Содержание к диссертации
Введение
ЧАСТЬ I. Обзор литературы 12
ГЛАВА 1. Современное состояние исследований в области фармакогностического, фитохимического и фармакологического изучения мяты перечной и тысячелистника 12
1.1. Ботаническая характеристика растения мята перечная (Mentha piperita L.) 12
1.2. Ботаническая характеристика растения Тысячелистник обыкновенный Achillea millefolium L. 16
1.3. Химический состав эфирного масла и листьев мяты перечной 19
1.4. Химический состав травы и цветков тысячелистника 20
1.5. Фармакологическое действие мяты перечной 24
1.6. Применение в гомеопатии мяты перечной 26
1.7. Применение тысячелистника обыкновенного в медицине 26
1.8. Особенности экстрагента, применяемого для получения углеводородного
экстракта тысячелистника. 27
Заключение 29
Экспериментальная часть 31
ГЛАВА 2. Объекты и методы исследования 31
2.1. Объекты исследования 31
2.2. Методы исследования 32
ГЛАВА 3. Физико-химические свойства углеводородного экстракта 35
3.1. Растворимость 35
3.2. Определение сухого остатка 37
3.3. Определение плотности 38
3.4. Определение кислотного числа 38
3.5. Разработка методики проведения тонкослойной хроматографии 39
3.6. Исследование состава углеводородного экстракта тысячелистника и экстрагента методом газовой хроматографии 57
3.7. Сравнительный газохроматографический анализ петролеума и углеводородного экстракта мяты 59
3.8. Хромато-масс-спектрометрическое исследование экстрагента и углеводородного экстракта тысячелистника 64
3.9. Хромато-масс-спектрометрическое исследование петролеума и углеводородного экстракта мяты 71
3.10. СФМ исследования углеводородного экстракта мяты перечной, тысячелистника и петролеума 75
ГЛАВА 4. Выбор оптимального вида сырья для получения углеводородного (петролеумного) экстракта листьев мяты перечной и травы тысячелистника 81
4.1. Изучение спиртового извлечения, полученного из свежего и высушенного сырья – травы тысячелистника и листьев мяты 81
4.2. Сравнительный анализ эфирного масла форм мяты перечной, относящейся к различным хемотипам 89
ГЛАВА 5. Получение гомеопатического препарата на основе углеводородного экстракта тысячелистника и мяты перечной и углеводородного экстрагента 105
5.1. Методика приготовления гомеопатических гранул 105
5.2. Анализ качества гранул гомеопатических 105
ГЛАВА 6. Изучение биологической активности углеводородных (петролеумных) экстрактов травы тысячелистника и листьев мяты перечной 108
6.1. Изучение противопециломикозной активности гомеопатического препарата Millefolium-petroleum 108
6.2. Возможности остановления кровотечений при паразитарных болезнях 111
6.3. Мазь на основе углеводородных экстрактов тысячелистника, мяты перечной, шалфея для лечения псороптоза 115
ГЛАВА 7. Изучение острой и хронической токсичности углеводородных (петролеумных) экстрактов травы тысячелистника и листьев мяты 121
7.1. Сравнительное изучение острой токсичности углеводородного экстракта (петролеумного) листьев мяты перечной, травы тысячелистника, петролеума 121
7.2. Изучение хронической токсичности гомеопатического препарата,полученного из петролеумного экстракта мяты перечной. 127
Выводы 140
Литература
- Ботаническая характеристика растения Тысячелистник обыкновенный Achillea millefolium L.
- Определение сухого остатка
- Сравнительный анализ эфирного масла форм мяты перечной, относящейся к различным хемотипам
- Анализ качества гранул гомеопатических
Введение к работе
Актуальность темы
Актуальной задачей здравоохранения является поиск и изучение новых лекарственных препаратов для лечения паразитарных заболеваний, осложненных пециломикозом, сопровождающихся кровотечениями и воспалительным процессом. Несмотря на значительные успехи синтеза химических лекарственных средств и их применения, растения продолжают оставаться одним из перспективных источников получения лекарственных препаратов.
Перспективным является изучение углеводородных экстрактов из листьев мяты перечной и из травы тысячелистника, где в качестве экстрагента используется петролеум.
