Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Клинико - фармакологические аспекты технологии мягких лекарственных форм для местного лечения ран (обзор литературы) 14
1.1 Общие сведения о ранах 15
1.2. Современные лекарственные средства в местном лечении ран 26
1.2.1. Лекарственные формы левомицетина 38
1.2.2. Предпосылки создания линимента метилурацила как ранозаживляющего препарата 44
Глава 2. Материалы и методы исследования 49
2.1. Материалы исследования 49
2.1.1. Лекарственные вещества 49
2.1.2. Вспомогательные вещества 51
2.2. Методы исследования 54
2.2.1. Методы качественного и количественного анализа мягких лекарственных форм ранозаживляющего действия 54
2.2.2. Методы определения физико-химических и структурно-механических свойств геля и мази левомицетина и линимента метилурацила 65
2.2.3. Изучение кинетики высвобождения действующих веществ 68
2.2.3.1. Количественное определение левомицетина и метилурацила в диализате 69
2.2.4. Определение стабильности лекарственных форм 71
2.2.5. Микробиологическое исследование мягких лекарственных форм левомицетина и метилурацила 71
2.2.6.Биологические исследования изучаемых мягких лекарственных форм 73
2.2.7. Статистическая обработка результатов 78
Глава 3. Разработка состава и технологии геля и мази ранозаживляющего действия с левомицетином 80
3.1. Экспериментально - теоретическое обоснование состава и технологии мягких лекарственных форм с левомицетином 80
3.1.1. Выбор оптимальной системы растворителей для действующего вещества мягких лекарственных форм с левомицетином 81
3.1.2. Изучение набухающей способности РАП - Ареспола 83
3.1.3. Исследование концентрационной зависимости влияния количества полимера на реологические показатели и структурную стабильность лекарственного препарата 85
3.1.4. Изучение влияния степени нейтрализации и типа нейтрализующего агента на вязкость гидрогелей с редкосшитым акриловым полимером -Аресполом 90
3.1.5. Изучение осмотической активности у гелевых основ со структурообразующим компонентом - Аресполом 94
3.1.6. Влияние количества масляной фазы на реологические показатели и структурную стабильность лекарственного препарата 102
3.2. Выбор оптимального состава мягких лекарственных форм ранозажи-вляющего действия - геля и мази левомицетина и исследование их физико-химических и структурно-механическихсвойств 104
3.3. Разработка технологии мягких лекарственных форм ранозаживля-ющего действия с левомицетином 111
3.4. Изучение кинетики высвобождения действующего вещества из разработанных препаратов 114
3.5. Микробиологические исследования геля и мази левомицетина 118
3.6.Изучение антимикробной активности разработанных препаратов в опытах in vitro 120
3.7. Изучение стабильности лекарственных препаратов в процессе хранения 122
3.8. Биологические испытания ранозаживляющих препаратов на лабораторных животных 126
3.8.1. Изучение специфической активности in vivo 126
Выводы 136
Глава 4. Разработка состава и технологии линимента метилурацила 138
4.1. Экспериментально - теоретическое обоснование состава и техноло гии линимента метилурацила 138
4.1.1. Разработка основ 139
4.2. Изучение влияния различных факторов на структурно-механические и технологические характеристики мазевых основ 141
4.2.1. Изучение влияния концентрации полимера на реологические характеристики мазевых основ 143
4.2.2. Изучение влияния концентрации масляной фазы на реологические показатели разрабатываемых эмульсионных основ 148
4.2.3. Влияние эмульгатора на структурно - механические свойства эмульсионных систем Ареспола 151
4.3. Разработка оптимального состава линимента метилурацила и изучение его физико-химических и структурно-механических свойств... 152
4.4. Разработка технологии линимента метилурацила 159
4.5. Изучение кинетики высвобождения метилурацила в опыте in vitro 161
4.6. Микробиологическое исследование линимента метилурацила 5% 163
4.7. Изучение стабильности линимента метилурацила 5% в процессе хранения 164
4.8. Доклиническое изучение специфической активности, местно-раздражающего и сенсибилизирующего действия линимента метилурацила 167
Выводы 169
Заключение 171
Общие выводы 180
Библиография 182
Приложение
- Современные лекарственные средства в местном лечении ран
- Методы качественного и количественного анализа мягких лекарственных форм ранозаживляющего действия
- Исследование концентрационной зависимости влияния количества полимера на реологические показатели и структурную стабильность лекарственного препарата
- Микробиологические исследования геля и мази левомицетина
Введение к работе
Актуальность темы. Гнойная раневая инфекция была и остается одной из самых важных проблем практической медицины, что предусматривает постоянное усовершенствование методов местного лечения ран.
