Введение к работе
Актуальность проблемы. Для осуществления сайт-специфической модификации нуклеиновых кислот (НК) в настоящее время широко используются производные олигонуклеотидов, содержащие в своем составе реакционноспособные группировки. Основными факторами, которые определяют эффективность и селективность модификации НК-мишени с помощью олигонуклеотидных реагентов, являются стабильность комплементарного комплекса НК-мишень -олигонуклеотидный реагент и природа модифицирующей группировки, ковалентно присоединенной к олигонуклеотиду-алресу.
Среди многочисленных химических группировок, применяемых для модификации НК, все более широкое распространение получают фотоактивируемые производные, главным преимуществом которых является возможность проведения реакции фотомодификации в определенный момент времени, что особенно важно в случае применения этого метода в экспериментах in vivo.
Многообразие фотохимических групп, способов их введения в состав олигонуклеотидов, широкий выбор источников света и условий проведения фотомодификации НК-мишени позволяют надеятся на перспективность метода фотохимической сайт-специфической модификации НК.
Цель работы. Цель настоящей работы заключалась в разработке методов синтеза новых олигонуклеотидных реагентов, содержащих высокореакционноспособные группы азидоэтидиевых красителей, и использовании полученных производных для исследования закономерностей сайт-специфической фотомодификации одно- и двуцепочечных НК.
Научная новизна. Новизна результатов, полученных в диссертационной работе, состоит в следующем. Впервые были синтезированы производные олигонуклеотидов, несущие моноазидоэтидиевые группировки. Проведены систематические исследования комплексообразую-щих и фотохимических свойств этидиевых и азидоэтидиевых производных олигонуклеотидов; Для этого методами термической денатурации и футпринтинга изучены комплементарные комплексы этих производных с одно- и двуцепочечными НК. Проведено сравнение эффективности и позиционной направленности адресованной фотохимической модификации, осуществляемой при использовании этидиевых и азидоэтидиевых производных олигонуклеотидов. Впервые осуществлена- высокоэффективная модификация фрагмента двуцепочечной ДНК
-I-
в составе комплементарных триплексов с олигонуклеотидными производными,- содержащими азидоэтидиевые красители.
С целью апробации возможности применения таких производных в биологических экспериментах была изучена стабильность нескольких этидиевых производных декатимидилата по отношению к клеточным нуклеазам внутри клеток асцитной карциномы Кребса-2, а также проведены эксперименты по фотохимическому мечению клеточных белков.
Практическая ценность. Предложены и испытаны новые эффективные сайт-специфические олигонуклеотидные фотореагенты, содержащие азидоэтидиевые красители. .На основании полученных данных разрабатываются новые, более эффективные, фотореагенты.
Апробация работы. Результаты работы докладывались на международных симпозиумах: "Перспективы терапевтического и диагностического применения олигонуклеотидных производных" (Новосибирск, 1988), "Синтез олигонуклеотидов: проблемы и границы практического применения" (Москва, 1991), "Нуклеиновые кислоты как терапевтические агенты" (Тампа, США, 1991).
Публикации. По теме исследований, представленных в диссертации, опубликовано 4 печатные работы.
Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 158 страницах машинописного текста, состоит из введения, семи глав, выводов и списка цитируемой литературы из 164 наименований и содержит 11 таблиц и 25 рисунков.
