Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 9
3. Материал и методы исследований 66
4. Результаты исследований 72
4.1. Получение и фармако-токсикологические свойства р-каротина 72
4.1.1. Получение Р-каротина 72
4.1.2. Токсикологические свойства Р-каротина 74
4.1.3. Фармакологические свойства Р-каротина 97
4.2. Характеристика и применение препаратов р-каротина 120
4.2.1. Физико-химические свойства и контроль каролина 120
4.2.2. Лечебно-профилактическая эффективность каролина . 122
4.2.2.1. Эффективность каролина при послеродовых заболеваниях коров 122
4.2.2.2. Эффективность каролина при гиповитаминозе А птицы 128
4.2.2.3. Эффективность каролина при послеродовых заболеваниях свиней и гиповитаминозе А поросят 143
4.2.2.4. Эффективность каролина при гипотрофии поросят 146
4.2.3. Характеристика и применение карсела 153
4.2.3.1. Физико-химические свойства и контроль карсела 153
4.2.3.2. Фармако-токсикологические свойства карсела 156
4.2.3.3. Эффективность карсела при послеродовых заболеваниях коров 179
4.2.3.4. Эффективность карсела при транспортном стрессе 183
4.2.3.5. Эффективность карсела при поражениях печени 188
4.2.3.6. Эффективность карсела при микотоксикозах 211
4.2.4. Характеристика и применение картока 217
4.2.4.1. Физико-химические свойства и контроль картока 217
4.2.4.2. Фармако-токсикологические свойства картока 220
4.2.4.3. Эффективность картока при послеродовых заболеваниях коров 225
4.2.4.4. Эффективность картока при гипотрофии телят 229
4.2.4.5. Эффективность картока при диспепсии телят 233
4.2.4.6. Эффективность картока при бронхопневмонии телят.. 235
4.3. Получение и фармако-токсикологические свойства ликопина 239
4.3.1. Получение, физико-химические свойства и контроль ликопина 239
4.3.2. Токсикология ликопина 243
4.3.3. Фармакология ликопина 249
4.3.4. Характеристика и применение препаратов ликопина 267
4.3.4.1. Характеристика и применение ликовита 267
4.3.4.1.1. Физико-химические свойства и контроль ликовита... 267
4.3.4.1.2. Лечебно-профилактическая эффективность ликовита 272
4.3.4.2. Характеристика и применение ликолина 289
4.3.4.2.1. Физико-химические свойства и контроль ликолина.. 289
4.3.4.2.2. Профилактическая эффективность ликолина 291
4.4. Экономическая эффективность применения препарата каротина 294
Заключение 306
Выводы 331
Предложения производству 335
Список литературы 336
- Характеристика и применение препаратов р-каротина
- Эффективность каролина при послеродовых заболеваниях свиней и гиповитаминозе А поросят
- Эффективность картока при послеродовых заболеваниях коров
- Получение, физико-химические свойства и контроль ликопина
Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Прогресс ветеринарной фармакологии обеспечивается постоянным поиском и созданием новых высокоэффективных и безопасных препаратов. Установлено, что на метаболизм и иммунную систему животных многие факторы окружающей среды - несбалансированное кормление, стрессы различной этиологии - действуют неблагоприятно. Это требует применения различных средств, которые позволяют ослабить негатив-ное влияние неблагоприятных факторов (Антипов В.А., 2000; Шахов А.Г., Бузлама B.C., 1990; Папуниди К.Ф., Фролов А.В., Назаров В.Р., 2002; Аргунов М.Н, 2002). В связи с этим разработка, исследование и производство биологически активных препаратов для профилактики и лечения болезней, связанных с нарушением обмена веществ, а также средств стимуляции роста и продуктивности животных является актуальным направлением ветеринарной науки.
