Содержание к диссертации
Список условных обозначений и сокращений1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Вирусная диарея крупного рогатого скота
1.1.1. Таксономическое положение и основные биологические свойства вируса вирусной диареи крупного рогатого скота
1.1.2. Структурная характеристика вируса вирусной диареи крупного рогатого скота
1.2. Аденовирусная инфекция КРС
1.2.1. Общая характеристика аденовирусов
1.2.2.Сведения об аденовирусной инфекции крупного рогатого скота
1.2.3. Структурная характеристика аденовириона, структура вирусного нуклиокапсида
1.2.4. Основные структурные белки аденовириона
1.2.5. Антигенная структура белков.аденовирусов
1.3.Клинико-эпизоотологические особенности и патогенез вирусной диареи КРС
1.4. Клинико-эпизоотологические особенности и патогенез аденовирусной инфекции КРС
1.5. Специфическая профилактика ВД КРС
1.6. Специфическая профилактика аденовирусной инфекции КРС
1.7.Иммуномодуляторы, их природа и иммуномодулирующий эффект
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы и исследования
2.2гРезультаты исследований --_!_•_• • • — —
2.2.1. Отработка культивирования аденовируса и вируса вирусной диареи с инфекционными титрами не ниже 1060ТЦД5(/мл
2.2.2. Очистка и концентрирование аденовируса КРС и вируса вирусной диареи КРС
2.2.3. Отработка оптимальных условий инактивации полученных вирусов
2.2.4. Изготовление экспериментальных серий моно- и ассоциированных вакцин и сравнение их свойств на разных видах животных
2.2.5. Оптимизация схемы введения ассоциированной вакцины
2.2.6.Влияние срока хранения на антигенную активность ассоциированной инактивированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота
2.2.7.Исследование влияния иммуномодуляторов на антигенные свойства вакцины
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
4. ВЫВОДЫ
5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ
Введение к работе
Актуальность проблемы. На протяжении многих лет животноводство всех стран мира, в том числе и России, несёт значительные экономические потери от респираторных и желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят. В основе сложившейся неблагоприятной ситуации лежит целый ряд неспецифических предрасполагающих факторов, среди которых наиболее важными являются содержание большого поголовья скота на ограниченном пространстве, механизация методов содержания и кормления, что ведет за собой ограничение двигательной активности у животных, возникновение стрессов, усложнение микробного и вирусного пейзажа в хозайствах и комплексах, снижение иммунитета. В этих условиях, особенно при нарушении санитарно-гигиенических норм, несвоевременной выпойки молозива телятам, а также при отсутствии на станциях исскуственного осеменения должного контроля за возможной контаминацией спермы вирусами, нередко возникают и очень быстро распространяются инфекционные заболевания, в том числе вирусной природы.
Аденовирусная инфекция и вирусная диарея крупного рогатого скота широко распространены во всем мире, в том числе и в России. Их возбудители занимают одно из ведущих мест в патологии респираторного и желудочно-кишечного тракта новорожденных телят. По данным отчетности последних годов по России, в 60-100% случаев при заболеваниях телят диареей, выделяют аденовирус и вирус ВД или их ассоциацию (Сюрин В. Н. и др 1998).
Величина экономического ущерба при этих заболеваниях, складывающаяся из падежа телят, снижения мясной и молочной продуктивности, уменьшения привесов, выбраковки животных, убытка от абортов, бесплодия и.т.д., огромна, а терапевтические меры борьбы с уже возникшим заболеванием малоэффективны. Поэтому в комплексе противоэпизоотических мер борьбы с аденовирусной инфекцией и вирусной диареей КРС специфическая профилактика является ведущей.
В арсенале биологической промышленности во всем мире имеется большое количество препаратов, предназначенных для специфической профилактики респираторных и кишечных заболеваний телят, которые широко используются в ветеринарной практике Массовое применение иммунобиологических средств защиты животных требует особого контроля на всех этапах их изготовления, производства и использования. Особенно это касается ассоциированных препаратов, поскольку их конструирование из различных антигенов является сложной задачей и подразумевает получение вакцины, обладающей высокими иммуногенными свойствами по каждому из компонентов.
В связи с этим изучение противоэпизоотической эффективности и иммуногенных свойств вакцинных препаратов, включающее количественное определение уровня специфических антител у животных, их динамику, а также влияние иммунизации на заболеваемость и сохранность поголовья, является главным практическим критерием оценки вакцин против вирусных инфекций телят, и, в конечном итоге, подтверждает или опровергает целесообразность их применения.
