Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы 12
1.1. Регенерация эпителия 12
1.2. Методы оптимизации регенерации слизистой оболочки полости рта 14
1.3. Роль факторов роста в регуляции репаративной регенерации покровных тканей 17
1.4. Влияние цитокинов на регуляцию раневого процесса 19
1.5. Эпидермальный фактор роста 26
Глава II. Объекты и методы исследования 35
2.1. Характеристика РЭФР 35
2.2. Объекты исследования 37
2.3. Методы исследования 41
Глава III. Результаты собственных исследований
3.1. Динамика заживления повреждений слизистой оболочки твердого неба у крыс при ненарушенном иммунном статусе без стимуляции репаративного процесса рекомбинантным эпидермальным фактором роста 46
3.2. Динамика заживления повреждений слизистой оболочки твердого неба у крыс при ненарушенном иммунном статусе на фоне применения РЭФР (100 мкг/л) 61
3.3. Динамика заживления повреждений слизистой оболочки твердого неба у крыс при ненарушенном иммунном статусе на фоне применения РЭФР (500 мкг/л) 73
3.4. Динамика заживления повреждений слизистой оболочки твердого неба у крыс с экспериментальным иммунодефицитом без стимуляции репаративного процесса рекомбинантным эпидермальным фактором роста
3.5. Динамика заживления повреждений слизистой оболочки твердого неба у крыс с экспериментальным иммунодефицитом на фоне применения РЭФР (100 мкг/л) 94
3.6. Динамика заживления повреждений слизистой оболочки твердого неба у крыс с экспериментальным иммунодефицитом на фоне применения РЭФР (500 мкг/л) 102
Глава IV. Обсуяедение результатов исследования 112
Выводы 129
Практические рекомендации 131
Список использованной литературы 132
- Методы оптимизации регенерации слизистой оболочки полости рта
- Эпидермальный фактор роста
- Методы исследования
- Динамика заживления повреждений слизистой оболочки твердого неба у крыс при ненарушенном иммунном статусе на фоне применения РЭФР (500 мкг/л)
Введение к работе
Актуальность темы
Особенности заживления ран в полости рта обусловлены наличием разнообразной микрофлоры, постоянной механической, термической и химической нагрузками на ткани этой локализации и высокой специфичностью их гистологического строения [Измайлов Г.А., Измайлов С.Г., Логинов В.И., Подушкина И.В., 2007]. Операционные раны, осложненные патогенной микрофлорой, а так же гнойные раны с высокой степенью микробной обсемененности нередко приводят к развитию вторичного иммунодефицита или наоборот, долго незаживающие раны являются следствием неполноценности иммунной системы [Кологривова Е.Н., 2003]. Иммунодефицитные состояния способствуют бактериальной колонизации раневой поверхности, увеличивая площадь воспаления и грануляционной ткани, что может затянуть процесс заживления ран и привести к образованию незаживающих трофических язв [Калинина Н.М., Сюсюкин А.Е., Вологжанин Д.А., 2006]. Данная проблема наиболее актуальна при лечении пациентов пожилого возраста и с анамнезом, отягощенным общесоматическими заболеваниями: сахарным диабетом, патологией сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта, гипоксическими состояниями, врожденными и приобретенными иммунодефицитами, сопровождающимися снижением репарационного потенциала слизистой оболочки полости рта [Семенков В.Ф., Карандашов В.И., Ковальчук Л.В., 2008]. Эти состояния вызывают нарушения всех видов обмена, приводящих к снижению синтеза и гуморального транспорта, а также секреции со слюной факторов роста и содержания их в крови и ткани. Общим принципом лечения травм слизистой оболочки полости рта (СОПР) в стоматологической клинике является применение средств, направленных на усиление регенеративного процесса в тканях. Но, наряду с оптимизацией раневого процесса, у таких пациентов большое значение приобретает коррекция общего и местного
иммунных статусов. Поэтому в комплексном лечении повреждений слизистой оболочки полости рта, вызванных ортопедическими конструкциями, оперативным вмешательством, травмами, носящими иммунологический характер и другими патогенными факторами, целесообразно использовать рекомбинантный эпидермальный фактор роста (РЭФР), способствующий заживлению травматических поражений слизистой оболочки полости рта.