В этом отношении перспективно использование каротина как вещества, выполняющего в организме целый ряд специфических и жизненно важных функций. Длительное время считалось, что его основная роль в биологических системах обусловлена превращением в витамин А, но в последние десятилетия установлено, что каротиноиды обладают антиоксидантными, адаптогенными, антиканцерогенными, радиопротекторными, антимутагенными и иммуномоду-лирующими свойствами, не связанными с их провитаминнои активностью (Кузьмич Р.П., 2000; Холодова Ю.Д., Чаяло П.П., 1990; Чиркин А.А, Казарян Р.В., Подцубный Н.П., 1996; Плецитый К.Д., 1981; Сергеев А.Г., 1986; Букин Ю.В., 1995; Charleux J.L., 1996; Takatsuka N. et alL, 1998). Вместе с тем в последние годы появились сведения о высокой биологической активности лико-пина - каротиноида, не способного превращаться в ретинол (Капитанов А.Б., 2004; Бекетова Н.А, 1998; Кравченко Л.В., Морозов С.В, 2003; Poulsen Н.Е., 1998). В вопросе применения каротиноидов наиболее перспективно использование фармакопейной субстанции бета-каротина, полученной микробиологи ческим синтезом из культуры гриба Blakeslea trispora (Казарян Р.В., Ку диноваС.П., 1978; 1990).
Препараты каротина достаточно широко применяются в здравоохранении, однако в ветеринарии и животноводстве их использование ограничено. Слабая изученность токсикологических свойств и особенностей фарма-кодинамики, отсутствие схем научно обоснованного применения кароти-ноидов в качестве лечебно-профилактических средств сдерживает их внедрение в животноводство и ветеринарию. Учитывая перспективность данной группы препаратов, мы в соответствии с требованиями к изучению лекарственных средств, рекомендуемых для применения в ветеринарной медицине, провели комплексные исследования по определению фармако-токсикологических свойств препаратов бета-каротина и ликопина, а также обосновали их применение в ветеринарии и животноводстве.
ЦЕЛЬ и ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ. Целью исследований явилась разработка, фармеко-токсикологическая оценка и научно-практическое обоснование использования препаратов бета-каротина (каролин, карсел и карток) и ликопина (ликолин и ликовит) в практическом животноводстве, а также их внедрение в промышленное и сельскохозяйственное производство.
В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:
- изучить физико-химические свойства препаратов, дать характеристику параметров и методов контроля их качества;
- дать токсикологическую оценку каролина, карсела, картока, ликолина и ликовита;
- выявить основные фармакологические аспекты действия каротиноид-ных композиций;
- определить лечебно-профилактическую эффективность препаратов в различных показаниях;
- разработать нормативную документацию по применению и контролю качества каролина, карсела, картока, ликолина и ликовита.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Впервые изучены фармако-токсикологические свойства новых препаратов из группы каротиноидов
бета-каротина и ликопина, полученных микробиологическим синтезом из культуры гриба Blakeslea trispora. Научно обоснована и экспериментально доказана целесообразность их применения для оптимизации обменных процессов организма, увеличения его антиоксидантной защиты и неспецифической резистентности. Установлен высокий уровень биологического действия и их лечебно-профилактической эффективности при гиповитаминозе А, послеродовых заболеваниях, гипотрофии, микотоксикозах и др.
Научная новизна исследований защищена шестью решениями на выдачу патентов РФ.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Разработана и внедрена в производство серия препаратов бета-каротина (каролин, карсел и карток) и ликопина (ликолин и ликовит) для стимуляции продуктивности и нормализации обменных процессов, повышения устойчивости животных к заболеваниям, обладающих высокой лечебно-профилактической эффективностью при ряде патологий крупного рогатого скота, свиней и птицы.
Разработана нормативная документация (пять технических условий и три наставления по применению), определяющая условия производства и применения препаратов, требования к качеству и методам контроля, утвержденная в установленном порядке вышестоящими структурами.
ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ. Результаты исследований нашли отражение в документах, утвержденных (согласованных) Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации: каролин - Технические условия № 9141-003-41341380-01; Наставление по применению препарата каролин в ветеринарии № 13-4-03/0014 от 21.02.01; карсел - Технические условия № 9141-003-41341380-01; Временное наставление по применению препарата карсел в ветеринарии № 13-4-03/0019 от 21.02.01; карток - Технические условия на опытную партию № 9141-005-41341380-01; Временное наставление по применению препарата карток в ветеринарии № 13-4-03/0018 от 21.02.01; ликолин - Технические условия № 9283-029-05766117-01; ликовит - Технические условия № 9283-028 05766117-01; Методические рекомендации по применению
препаратов каротина в ветеринарии и животноводстве (утверждены Акаде-миком-секретарем РАСХН A.M. Смирновым 22 сентября 2004 года); Методические рекомендации по эффективным зооветеринарным технологиям повышения воспроизводства, сохранности и продуктивности животных (утверждены заместителем главы администрации Краснодарского края Н.П. Дьяченко 12 апреля 2005 г.); Методические рекомендации по комплексной этио-патогенетической фармакотерапии и профилактике болезней молодняка сельскохозяйственных животных в условиях Краснодарского края (утверждены начальником управления Федеральной службы по ветеринарному надзору по Краснодарскому краю и республике Адыгея 11 ноября 2005 г.).
Освоено промышленное производство препаратов в ЗАО «Роскар-фарм» (г. Краснодар) и ОАО «Уралбиофарм» (г. Екатеринбург).
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты экспериментальных и клинических исследований, явившихся основой диссертации, доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях Ученого Совета Краснодарского НИВИ 1996-2006 гг.; заседаниях кафедры фармакологии КГАУ 2000-2005 гг.; заседаниях Вет-фармбиосовета 1996-2005 г.г.; на международных и Всероссийских научно-практических конференциях в Москве, Краснодаре, Воронеже, Санкт-Петербурге, Казани и других городах в 1996-2006 гг.
ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликовано 45 научных работ, в том числе 1 монография, 2 брошюры, 5 методических рекомендаций. 1 ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ ДИССЕРТАЦИИ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:
физико-химические свойства и контроль каролина, карсела, картока, ли-колина и ликовита;
токсикологическая оценка изучаемых препаратов бета-каротина и лико-пина;
фармакологические свойства каролина, карсела, картока, ликолина и ликовита;
обоснование применения каротиноидов в качестве лечебно-профилактических средств при различных патологиях у животных и птиц;
результаты внедрения препаратов в промышленное и сельскохозяйственное производство.
ОБЪЕМ И СТУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Работа изложена на 370 страницах стандартного компьютерного набора и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений и приложения. Список использованной литературы включает 348 источников, в том числе иностранных - 197. Работа иллюстрирована 131 таблицей и 23 рисунками.
Характеристика и применение препаратов р-каротина
Лечебное, профилактическое и стимулирующее действие фармакологических препаратов во многом зависит от их физико-химических и биологических свойств, поэтому оценка препаратов по показателям, характеризующим их физические, химические и биологические особенности, приобрела важное теоретическое и прикладное значение. Контроль качества препаратов, их биологической активности и безвредности для человека, окружающей среды и животных при определенных условиях применения в животноводстве и ветеринарии - важнейший вопрос в исследовании новых биологически активных веществ. Поэтому, все этапы производства препаратов, их стандартизации, сертификации, регистрации и использования должны быть строго регламентированы. При выпуске препаратов для животноводства и ветеринарии большое внимание должно уделяться нормативно-технической документации, отражающей все этапы производства препаратов, их физико-химические и биологические свойства, методы оценки их качества, правильности хранения, транспортировки и использования. Каролин представляет собой раствор бета-каротина в рафинированных и дезодорированных маслах (кукурузном, соевом, подсолнечном) с массовой долей каротина не менее 0,18%. Действующим веществом является, получаемый из биомассы культуры гриба Blakeslea trispora, бета-каротин (С40Н56), выпускаемый по ФС 42-3867. По органолептическим, физико-химическим и биологическим показателям препарат должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в таблице 27.
