Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9
1.1. Микрофлора желудочно-кишечного тракта животных и птиц 9
1.2. Дисбактериоз и пути его коррекции 23
1.3. Энтеробактерии, их роль в этиологии желудочно-кишечных заболеваний. 29
1.4. Санитарно-микробиологическое состояние мяса птицы в процессе ее технологической переработки 37
1.5. Препараты, изготовленные на основе меда, применение их в ветеринарии. 51
ГЛАВА 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ. 60
2.1. Материалы и методы исследований 60
2.2. Результаты исследований 73
2.2.1 Изучение микроэкологического статуса кишечника цыплят и кур. 73
2.2.1.1. Исследование помета птиц разного возраста в производственных условиях 73
2.2.1.2. Исследование микрофлоры тонкого отдела кишечника птицы. 83
2.2.2. Изучение условно-патогенной и патогенной микрофлоры в мясе птицы механической обработки и в готовой продукции 93
2.2.3 Изучение свойств препаратов, изготовленных на основе меда — апитулима итулима 101
2.2.3.1. Изучение антимикробных свойств тулима и апитулима 101
2.2.3.2. Опыт применения апитулима в производственных условиях 132
2.2.3.3. Определение токсичности, безвредности, пирогенности апитулима и тулима 133
3. ОБСУЖЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ. 140
4. ВЫВОДЫ. 152
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 154
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ. 155
ПРИЛОЖЕНИЕ 187
- Микрофлора желудочно-кишечного тракта животных и птиц
- Исследование помета птиц разного возраста в производственных условиях
- Изучение антимикробных свойств тулима и апитулима
Введение к работе
Сосредоточение на ограниченных площадях большого поголовья кур и цыплят-бройлеров, применение многоярусных клеточных батарей, создание искусственного микроклимата в помещениях с птицей, использование в рационах нетрадиционных кормов — все это ведет к изменению микробиоценоза кишечника птиц. В связи с этим создается благоприятный фон для развития гастроэнтеритов алиментарного происхождения, длительных кишечных расстройств на фоне снижения естественной резистентности и иммунной реактивности организма больной птицы (Н.Ш.Сингариева, 1999; А.Н.Борисенкова, 1999; М.А.Трунов, 2000; И.П.Степаненко, 2001; А.Н.Борисенкова, Р.Н.Коровин, Т.Н.Рождественская, О.Б.Новикова и др., 2003).
При выборе способа борьбы с какой-либо инфекционной болезнью бактериальной этиологии, прежде всего обращают внимание на патогенные микроорганизмы (возбудители этих болезней), забывая о постоянном спутнике любого живого организма - условно-патогенной микрофлоре, которая представляет серьезную опасность для здоровья птицы и имеет огромное значение в возникновении и развитии болезни, оказывает влияние на экономические показатели птицехозяйств, обусловленные прямыми и косвенными потерями (А.Н.Борисенкова, Т.Н.Рождественская, В.А.Чавгун, 1997; М.А.Сидоров, В.В.Субботин, Н.В.Данилевская, 2000; Э.Д.Джавадов, 2001; А.Н.Борисенкова, 2001).
Условно-патогенная микрофлора является обитателем организма здоровой и переболевшей птицы, многие микроорганизмы широко распространены и длительно сохраняются во внешней среде. Заселяя первоначально организм, микроорганизмы находятся в симбиотической связи с макроорганизмом, создавая на определенное время иммунологическое равновесие. Однако при стрессах, сопровождающихся ослаблением общего состояния организма и снижением его естественных защитных функций, «микробное давление» усиливается, что приводит к возникновению аутоинфекции, которая может протекать самостоятельно, приводя к массовому падежу птицы, особенно молодняка, или быть вторичным процессом (М.Умитжанов, 1993; А.С.Орешкин, В.В.Пономарев, 2000).