Листья мяты перечной – официнальное лекарственное сырье, на основе которого выпускаются препараты для лечения воспалительных процессов. На современном фармацевтическом рынке богатый ассортимент комплексных препаратов, применяемых как наружно, так и внутрь, такие, как меновазин, бальзам «золотая звезда», венозол гель и другие.
Тысячелистник обыкновенный – официнальное лекарственное растение, которое широко используется для лечения различного рода кровотечений и воспалительных процессов. В ассортименте аптек большое количество препаратов, содержащих в своем составе траву тысячелистника или его экстракт. Широко применяются препараты Лив-52, Ротокан, Малавит, Траумель, Миллефолиум.
Гомеопатические лекарственные препараты в настоящее время широко используются для лечения многих заболеваний, в том числе и для лечения заболеваний, сопровождающихся воспалительным процессом. В Российской Федерации метод гомеопатии разрешен к медицинскому применению в 1995 году (Приказ №335 МЗ РФ от 29.11.95 № 335).
Зарубежная фармацевтическая промышленность предложила ряд лекарственных препаратов, как аллопатических, так и гомеопатических на основе керосиновой фракции нефти. Так, хорошо известен препарат фирмы Веледа «Петролеум», который применяется для лечения радикулита, он также обладает отхаркивающим действием при кашле и тяжелых бронхитах (в том числе и у детей). Известен петролеум гомеопатический. Согласно немецкой гомеопатической фармакопее петролеум представляет собой фракцию нефти, выкипающую в температурном интервале 180–220С. В России, где имеется много источников сырья для производства петролеума, данный лекарственный препарат не выпускается. В гомеопатии очень часто используется петролеум в комплексе с другими гомеопатическими препаратами. Исходя из вышесказанного, исследования петролеумных (углеводородных) экстрактов из листьев мяты перечной и травы тысячелистника обыкновенного, которые ранее не применялись в медицинской, в ветеринарной практике, является актуальной задачей фармации.
Цель и задачи работы
Целью настоящей работы является изучение физико-химических свойств, биологической активности и токсичности углеводородных экстрактов листьев мяты перечной и травы тысячелистника.
Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
-
Провести информационно-аналитический поиск источников литературы для установления степени изученности данной темы.
-
Получить углеводородные (петролеумные) экстракты из листьев мяты перечной и травы тысячелистника.
-
Используя современные методы анализа (хромато-масс-спектрометрию, спектрофотометрию, ТСХ), изучить физико-химические свойства полученных экстрактов.
-
Изучить фармакологическую активность петролеумных (углеводородных) экстрактов.
-
Получить гомеопатические препараты на основе углеводородных экстрактов.
-
Изучить токсичность петролеумных (углеводородных) экстрактов.
Научная новизна работы.
Получены углеводородные экстракты (петролеумные) из листьев мяты перечной и травы тысячелистника.
Описаны физические свойства данных экстрактов. Методом ТСХ, хромато-масс- спектрометрии изучен состав биологически активных веществ экстрактов.
Проведен сравнительный анализ химического состава липофильных фракций (спиртового извлечения, эфирного масла, углеводородного экстракта) листьев мяты перечной и травы тысячелистника.
Предложены условия для проведения ТСХ анализа данных углеводородных экстрактов.
Впервые изучены биологическая активность, острая и хроническая токсичность углеводородных экстрактов.
Изучен качественный состав и токсичность петролеума.
Практическая значимость работы
На основе проведенных исследований разработан проект Фармакопейной статьи «Петролеум». Результаты исследований внедрены в учебный процесс кафедры фармакогнозии Первого МГМУ им. И.М.Сеченова.
Положения, выносимые на защиту:
-данные по качественному и количественному составу биологически активных веществ липофильных фракций листьев мяты перечной и травы тысячелистника;
-результаты оценки биологической активности полученных углеводородных экстрактов;
- результаты изучения острой и хронической токсичности полученных экстрактов.