Очевидный прогресс активной хирургической обработки гнойных ран не исключает традиционного метода местного медикаментозного лечегаїя под повязкой. Накопленный большой клинический опыт, и имеющиеся экспериментальные данные неопровержимо доказывают, что местное медикаментозное лечение ран должно строиться строго в соответствии с теми процессами, которые происходят в разные стадии раневого процесса, помогая их естественному ходу, а не тормозя его.
По современным представлениям эффективное лечение гнойной раны в первой фазе обеспечивается усилением оттока из раны, неполитическим действием, подавлением микрофлоры, а во второй и третьей репаративно-восстановительных фазах - стимулированием репаративных процессов, созданием протекторного действия на растущие грануляции и защитой раны от вторичной инфекции. Используемые в клинической практике многокомпонентные мази "Левосин" и "Левомеколь", линимент "Левомицетин-Акри 5% ", а также, линимент синтомицина 1%, 5%, 10%-ный, содержащие действующее вещество левомицетин (право- и левовращающие изомеры), обладающие антимикробными, осмотическими и некролитическими свойствами, сокращают сроки лечения или подготовки раны к оперативному закрытию швами или аутодермопласти-кой.
Однако, левомицетин по скоим фармакотерапевтическим свойствам оптимален для лечения в I фазе раневого процесса, а мазевые основы, на которых разработаны его мягкие лекарственные формы плохо смешиваются с гнойным экссудатом и подходят для П (репарагивно-восстановителъной) фазы, что в целом снижает эффективность лекарственного препарата и не в полной мере удовлетворяют современную хирургию.
Поэтому разработка и создание новых стабильных и эффективных лекарственных средств ранозаживляющего действия, клинико-фармакологический эффект которых учитывает основные стадии течения раневого процесса, является актуальной и имеет большое социально-экономическое значение.
Цель и задачи исследования. Цель диссертационной работы - разработка и исследование геля и мази левомицетина, на современной мазевой основе с регулируемой осмотической активностью, и линимента метилурацила на гидрофильной мазевой основе, включающих редкосшитый акриловый полимер -Ареспол, и создание рациональной лекарственной формы повышающей эффективность хорошо известных лекарственных веществ, используемых при лечении ран и ожогов в первой и во второй фазах раневого процесса. Для достижения поставленной цели предусматривалось решение следующих задач:
экспериментально-теоретически обосновать состав и разработать технело-
гию производства мягких лекарственных форм с левомицетшюм и метилу-
рацилом;
исследовать их реологические и физико - химические свойства, стабильность в процессе хранения и фармацевтическую доступность;
апробировать методики физико-химического и количественного анализа лекарственных препаратов;
изучить специфическую активность и биологическую безвредность разработанных мягких лекарственных форм;
на основании полученных результатов исследования составить нормативную документацию и представить в Фармакопейный и Фармакологический комитеты Минздрава РФ с целью получения разрешения на проведение клинических испытаний геля и мази левомицетина и линимента метилурацила.
Объекты и методы исследования. При выполнении диссертационной работы были использованы: субстанция левомицетина (ФС 42-2786-91) и метилурацила (ФС 42-2255-95), редкосшитый акриловый полимер - Ареспол
(ТУ 2219-005-29053342-97) в качестве структурообразующего компонента и носителя лекарственного вещества и другие вспомогательные вещества, соответ-ствзтощие действующей в настоящее время нормативной документации и стандартам.
В диссертационной работе использовались следующие методы исследования:
реологические - для изучения структурно-механических свойств и оценки
механической стабильности мазевых основ и лекарственных препаратов;
тонкослойной хроматографии - для подтверждения подлинности мягких лекарственных форм;
спектрофотометрии - для количественного определения лекарственных веществ в мягких лекарственных формах;
для биофармацевтического исследования разработанных мягкігх лекарственных форм использовался метод равновесного диализа через полупроїш-цаемую мембраігу;
изучение антибактериальной активности левомицетипа проводили по общепринятой методике определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам путем серийных разведений препарата, растворенного в стерильном агаре;
биологические методы in vivo на моделях микробно-инфицированной (гнойно-некротической) раны, каррагенинового отека, термопоражеігая, химического ожога и по методу Тринуса применялись для изучения специфической активности, безвредности геля и мази левомицетипа и линимента метилурацила.