С учетом этого весьма актуальным следует считать поиск эффективных и безопасных средств, усиливающих иммунную защиту, устойчивость к стрессам, стимулирующих обменные процессы в организме птиц, позитивно влияющих на кишечный биоценоз (Ю.В.Конопатов, 1992; В.И.Сапего, М.А.Ровин, 1999; И.П.Степаненко, 2001). В связи с этим остро встает проблема неспецифической профилактики кишечных инфекций у птиц, направленной на поддержание и сохранение, формирование и коррекцию видового и численного состава резидентной микрофлоры желудочно-кишечного тракта. Такими свойствами обладают иммунотропные препараты, изготовленные из специальных сортов меда, содержащие в высокой концентрации ферменты, флавоноиды, витамины, минеральные соли, органические кислоты и другие вещества, повышающие жизнедеятельность организма (Ю.В.Тулев, 1995-2001). Аспекты использования медовых иммунотропных препаратов в птицеводстве требуют рассмотрения ряда проблем: возможности коррекции кишечного биоценоза, коррекции иммунной, гормональной, ферментной и эндокринной систем, при предварительном изучении ряда свойств данных препаратов: токсичности, пирогенности, безвредности, антибактериальных свойств. Необходимость обратить внимание на эти вопросы является очевидной, так как не только дополнит уже имеющиеся сведения о действии иммунотропных препаратов, но и будет способствовать их применению в промышленном птицеводстве. Таким образом, проблема изучения микробиологического статуса кишечника птиц и изучения различных свойств препаратов, приготовленных на основе меда, является актуальной и представляет научный и практический интерес.
Цель работы - изучить патогенную и условно-патогенную микрофлору кишечника птиц, выявить доминирующие виды микроорганизмов, изучить антибактериальные свойства препаратов, изготовленных на основе меда.
Для реализации данной цели были сформулированы следующие задачи:
- изучить микрофлору кишечника птиц с использованием групповых проб помета в производственных условиях;
- провести исследование кишечника цыплят и кур при энтеритах, с целью обнаружения возможного источника загрязнения мяса птицы и продуктов его переработки;
- определить наличие сульфитредуцирующих клостридий в мясе птицы механической обвалки и готовой продукции с учетом сортности;
- изучить антибактериальную активность препаратов, изготовленных на основе меда (апитулима и тулима) в отношении микрофлоры, выделенной из кишечника птиц и в отношении эталонных штаммов ряда патогенных микроорганизмов;
- для определения достоверных результатов и избежания однозначной их трактовки при изучении антибактериальных свойств препаратов изготовленных на основе меда, рассчитать доверительные интервалы подавления роста микроорганизмов и изучить их фармакологические свойства на лабораторных животных.
Научная новизна.
Получены новые данные по микроэкологическому статусу кишечника бройлеров, цыплят и кур яичных пород. Выявлен широкий набор энтеробак-терий и другой микрофлоры.
Впервые выделена Salmonella bovis morbificans, нехарактерная для содержимого кишечника птиц. Впервые из помета птиц выделена микрофлора рода Xenorhabdus (сем. Enterobacteriaceae). При массовых геморрагических энтеритах цыплят и кур из содержимого кишечника, слизистых оболочек и печени выделена Cl.perfringens. Установлена зависимость санитарно микробиологических показателей колбасных изделий от наличия сульфитре-дуцирующих клостридий в сырье. Впервые изучены антимикробные свойства препаратов, изготовленных на основе меда — апитулима и тулима, в отношении микроорганизмов, выделенных из помета кур и референс-штаммов. Впервые при изучении антимикробных свойств применен математический метод расчета доверительного интервала на модели иммунотропных препаратов апитулима и тулима. Впервые изучены острая и • хроническая токсичность, пирогенность и безвредность вышеуказанных препаратов.
Практическая значимость.
Выявлена доминирующая микрофлора кишечника кур. Установлена роль Cl.perfringens в развитии геморрагических энтеритов кур. Выявлена взаимосвязь наличия сульфитредуцирующих клостридий в сырье и готовых колбасных изделиях. Установлены антимикробные свойства препаратов, изготовленных на основе меда в отношении кишечной микрофлоры цыплят и кур. Апробирована и предложена методика математического метода расчета доверительного интервала для определения антимикробных свойств препаратов. Учитывая антимикробные свойства препаратов, изготовленных на основе меда, нами проведены испытания апитулима и тулима на бройлерах в производственных условиях и получены положительные результаты.