Апробация работы
Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на XXI,ХХ11,ХХ111 Московской международной гомеопатической конференции «Развитие гомеопатического метода в современной медицине» (Москва, 2011,2012,2013), на национальных Российских конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2010,2013), на научной конференции одаренных студентов и молодых ученых в Самарканде (2010), на V111 Всероссийской конференции с международным участием «Химия и медицина» (Уфа, 2010) ,на научно-практической конференции «Современные аспекты использования растительного сырья и сырья природного происхождения в медицине» (Москва, 2013). Апробация диссертации состоялась на кафедре фармакогнозии фармацевтического факультета ГБОУ ВПО Первый МГМУ имени И.М.Сеченова МЗ РФ (Москва, 2013).
Личное участие автора
Автор, изучив отечественную и зарубежную нормативную и справочную документацию, обосновал актуальность избранной темы. Предложил методики определения качественного состава новых петролеумных экстрактов мяты перечной и тысячелистника, при этом использовав современные методы исследования – ТСХ, хромато-масс-спектрометрию. Изучил токсичность и фармакологическую активность предложенных экстрактов на цыплятах, мышах, крысах и кроликах. Самостоятельно получил новые гомеопатические препараты. Провел статистический анализ результатов исследований, подготовил фотографии, рисунки, таблицы, демонстрирующие результаты исследований, сформулировал выводы и практические рекомендации. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии во всех этапах исследования: от постановки задач, их теоретической и практической реализации до обсуждения результатов в научных публикациях, докладах на международных и российских конференциях.
Соответствие диссертации паспорту научной специальности
Научные положения диссертационной работы соответствуют формуле специальности 14.04.02. – фармацевтическая химия, фармакогнозия (фармацевтические науки). Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 6 и 7 паспорта «фармацевтическая химия, фармакогнозия».
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 26 печатных работ, из них 8 статей – в рекомендуемых ВАК изданиях.
Связь темы диссертационной работы с планом научных работ учреждения. Диссертационная работа выполнена в рамках комплексной темы кафедры фармакогнозии Первого МГМУ имени И.М.Сеченова «Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований». Номер государственной регистрации: 01.2.006 06352 и в соответствии с планом НИР лаборатории фармакогнозии НИИ фармации Первого МГМУ имени И.М. Сеченова по теме: «Фармакогностическое изучение лекарственного растительного сырья, лекарственных сборов, лекарственных форм из сырья и разработка методов их стандартизации с учетом влияния антропогенных факторов» (код темы 04.07.093, проблема № 1006 АМН РФ, Государственный регистрационный номер 01200110546).
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 150 страницах машинописного текста, содержит 28 таблиц и 39 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, пяти глав экспериментальной части, выводов, списка литературы, включающего 152 источника, в том числе 45 на иностранных языках и приложения.
Ботаническая характеристика растения Тысячелистник обыкновенный Achillea millefolium L.
Цельное сырье: Стебли округлой формы, опушены, с очередно расположенными стеблевыми листьями. Листья ланцетовидные, длиной до 10 см, шириной до 3 см, дважды перисто-рассеченные на ланцетовидные и линейные доли. Корзинки продолговато-яйцевидные длиной 3-4 мм, шириной 1,5 — 3 мм, в щитковидных соцветиях. Краевые цветки пестичные, срединные — трубчатые. Корневище ползучее, шнуровидное, с почти неветвистыми тонкими корнями и подземными побегами, на верхушке которых развиваются крупные прикорневые черешковые листья с ланцетовидным контуром. Цвет стебля и листьев серовато-зеленый, краевые цветки имеют белый цвет, реже розовый, срединные — желтоватый. Запах своеобразный, ароматный. Вкус горький, пряный [105].