Научная новизна. Впервые научно обоснованы и разработаны состав и технология геля и мази левомицетипа и линимента метилурацила на основах с отечественным редкосшитым акриловым полимером - Аресполом, для лечения ран и ожогов различной этиологии. На основании исследований физико-химических свойств мазевых основ с различным содержанием полиэтиленокси-
да (ПЭО 400) и Ареспола, подобрана оптимальная система растворителей -ПЭО 400 : вода = 60 : 40, увеличивающая растворимость левомицетина и обеспечивающая условия для набухания полимера.
Выявлен пролонгированный характер высвобождения лекарственных веществ из разработанных мягких лекарственных форм, достигающий за первые пять - шесть часов максимальной концентрации в диализате, превышающей 60% и удерживающейся в течение суток.
Результаты изучения антимикробной активности геля и мази левомицетина 5% в опытах in vitro обнаружили у разработанных препаратов высокую антимикробную активность к возбудителям раневой инфекции, превосходящую антимикробное действие существующих линиментов синтомицина 5% и 10%, «Левомицетин - Акри» 5% и не уступающую многокомпонентной мази «Лево-син», доказавшим свою клиническую эффективность.
Лечение экспериментально вызванных микробно-инфицированных ран у кроликов выявило ускоренное заживление их, по сравнению с лечением гнойных ран широко применяемыми препаратами с левомицетином и синтомицином, в среднем на шесть - семь дней. Так кожно-мышечные раны леченные мазью левомицетина 5% очищаются в среднем на шестые сутки, гелем левомицетина 5% - на восьмые, а линиментом "Левомицетин - Акри " 5% - на десятые и линиментом синтомицина! 0%- на двенадцатые сутки.
На моделях каррагенинового отека, термопоражения, химического ожога и по методу Тринуса обнаружено противовоспалительное и ранозаживляющее действие линимента метилурацила 5%, при этом сроки заживления ожогов у морских свинок сокращаются на десять дней по сравнению с контролем.
Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:
состав и показатели качества геля и мази левомицетина (проект ФСП на гель левомицетина 5% и мазь левомицетина 5% - представлены в Фармакопейный и Фармакологический комитет, письмо Департамента государственного коп-
троля качества, эффективности и безопасности лекарственных средств № 291-10/342 от 19.02.2001 г.).
технология получеїшя геля и мази левомицетина ("Лабораторный регламент на производство геля левомицетина 5% и мази левомицетина 5% " - акт наработки серийных образцов от 17.04.2001 г. ЗАО "Центральная Европейская Фармацевтическая Компания");
состав и показатели качества линимента метилурацила (проект ФСП на линимент метилурацила 5% - представлен в Фармакопейный и Фармакологический комитет, письмо Департамента государственного контроля качества, эффективности и безопасности лекарственных средств № 291 - 10 / 342 от 19.02.2001 г.);
технология получения линимента метилурацила ("Лабораторный регламент на производство линимента метилурацила 5%" - акт наработки серийных образцов от 17.04.2001 г. ЗАО "Центральная Европейская Фармацевтическая Компания").
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы и результаты исследований обсуждались на научно-практической конференции "Современные тенденции развития фармации " (Самара, 1999 г.), на научно-практической конференции "Достижения и перспективы медицинской реабилитации" (Сочи, 1999 г.), на IV научно-практической конференции молодых ученых и специалистов НИИ Фармации "Современные проблемы фармации" (Москва, 1999 г.), на VII Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 2000г), на П-ой Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2001 г).
Публикации материалов исследований. По теме диссертации опубликовано 16 печатных работ.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических паук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-
»
исследовательских работ Федерального Государственного учреждения науки НИИ Фармации МЗ РФ (номер Государственной регистрации темы 0189. 0004246) и тематикой Проблемной комиссии по фармации № 36.08 РАМН, МЗ РФ.