В РФ рекомбинантный эпидермальный фактор роста человека синтезирован с использованием Е. Coli. Данный фактор представляет собой полипептид, который не обладает видовой специфичностью, т.е. он может сохранять активность у животных различных видов. РЭФР в настоящее время проходит экспериментальную проверку, и в дальнейшем может быть использован в качестве специфического стимулятора заживления повреждений слизистой оболочки полости рта. Исследование этого вопроса является актуальной проблемой стоматологии и патофизиологии. Особенно при необходимости оптимизации заживления повреждений слизистой полости рта при общесоматических заболеваниях, сопровождающихся иммунодефицитными состояниями. В связи с этим сформулирована цель нашей работы.
Цель исследования:
Обосновать в эксперименте возможность применения рекомбинантного эпидермального фактора роста для оптимизации заживления повреждений слизистой оболочки полости рта на фоне иммунодефицитного состояния.
Задачи исследования:
1. Провести сравнительную оценку репаративной регенерации повреждений слизистой оболочки полости рта под влиянием рекомбинантного эпидермального фактора роста при ненарушенном иммунном статусе и при экспериментальном иммунодефиците.
-
Выявить особенности репарагивной регенерации слизистой оболочки полости рта при экспериментальном иммунодефиците в зависимости от концентрации рабочего раствора рекомбинантного эпидермального фактора роста.
-
Определить скорость эпителизации повреждения слизистой оболочки полости рта при экспериментальном иммунодефиците под влиянием рекомбинантного эпидермального фактора роста и сравнить с аналогичным показателем при ненарушенном иммунном статусе.
Научная новизна исследования
Впервые экспериментально обоснована возможность применения отечественного РЭФР для стимулирования заживления повреждений слизистой оболочки полости рта при иммунодефицитом состоянии. Установлены общие закономерности заживления повреждений слизистой оболочки твердого неба при применении РЭФР в различных концентрациях в условиях ненарушенного иммунного статуса и экспериментального иммунодефицита, вызванного циклофосфаном. Доказано, что иммунодефицитное состояние снижает потенциал репарагивной регенерации слизистой оболочки твердого неба экспериментальных животных в 10 раз и сопровождается увеличением размера повреждения в 1,5 раза в течение первых 3 суток после нанесения. Показано значительное ускорение динамики репарагавных процессов, протекающих при повреждении слизистой оболочки твердого неба, в ответ на применение РЭФР.
Впервые определены темпы сокращения размера и скорость эпителизации повреждений слизистой оболочки твердого неба при иммунодефицитном состоянии. Новыми являются данные о том, что применение РЭФР в эксперименте ускоряет и оптимизирует процесс заживления повреждений слизистой оболочки полости рта при иммунодефицитном состоянии.
Практическая значимость работы
Работа представляет собой доклиническое экспериментальное исследование, которое послужило основанием для составления рекомендаций по применению отечественного РЭФР для оптимизации репаративных процессов при повреждениях слизистой оболочки полости рта на фоне иммунодефицитного состояния. На основании данных, полученных в ходе исследования, доказана высокая эффективность применения РЭФР для ускорения эпителизации повреждений слизистой оболочки полости рта. Предложено использование РЭФР в создании лекарственных форм для местного применения.
Основные положения, выносимые на защиту
Применение рекомбинантного эпидермального фактора роста оказывает достоверный эффект ускорения репаративной регенерации слизистой оболочки полости рта при экспериментальном иммунодефиците, завершающейся полноценным восстановлением структуры тканей на участке повреждения.
Скорость эпителизации повреждений слизистой оболочки полости рта при экспериментальном иммунодефиците увеличивается при применении рекомбинантного эпидермального фактора роста в концентрации 100 мкг/л и возрастает при повышении концентрации рабочего раствора данного препарата до 500 мкг/л.
Применение рекомбинантного эпидермального фактора роста при экспериментальном иммунодефиците усиливает репаративные процессы в слизистой оболочке полости рта, превышая аналогичный показатель у животных с ненарушенным иммунным статусом.