Ареал произрастания A. millefolium – евро-азиатский вид. На европейской части РФ распространен повсеместно от государственной границы на юге до побережья Ледовитого океана[105]. Охватывает о. Колгуев, южную половину о. Вайгач, Югорский п-ов. В Сибири, начиная от 68 в. д. до 62 с. ш. Эта широта является пределом массового распространения вида в Западной и Средней Сибири; по долинам крупных рек тысячелистник распространяется севернее, доходя до 70 с. ш. В Восточной Сибири местонахождения вида немногочисленны и в основном располагаются в долинах рек (Лены, Алдана и их притоков). Изолированные местонахождения имеются в нижнем течении Лены и Оленека. Отдельные местонахождения отмечены на Дальнем Востоке — о. Сахалин (средняя и южная часть) и южная часть Хабаровского края, в долинах небольших рек Центрального Казахстана. Растет тысячелистник обыкновенный в степях и на лугах, в разреженных смешанных и березовых лесах, среди кустарников, по опушкам, по окраинам полей, на пустырях и у дорог. A. millefolium распространен в лесной, лесостепной и степной зонах. Постоянно присутствует на разнотравно-вейниковых и разнотравно-злаковых суходольных лугах юга Новосибирской области и Алтайского края. Встречается по низинным заболоченным разнотравно-злаковым лугам, в парковых лиственничниках со злаково-разнотравным покровом, разреженных березово-лиственничных лесах с зарослями кустарников и лиственнично-кедровых травянистых лесах. Часто встречается по окраинам полей, у дорог, в лесополосах. Чувствителен к затенению, нетребователен к почве. Распространен повсеместно [103,].
Ресурсы тысячелистника обыкновенного Одно растение тысячелистника может дать от 0,4 до 1,4 г воздушно-сухого сырья. Продуктивность тысячелистника обыкновенного на разнотравных лугах составляет 282 кг/га (сырой вес). Заготовки сырья тысячелистника проводят в основном в европейской части страны. В Ставропольском крае ежегодно заготавливают около 10 т травы (запасы сырья в предгорных районах края составляют 25 т.) В Башкирии ежегодно собирают до 73 т сырья.
Большие запасы тысячелистника имеются на Украине, где в лесостепных районах можно ежегодно заготовлять 700—800 т, а в степных — 400—500 т сырья. Заготовки возможны во многих других частях РФ.
По предварительным подсчетам запасы сырья тысячелистника на остепненных лугах северо-восточного Алтая составляют около 107 т, на пойменных лугах — 357 т. Значительные запасы имеются в Томской области на пойменных лугах долины р. Чулым.
Сырье тысячелистника является предметом экспорта. Заготавливают два вида его сырья — траву и соцветия. Траву собирают в фазу цветения (июнь — первая половина августа), срезая верхушки стеблей длиной до 15 см. При заготовке соцветий срезают отдельные цветочные корзинки или щитки со стеблем не длиннее 2 см. При правильном режиме заготовок одни и те же участки можно использовать несколько лет подряд, давая затем «отдых» зарослям на один — два года [24].
Химический состав эфирного масла и листьев мяты перечной В состав листьев мяты перечной входит эфирное масло, которое представляет собой «легкоподвижную прозрачную или слегка окрашенную в желтоватый цвет жидкость с запахом мяты и жгучим холодящим вкусом».[18 ] Эфирное масло, образующееся в листьях и соцветиях мяты, имеет различный состав. Масло из соцветий имеет низкую парфюмерную оценку и обладает рядом нежелательных свойств: горьким вкусом, неприятным запахом, легкой окисляемостью кислородом воздуха, повышенной кислотностью, также имеет высокий процент смол, содержит до 30% ментофурана, 25—40% ментона и низкий процент ментола. Присутствие масла соцветий в товарной продукции мятного масла снижает его качество.
Состав масла соцветий по мере их развития претерпевает изменения: увеличивается количество ментола и уменьшается количество ментофурана и ментона, т. е. в результате биохимических процессов, протекающих в растении, масло соцветий по своему качественному составу приближается к маслу из листьев.
Соотношение между количествами масел из листьев и соцветий, не является постоянным в течение всего периода развития мяты, поэтому качество получаемой продукции определяется сроками уборки. Масло, полученное из мяты, собранной в начале цветения, более низкого качества, по причине того, что соцветия содержат высокий % масла, но низкого качества (25—30% ментофурана, 30—35% ментона и лишь 25—30% ментола), а листья в начале цветения имеют низкий % ментола (37—42%), и высокий % ментона (25— 30%). Поэтому необходимо проводить уборку мяты перечной в период полного цветения для получения стандартного масла.
Определение сухого остатка
Чистый сухой пикнометр взвешивали с точностью до 0,0002 г, заполняли дистиллированной водой немного выше метки, закрывали пробкой и выдерживали в термостате в течение 20 минут. Доводили уровень воды до метки отбирая излишек фильтровальной бумагой. Пикнометр снова закрывали пробкой и выдерживали в термостате 10 минут, проверяя положение мениска. Далее вынимали пикнометр, протирали фильтровальной бумагой и оставляли под стеклом аналитических весов на 10 минут и взвешивали.
