третьей группы составлял 89,0+6,4 г, второй группы 178,8+4,4 г, первой группы - 174,2+9,8 г, и у интактных в отношении гельминтов цыплят -297,2+13,0 г. Количественные различия прироста массы тела у цыплят в первые дни после заражения, по нашему мнению, связаны выраженными функциональными нарушениями различных систем и органов, обусловленными миграцией паразитов. С началом яйцекладки гельминтов темп прироста массы тела у цыплят подопытных и контрольных групп были примерно одинаковым, однако, масса тела цыплят в контрольной группе оставалась значительно выше. Патогенное действие паразитов было более выраженным в период от заражения до начала их яйцекладки, это подтверждается значительными отклонениями в общей резистентности и иммунобиологической перестройкой организма птиц. Определяя влияние смешанных инвазий на состояние иммунного статуса цыплят, изучили состояние активности В- и Т-систем иммунитета. Из материалов таблицы 7 видно, что при однократном заражении птицы повышению активности В-системы иммунитета предшествовало появление антител в периферической крови. Так, в крови цыплят первых 3-х групп количество В-лимфоцитов на 5-й день после инвазирования увеличивалось до 20,0+0,4% в первой группе, до 20,2+0,4 во второй и до 19,8+0,1% в третьей группе. У контрольных животных количество В-лимфоцитов оставалось на уровне 19,0+0,9%. При этом, начиная с 10-го дня, у цыплят третьей группы количество В- лимфоцитов уменьшилось до 12,2+0,4%; на 15-й день до 12,0+0,1%; на 30 день - до 10,3+0,7%. Соответственно, в первой и второй группах на 10 день снизилось до 17,8+0,1 - 15,8+0,9%; на 15 день - до 14,9+1,1 - 15,3+0,8; на 30 день снизилось до уровня 14,0+0,4 - 15,0+0,8 (рисунок 4). В процессе развития инвазионного процесса у цыплят, гельминты угнетают Т-клеточное звено иммунитета после заражения. У цыплят, зараженных только яйцами аскаридий или гетеракисов на 30-й день после заражения количество Т-лимфоцитов уменьшалось соответственно до 28,2+1,6 и 29,8+1,2%. В третьей группе активность Е- РОК снижалась постепенно. На пятые сутки она составляла 28,7+1,3%; на 10-й день - 20,8+1,0%; на 15-й день - 20,9±1,0% и на 30-й день - 20,1+1,2% (рисунок 5). Полученные результаты экспериментальных исследований подтверждают, что одновременное инвазирование цыплят яйцами аскаридий и гетеракисов в сравнении с моноинвазией вызывает более значительные изменения в Т- и В-системах иммунитета. При убое и вскрытии птицы подопытных и контрольных группах установили, что количество гельминтов в кишечнике отдельных особей было неодинаковым. У цыплят первой группы нашли от 28 до 68 аскаридий (М = 48,8+8,4); второй - от 61 до 92 гетеракисов (М = 76,5+11,4); третьей - аскаридий от 33 до 81 экземпляров (М = 77+10,7) и гетеракисов от 68 до 112 экземпляров (М = 90+11,9). Результаты гельминтологических исследований подтверждают, что при смешанных инвазиях не отмечено выраженной конкуренции гельминтов. Смешанные инвазии оказывают более выраженное воздействие на организм хозяина, выражающееся увеличением приживаемости гельминтов: аскаридий в 1,6 раза и гетеракисов в 1,17 раза. Из представленных выше данных видно, что у птиц при моноинвазиях в большей степени, чем при микстинвазиях происходит активация В-иммунной системы организма. Следует отметить, что при микстинвазиях усиление В-иммунной системы было кратковременным и уже к 10-му дню наступает ее значительное истощение. Происходит снижение от уровня достигнутого на 5-й день после заражения, практически более чем на одну треть. Падение активности В-лимфоцитов продолжает снижаться при моноинвазиях до 30 дня (период наблюдения).