В последние годы значительно возрос интерес к проблеме иммунокорекции, что связано с усилением экологического неблагополучия и возрастающей нагрузкой на организм животных Кроме того, интерес к иммуномодуляторам со стороны практикующих ветеринарных врачей обусловлен возрастающей потребностью в высокоэффективных средствах профилактики вирусных инфекций Вирусная диарея крупного рогатого скота заболевание КРС, преимущественно молодых животных, характеризующееся широким спектром клинических проявлений, способное протекать в различных формах, как в острой с летальным исходом, так и латентной — вызывая у животного сероконверсию без каких- либо клинических проявлений. Возбудителем данного заболевания является вирус вирусной диареи КРС, который относится к роду pestivirus семейство Flaviviridae. В настоявшее время компанией НАРВАК выпускается ассоциированная вакцина инактивированная против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3 и лептоспироза крупного рогатого скота, а также сотрудникам института экспериментальной ветеринарии имени Н. Вышелесского (Белоруссия) разработаны ассоциированная живая культуральная вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота; ассоциированная инактивированная культуральная вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота-и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота.
Аденовирусная инфекция, зарегистрированная преимущественно у молодняка крупного рогатого скота характеризуется острым течением и поражением органов дыхания, пищеварения и конъюнктивитом. В 1982 г была разработана моновакцина против аденовирусной инфекции КРС и бивакцина, содержащая аденовирус и возбудитель пастереллеза, в которых были использованы в качестве инактиванта - димерэтиленимин, и адъюванта - аэросил (Сюрин В.Н., Литвинов О.Б., Белоусова Р.В).
Установлено, что вирус ВД КРС и аденовирусы являются иммунодепрессантами и способствуют развитию вторичной инфекции.
В настоящее время в распоряжении ветеринарных специалистов имеются моно- и поливалентные вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи КРС, однако на отечественном рынке ветеринарных препаратов отсутствуют ассоциированные вакцинные препараты против указанных инфекций. Поэтому разработка отечественных препаратов против указанных инфекций является своевременным и актуальным.
Целью исследований являлась разработка ассоциированной инакти-вированной-концентрированной-вакцины_против_аденовирусной_инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Оптимизировать условия культивирования аденовируса и вируса вирусной диареи КРС с получением инфекционной активности не ниже 1060ТЦД5о/мл.
2. Отработать оптимальные условия инактивации полученных вирусов.
3. Получить концентрированные вирусные антигены и изучить их антигенную активность.
4. Изготовить экспериментальные серии моно- и ассоциированных вакцин и определить антигенные свойства на разных видах животных.
5. Испытывать ассоциированную вакцину на естественно восприимчивых животных.
6. Исследовать влияние иммуномодуляторов на антигенные свойства вакцины.
Научная новизна работы: Впервые разработана ассоциированная инактивированная концентрированная вакцина против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.
Предложена модифицированная методика получения очищенных и концентрированных препаратов аденовирусов и вируса вирусной диареи КРС, пригодных для создания вакцин.
Дано научное обоснование и показана эффективность применения иммуномодуляторов и ассоциированной инактивированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.
Практическая значимость работы. Результаты исследований вошли^в-нормативную^техническую_,документацию_:_временная инструкция по изготовлению и контролю вакцины ассоциированной концентрированной инактивированной против аденовирусной инфекции и вирусной диа! 10 реи крупного рогатого скота; технические условия изготовления и контроля вакцины ассоциированной концентрированной инактивированной против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота; наставление по применению ассоциированной инактивированной концентрированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота.
Полученные результаты являются основой для дальнейших исследований механизмов и закономерностей формирования поствакцинального противовирусного иммунитета у КРС и могут быть использованы при изучении патогенеза и иммуногенеза инфекций, вызываемых аденовирусами и вирусом вирусной диареи КРС. Полученные результаты используются в учебном процессе по дисциплине «Молекулярная биология вирусов» для студентов 4 и 5 курсов ветеринарно-биологического факультета ФГОУ ВПО МГАВМиБ. Апробация работы. Результаты работы доложены на международной научной практической конференции молодых ученых ВНИиТИБП, (Щелково, 2004), 3-ей конференции по учебно-методической, воспитательной и научно-практической работе ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва, 2006); конференции по актуальным проблемам инфекционной патологии и иммунологии животных (Москва, 2006), конференции «Вопросы физикохимической биологии в ветеринарии» (Москва, 2006).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 научных статей, в т.ч. 8 статей в сборниках научных трудов, 3 статьи — в научных журналах, рекомендованных ВАК РФ. Структура и объем работы. Диссертация изложена на 145 страницах и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, выводы, данные о практическом использовании научных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, приложения. Список использованной литературы включает 297 источников, из которых 198 - иностранных авторов. Работа иллюстрирована 14 рисунками и 17 таблицами.
Личный вклад соискателя. Работа выполнена соискателем самостоятельно. В выполнении отдельных этапов, связанных с культивированием, очисткой и концентрированием вирусов, принимали участие к.б.н.
доцент И.В. Третьякова, к.б.н. Т.П. Лобова, д.б.н., профессор Е.И. Ярыгина, за что автор приносит им благодарность.
Основные положения и результаты, выносимые на защиту.
• технология очистки и концентрирования вирусов аденовирусной инфекции и ВД КРС;
• условия приготовления экспериментальных серий моно- и ассоциированных вакцин и результаты изучения их антигенных свойств на разных видах животных;
• схема введения ассоциированной вакцины;
• результаты исследований по оценке влияния иммуномодуляторов на антигенные свойства вакцины.
