Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Взаимодействие Citrobacter freundii метионин - -лиазы с субстратами и ингибиторами в растворе и кристалле Морозова, Елена Андреевна

Взаимодействие Citrobacter freundii метионин - -лиазы с субстратами и ингибиторами в растворе и кристалле
<
Взаимодействие Citrobacter freundii метионин - -лиазы с субстратами и ингибиторами в растворе и кристалле Взаимодействие Citrobacter freundii метионин - -лиазы с субстратами и ингибиторами в растворе и кристалле Взаимодействие Citrobacter freundii метионин - -лиазы с субстратами и ингибиторами в растворе и кристалле Взаимодействие Citrobacter freundii метионин - -лиазы с субстратами и ингибиторами в растворе и кристалле Взаимодействие Citrobacter freundii метионин - -лиазы с субстратами и ингибиторами в растворе и кристалле
>

Диссертация, - 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Морозова, Елена Андреевна. Взаимодействие Citrobacter freundii метионин - -лиазы с субстратами и ингибиторами в растворе и кристалле : диссертация ... кандидата химических наук : 03.01.03 / Морозова Елена Андреевна; [Место защиты: Ин-т молекуляр. биологии им. В.А. Энгельгардта РАН].- Москва, 2011.- 93 с.: ил. РГБ ОД, 61 11-2/360

Введение к работе

Актуальность темы. Пиридоксаль-5'-фосфат-зависимые ферменты обладают уникальной способностью катализировать широкий спектр реакций в метаболизме аминокислот. На сегодняшний день известно более чем 140 различных ферментов, имеющих в качестве кофактора пиридоксаль-5 '-фосфат. Эти ферменты участвуют в синтезе, превращениях и деградации аминокислот и биогенных аминов, а также в синтезе тетрапиррольных соединений и метаболизме аминосахаров. Свидетельством их ключевой значимости в метаболизме биологически активных соединений является то, что пиридоксаль-5'-фосфат-зависимые ферменты используются в качестве мишеней при разработке лекарственных средств.

Пиридоксаль-5'-фосфат-зависимый метаболизм серосодержащих аминокислот играет важную роль в живой клетке. S-Аденозилметионин, синтезируемый из метионина, является одним из важнейших биорегуляторов. Он служит предшественником в биосинтезе полиаминов, спермина и спермидина, которые участвуют в процессах клеточного деления и донором метальных групп в различных реакциях их переноса. В частности, метилирование РНК необходимо для обеспечения процесса трансляции. В эукариотических клетках метилирование ДНК играет важную роль в таких процессах как транскрипция генов, конденсация хроматина, эмбриональное развитие. Метионин также является предшественником в синтезе пропионил-СоА, образующийся из которого сукцинил-СоА участвует в цикле Кребса, являющимся одним из основных процессов клеточного метаболизма.

Пиридоксаль-5'-фосфат-зависимая метионин - у-лиаза - фермент, участвующий в метаболизме серосодержащих аминокислот, который катализирует реакцию расщепления метионина с образованием метилмеркаптана, аммиака и а-кетобутирата. Наличие метионин - у-лиазы в патогенах - бактериях и одноклеточных эукариотах и отсутствие ее в клетках животных и человека обусловливает перспективность использования этого фермента в качестве биохимической мишени для создания новых антипатогенных лекарственных препаратов. Дизайн препаратов, ингибирующих фермент, требует знания структурно-функциональных аспектов механизма его действия.

Цели и задачи исследования.

Целью данной работы являлось изучение механизма реакции у-элиминирования L-метионина, катализируемой пиридоксаль-5'-фосфат-зависимой метионин - у-лиазой Citrobacter freundii. В работе решались следующие задачи: 1) определение стационарных кинетических параметров взаимодействия метионин - у-лиазы с рядом аминокислот -субстратов и потенциальных ингибиторов и исследование вклада стадий обмена С-а- и С-Р-протонов ингибиторов в ферментативную реакцию; 2) получение кристаллов

холофермента, дающих высокое рентгенографическое разрешение; 3) спектральная идентификация интермедиатов, образуемых ферментом с субстратами и ингибиторами в растворе и кристалле.

Научная новизна и практическая ценность работы.

Исследование кинетических параметров взаимодействия фермента с субстратами и
ингибиторами в растворе позволило предположить скорость-лимитирующую стадию
реакции у-элиминирования L-метионина. Получены кристаллы холофермента, дающие
разрешение 1,35 А. Впервые для пиридоксаль-5'-фосфат-зависимых ферментов

основание Шиффа пиридоксаль-5'-фосфата с аммиаком идентифицировано в кристаллах, полученных в присутствии сульфата аммония. Показано, что кристаллы холофермента каталитически компетентны и их комплексы с аминокислотами могут быть использованы для определения пространственных структур трех интермедиатов реакции у-элиминирования.

Апробация работы. Материалы работы были представлены на международной конференции «Vitamins, Coenzymes, and Biofactors» (Авайи, Япония, 2005 г.), на международной конференции «Biocatalysis - 2007: fundamentals and applications» (Москва - Санкт-Петербург, Россия, июнь 2007 г.), на IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (Новосибирск, Россия, май 2008 г.) и на международной конференции «Perspectives en Enzymologie» (Сант-Мало, Франция, июль 2008 г.).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на страницах,

включает рисунка, таблиц и содержит ссылок на литературные

источники. Диссертация состоит из глав: введение, обзор литературы, результаты работы и их обсуждение, методы исследования, выводы и список литературы.

Похожие диссертации на Взаимодействие Citrobacter freundii метионин - -лиазы с субстратами и ингибиторами в растворе и кристалле