Определение прозрачности, цвета, запаха и вкуса проводят органолеп-тически в соответствии с ГОСТ 5472, кислотное число препарата определя-ют по ГОСТ 5476, перекисное число по ГОСТ 26593, стерильность по ГОСТ 28085. Для определения массовой доли бета-каротина в мерную колбу, вместимостью 100 мл, отвешивают с точностью до 4-го десятичного знака 0,2 г препарата. Колбу на треть заполняют хлороформом и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят до метки хлороформом и тщательно перемешивают. Из колбы пипеткой отбирают 10 см3 раствора в мерную колбу вместимостью 100 мл. Объем. раствора снова доводят до метки хлороформом и тщательно перемешивают. Определение бета-каротина проводят спектро-фотометрически при длине волны 465 нм. Используют кюветы с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют хлороформ. где: D- оптическая плотность испытуемого раствора (показания прибора); т-масса навески в граммах; п- число разведений; 2936- удельный показатель поглощения (при длине волны 465 нм для 100% раствора бета-каротина в хлороформе). За окончательный результат принимают среднее арифметическое трех параллельных определений. Допустимые расхождения при параллельных определениях не должны превышать 2% по отношению к средней арифметической величине. При определении безвредности 5-ти белым клинически здоровым мышам вводят перорально по 0,1 мл препарата на 1 мышь, контрольным мышам (5 особей) дистиллированную воду в той же дозе. За животными ведут наблюдение в течение 10 суток. Мыши должны оставаться живьми и клинически здоровыми. При гибели одной и более мышей проверку повторяют на удвоенном количестве животных. При гибели хотя бы одной мыши в повторном опыте препарат бракуют. Разработка показаний к применению и испытание каротиноидных препаратов на предмет выявления их лечебно-профилактической активности при болезнях животных осуществлено путем постановки специальных опытов. Первая серия опытов по определению профилактического влияния каролина на воспроизводительную функцию коров была проведена в АО им. Ленина Краснодарского края. Были сформированы 2 группы коров-аналогов по 76 особей (в сухостойном периоде) за 30 дней до отела, 1 - опытная и 2 - контрольная. Животным опытной группы подкожно вводили каролин в дозе 10 мл на животное, через каждые 7 дней до отела и 2 раза после отела. Ко ровам контрольной группы препарат не вводили. За животными обеих групп » вели клинические наблюдения во время родов и послеродовом периоде. При этом учитывали частоту задержаний последа, заболеваемость острым после- родовым эндометритом, а также определяли состояние яичников через месяц после отела. У 12-ти коров из опытной группы и 12-ти из контрольной, перед постановкой опыта, а затем через 15 и 30 дней после отела брали кровь для биохимических исследований и определяли следующие показатели; общий белок, каротин, витамин А, общий кальций, неорганический фосфор. В ходе этой серии опытов было установлено, что у коров опытной группы, в сравнении с контролем, меньше регистрировали следующих заболеваний: задержание последа на 14,5%, острого гнойно-катарального эндометрита на 22,4%, гипофункции яичников на 8,8%, на 20 дней короче сервис-период и на 1,0 - ниже индекс осеменения (таблица 28).
Эффективность каролина при послеродовых заболеваниях свиней и гиповитаминозе А поросят
Специальная серия опытов посвящена изучению влияния каролина на супоросных свиноматок, а через их организм - на новорожденных поросят, а также на поросят-отьемышей. В первой серии опытов были проведены исследования по применению каролина, как фактора защиты свиноматок от послеродовых осложнений, а их приплода - от постнатальных заболеваний. Для этого сформировали 2 группы по 12 особей в каждой, супоросных свиноматок крупной белой породы массой 200-230 кг, находящихся на 3-м месяце супоросности. В опытной группе ежедневно в корм добавляли каролин, в количестве 20 мл/жив. Контрольная группа получала только основной рацион.