На защиту выносятся следующие положения:
результаты исследований по обоснованию состава и технологии мази и геля левомицетина и линимента метилурацила, предназначенных для лечения ран и ожогов различной этиологии, в том числе гнойно-некротических, а также воспалительных заболеваний кожи;
результаты изучения физико-химических, реологических и биофармацевтических характеристик лекарственных форм левомицетина и линимента метилурацила;
результаты доклинического изучения специфической активности, местно-раздражающего, сенсибилизирующего и ранозаживляющего действия на лабораторных животных геля и мази левомицетина 5% и линимента метилурацила 5%.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 268 стр. машинописного текста, содержит 4 схемы, 18 фото, 30 таблиц и иллюстрирована 37 рисунками, включает введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования, две главы экспериментальной части, заключение, общие выводы, библиографию и приложения. Библиография включает 186 литературных источников, из которых 30 на иностранных языках.
Современные лекарственные средства в местном лечении ран
Изложенные выше патоморфологические особенности и клиническое течение различных видов ран и термических поражений и методы их лечения убедительно свидетельствуют о существенной роли местной терапии при этой патологии. Основные принципы местного лечения ран кратко изложены в предыдущем разделе, поэтому рассмотрим частные вопросы применения для этих целей препаратов, способствующих очищению и заживлению ран. Положительное влияние на рану разного рода "отсасывающих" ЛС, обладающих осмотической активностью, известно с глубокой древности. Механизм действия гипертонических растворов обусловлен разницей осмотического давления в тканях и повязке, вследствие чего создается ток жидкости из раны в повязку. Действие водных гипертонических растворов чрезвычайно кратковременно (не более 3 часов), так как все они быстро разбавляются раневым экссудатом и теряют осмотическую активность, а применение более концентрированных растворов не рационально, ибо они повреждают клетки [29, 177, 180]. Не оправдали себя и различные присыпки, которые также повреждают ткани. Мази и эмульсии нашли более широкое применение, так как не раздражают и не повреждают ткани [157, 173, 182]. Однако их недостатком является то, что они не адсорбируют экссудат раны и при этом задерживают процесс регенерации, несмотря на то, что эмульсионные композиции типа вода/масло могут играть роль защитных мазей для рук, лица и других открытых участков тела [22, 133, 163, 181].
Широкое применение в гнойной хирургии нашли протеолитические ферменты: трипсин и химотрипсин в связи с их некролитическими и противоотеч-ными свойствами. Недостатком их является то, что они не обеспечивают полного очищения раны, часто вызывают аллергизацию организма, усложняя этим лечение, а также то, что при местном использовании они действуют кратковременно - не дольше 30 минут [32,53, 73]. Появилось новое запатентованное ЛС для лечения длительно незаживающих гнойных ран любого генезиса - мазь Вермин. По оригинальной технологии из биомассы гибрида красного калифорнийского дождевого червя выделен препарат Вермин - порошок белого цвета с желтоватым оттенком, со слабым, характерным запахом, хорошо растворим в воде; в котором выявлена активность 13 ферментов, относящихся к оксидоредуктазам, трансферазам и гидролазам. Биологические исследования показали, что ЛП нетоксичен, не обладает мутагенными, аллергенными и тератогенными свойствами; а помимо ферментативной проявляет противоопухолевую и иммунотропную активность. Последнее выражается в активизации клеточного и гуморального иммунитета в широком диапазоне примененных доз. Исследование влияния мази на местный иммунитет в длительно незаживающих гнойных ранах отражает её высокую эффективность, о которой свидетельствует снижение к седьмому дню лечения количества дегенеративно-измененных форм нейтрофиллов и увеличение их фагоцитарной активности.