Под воздействием моно- и микстинвазий в организме цыплят первоначально (на 5-10 день после заражения) происходит увеличение Т-лимфоцитов, с последующим постепенным снижением. Однако, к 30 дню аскаридиозной инвазии количество Т-лимфоцитов постепенно повышается, но остается ниже контрольной группы в 1,14 раза; при гетеракидознои инвазии - соответственно в 1,07 раза; при микстинвазни - количество Т-лимфоцитов к 30 дню после заражения в 1,6 раза ниже, чем у цыплят контрольной группы. При убое и вскрытии цыплят, количество гельминтов в кишечнике колебалось: в 1 группе от 26 до 68 аскаридии, во 2 - 42-119 гетеракисов, в 3 - 31-115 аскаридии и 27-113 гетеракисов. Количество ооцист в 1 г фекалий составило: в 1-ой группе - 65-117 экз., во 2 - 216-324, в 3 - 112-190. В контрольной группе гельминты и ооцисты кокцидий не обнаружены. Известно, что гельминты представляют собой многоклеточные организмы, содержащие значительный набор антигенов. Личинки и взрослые особи обладают антигенными различиями, что выгодно для паразита, так как с переходом в новую стадию развития какое-то время не срабатывают механизмы защиты организма. Изменения количественных показателей В- и Т-лимфоцитов, по-видимому, связаны с определенными стадиями развития гельминтов и ооцист кокцидий. Разнообразное проявление иммунологической реактивности птиц можно объяснить тем, что возбудитель, проникший в организм вторым застает его иммунную систему функционально активной, либо подавленной. Супрессия иммунной системы организма хозяина, вызванная первоначально гельминтами и простейшими является, с одной стороны, условием длительного выживания гельминтов, а с другой - причиной благоприятных проявлений для роста и размножения ооцист кокцидий.
Фармакотоксикологические свойства и терапевтическая эффективность препарата альбамелин
Альбамелин представляет собой композицию альбендазола и цеолита в соотношении 10 : 90. Препарат обладает широким спектром нематодоцидного, цестодоцидного и трематодоцидного действия. Один из основных вопросов, возникающий перед токсикологическими исследованиями при изучении любого вещества -это параметры острой токсичности препарата, его потенциальная опасность. Параметры острой токсичности необходимы для установления степени опасности химического вещества, а также для дальнейших исследований, где требуется знание максимально переносимых доз. Полученные при этом сведения о токсических свойствах нового препарата необходимы для определения коэффициента токсичности - отношение дозы, соответствующей ЛДзо к терапевтической. 2.4.1. Острая токсичность альбамелина Для определения параметров острой токсичности готовили суспензию, для чего брали 21,0 г альбамелина, тщательно растирали в ступке пестиком и по частям доводили 2% крахмальным клестером до массы 50,0 г. Полученная суспензия была однородной, в 1 мл содержалось 420 мг альбамелина. Препарат вводили животным натощак в дозах: для белых мышей -первой группе - 0,1 мл (2100 мг/кг); второй - 0,2 мл (4200 мг/кг); третьей - 0,3 мл (6300 мг/кг); четвертой - 0,4 мл (8400 мг/кг); пятой - 0,5 мл (10500 мг/кг); шестой - 0,6 мл (12600 мг/кг) (таблица 8); для белых крыс - первой группе 4,0 мл (8400 мг/кг); второй 7,0 мл (14700 мг/кг); третьей 10,0 мл (21000 мг/кг); четвертой 13,0 мл (27300 мг/кг); пятой 16,0 мл (33600 мг/кг) (таблица 9). Клиническая картина при введении препарата в желудок белым мышам и крысам в токсических и смертельных дозах развивалась в течение первых часов и характеризовалась следующими признаками; угнетение, вялость мышей, у некоторых судороги, учащённое дыхание, тремор, возбуждение, сопровождающееся резким подпрыгиванием через 10-20 мин с последующим угнетением, тусклость глаз у погибающих мышей. Гибель мышей, как правило, происходила в первые 6 часа. ЛДо альбамелина при введении в желудок белых крыс составила 8400 мг/кг по лекарственной форме; ЛДіб составила 12840 мг/кг; ЛД5о составила 19020 мг/кг; ЛД8д составила 30900 мг/кг; ЛДюо - 33600 мг/кг. Вычисляем доверительные границы ЛД5о- 19020 : 1,35 = 14088 мг/кг (нижняя доверительная граница); 19020 х 1,35 = 25677 мг/кг (верхняя доверительная граница). Таким образом, среднесмертельная доза альбамелина для белых мышей при алиментарном введении составляет 6510 мг/кг, для белых крыс 19020 мг/кг, что позволяет отнести этот препарат к lV-му классу опасности (ГОСТ 12.01.007-76). 