После опороса учитывалось: количество поросят, их живая масса при рождении, на 21 и 30 день. Рассчитывался процент сохранности, у свиноматок отслеживали заболеваемость синдромом ММА. Результаты отражены в таблице 39. Из материалов, представленных в таблице, следует, что каролин снизил частоту возникновения опасного послеродового заболевания, получившего название синдром ММА. Болезнь характеризуется воспалением матки, молочной железы с появлением агалактии (подавлением и прекращением процессов молокообразования). Синдром ММА зарегистрирован у двух свиноматок в контрольной группе, тогда как в опытной группе животные не болели. Также, повысилась молочность свиноматок, но на крупноплодность препарат влияния не оказал. Масса поросят в возрасте 21 день была выше, чем у контрольной группы на 5,3 %, но к 30-дневному возрасту этот показатель снизился до 2,17 %. Различия сохранности поросят между опытной и контрольной группами (в 21 день на 2,04 % и в 30 дней на 1,29 %) свидетельствуют о том, что добавка в рацион каролина повышает жизнеспособность поросят. Во второй серии опытов был проведен эксперимент по изучению действия каролина на поросят-отъемышей при внутреннем и внутримышечным способе введения.
Было сформировано 5 групп, в которые по принципу аналогов подбирались поросята массой 12,7-13,7 кг (по 40 животных). Опыт проводился в течение 2 месяцев, при этом учитывали сохранность поросят, их рост, продуктивность и биоконверсию корма. Кормление осуществляли по нормированному рациону. Две группы поросят получали ежедневно с кормом каролин из расчета 10 мл/жив (20 мг каротина) и 5 мл/жив (10 мг каротина). Третья группа была для них контрольной. Четвертая группа поросят получала препарат в дозировке 5 мл/жив путем внутримышечной инъекции один раз в 5 дней. Пятая группа была контролем для четвертой. Из результатов исследований, представленных в таблице 40, видно, что скармливание препарата каролин поросятам 1-2 групп способствовало повышению их сохранности. Жизнеспособность в I и 2 группах по сравнению с 3 (контрольной), при увеличении дозировки возрастала на 7,5 % и 5 % соответственно. Увеличился так же и прирост массы тела: при скармливании: в дозе 5 мл - на 5,1 %, в дозе 10 мл - на 5,7 %, в сравнении с контролем. Внутримышечная инъекция препарата увеличила прирост массы тела поросят на 2,05%. Сохранность в этой группе была выше в сравнении с интактными животными на 7,5 %. Таким образом, применение каролина способствовало повышению сохранности, активизации роста и развития поросят. Эксперименты выполняли на базе свиноводческого комплекса, неблагополучного по гипотрофии поросят. Клинический материал подбирали путем диспансерного обследования свиней, оценки условий их кормления и содержания. Выявляли причины антенатальной и постнатальной гипотрофии поросят. К антенатальной относили гипотрофию, обусловленную нарушением внутриутробного развития поросят: при неполноценном кормлении беременных свиноматок, родственном разведении, заболеваниях самок и самцов, слишком большой численности (более 13) новорожденных в помете. К постнатальной относили гипотрофию, возникающую вследствие низкой молочности подсосных свиноматок (гипо- и агалакти-ии), поражений молочной железы, нарушений условий кормления и содержания новорожденных поросят и их матерей.
Клинические исследования подопытных животных проводили по общепринятой методике. Поросят взвешивали в процессе их роста и развития. Измеряли длину туловища, обхват груди. При постановке диагноза на гипотрофию принимали во внимание особенности клинической картины болезни: общая слабость, вялость, недоразвитость, сниженная живая масса поросят, бледность кожи и видимых слизистых оболочек, подавленность сосательного рефлекса, западение глаз, низкая температура тела (гипотермия), анемия. В крови определяли гемоглобин, эритроциты, лейкоциты, СОЭ, в сыворотке - общий белок, альбумины, глобулины.