Основные положения выносимые на защиту:
- микроэкологический статус кишечника цыплят и кур;
- зависимость санитарно-микробиологических показателей колбасных изделий от наличия сульфитредуцирующих клостридий в сырье;
- антимикробные свойства препаратов, изготовленных на основе меда - апитулима и тулима, в отношении кишечной микрофлоры птиц;
- математический метод расчета доверительного интервала для определения антимикробных свойств препаратов.
Апробация работы. Основные положения и результаты заслушаны на заседаниях Методического Совета отделов микробиологии и паразитологии ВНИВИП (1998-2001), Ученого Совета ВНИВИП (1998-2001), на курсах повышения квалификации ветеринарных врачей и на Межрегиональных Координационных совещаниях специалистов птицеводства по ВНИВИП (1998-2001), на юбилейной конференции, посвященной 190-летию высшего ветеринарного образования в России и 100-летию ветеринарной науки в России (Санкт-Петербург, 1998), на конференции по птицеводству Национального комитета по сотрудничеству птицеводов России с Всемирной научной ассоциацией по птицеводству (Зеленоград, 1999), на семинарах «Современное производство конкурентоспособной мясной продукции» (Санкт-Петербургская Академия методов техники управления, ЛИТМУ, 2002-2003).
Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 7 работ.
Структура и объем работы. Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, библиографического указателя литературы, приложения. Диссертация изложена в одном томе на страницах компьютерного текста, иллюстрирована 32 таблицами, 9 гистограммами, 6 рисунками, 5 диаграммами, 2 графиками. Список использованной литературы включает 317 источников, в том числе 72 иностранных авторов.
Микрофлора желудочно-кишечного тракта животных и птиц
Желудочно-кишечный тракт является центральным органом в аспекте биологической силы и здоровья любого живого организма.
Слова австрийского врача, доктора медицины Франца Ксавьера Майра (1875-1965), который назвал органы пищеварения «корневой системой человека», можно с полным правом отнести ко всем млекопитающим и птице. Нарушения и заболевания пищеварительной системы неотвратимо приводят к дисфункциям и проблемам во всем организме.
И.И.Мечников еще в конце 19 века высказал гениальную мысль о значении микрофлоры пищеварительного тракта для здоровья и долголетия человека. Он первым выдвинул и обосновал положение о необходимости направленного заселения кишечника полезными микроорганизмами и предложил вводить в кишечный тракт молочнокислые бактерии, используя их антагонистические свойства в отношении болезнетворных микробов.
На протяжении долгих лет складывались сложные симбиотические взаимоотношения между макро- и микроорганизмами. В эволюции взаимоотношений микроба и хозяина в большинстве случаев естественный отбор сохранил особи, достигшие динамического равновесия между собой. Постепенно исследователи приходили к убеждению, что микробный биоценоз кишечника формировался в процессе эволюции за счет микробной флоры внешней среды, определенные виды которой находили благоприятные экологические условия в различных участках пищеварительного тракта и приспособились к обитанию в них. Таким образом, в процессе эволюционного развития определился микроэкологический статус кишечника, сформированный в результате отбора нормальной микрофлорой, являющейся открытым биоценозом, в составе которого кроме индигенных всегда находятся случайные и условно-патогенные виды, но в безопасных для здорового хозяина количествах. (Б.В.Тараканов, 2000).
Относительное видовое постоянство микрофлоры пищеварительного тракта было подтверждено экспериментальными исследованиями и наблюдениями на животных и человеке, что позволило отвергнуть элемент случайности (В.Г.Геймберг, 1957). Примерно до середины 30-х годов XX века господствовало мнение о доминировании аэробных бактерий в микрофлоре кишечника. Однако к началу 60-х годов, по мере разработки новых питательных сред и улучшению методов культивирования микроорганизмов, было обращено внимание и на анаэробную флору кишечника (В.Г.Геймберг, 1957).