После однократного применения мази отмечалось уменьшение воспалительной реакции вокруг очага, гнойное отделяемое приобретало более жидкую консистенцию [155]. Коагуляция белков микробной клетки, неспецифическое действие на проницаемость ее оболочки, и торможение группы ферментов является основным механизмом действия антисептических средств, которые не должны вызывать повреждения или серьезного раздражения тканей, всасываться в значительных количествах в кровь и задерживать процессы регенерации. Эти вещества широко применяются в дерматологии (примочки, повязки), офтальмологии (капли и промывания), хирургии (промывание и орошение ран, обработка рук и операционного поля, лечение ожогов), гинекологии и урологии (спринцевание, промывание мочевого пузыря). В соответствии со способами введения антисептики назначаются в форме растворов, мазей, эмульсий и суспензий [28, 85, 88]. Количество зарегистрированных отечественных и импортных лекарственных средств фармакологической группы "Антисептики" составляет к на стоящему времени 329 наименований, однако, несмотря на многочисленность решить проблему лечения ран с помощью них не удается. Известно, что и общая антибиотикотерапия не угнетает развитие микроорганизмов в ране, так как при воспалении ухудшается микроциркуляция в поврежденном участке, да и микробы локализуются в некротической ткани, потерявшей связи с макроорганизмом [30, 68, 129]. В связи с этим перспективным является использование с лечебной целью многокомпонентных мазей [39, 51, 96,107]. Их применение позволяет активно вмешиваться в течение гнойного раневого процесса и дает значительный лечебный эффект, сокращая период заживления в 2 - 2,5 раза [93,95,109,129]. Методы фитотерапии для лечения гнойных ран применяются в течение нескольких десятилетий [54, 149, 150, 156]. Известно использование для этих целей настойки почек черного тополя и березы бородавчатой, корневищ калгана и кровохлебки лекарственной и настойки прополиса, входящих в состав оригинального комплексного фитопрепарата "Пропобесан" [4, 56, 100]. По данным ряда авторов [106, 121, 136] эти же компоненты оказались эффективными при лечении 520 больных с ожогами I - III степени. На фоне этого лечения выраженность стадии токсемии незначительная, а стадия септикотоксемии не развивалась вообще, следовательно не было и осложнений.
Суть в том, что при использовании "Пропобесана" на поврежденной ожогом поверхности образуется бактерицидная пленка, которая предотвращает размножение гнойных микроорганизмов на и под ней. Наряду с этим ускорялась эпителизация ожоговых ран. В целом сроки лечения ожоговых больных в стационаре сокращалось на 10-20 суток [132]. Французские химики предложили оригинальную рецептуру полимерной мастики, увеличивающей свой объем в 10 и более раз при нагревании свыше 120С. В результате получается рыхлая пенистая масса, которая обволакивает место нагрева и препятствует горению. Такой материал можно применять при лечении ожогов и обморожений. Мастика химически инертна и не раздражает
Методы качественного и количественного анализа мягких лекарственных форм ранозаживляющего действия
Для стандартизации мягких лекарственных форм с левомицетином и ме-тилурацилом апробированы методики качественного и количественного определения действующих веществ разработанных лекарственных форм на основе анализа данных литературы и НД на субстанции и препараты левомицетина и метилурацила. Определение подлинности левомниетнна в исследуемых лекарственны! Формах Ультрафиолетовый спектр раствора левомицетина, приготовленного для определения удельного показателя поглощения в области от 220нм до 400нм, имеет максимум поглощения при Х=278нм±2нм и минимум поглощения при Х=237нм±2нм (рис.2.1). Оптическую плотность растворов измеряли на спектрофотометре СФ-46 и Сагу-50 (США).
Тонкослойная хроматография проводится для качественного определения лекарственного вещества в разработанных геле и мази левомице-тина 5%, учитывая НД на мазь Левомеколь (ФС 42-2922-92). 1г навески препарата (левомицетина), растворяют в 10мл смеси растворителей (95% этанол : вода очищенная в соотношении 1:1). На хроматографи-ческую пластинку "Силуфол" УФ-254 размером 15x15см в точку на линию старта наносят 0,005мл приготовленного раствора лекарственного препарата. Рядом наносят раствор свидетеля. Приготовление раствора свидетеля Около 0,05 г левомицетина (точная навеска) помещают в коническую колбу вместимостью 25мл, растворяют в 10мл смеси растворителей (95% этанол : вода очищенная в соотношении 1:1). 1. Пластинку помещают в камеру и хроматографируют восходящим способом в системе растворителей хлороформ - ацетон - этанол (60 : 5 : 10). После продвижения фронта растворителя на 12 см, ее вынимают, сушат на воздухе до удаления следов растворителей (10 минут), затем просматривают в УФ - свете при длине волны 254нм. На хроматограмме проявляется ярко окрашенная зона, цветом и положением соответствующая пятну раствора свидетеля. На линии старта допускается наличие ореола от нанесенной пробы препарата. Вспомогательные вещества основы определению действующих веществ не мешают, поскольку при проявлении хроматограмм не обнаруживаются. Хроматограмма представлена на рис.2.2.