Эффективность картока при послеродовых заболеваниях коров
В третьей серии опытов для оценки влияния ликовита на организм кур-несушек было сформировано 2 группы. В опытной группе количество птицы на начало опыта составило 1451, в контрольной - 1497 голов. Ликовит добавлялся в корма из расчета 2,5 кг на 1 тонну комбикорма в течение 3 недель. Во время опыта за птицей вели наблюдение, учитывали поведенческие реакции, яйценоскость и сохранность, проводили лабораторное исследование желтков яиц на содержание каротиноидов, витамина А и интенсивность пигментации по шкале фирмы BASF (таблица 97). Сохранность птицы, получавшей ликовит, была выше, чем в группе ин-тактной птицы на 1,42%. Интенсивность яйцекладки была выше в опытной группе на 4,21% в сравнении с контролем. Желтки яиц от несушек, в рацион которых вводили ликовит, были окрашены более интенсивно в сравнении с интактными по шкале интенсивности окраски фирмы BASF. Введение препарата способствовало накоплению витаминов в желтке, так в сравнении с контролем, были выше концентрации каротиноидов на 41%, ретинола на 30,3% и токоферола на 22,4% В четвертой серии опытов для оценки влияния ликолина на кур-несушек было сформировано 2 группы. В опытной іруппе количество птицы на начало опыта составило 1563, в контрольной - 1497. В опытной группе ликолин вводили в рацион из расчета 4 л на тонну комбикорма в течение 3 недель. Во время опыта за птицей вели наблюдение, учитывали поведенческие реакции, яйценоскость и сохранность, проводили лабораторное исследование желтков яиц на содержание каротиноидов, витамина А и интенсивность пигментации по шкале фирмы BASF (таблица 98).
Сохранность птицы, получавшей ликолин была выше, чем в контрольной на 1,11%. Интенсивность яйцекладки была выше в опытной группе на 4,6% в сравнении с контролем. Желтки яиц от несушек, в рацион которых вводили ликолин, были окрашены более интенсивно в сравнении с интактными по шкале интенсивности окраски фирмы BASF, концентрация каротиноидов, витаминов А и Е в них также была выше. В пятой серии опытов было изучено влияние ликолина в сравнении с ликовитом на организм птицы. Для этого было сформировано 5 групп кур-несушек в возрасте 200 суток. Использовались племенные куры-несушки родительского стада кросса «Ломан-Браун». Птица содержалась в клеточных батареях. Куры получали основной рацион, представленный комбикормом заводского изготовления с добавкой стандартного витаминно-минерального премикса П 1-2. Препараты задавали в смеси скормом в течение 30 дней. Схема опыта представлена в таблице 99. В период экспериментальных исследований проводился комплексный клинико-лабораторный анализ состояния птицы. На протяжении опыта клиническая картина у кур всех опытных групп отличалась незначительно, однако по состоянию перьевого покрова, активности, продуктивности, пигментации гребешков, сережек, кожи ног птица опытных групп превосходила контрольную. Клинические наблюдения подтверждались данными лабораторных исследований по накоплению каротиноидов в организме птицы под влиянием изучаемых препаратов, так как к концу эксперимента у 10 кур из каждой группы брали кровь для лабораторных исследований. Анализ гематологических и биохимических исследований крови кур-несушек (таблица 100), свидетельствует о положительном влиянии изучаемых препаратов на эритро - и гемопоэз, белковый и витаминный обмены. Содержание эритроцитов у кур, получавших каротиноиды, превосходило контроль максимально на 22,5%, разница между ликовитом и ликолином по этому показателю была незначительной. Уровень гемоглобина в опытных группах превосходил аналогичный показатель в контроле максимально на 14,6% при назначении ликовита и на 14,1% при назначении ликолина. Общий белок, под влиянием ликовита увеличился, в среднем на 20%, а ликолина на - 4,8 %. По концентрации кальция и фосфора в сыворотке крови существенных различий между контрольной