По определению М.А.Сидорова, В.В.Субботина, Н.В.Данилевской (2000), нормальная микрофлора организма - совокупность множества микробиоценозов, характеризующихся определенным составом и занимающих ту или иную экологическую нишу (биотоп) в организме животного. Наиболее сложные микробиоценозы у млекопитающих - микрофлора желудочно-кишечного тракта.
Иногда вместо понятия «нормальная» микрофлора употребляют синонимы: индигенная микрофлора (T.Rosebury, 1962), аутофлора, зубиоз (H.Haenel, J.Bending, 1965), аутохтонные микробы (П.Д.Уолкер, 1975; M.Alexander, 1971) или резидентная микрофлора. Однако это далеко не одно и то же. О.В.Чахава (1982) предложил называть аутомикрофлорой микробную флору любого состава, имеющуюся у данного хозяина в конкретной ситуации, а нормальной - микрофлору, характерную для здоровых представителей данной популяции. Таким образом, аутомикрофлорой является любая -и дисбактериозная, и нормальная микрофлора.
Совокупность бактерий всех микробиоценозов организма животного по количеству клеток в сотни раз превышает общее число клеток всех тканей и органов макроорганизма (1014). Огромное количество микробных клеток и их видовое разнообразие (свыше 400 видов) обеспечивают участие нормаль -11 ной микрофлоры в самых разных физиологических функциях макроорганизма. (М.А.Сидоров, В.В.Субботин, Н.В.Данилевская, 2000).
По словам T.Z.Csaky (1968), микрофлора является своеобразным «органом», влияющим на функции всего организма.
Из пищеварительного тракта человека и животных к настоящему времени выделено более 60 различных видов микроорганизмов. Микроорганизмы, которые постоянно обнаруживают в содержимом кишечника здоровых организмов, являются облигатными представителями его нормальной микрофлоры (R.M.Donaldson, 1964). В.Г.Петровская, О.П.Марко (1976) указывают, что микрофлора кишечника здорового человека представлена облигатными и факультативными микроорганизмами. В облигатной группе преобладают строго анаэробные бесспоровые бактерии, количество которых в грамме материала составляет в среднем 1 млрд., а количество аэробных не превышает 1,5-3 млн. Основу нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта составляют неспорообразующие облигатно-анаэробные микроорганизмы. Соотношение анаэробов и аэробов в тонком и толстом кишечнике составляет до 1000:1.
К резидентной микрофлоре желудочно-кишечного тракта относятся би-фидобактерии, лактобактерии, бактероиды, энтерококки, эшерихии, дрож-жеподобные грибы, высеваются также клостридии, стрептококки и стафилококки (J.Houte, H.M.Jansen, 1968; L.J.Mata, C.Carrilla, E.Villatoro, 1969; И.А.Рахманина и; др., 1973; M.S. Nawaz et al., 1999, М.А.Сидоров, В.В.Субботин, Н.В.Данилевская, 2000; Б.Бессарабов и др., 2001).
Исследования" показали, что микробы обнаруживаются во всех отделах пищеварительного тракта (W.W.Topley, G.Wilson, 1948; Л.Г.Перетц, 1955; H.M.Hafez, 1999) и находятся между собой в разнообразных связях. По мнению экологов и микробиологов, микробные популяции подчиняются общим экологическим закономерностям (R.J.Clarke, T.Bauchop, 1977).