Количественное определение Методика количественного определения содержания левомицетина Методика количественного определения основана на способности растворов лекарственного вещества - левомицетина обнаруживать спектры поглощения в области от 220нм до ЗООнм с максимумом поглощения при Я.=278нм±2нм УФ-спектрофотометрический метод анализа используется также при анализе субстанции. В связи с тем, что поглощение растворов ред-косшитого акрилового полимера - Ареспола (структурообразующего компонента), также имеет высокие значения в области Х.=240нм, разработанные методики количественного определения левомицетина в геле и мази предусматривают предварительное удаление полимера, что достигается прибавлением к водному раствору препарата насыщенного раствора калия хлорида, приводящего к разрушению гелевой структуры, с последующей фильтрацией выпавшего в осадок полимера. Приготовление раствора рабочего стандартного образца (РСО) левомицетина Около 0,025 г левомицетина (точная навеска) растворяют в мерной колбе вместимостью 50мл в горячей воде (при температуре 65С в течение 15 мин) и доводят объем раствора до метки (раствор А), 1мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 50мл и доводят объем раствора до метки водой очищенной. Измеряют оптическую плотность на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 1см при длине волны 278нм. Раствор используют свежеприготовленным. 1мл раствора рабочего стандартного образца содержит 10 5г левомицетина. Количественное определение левомицетина в геле и мази Около 0,5 г препарата (точная навеска мази или геля левомицетина) растворяют в химическом стакане в 30мл теплой воды (при температуре 55-60С), охлаждают и прибавляют 5,5мл насыщенного раствора калия хлорида, после
Исследование концентрационной зависимости влияния количества полимера на реологические показатели и структурную стабильность лекарственного препарата
Важной характеристикой мазевых основ как носителей лекарственных веществ в мягких лекарственных формах являются их структурно-механические свойства. Они могут быть описаны комплексом реологических параметров из которых основные - предельное напряжение сдвига и тиксотроп ность, обуславливающие состояние системы в покое, а также эффективная вязкость. Изучение реологических свойств мазевых основ имеет большое теоретическое и практическое значение, так как большинство применяемых МЛФ относится к структурированным дисперсным системам и обладает определенными физико-механическими или реологическими свойствами, которые влияют на такие терапевтические и потребительские качества мазей, как высвобождае-мость и всасывание лекарственных веществ, фасуемость и экструзия из туб, адгезия и намазываемость. На основании построенных реограмм можно сделать вывод о строении гелевых систем и, сравнивая с реологическим оптимумом, выбрать наиболее перспективные. Состав экспериментальных образцов гелевых основ Ареспола представлен в табл. 3.2. Удобство и легкость нанесения МЛФ на ткани или слизистую ассоциируется у пациента с теми усилиями, которые он прилагает для распределения на поверхности кожи определенного количества мази.
Этот процесс является аналогичным тому, который происходит во время сдвига вязко - пластичного материала в ротационном вискозиметре, а усилие, затрачиваемое пациентом, -аналогично напряжению сдвига, которое характеризует сопротивляемость материала сдвиговым деформированием. Значения эффективной вязкости исследуемых образцов полностью укладываются в границы реологического оптимума консистенции [10,61]. На реологические свойства основ могут влиять различные факторы: концентрация входящих ингредиентов, рН и температура, важнейшими из них являются концентрации Ареспола и OAK. Изучение структурно-механических свойств мягкой лекарственной формы левомицетина различных концентраций проводилось путем оценки ряда реологических параметров: касательного напряжения сдвига, эффективной вязкости и механической стабильности. Ареспол, обладая высокими загущающими свойствами, определял образование гелевых систем и изменение его концентрации оказывало существенное влияние как на величину эффективной вязкости, так на глубину стуктуро-образовательных процессов в системе (рис.3.2). увеличение концентрации Ареспола ведет к повышению значений эффективной вязкости у всех основ. Для изучения тиксотропных свойств строили кривые кинетики деформации гидрогелей в координатах: скорость сдвига - напряжение сдвига в области По рассчитанным значениям эффективной вязкости гелевых систем строили графики зависимости вязкости от градиента скорости сдвига в логарифмических координатах. Как показано на рис.3.4, зависимости In г) от In Dr прямо пропорциональны и характеризуют исследуемые образцы как структурированные системы. Построения показывают незначительные "петли гистерезиса".