2.4.2. Кумулятивные свойства альбамелина Определение кумулятивного эффекта необходимо для правильного выбора коэффициента запаса при установлении предельно-допустимых доз в профилактике и лечении гельминтозов. Кумулятивные свойства альбамелина изучали методом Лима и соавт. (1961) (тест субхроническая токсичность). Опыт проводили на 60 белых мышах-самках живой массой 19-20 г, которые по принципу аналогов были разделены по 30 мышей в каждой. Животные первой группы получали испытуемый препарат, животные второй группы служили контролем. Препарат вводили животным ежедневно, индивидуально, при помощи шприца с оливой, алиментарным путем в виде суспензии. Все животные содержались на стандартном корме, одинаковом для обеих групп.
В течение 32 дней за всеми животными вели наблюдения. В течение первых четырех дней животные опытной группы получали препарат в дозе равной ОД ЛД50. Через каждые четыре дня, на пятый дозу увеличивали в 1,5 раза. В течение опыта вели наблюдение за животными, отмечали их смертность. Результаты опыта приведены в таблице 10. О влиянии альбамелина па антитоксическую функцию печени взяли - 70 белых беспородных мышей, массой 18-20 грамм и разделили их иа 3 группы. Контрольных и подопытных животных подбирали парами по весу и гексенал им вводили одновременно. Альбамелин в дозе 5 мг/кг и 10 мг/кг (по ДВ) массы тела давали перорально индивидуально с помощью зонда в виде взвеси в 2% -ном крахмальном клейстере. Раствор гексенала готовили непосредственно перед применением и вводили внутри брюшинно в дозе 80 мг/кг массы тела 1 мл/100 г массы) через 1, 3 и 24 часа после дачи препарата. Скорость наступления и длительности гексеналового сна отсчитывали с момента принятия «бокового положения» до первых попыток изменить его и выражали в минутах. Результаты исследований функционального состояния печени представлены в таблице 12. Как показали исследования, препарат в испытуемых дозах достоверного увеличения времени сна у мышей не вызывал. Следовательно, альбамелин не обладает гепатотропным действием и не приводит к нарушению функционального состояния печени. 2.4.4. Оценка терапевтической эффективности препарата альбамелин (10%) Опыты проводили на спонтанно инвазированных аскаридиями курах двух возрастных групп: цыплятах 60-70 дневного возраста и курах-несушках. Первый опыт провели на 600 цыплятах 60-70 дневного возраста спонтанно инвазированных аскаридиями и частично гетеракисами. Цыплят разделили на 5 групп: цыплятам первой группы назначали альбамелин в дозе 5 мг по ДВ на голову с кормом утром два дня подряд, второй - в дозе 7 мг на голову, третьей - 10 мг на голову также два дня подряд, четвертая группа служила базовым контролем и получала панакур 22% гранулят 2 в дозе 5 мг/кг по ДВ на голову два дня подряд. Цыплята пятой группы служили контролем и оставались без лечения. Аптгельминтпую эффективность препаратов определяли по результатам вскрытия по 20 голов птиц из каждой группы через 15 и 30 дней после дачи препаратов согласно «Методическим рекомендациям по оценке антгельминтиков в ветеринарии» (1986). Второй опыт провели на 400 спонтанно зараженных курах несушках: курам первой группы (200 голов) назначали альбамелин в дозе 10 мг на голову по ДВ с кормом два дня подряд в утреннее кормление, второй (100 голов) - базовый препарат - панакур (22% гранулят) в дозе 5 мг/кг по ДВ на голову два дня подряд в утреннее кормление, третья группа кур (100 голов) служила контролем. Результаты исследований представлены в таблице 13.