Симбиоз между бактериями различных видов в кишечнике может иметь многообразные формы: нейтрализм, конкуренция, паразитизм, ком--енса-лизм, мутуализм и др. Однако вопреки такому размаху вариабельности взаимоотношений микрофлора быстро превращается в очень стабильную популяцию, которая помогает животному сохранять устойчивость к желудочно-кишечным инфекциям. Этот феномен, описанный различными авторами, получил название «бактериальный антагонизм», «бактериальное вмешательство», «барьерный эффект», «колонизационная резистентность», «конкурентное исключение» (R.Fuller, 1989; Б.В.Тараканов, 2000). Недостаток или избыток того или иного субстрата или метаболита, также как и изменение численности микроорганизмов в соответствующем биотипе, служит сигналом для адаптивных или необратимых изменений в соответствующем звене микроэкологической системы (Л.Г.Перетц, 1955; В.Г.Петровская, О.П.Марко, 1976; D.C.Savage, 1977, 1983; В.Н.Красноголовец, 1979; G.Evaldson, A.Heimdahi, L.Kagar, C.E.Nord, 1982; G.L.Simon, S.Z.Gorbach, 1982).
Нормальная микрофлора участвует в водно-солевом обмене, выполняет ряд физиологических функций, связанных с утилизацией пищи и поддержанием адекватности питания (H.A.Gordon, 1960), в регуляции газового состава кишечника и других полостей организма хозяина. Доказано участие микрофлоры в конечном звене пищеварения, в основном в биохимических процессах расщепления питательных веществ (белков, углеводов, липидов, нуклеиновых кислот, минеральных веществ), протекающих в толстом отделе кишечника (И.П.Павлов, 1896; T.D.Luckey, 1963; H.Haenel, 1964).
Имеются данные о том, что нормальная кишечная микрофлора продуцирует энзимы, участвует в синтезе биологически активных соединений (антибиотики, гормоны), в синтезе витаминов, особенно витаминов группы В, играющих значительную роль в нормальном течении иммунных процессов в синтезе клеточных структур ДНК и РНК (T.Baumgertel und D.Zahn, 1953; В.И.Петровский, 1961; R.M.Donaldson, 1964; М.А.Сидоров, В.В.Субботин, Н.В.Данилевская, 2000).
Г.И.Гончарова, Э.П.Козлова, В.И.Чистякова (1979) в своих работах также указывают на роль микроорганизмов в пищеварительных и метаболических процессах, в синтезе витаминов и жизненно необходимых аминокислот, регуляции моторно-эвакуаторной функции толстой кишки, всасывания железа, кальция, витамина Д и утилизации биологически активных веществ.
Различные микроорганизмы кишечной микрофлоры участвуют в рециркуляции холестерина, желчных кислот, билирубина, жирных кислот и других макромолекул (К.W.Heaton, J.V.Lever, D.Barnard, 1972). Так, холестерин-превращающая активность была выявлена у кишечных палочек (М.В.Панчишина, С.Ф.Олейник, 1983).
Исследование помета птиц разного возраста в производственных условиях
В первой серии исследований микрофлору кишечника птиц изучали используя прижизненный метод диагностики, а именно, путем бактериологического исследования групповых проб свежего помета.
Исследования проводили на двух птицефабриках яичного направления. Бактериологическому исследованию было подвергнуто 90 проб помета от цыплят и кур-несушек промышленного стада, соответсвенно 71 и 19 проб.
У всех культур, выделенных в ходе исследования, были изучены биохимические свойства. Интерпретацию полученных результатов проводили согласно определителю бактерий (Bergey s Mannual of Systematic Bacterilogy, 1997), определителю зоопатогенных микроорганизмов (М.А.Сидоров, Д.И.Скородумов, В.Б.Федотов, 1995), а также инструкций, прилагаемых к ПБДЭ и ПБДС. Результаты исследования биохимических свойств микроорганизмов сем. Enterobacteriaceae, выделенных из помета птиц разного возраста и их идентификация с использованием ПБДЭ представлены в таблице 2.2.1.1.1.
Из представленных в таблице данных видно, что из 30 родов семейства энтеробактерий (Bergey s Mannual of Systematic Bacterilogy, 1997), из групповых проб помета птиц были выделены культуры, являющиеся представителями 11-ти родов.
Необходимо отметить, что 10 культур Enterobacter agglomerans, выделенных из помета, были не однотипны по своим биохимическим свойствам. Результаты изучения биохимических свойств вышеназванных микроорганизмов приведены в таблице 2.2.1.1.2.