и опытными группами не реги- стрировали. Отмечено достоверное увеличение содержания каротиноидов в крови кур опытных групп, по сравнению с контролем максимально в 3 группе в 2,5 раз, концентрация витамина А увеличилась в 1,2 - 1,5 раза. Результаты исследований по оценке влияния изучаемых препаратов на показатели естественной резистентности кур-несушек представлены в таблице 101. Как следует из данных, представленных в таблице, препараты способствуют повышению показателей естественной резистентности у птицы. Однако влияние ликовита было более значимым, так в сравнении с контролем возросли показатели: БАСК в 1,3 - 1,4; ЛАСК в 1,5; ФАЛ - в 1,28 - 1,32 раза. А в группах кур, получавших ликолин, разница составила: по БАСК в 1,4 -1,2; по ЛАСК в 1,3 и по ФАЛ в 1,2 - 1,3 раза соответственно по группам. Влияние препаратов на формирование вакцинального иммунитета против болезни Ньюкасла определяли путем сравнения индивидуальных титров антигемагглютининов сыворотки крови кур после вакцинации (таблица 102).
Получение, физико-химические свойства и контроль ликопина
Лечебное, профилактическое и стимулирующее действие фармакологических препаратов во многом зависит от их физико-химических и биологических свойств, поэтому оценка препаратов по показателям, характеризующим их физические, химические и биологические особенности, приобрела важное теоретическое и прикладное значение. Контроль качества препаратов, их биологической активности и безвредности для человека, окружающей среды и животных при определенных условиях применения в животноводстве и ветеринарии - важнейший вопрос в исследовании новых биологически активных веществ. Поэтому, все этапы производства препаратов, их стандартизации, сертификации, регистрации и использования должны быть строго регламентированы. При выпуске препаратов для животноводства и ветеринарии большое внимание должно уделяться нормативно-технической документации, отражающей все этапы производства препаратов, их физико-химические и биологические свойства, методы оценки их качества, правильности хранения, транспортировки и использования. В этой связи сведения о получении, физико-химических свойствах и контроль ликопина приводятся ниже. В основу технологии получения ликопина положен микробиологический синтез биомассы гриба Blakeslea trispora с последующей экстракцией ликопина растительным маслом. С целью извлечения ликопина сухую биомассу гриба растирают на трехвальцовой краскотерке. Предварительно ликопинсодержащую биомассу перемешивают в экстракторе с хладоном для извлечения липидов гриба, после проведения экстракции биомассу отфильтровывают на фильтр-прессе. Далее в экстрактор загружают полученный осадок с фильтр-пресса и расчетное количество растительного масла, перемешивают, нагревают и передают на фильтр-пресс для отделения концентрированного раствора от мицелия гриба. Осадок, оставшийся на фильтре, представляет собой обедненную ликопином биомассу и называется ликопиновым шротом (препарат ликовит). Полученный концентрированный раствор ликопина передают на кристаллизацию, которую проводят при комнатной температуре в течение 3- 5 суток. Затем нагретую суспензию кристаллов ликопина фильтруют и отжимают с помощью вакуума. Фильтрат представляет собой масляный раствор с низким содержанием ликопина и называется ликопиновым маслом (препарат ликолин). Ликолин представляет собой раствор ликопина в рафинированных и дезодорированных маслах (кукурузном, соевом, подсолнечном) с массовой долей ликопина от 0,05 до 0,2%. В институте питания РАМН (г. Москва) и АО «Уралбиофарм» (г. Екатеринбург) оценку чистоты и устойчивости препаратов ликопина к окислительным изменениям в процессе длительного хранения, их индивидуального состава, включая геометрические цис- и трансизомеры ликопина проводили методом ВЭЖХ на хроматографической системе фирмы Jasco (Япония) со спектрофотометрическим детектированием.