Сравнительная терапевтическая эффективность альбамелина и альбена
Для подтверждения полученных данных провели опыт по сравнительной терапевтической эффективности изучаемых препаратов альбамелина и альбена с уже применяемым в ветеринарии панакуром 22% гранулятом. В опыте использовали 80 кур, спонтанно зараженных аскаридиями и гетеракисами. Из кур сформировали четыре равные группы. Птицы первой группы получили альбамелин в дозе 10 мг/кг, второй - альбен в дозе 10 мг/кг, третьей - панакур 22% гранулят в дозе 5 мг/кг, четвертой - препарат не давали, и она служила контролем. Препараты смешивали с небольшой порцией сухого комбикорма и скармливали курам два дня подряд в утреннее кормление. Результаты лечения через 10 дней, так же как и зараженность птиц до лечения, выявляли по данным двукратного копроскопического исследования. После лечения куры контрольной группы выделяли яйца нематод в том же количестве, что и в среднем составило 28,8+1,4 яиц аскаридий и 24,2±1,2 яиц гетеракисов. Под действием альбамелина, альбепа и панакура куры полностью освободились от нематод. Таким образом, новые отчественные препараты - альбамелин и альбен обладают высокой нематодоцидной эффективностью и не уступают по эффективности импортному препарату панакур грапулятом (22%). Однако эффективность отчественных препаратов выше, т. к. цепа их в 3-4 раза дешевле. 2.7. Влияние альбена гранулята и альбамелина на организм цыплят В первом опыте на 60 цыплятах 40 дневного возраста, спонтанно инвазированных аскаридиями и эймериями (Е. menella), изучили переносимость различных препаратов. Из цыплят сформировали 7 равных группы. Первой, второй, третьей группам цыплят индивидуально двукратно с интервалом 24 часа задали альбамелин в дозах 10, 50 и 100 мг/кг массы птицы, соответственно. Четвертой, пятой, шестой группам - альбен в тех же дозах. Цыплята седьмой группы служили контролем. Убивали и вскрывали по 3 цыпленка через 1, 5 и 10 суток после второй дачи препарата. В результате видимых клинических признаков отклонения от показателей нормы не отметили, цыплята были активными. Осмотр органов и тканей убитых опытных цыплят дает основание сказать, что препараты альбамелин и альбен не вызывали видимых макроскопических изменений в оравнах и тканях. При вскрытии кишечника опытных цыплят через сутки аскаридий находили во всех группах цыплят в количестве от 3 до 19 экз, через 5 и 10 суток у опытных цыплят всех групп аскаридий не обнаружили.