Из таблицы видно, что все энтеробактеры, как и большинство энтеро-бактерий, каталазоположительные и оксидазоотрицательные. У всех культур также отмечали отсутствие лизиндекарбоксилазы, аргининдегидролазы и уреазы, культуры не утилизировали орнитиндекарбоксилазу, не образовывали ацетилметилкарбинол и сероводород, утилизировали глюкозу, манит, арабинозу, наблюдалось наличие b-галактозы. В проявлении или отсутствии других свойств отмечали вариабельность. Причем вариабельность наблюдали даже в пределах одной возрастной группы птиц. Так, из двух культур Епerob.agglomerans, выделенных от кур в возрасте 250 дней, одна утилизировала цитрат натрия и цитрат натрия с глюкозой, но не утилизировала малонат натрия, другая наоборот — не утилизировала цитрат натрия и цитрат натрия с глюкозой, но утилизирова малонат натрия, в одном случае наблюдали наличие фенилаланиндезаминазы, в одном случае образовывался индол, в другом нет, в одном случае наблюдали утилизацию сахарозы и инозита, в другом нет. Подобную вариабельность отмечали и у культур Enterobacter agglomerans, выделенных от кур в возрасте 260 дней, от которых нами выделено три группы энтеробактеров, имеющих различия в биохимических свойствах.
Результаты выделения условно-патогенных микроорганизмов из помета цыплят и кур в хозяйствах промышленного типа представлены в таблицах видно, что из проб помета от 4-5-дневных цыплят выделены 9 культур E.coli, из которых 4 были патогенны — обнаружен адгезивный антиген F41 . 5 культур не вызывали гибель белых мышей при внут-рибрюшинном заражении, т.е. были непатогенны. Одновременно с кишечной палочкой был выделен Proteus vulgaris непатогенный для белых мышей.
Из помета цыплят в возрасте 9-11 дней, а также из помета взрослой птицы, наряду с протеем и кишечной палочкой выявлена другая микрофлора из семейства Enterobacteriaceae: Enterobacter agglomerans — 10 культур, Serratia rubideae - 5, Enterobacter intermedium — 5, в единичных случаях - Citrobacter freundii, Klebsiella pneumoniae, Providencia stuartii, Shigella boydii, а в 13 пробах обнаружен Staphylococcus lentus. Все выделенные культуры для белых мышей были непатогенны. На одной из птицефабрик (п/ф А) исключения составили 17 культур кишечной палочки (из 62), с выявленным адгезивным антигеном F4i, характерным для патогенных штаммов (27,4%), а также, выделенный в одном случае Proteus mirabilis. Выделенные патогенные штаммы E.coli и Proteus mirabilis были чувствительны к офлаксацину (таривиду), аз-треонаму, гентамицину, умеренно устойчивы к амикацину и фурадонину.
На другой птицефабрике (п/ф В) по производству яиц, где не применяют лекарственные препараты (таблица 2.2.1.1.4.), а назначают только витамины группы В и С, из 7 проб помета от 113-дневной птицы и в 6 случаях по 3 от кур-несушек 211-ти и 270-дневного возраста были выделены сальмонеллы, которые при серологической типизации отнесены к группе С2 - Salm.bovis morbificans (08; 06; Нг; Н2)ь Н2,5) и составили 68,42%. Выделенные культуры -сальмонелл оказались чувствительны к левомицетину, гентамицину, фурадо-нину. Полученные данные требуют продолжения исследований и указывают на возможность внесения изменений в технологический цикл хозяйства, выделив дополнительную точку микробиологического мониторинга для контроля за эпизоотической ситуацией в отношении сальмонеллеза и предложив курс антибиотикотерапии препаратами, действующими на возбудителя.
Из всех 19 проб помета от взрослой птицы на данной птицефабрике выделены непатогенная кишечная палочка и Xenorhabdus nematophilus, в одной -Proteus vulgaris. Представители рода Xenorhabdus относятся к малоизуче-ным, недавно описаным энтеробактекриям, не привлекающим внимания из-за их ограниченного распространения. Их естественным местом обитания является просвет кишечника у энтомопатогенных нематод и полость тела насекомых, инфицированных этими нематодами. По источникам выделения, плохому росту при 37С и слабой активности биохимических процессов в целом род Xenorhabdus фенотипически уникален (Bergey s Marmual of Sisematic Bacteriology, 1997).