Внедрение результатов исследования
Материалы исследования внедрены в учебный процесс кафедр госпитальной терапевтической стоматологии, пародонтологии и гериатрической стоматологии, патологической физиологии и
используются преподавателями кафедр на теоретических занятиях со студентами и ординаторами, в лекционном материале и методических рекомендациях. Материалы диссертации дают представление об этапах раневого процесса и преимуществах использования рекомбинантного зпидермального фактора роста для оптимизации заживления повреждений слизистой оболочки полости рта по сравнению с традиционными методами.
Личное участие соискателя в разработке проблемы
Автором лично была проведена экспериментальная часть, в которую
входило нанесение повреждения на слизистую оболочку твердого неба,
послеоперационное ведение крыс, выведение животных из эксперимента,
макроскопическое исследование полученных препаратов:
планиметрическая оценка, определение темпов регенерации и скорости эпителизации раневых дефектов. Автором лично был проведен статистический анализ полученных в ходе исследования результатов, подготовлены текстовая и иллюстрированная части работы.
Публикации
По материалам исследования было опубликовано 6 печатных работ, в том числе: 4 в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.
Апробация результатов работы
Основные положения диссертации доложены на:
XXXII Итоговой конференции молодых ученых МГМСУ (Москва, Россия, 2010);
совместном заседании кафедры госпитальной терапевтической стоматологии, гериатрической стоматологии и пародонтологии; кафедры патологической физиологии; лаборатории по изучению боли и методов обезболивания отдела функциональных основ стоматологии
НИМСИ ГОУ ВПО Московского государственного медико-стоматологического университета Росздрава (29 апреля 2010 г.).
Объем и структура диссертации
Методы оптимизации регенерации слизистой оболочки полости рта
Негативные особенности заживления ран в полости рта хорошо известны. Они обусловлены наличием разнообразной микрофлоры, постоянной механической и термической нагрузкой на ткани этой локализации и высокой специфичностью их гистологического строения [13,15,58,95]. Учитывая, что регенерация тканей представляет собой четко регулируемый каскадный и многокомпонентный морфофункциональный процесс, обеспечиваемый сложными кооперативными межклеточными взаимодействиями, представляет интерес поиск препаратов, применение которых обеспечило бы наилучший результат регенерации тканей пародонта [6,27,40,68].
В стоматологической практике часто встречаются травмы слизистой оболочки рта, возникновение которых обусловлено различными хирургическими вмешательствами, в т.ч. кюретажем пародонтальных карманов, лоскутными операциями в пародонтологии и зубной имплантацией [37,38,53,104,132]. Нередко наблюдаются ожоги, возникающие при местном применении лекарственных препаратов, повреждение слизистой оболочки рта в период адаптации к частичным и полным съемным протезам, механическое воздействие на десну и слизистую оболочку во время препарирования твердых тканей зубов, травмирование слизистой оболочки десны краем искусственной коронки и др. [12,25,27,142]. Эта проблема наиболее актуальна при лечении пациентов пожилого возраста и с анамнезом, отягощенным общесоматическими заболеваниями: сахарным диабетом, патологией сердечнососудистой системы, желудочно-кишечного тракта, врожденными и приобретенными иммунодефицитами [47,49,57,77,152].
Операционные раны, осложненные патогенной микрофлорой, а так же гнойные раны с высокой степенью микробной обсемененности нередко приводят к развитию вторичного иммунодефицита или наоборот, долго незаживающие раны являются следствием неполноценности иммунной системы [19,36,48,56,155]. Поэтому у таких пациентов, наряду с оптимизацией раневого процесса, большое значение приобретает коррекция общего и местного иммунных статусов [2,20,62].