У контрольных цыплят число аскаридий было от 17 до 98 экз., что в среднем составило 57,5 экз. Результаты опыта показали, что препараты в терапевтических дозах хорошо переносится цыплятами. В следующем опыте на 20 цыплятах русской белой породы, спонтанно инвазированных на 100% аскаридиями, изучали гематологические показатели под действием препаратов альбамслин и альбен в пятикратно увеличенных дозах - 50 мг/кг массы тела по лекарственной форме. Из цыплят сформировали 4 равные группы (табл. 22). Гемоглобин, СОЭ, форменные элементы крови и лейкоцитарныую формулу определяли до дачи препаратов, через 1, 5и 10 суток после индивидуального двукратцого введения альбамелина и альбена в вышеуказанных дозах. Результаты исследований свидетельствуют, что препараты в пятикратно увеличенных дозах, не оказывали отрицательного влияния на показатели крови, которые у контрольных и опытных цыплят варьировали в допустимых пределах, но находились ближе к нижней границе (рис. 6, 7, 8, 9, 10, 11). При вскрытии опытных птиц средняя зараженность цыплят контрольной группы составила 43,2 аскаридии на голову, под действием антгельминтиков все группы цыплят полностью освободились от аскаридии. Предыдущими нашими исследованиями установлено, что заражение цыплят культурой аскаридий, гетеракисов и ооцист кокцидий вызывает снижение иммунного статуса в течение 30 дней исследования, причем Т-клеточный дефицит, возникающий в ответ на заражение сочетается с существенными сдвигами количественного состава субпопуляций Т-лимфоцитов, осуществляющих регуляторную функцию, а именно за счет увеличения тефиллинчувствительных Т-лимфоцитов и снижения теофнллинрезистентных Т-лимфоцитов. В связи с этим мы решили изучить влияние альбамелина и альбена на иммунотропные свойства организма цыплят. В данном опыте изучили уровень иммунологического статуса цыплят, спонтанно зараженных аскаридиями и гетеракисами на фоне дегельминтизации их альбамелшюм и альбеном. Под опыт взяли 60 зараженных цыплят 45 дневного возраста подобранных по принципу аналогов. Птиц разделили иа 3 группы: 1 группа (20 голов) - контрольная, препаратов не получала; 2 группа (20 голов) - цыплятам был задан альбамелин в дозе 10 мг/кг двукратно; 3 группа (20 голов) - продегельминтизировали альбеном из расчета 10 мг/кг двукратно. Зараженность цыплят аскаридиями и гетеракисами была приблизительно одинаковой у контрольных и подопытных птиц. Гельминтологическое вскрытие. При гельминтологическом вскрытии цыплят по окончанию опыта было установлено: у цыплят 1 группы (контрольной) количество аскаридий составляло 34,2±1,8 экз., гетеракисов 42,8±2,9 экз., цыплята 2 группы были практически чистыми, у них находили лишь единичные ооцисты кокцидии, в 3 группе цыплят также гельминтов не находили. Динамика лейкоцитов (таблица 23, рисунок 12). Из данных таблицы видно, что как до введения препаратов, так и на протяжении 10 дней у цыплят 1 и 2 групп наблюдался незначительный лейкоцитоз, однако, к 30 дню количество лейкоцитов у подопытных цыплят было на уровне контрольных. Динамика Т- и В-лимфоцитов. Изменения относительного количества розеткообразующих Т-лимфоцитов у подопытных цыплят всех групп носило волнообразный характер (таблица 24, рисунок 13). Введение альбамелина способствовало угнетению спонтанного розеткообразования лимфоцитов периферической крови цыплят, продолжающееся до 10 дня после дегельминтизации (33,1±1,2% против 39,8±1,2% в контроле). Процентное содержание Т-лимфоцитов оставалось достоверно сниженным у цыплят, получивших альбамелин и к концу наблюдений относительное количество Т-лимфоцитов составило 31,2+1,2% у цыплят этой группы, против 39,7±0,2% в контроле и 35,2±0,8% у дегельмиптизированных альбеном. Следует отметить, что терапия альбеном обусловила также достоверное повышение в крови цыплят тимусзависимых лимфоцитов, способных образовывать интенсивные розетки, их количество составляло 14,8±0,8 - 14,4+0,2% против 10,8+0,2 - 11,2+0,4% в контроле. Результаты исследований, приведенные в таблице 25, говорит о том, что у цыплят которым вводили альбен, отмечалось достоверное повышение розетко образующей способности В-лимфоцитов. Установлено достоверное по сравнению с контролем и другими подопытными группами цыплят увеличение В-лимфоцитов до 21,2+0,7% на 30 день против 16,8+0,8% в группе, получавшей альбамелин и 19,8+0,9 в контроле (рисунок 14).