В ходе наших исследований культура Xenorhabdus nematophilus росла при температуре 24С, на мясопептонном агаре имела желто-коричневый пигмент, была подвижна, оксидазоотрицательна и каталазоотрицательна. Биохимические свойства данной культуры, установленные по ПБДЭ и представленные в таблице 2.2.1.1.1. совпадают с таковыми, указанными в определителе бактерий (Bergey s, 1997).
Как уже отмечалось, из 5 проб помета цыплят 9-ти дневного возраста, были выделены культуры Serratia rubideae, из 1-ой пробы 118 дневной птицы - Kluyvera cryocrescens, из 2-х проб 119 дневной птицы - Shigella boydii; из проб помета 113-ти, 211-ти и 270-ти дневной птицы - 19 культур Xenorhabdus nematophilus и из 5 проб 207 дневной птицы - Enterobacter intermedium. Данные микроорганизмы не являются типичными представителями микрофлоры желудочно-кишечного тракта птиц. Полученные данные требуют продолжения исследований для определения роли вышеперечисленных микроорганизмов. и установления их этиологического значения в инфекционной патологии птиц.
Наряду с представителями семейства энтеробактерий, в 13-ти пробах помета от цыплят и кур-несушек промышленного стада были выделены культуры стафилококка, которые обладали следующими биохимическими свойствами: имели положительную каталазную реакцию, утилизировали глюкозу, фруктозу, маннозу, мальтозу, лактозу, треголозу, маннит, ксилозу, сахарозу, арабинозу, галактозу, не утилизировали салицин, обнаруживалось наличие фосфатазы, нитрат редуктазы, отсутствие аргининдегидролазы и уреазы, ацетилметилкарбинол не образовывался, не продуцировали коагула-зу и гемолизин. Таким образом, выделенные стафилококки были отнесены к виду Staphylococcus lentus, не патогенному для белых мышей. Других видов представителей рода Staphylococcus в нашей работе обнаружено не было. Суммированные данные выделения микрофлоры из помета птиц по обеим птицефабрикам представлены в таблице 2.2.1.1.5.
Из представленных данных видно, что в групповых пробах помета у цыплят первых дней жизни присутствуют E.coli и Proteus vulgaris. Появление гнилостной микрофлоры (протея) у цыплят в раннем возрасте может служить сигналом нарушениия биоциноза кишечника молодняка птицы, а значит, возникает необходимость в применении средств, нормализующих микрофлору кишечника, таких как комплексные пробиотики.
Изучение антимикробных свойств тулима и апитулима
Препараты апитулим и тулим относятся к иммуномодуляторам, изготовленным из меда. Они стимулируют иммунные процессы и факторы естественной резистентности организма, нормализуют обмен, повышают антитоксическую функцию печени, не оказывают отрицательного влияния на почки, повышают фагоцитарную активность макрофагов, нормализуют показатели крови (гемоглобин, лейкоформулу, СОЭ и др.), увеличивают содержание в крови витамина А и глобулиновых фракций белков, проявляют антибактериальный и противовирусный эффект, задерживают рост некоторых видов опухолевых клеток.
Препараты вызывают индукцию эндогенного лейкоцитарного альфа- интерферона, который осуществляет активацию макрофагов, нейтрофилов, моноцитов и гранулоцитов, тем самым повышает антибактериальный эффект в отношении патогенной микрофлоры и улучшает биоценоз.
В ветеринарии препараты успешно применяются с лечебно-профилактической целью при онкологических заболеваниях животных : лейкозе крупного рогатого скота и птиц, лимфогранулематозе, опухолях печени, почек, прямой кишки, вымени, кожи; при бактериальных инфекциях (сальмо-неллезе, колибактериозе, пастереллезе) и заболеваниях вирусной этиологии (гриппе, чуме, гепатите, герпесе) различных видов животных. Отмечено усиление специфического иммунитета на фоне вакцинации. Установлен рано-заживляющий эффект, восстанавливающее действие на слизистую оболочку кишечника, дыхательных путей.