При этом в ряду концентраций Ареспола 0,5%- 0,8%- 1%- 1,25%- 1,5 % для нейтрализованных систем наблюдается увеличение ширины "петель гистерезиса", что свидетельствует о возрастающей глубине структурообразования в системе с увеличением концентрации (рис.3.3). Присутствие восходящих и нисходящих кривых "петли гистерезиса" говорит о том, что исследуемые образцы обладают слабыми тиксотропними свойствами. Ранее установлено, что оптимальные значения концентрации Ареспола, позволяющие получить необходимый уровень вязкости, лежат в области концентраций полимера от 0,8% до 3% (рис.3.2). Однако, использование РАП в концентрации от 2% до 3% приводит к получению высоковязких гелей, что в свою очередь затрудняет нанесение мягкой лекарственной формы на кожу и ее экструзию из туб. А образцы гелей, в составе которых структурообразующий компонент содержится в концентрации до 1%, представляют собой достаточно текучие системы и могут быть отнесены в соответствии с ГФ-ХІ к линиментам. В связи с этим нами была выбрана концентрация Ареспола 1%, позволяющая получать гелевые системы, соответствующие требуемым фармако-терапевтическим и потребительским качествам МЛФ. Коэффициенты динамического разжижения исследуемых образцов МЛФ с концентрацией Ареспола 1%, характеризующие потребительские свойства МЛФ, превосходят аналогичные показатели образцов с меньшей концентрацией Ареспола, что обеспечивает более качественное их нанесение под действием механического растирания и удовлетворительное разжижение в режиме перемешивания, а также облегчает заполнение туб или банок (табл.3.3). Известно, что реологические свойства МЛФ зависят от ряда факторов, основными из которых являются состав мазевой основы и физико-химические свойства лекарственного вещества. При изучении влияния левомицетина на вязкостные характеристики, установлено, что введение его в количестве 5% от общего количества мази не оказало влияния на значения вязкости, а также на процессы структурообразования в системе.
В результате предварительных исследований нами было установлено, что водные дисперсии Ареспола в интервале концентраций от 0,1 до 2,0% имеют величину рН от 3,2 до 4,5 и не являются структурированными системами. Это согласуется с данными литературы по изучению свойств полимеров (мет)акрилового ряда. Гелеобразование в ситемах РАП возможно только при нейтрализации их, добавлении поверхностно - активных веществ (ПАВ) и соединений основного характера, в частности, содержащих гидроксильные и аминогруппы. Одним из факторов, влияющих на структурообразование гелевых систем на основе Ареспола, является степень нейтрализации и тип нейтрализующего агента. Исходя из этого, нами была изучена возможность получения гелей с использованием различных нейтрализующих агентов гидроксида натрия и три-этаноламина (ТЭА). Из рис.3.5 видно, что вязкость полимера зависит от рН его растворов при воздействии в интервале рН 3,2 - 13,2. С ростом степени нейтрализации наблюдается повышение значений эффективной вязкости, что связано с увеличением гидродинамического объема набухших полимерных частиц. Зависимость эффективной вязкости от рН среды
Микробиологические исследования геля и мази левомицетина
Разработанные мягкие лекарственные формы - гель левомицетина и мазь левомицетина обладают высокой антимикробной активностью не только за счет лекарственного вещества, но и из-за бактериостатической активности ПЭО 400. Как отмечалось выше, бактериостатические свойства ПЭО 400 при концентрации 60% обеспечивают микробиологическую чистоту мази. Известна способность ПЭО 400 за счет высоких осмотических свойств усиливать антимикробное действие препаратов, а также расширять спектр действия антибактериальных лекарственных веществ. Микробиологические испытания препаратов проводили в соответствии с методикой, рекомендованной ГФ - XI изд. (вып. 2, стр. 193-201) и Изменением № 1 категория 2 от 28.12.1995 г. Испытания на микробиологическую чистоту разработанных МЛФ включали количественное определение жизнеспособных бактерий и грибов, а также выявление определенных микроорганизмов Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus и семейства Enterobacteriaceae. При этом для нейтролизации антимикробного действия разработанных препаратов - геля левомицетина 5% и мази левомицетина 5% использовали следующие разведения, представленные в табл.3.5. В ходе проведенных исследований было установлено, что разработанные мягкие лекарственные формы соответствуют требованиям Государственной Фармакопеи XI издания и дополнений к ней и обладают выраженным антимикробным действием в отношении аэробных бактерий и грибов. В связи с Изменением №2 от 01.01.2002 г. в ходе дальнейших исследований перед предстоящими клиническими испытаниями необходимо провести повторное микробиологическое исследование разработанных мягких лекарственных форм.