Несмотря на различную этиологию поражений, общим принципом лечения таких пациентов в стоматологической клинике является применение средств, направленных на усиление регенеративного процесса в тканях [2,3,18]. В настоящее время врачу-стоматологу предоставляется огромный выбор лекарственных средств для лечения таких больных. Это и традиционные масляный раствор витаминов А и Е, каротолин, облепиховое масло, актовегин, пленка на основе облепихового масла "Облекол", препараты «Олеогель-Липофита», «Пародиум-гель» [13,41,51,54]. Среди современных средств для регенерации поврежденной слизистой оболочки в стоматологической клинике, отмечают стерильную губку «Метуракол» с содержанием 0,5% метилурацила, которая наряду с ранозаживляющим действием обладает еще противовоспалительным и иммунотропным [23,42]. При всей доступности и терапевтическом эффекте данных средств стоматологи отмечают ряд недостатков, к которым можно отнести слабую фиксацию на слизистой оболочке полости рта, окрашивание поверхности в оранжевый или желтый цвет, невозможность предохранения участка поврежденной слизистой оболочки от инфицирования и других воздействий [13,27]. Хороший терапевтический эффект, при отсутствии перечисленных выше недостатков, отмечен при применении солкосерилсодержащей дентинной адгезивной пасты. Данная паста не содержит воды и после абсорбции слюны она образует защитную пленку, сохраняется на раневой поверхности 3-5 часов, предохраняет рану от инфицирования [26,44]. В последнее время в стоматологической клинике получила распространение лечебно-адгезивная пленка "Диплен-Дента". Пленка хорошо фиксируется к слизистой оболочке, не вызывает неприятных ощущений в полости рта, оказывает ранозаживляющее, бактерицидное действие на поврежденную слизистую оболочку, снижает болезненность. Повышается скорость процессов эпителизации и организации.рубца [4,5,9,13,61]. Все чаще при воспалительных заболеваниях пародонта стоматологами используется гель «Метрогил-дента» [21,22]. В недавнем времени в практику лечения пародонтита введен метод инфракрасного облучения аппаратом «Световид» [52].
Для лечения травм слизистой оболочки рта традиционно используются различные аппликационные средства (растворы, мази, пасты, лаки, гели, диски, спреи и т.д.), однако они недостаточно эффективны из-за невозможности обеспечения постоянной концентрации лекарственного вещества, кратковременности его действия, дискомфорта и длительности лечения [27,42]. В связи с этим проблема лекарственной терапии травм слизистой оболочки рта остается по-прежнему актуальной.
Важнейшая роль в процессе заживления ран на этапах пролиферации и регенерации придается фибробластам, синтезирующим соединительнотканные волокна, состоящие из коллагена, эластина и протеогликанов под действием различных факторов роста [73,84].
Факторами роста называют группу белковых молекул, индуцирующих синтез ДНК в клетке [90]. Обнаружено, что спектр воздействий на клетки этих компонентов гораздо шире, чем предполагалось вначале. Так, некоторые белки этой группы в зависимости от типа клеток-респондентов могут индуцировать дифференцировку и подавлять пролиферацию [98]. Кроме того, к ним относят регуляторные полипептиды, модулирующие подвижность клеток, но не обязательно влияющие на деление клеток [85,108]. Главное отличие факторов роста от белковых гормонов состоит в ауто- или паракринном механизме действия (эндокринный механизм действия для гормонов) [65].
Как и гормоны, факторы роста взаимодействуют с рецепторами, инициируя множественные эффекты: от процессов регуляции роста, дифференцировки и экспрессии генов до угнетения апоптоза, например, в костной ткани стимулируют пролиферацию остеобластов и апоптоз остеокластов. Эффекты факторов роста, в отличие от гормонов, могут продолжаться в течение нескольких дней [70,114,153].
Факторы роста представляют собой небольшие полипептиды, которые стимулируют или ингибируют пролиферацию определенных типов клеток. Как правило, они секретируются одними клетками, а действуют на другие, но иногда они действуют на клетки, которые их секретируют (аутокринный механизм). Эти факторы важны для процессов развития эмбриона и также для поддержания клеточного баланса у взрослого организма. Например, для уравновешенного обновления клеток кожи, кишечника и кроветворной системы. Во всех этих случаях сравнительно небольшое число плюрипотентных стволовых клеток закладывают основу для образования значительного большего числа прогениторных клеток, которые затем дифференцируются дальше, превращаясь в зрелые постмитотические клетки. Последние заменяют старые клетки, которые погибают, например, за счет апоптоза [73,90,109].