Известно, что пусковым механизмом желудочно-кишечных заболеваний, обусловленных секундарной микрофлорой, являются вирусные инфекции. Препараты, изготовленные на основе меда, обладают широким спектром антивирусного действия, предотвращают иммунодефицитное со -102 -стояние организма и нормализуют жизненно важные функции, включая стабилизацию кишечной микрофлоры.
Высокая концентрация в исходном сырье природных компонентов (ферментов, флавоноидов, витаминов А, С, D, Е, К, группы В, минеральных солеи, органических кислот) и исключение в технологическом цикле воздействия на них физико-химических и прочих факторов дает возможность получить препараты с уникальными свойствами.
Антимикробные свойства тупима и апитулима изучали на 30-ти штаммах различных микроорганизмов: 20 штаммов были выделены от птиц с различных птицефабрик Северо-Запада, 10 - получены из ВГНКИ им. Л.А. Тарасевича. В опыт были включены представители следующих семейств: Enterobacteriaceae — 19 штаммов, в т.ч сальмонелл — 7, кишечных палочек - 5, протея - 4, клебсиелл - 2, цитробактер — 1; семейство Micrococcaceae — 6, в т.ч. стафилококков - 5, стрептококков - 1; семейство Pseudomonadaceae - 5.
Среди перечисленных выше культур из :" 72/С М- ; : были получены Salm. gallinarum, Salm. typimurium, Salm paratyphy A, E. coli 3912/41, E. coli 25922„Staph. aureus Wood 46, Pseud, aeruginosa, Strept. faecalis, Prot. vulgaris, Kleb. rhinoscleromatis.
Все штаммы, использованные в опытах, представлены в таблице 2.2.3.1.1.
На первом этапе исследования определяли максимальное разведение препаратов, обеспечивающее подавление роста микроорганизмов по наличию или отсутствию роста культур в МПБ при добавлении апитулима и ту-лима в разведениях от 1/2 до 1/128. Контролем служили пробирка с МПБ для подтверждения стерильности питательной среды, а также пробирки с тестируемыми культурами без добавления препаратов. Полученные данные представлены в таблицах 2.2.3.1.2 и 2.2.3.1.3. За минимальную подавляющую концентрацию (МІЖ) принимали первую пробирку с очевидным отсутствием видимого роста.
За результат принимали количество микроорганизмов в 1 см3 инокулюма, выраженное в виде числа от 1,1 до 9,9, умноженного на 10 в соответствующей степени.
Для удобства дальнейших рассчетов среднего результата мы объединили все исследуемые культуры в 7 групп: эшерихии, сальмонеллы, кокковая микрофлора, псевдомонады, протеи, клебсиеллы, цитробактеры. Средний значения количества колоний, выросших на 2-х параллельных чашках одного разведения представлены в таблицах 2.2.3.1.6. и 2.2.3.1.7.
Для того чтобы определить достоверность результатов и избежать однозначной их трактовки мы рассчитывали доверительные интервалы, которые характеризуют статистическое распределение микроорганизмов в образце.
Доверительный интервал 5, характеризующий статистическое распределение микроорганизмов в пробе при доверительной вероятности Р=0,95, рассчитывали по формуле: и т, которое является среднеквадратическим отклонением результата измерений (параметр функции распределения результа ЕС — сумма колоний, подсчитанных на всех отобранных чашках; Пі — количество чашек, отобранных в первом разведении;: П2 — количество чашек, отобранных во втором разведении; V— объем посевного материала, внесенный в каждую чашку, см ; d — коэффициент разбавления, соответствующий первому разведению. Дополнительно вводили обозначение М, которое представляет со-,92 1,9бл бой тов, характеризующий их рассеивание и равный корню квадратному из дисперсии результата измерения).