Микробиологические исследования по определению антимикробной активности геля и мази левомицетина 5% проведены в отношении основных возбудителей гнойной раневой инфекции: золотистого стафилококка (Staphylococcus aureus) штамм АТСС 25923, синегнойной палочки (Pseudomonas aeruginosa) штамм АТСС 27953, кишечной палочки (Escherichia coli) штамм АТСС 25922 и протея обыкновенного (Proteus vulgaris) штамм АТСС 6896. Для определения антимикробной активности методом in vitro использовали 18-ти часовую культуру бактерий. Смыв культур производили стерильным физиологическим раствором. После серии разведений вносили в 9 мл стерильного агара 1 мл взвеси и выливали на чашки Петри. На одну чашку приходилось 20 тыс. микробных тел. После застывания агара - АГВ в нем пробивали лунки диаметром 0,8 см и вносили в них 0,1 г исследуемого препарата. Для сравнения исследованию подвергали линимент синтомицина 5% и 10% и линимент "Левомицетин - Акри" 5%, мазь "Левосин" и мазевую основу, а также исследовали образцы разработанного линимента метилурацила 5% (глава IV) и мазь метилурацила 10%. После 24 часового инкубирования в термостате при 37С производили замеры зон задержки роста тест - культур микроорганизмов. Результаты иссле-дования представлены в табл.3.6.
Как видно из табл.3.6, гель и мазь левомицетина 5% обладают высокой антимикробной активностью по отношению к тест - культурам микроорганизмов, значительно превышающей активность существующих линимента синтомицина 5% и 10% и линимента "Левомицетин - Акри" 5% , доказавшим свою клиническую эффективность. Изучено влияние отдельных компонентов геля и мази левомицетина 5% на тест - культуры. Как видно из табл.3.6, мазевая основа обладает собственной антимикробной активностью, поэтому за счет нее удалось усилить антибакте риальное действие левомицетина. В ходе исследования обнаружена минимальная зона задержки роста основных возбудителей гнойной инфекции вокруг лунок с мазевой основой, которая по диаметру не отличалась от размеров зон задержки роста тест - культур вокруг лунок с линиментом метилурацила 5% и не превышала 9+11 мм, а для мази метилурацила 10% -6 + 8 мм. Проведенные испытания позволяют говорить о наличии у разработанных мягких лекарственных форм левомицетина достаточно высокой антимикробной активности в опытах in vitro к возбудителям раневой инфекции, превосходящей антибактериальное действие существующих линиментов "Левомицетин - Акри" 5% и синтомицина 5%, не уступающей активности линимента синтомицина 10% и многокомпонентной мази "Левосин" на гидрофильной основе. Изучение высыхаемости мазевых основ представляет интерес в связи с атравматичностью перевязочных материалов, пропитанных мазями или мазевыми основами.
Изучение атравматичности перевязочного материала "матрик", показало, что мазевые основы, содержащие 40% и более OAK повышали атравматические свойства перевязочного материала, что являлось важным условием ускорения процесса заживления ран. Так степень адгезии к ране повязки, пропитанной основой, содержащей 20% ПЭО 400, составляла 98%, а 40% ПЭО 400 - 35% по сравнению с материалом, не пропитанным мазевой основой. Введение 60% ПЭО 400 обеспечивало более высокие атравматические свойства материала, снижая адгезию повязки до 25%. Исходя из этих результатов, можно сделать вывод, что с увеличением концентрации ПЭО 400 степень адгезии к раневой поверхности уменьшается. Так как мазевая основа содержит воду, то для решения вопроса об упаковке при закладке основ на хранение изучали их высыхаемость. Такие основы могут храниться только в герметичной упаковке - тубах алюминиевых с внутренним лаковым покрытием. Наблюдалась высокая высыхаемость основ, содержащих воду в количестве более 60%, такие основы могут хранится только в герметичной упаковке -тубах алюминиевых. Мазевые основы, содержащие OAK в количестве более 40%, имели более низкую высыхаемость, поэтому такие основы можно хранить как в тубах алюминиевых, так и в стеклянных банках с навинчивающимися крышками. Результаты исследования потери в массе мазевых основ при хранении в тубах алюминиевых в течение двух лет (срок наблюдения) представлены в табл.3.7.