Эпидермальный фактор роста
Эпидермальный фактор роста выполняет не только трофическую функцию, но и стимулирует пролиферацию кератиноцитов, взаимодействуя при этом со многими другими митогенными факторами. Так EGF стимулирует активность орнитиндекарбоксилазьт - фермента, участвующего в пролиферации клеток, и фосфолипазы А, что приводит к активации каскада арахидоновой кислоты [145,158].
Прямое действие EGF на усиление синтеза ДНК было показано на кератиноцитах мыши (линии МК-1), которые переводили в состояние покоя путем культивирования в среде без сыворотки при концентрации ионов Са менее 0,1 мМ с добавлением только инсулина и трансферрина. В этом случае добавление EGF к покоящимся культурам кератиноцитов вызывало усиление синтеза ДНК. Инсулин и холерный токсин потенцировали действие EGF, однако эти агенты не были способны индуцировать синтез ДНК в отсутствие EGF [141].
В культурах кератиноцитов мыши, растущих при низком содержании Са в среде, EGF задерживает переход клеток к терминальной дифференциации. Клетки, комитированные к дифференциации, постепенно теряют способность связывать EGF, а дифференцирующиеся клетки оказываются неспособными метаболизировать то количество EGF, которое они связали [76].
В монослойной культуре кератиноцитов человека, растущей в среде MCDB 153 с 0.1 мМ Са, радиоавтографически установлено увеличение числа меченых ядер в присутствии EGF, а также инсулина и экстракта плаценты. В то же время в линии клеток эпидермоидной карциномы человека А-431, похожей по своим характеристикам на культуры кератиноцитов, EGF в небольших количествах (5-10 нМ) вызывает резкое подавление пролиферации при сохранении жизнеспособности клеток [154]. Экзогенный EGF стимулирует также посттранскрипционный процессинг и экспорт своего рецептора таким путем, который не чувствителен к ингибиторам синтеза белка [121]. Рецепторы EGF в норме присутствуют в кератиноцитах базального слоя и нижней части шиповатого слоя., У больных псориазом они встречаются до рогового слоя и в увеличенном числе, причем обработка пораженных участков EGF в больших дозах (50 мкг/мл) в течение длительного времени приводила к снижению числа рецепторов и нормализации кожного покрова [151].
Участие EGF в передаче регуляторных сигналов в клетку осуществляется за счет взаимодействия с высокоаффинными рецепторами, которые составляют 5-10% от общего количества рецепторов EGF [83]. К числу ранних клеточных реакций на действие EGF относятся: образование инозитолфосфата, выход Са из внутриклеточных депо, повышение внутриклеточного рН, фосфорилирование рецептора EGF, индукция экспрессии онкогена c-fos [96]. На 7 линиях клеток было показано, что с увеличением плотности клеточного пласта снижается связывание EGF с клетками за счет уменьшения числа высокоаффинных рецепторов [103]. Сложная схема механизма действия факторов роста через специфические рецепторы является достаточно упрощенной и не охватывает всех возможных эффектов активированных РТК, которые могут включать взаимодействие с белками цитоскелета, регуляцию активности протеинфосфатаз, а также прямое фосфорилирование транскрипционных факторов. Кроме того, эта схема предполагает наличие только мембранно цитоплазматических эффектов, однако в последнее время появились исследования, свидетельствующие о том, что ЭФР-рецепторные комплексы могут также транслоцироваться в ядро клетки [127].
Проблема заживления и лечения ран была и остается одной из самых актуальных проблем хирургии. Операционные раны, осложненные патогенной микрофлорой, а так же гнойные раны с высокой степенью микробной обсемененности нередко приводят к развитию вторичного иммунодефицита или наоборот, долго незаживающие раны являются следствием неполноценности иммунной системы [23,48,70]. Исход раневого процесса определяется совокупностью межклеточных взаимодействий лимфоцитов, макрофагов, фибробластов, эндотелиоцитов, кератиноцитов и других клеток через прямые рецепторные и медиаторные контакты по принципу саморегуляции [69,99]. В этих процессах экзогенные цитокины выполняют двойственную функцию. С одной стороны, они инициируют миграцию клеток крови в рану, что подтверждается увеличением в 1,5-2 раза соотношения мононуклеаров и гранулоцитов на 4 день после лечения, стимулируют кислородный метаболизм и фагоцитоз, ведут к очищению раневой поверхности от гнойно
Методы исследования
Регенерацию повреждений слизистой оболочки твердого неба изучали в эксперименте на животных с ненарушенным иммунным статусом в трех группах. Животные первой группы не получали в питьевой воде РЭФР и служили контролем для оценки темпов репаративных процессов в опытных группах (II и Ш), где животные получали РЭФР в возрастающей концентрации (100 и 500 мкг/л соответственно).