В результате исследования установлено, что стабильность кристаллического ликопина как в процессе выделения, так и при длительном хранении при пониженной температуре (0-5С) в бытовом холодильнике составляла не менее 90%. Препятствием для дальнейшего использования кристаллического ликопина в пищевом производстве является его плохая растворимость. Проведенные исследования показали, что в процессе хранения (12 месяцев) суспензий микрокристаллического ликопина в рафинированном и дезодорированном подсолнечных маслах при пониженной температуре суммарное содержание регистрируемых изомеров ликопина уменьшалось незначительно (не более 10%), при этом содержание цис-изомера увеличилось во всех образцах в среднем в 4 раза и составило 18— 20 %. При получении масляных растворов необходимой стадией технологического процесса является нагревание (80 С), сопровождающееся нежелательными процессами автоокисления, снижающими потребительское качество получаемых препаратов. Для оптимизации этой стадии технологического процесса изучено влияние на стабильность ликопина ряда показателей, характеризующих природу масляной основы препарата и ее качество (кислотное и перекисное числа), температуры получения растворов. Было показано, что определяющими факторами являются снижение температуры получения растворов (до 60 С); температуры хранения (ликопин в растворах, хранившихся на холоде, был в два раза стабильнее, чем в растворах, хранившихся при комнатной температуре); уменьшение исходного значения перекисного числа используемых растительных масел. Определение параметров острой токсичности проводили по методу Deichmann и Le Blanc (1943), образцом служил масляный раствор ликопина (ликолин). Исследовался широкий интервал доз от 0,62 до 36,0 г/кг массы тела. Было использовано 22 самца белых нелинейных крыс со средней массой 295 г, из которых сформировали 2 группы аналогов. За 6 часов до введения препарата кормление и поение было прекращено как в опытной, так и в контрольной группе. Ликолин вводили внутрижелудочно при помощи полиэтиленового зонда и шприца типа «Рекорд». Расчет введенной дозы проводили, исходя из плотности ликолина- 0,921 г/мл. Результаты представлены в таблице 88. После введения препарата было организовано кормление и поение крыс обеих групп. После введения ликолина в опытной группе, как и в контрольной, которым вводили аналогичные объемы растительного масла без ликопина в дозах 10,7-36 г/кг массы тела наблюдалось кратковременное угнетение. Крысы были неподвижны, голова опущена, шерсть взъерошена. На шумовые, тактильные раздражители реакция выражена слабо.
Это состояние продолжалось в течение 25-30 минут с момента внутрижелудочного введения как ликопинового, так и обычного растительного масла. Наблюдение за животными продолжалось в течение 2 недель с момента начала опыта. За этот период не было выявлено различий в поведении и состоянии опытных и контрольных крыс. Аппетит появился спустя 4,5-5 часов после введения препарата и растительного масла. Потребление корма и воды за время наблюдения в обеих группах было одинаковым. Ректальная температура не претерпевала значительных колебаний за период исследований и находилась в пределах 38,3-39,0 С как у контрольных, так и у опытных животных. Слизистые оболочки ротовой полости, конъюнктивы после введения ликопинового масла в дозах 24 и 36 г/кг массы тела на вторые - третьи сутки приобрели желтоватый оттенок. Хроническая токсичность ликопина. Ввиду отсутствия токсичности препарата при однократном внутрижелудочном введении был проведен эксперимент по установлению его влияния на организм при длительном поступлении с кормом. В опыте использовали 30 белых нелинейных самцов крыс со средней живой массой 283 г, из которых было сформировано 2 группы. Подопытные крысы групповым способом получали ликолин в смеси с комбикормом 1:1 в течение 2-х месяцев ежедневно по непрерывной схеме. Контрольная группа препарата не получала и находилась на основном рационе (комбикорм). Весь период эксперимента за животными велось наблюдение, проводили морфологическое исследование крови и взвешивание в начале опыта, на 30 и 60 сутки.