В ходе исследований установлено, что заживление повреждений слизистой оболочки твердого неба у животных первой группы сопровождается стабильным сокращением размера раневого дефекта в каждый из сроков наблюдения. К третьим суткам раневой дефект не превышает своим размером исходного повреждения, но существенного сокращения его размера мы не наблюдали. К седьмым суткам размер повреждения сокращается на 26,6%. Положительная динамика сохраняется в более поздние сроки наблюдения, что к 14-м суткам проявляется уменьшением размеров раневого дефекта на 66,8% и практически полным его закрытием к 21-м суткам, когда струп составляет лишь 13,4% от размера исходного повреждения. Динамика заживления повреждений слизистой оболочки твердого неба у животных первой группы представлена на рисунке 5 и в таблице 6. (мм)
В группе І на 3-й день наблюдений размер повреждений у всех животных не отличался от первоначального в момент его нанесения и составлял 4,83±0,21мм. Макропрепараты верхней челюсти, выделенные на 3-й сутки после нанесения повреждения слизистой оболочки твердого неба, представлены на рисунке 6.
Изучение морфологических препаратов методом световой микроскопии показало, что края повреждения были ровные, а на поверхности располагался тонкий, мягкий струп из сохранивших жизнедеятельность лейкоцитов, склеенных плазмой. Центральная часть повреждения была ограничена мигрирующим пластом многослойного эпителия (Рис. 7). В прилегающих к раневому дефекту участках этот пласт был немного утолщен.
Дно повреждения образовывала костная ткань твердого неба, покрытая утолщенной надкостницей (Рис. 8). В самой кости и в надкостнице был обнаружен воспалительный процесс, а на поверхности располагался струп, состоящий из скопления сохранивших свою жизнедеятельность сегментоядерных лейкоцитов, склеенных плазмой (Рис. 9). Наряду с воспалительными изменениями, на границе повреждения с сохранившейся тканью отмечалось начало репаративных процессов в находящихся в этом участке клетках фибробластического ряда (Рис. 10).
Иногда здесь имела место миграция пласта эпителия на слой новообразованной ткани. Но во всех случаях это были весьма незначительные продвижения эпителиального пласта. fyjftuiXL л/V Сомики - Ґ 2
На 7-е сутки размер повреждения отчетливо сокращается по краю за счет миграции пласта эпителия под струп и составляет 3,67±0,42мм (Рис. 11). Область повреждения окружена пластом эпителия, который, клинообразно внедряется под расположенный на раневом дефекте струп и истончается на конце (Рис.12). Сам струп мягкий, эластичный, что связано с его постоянным увлажнением, и довольно тонкий. В его состав входят разрушающиеся лейкоциты. Под струпом на поверхности кости располагалась утолщенная надкостница с клетками фибробластического ряда (Рис. 13). В клетках регенерирующего эпителия выявлялись гранулы гликогена, заполнявшие цитоплазму новообразованных эпителиальных клеток. Гликоген полностью исчезал там, где располагались неповрежденные эпителиальные клетки (Рис. 14). По краю повреждения, под эпителием,
происходило образование грануляционной ткани, содержащей гетероморфные клеточные элементы. Основная ее масса была представлена фибробластами различной степени зрелости, макрофагами, отдельными сегментоядерными лейкоцитами и тонкими пучками коллагеновых волокон (Рис. 15). Фибробласты заполняли и саму зону повреждения, формируя поверх костной ткани грануляционную ткань, содержащую кровеносные капилляры (Рис. 16). Именно она образовывала ту основу, по которой шло напластование эпителия. Процесс миграции эпителия шел неравномерно, на что оказывали влияние и воспалительная реакция и скорость образования грануляционной ткани.
Динамика заживления повреждений слизистой оболочки твердого неба у крыс при ненарушенном иммунном статусе на фоне применения РЭФР (500 мкг/л)
В ее состав входили лейкоциты, в основном фибробласты и макрофаги. Зона повреждения часто была заполнена клетками воспалительного инфильтрата. Пласт эпителия, расположенный на поверхности этого участка, был утолщен (Рис. 59). Образовывались эпителиальные выросты, вдающиеся в подлежащую соединительную ткань. Эти выросты содержали глыбки гликогена, заполняющие цитоплазму эпителия средних и поверхностных слоев. В участках эпителия, пограничных с мигрирующими пластами, содержалось небольшое количество глыбок гликогена, почти сливающихся между собой.
Утолщенный пласт эпителия (сутки 14). Окраска гематоксилин-эозин. Увеличение х400. Рис. 59. Толстый пласт эпителия, наползающего под струп (сутки 14). Окраска гематоксилин-эозин. Увеличение 400.
Динамика заживления повреждений слизистой оболочки твердого неба у крыс с экспериментальным иммунодефицитом на фоне применения РЭФР (100 мкг/л) Регенеративные процессы в повреждениях слизистой оболочки твердого неба у животных II группы с экспериментальным иммунодефицитом протекали на фоне получения РЭФР с питьевой водой в концентрации 100 мкг/л. По сравнению с предыдущей группой, заживление раневых дефектов в контрольные сроки 3 и 7 суток не сопровождалось увеличением исходных размеров повреждения. Но сокращение раневого дефекта в данной группе не составило более 10% от его исходного размера. Среднее значение максимального размера повреждения в период 7-ми суток наблюдения составляет 4,30±0,35мм. к 14-м суткам сохраняются раневые дефекты слизистой оболочки твердого неба, но их размер составляет не более 34% от исходного размера повреждения. Особенности раневого процесса, выявленные нами во II группе в срок 14 суток, указывают на существенные отличия между двумя группами, которые могут быть связаны с получением экспериментальными животными данной группы РЭФР в питьевой воде.
Динамика заживления повреждений слизистой оболочки твердого неба у крыс II группы на фоне приема с питьевой водой РЭФР в концентрации 100 мкг/л представлена на рисунке 60 и в таблице 13.
Динамика заживления повреждений слизистой оболочки твердого неба у крыс группы II в опыте №2 (РЭФР 100 мкг/л). Таблица 13 Динамика заживления повреждений слизистой оболочки твердого неба у крыс с экспериментальным иммунодефицитом (мм) М±т Контрольный срок наблюдений (сутки) Группа 3 7 14 1(п-7) 7,50±0,18 4,80±0,71 4,70±0,71 II (п=8) 4,50±0,71 Р, 0,05 4,30±0,35 Р, 0,05 1,70±0,35 Р, 0,05 В группе II (РЭФР - 100мкг/л) на 3-й сутки опыта дно раневого дефекта выглядело чище, чем в контрольной группе. Размеры повреждения варьировали в пределах 4,50±0,71мм (Рис. 61). Края раневого дефекта были более гладкие, его поверхность была покрыта струпом, состоящим из лейкоцитов и макрофагов. Миграция пласта эпителия происходила с краев повреждения в виде тонких участков, лишенных рогового слоя (Рис. 62). В этих участках вымывался гликоген, имевший вид мелких, почти сливающихся между собой, глыбок. Под струпом здесь располагалась грануляционная ткань. В состав ее входили молодые фибробласты (Рис. 63). Самым поверхностным слоем являлись клетки воспалительного инфильтрата. Клетки эпителия по краю раневого дефекта нередко образовывали утолщения. Иногда эпителиальный пласт образовывал здесь погружения в подлежащую соединительную ткань. Как правило, участки мигрирующего эпителия имели ровную нижнюю поверхность. За пределами этой зоны находился пласт эпителия с наличием на нижней поверхности эпителиальных выростов.