Пикнометр освобождали от воды, последовательно промывали спиртом этиловым, затем эфиром и сушили продуванием воздуха. Далее пикнометр заполняли петролеумом и повторяли те же операции, что и с водой дистиллированной. Испытание проводили пять раз Плотность петролеума составила 0,799г/мл ±0,001 Углеводородного экстракта мяты 0,807г/мл ±0,001 Углеводородного экстракта тысячелистника 0,812±0,001 ЗАОпределение кислотного числа Определение кислотного числа проводили согласно методике ГФ XI издания.
Точную навеску петролеума, пентролеумного экстракта листьев мяты, травы тысячелистника 1,0, отвешенную на электронных весах, помещали в колбу вместимостью 250 мл и растворяли в 50мл смеси равных объемов спирта 95% и эфира, предварительно нейтрализованного по фенолфталеину раствором гидроксида натрия (0,1моль/л). Прибавляли 1 мл раствора фенолфталеина и титровали раствором гидроксида натрия, при постоянном помешивании, до появления стойкого розового окрашивания не исчезающего в течение 30 секунд.
Испытание проводили пять раз, проводили статистическую обработку данных. Кислотное число углеводородного экстракта тысячелистника составило Кч(э) = 1,01±0,01; Петролеума Кч(п) = 0,71±0,01Кч(э) углеводородного экстракта мяты = 1,03±0,01; Петролеума Кч(п) = 0,71 ±0,01
.Выбор оптимальных условий для получения общего хроматографического портрета углеводородного экстракты травы тысячелистника Одним из наиболее быстрых и эффективных методов разделения и обнаружения веществ является тонкослойная хроматография. К преимуществам данного метода многие исследователи относят чувствительность, удобство в применении, в том числе устойчивость сорбента по отношению к агрессивным проявителям (концентрированные кислоты и щёлочи, различные окислители), быстрота разделения веществ. Основываясь на литературных данных для хроматографического анализа часто использовались следующие среды: хлороформ, хлороформ: метанол (8 : 3), бензол : этилацетат (7 : 3) и ряд других [13,18,33,35,36,46]. Выбор систем растворителя проводился с учётом их доступности и эффективности. В качестве неподвижной фазы использовались пластинки «Силуфол» и «Сорбфил». Для получения достоверных результатов должно быть постоянство условий хроматографирования. Отсутствие соответствующего оснащения лабораторий не всегда позволяло нам установить контроль над влажностью окружающей среды. Однако температура и насыщение хроматографической камеры - данные условия разделения были нами соблюдены. Хроматографирование проводилсоь в камерах с вертикальным элюированием. Камеры насыщались парами растворителя в течении двух часов, для увеличения эффективности разделения и сокращения времени хроматографирования.
Подбор системы проводили по следующей методике:
Нанесение проб и стандартов проводили микрошприцами на линию старта, отмеченную простым карандашом.
Расстояние от ниженего края пластинки до линии старта – 1,5 см, боковых краёв пластинки до точки нанесения пробы – 1,5 см. Между наносимыми пробами не менее 1 см (для избежания краевых эффектов). Фронт пробега 10 см. Обработку полученных хроматограмм проводили вручную.
Хроматографирование изначально проводилось в системе растворителей хлороформ, в качестве неподвижной фазы использовалися пластинки: «Силуфол». наносились свидетели ментол, цинеол, в качестве детектора парааминобензальдегид.В результате были зарегистрированы 4 зоны адсорбции, которые не имели четких границ. Хроматографирование в данной системе не давало четкого разделения.
В качестве втор0й системы для проведения хроматографирования нами, опираясь на литературные данные, была выбрана система растворителей Бензол:этилацетат (7 : 3) (рис.3.5.1.1, 3.5.2.1).
Сравнительный анализ эфирного масла форм мяты перечной, относящейся к различным хемотипам
В задачу наших исследований входило изучить спектрофотометрические характеристики полученного углеводородного экстракта и сравнить с таковыми экстрагента - петролеума, который является многокомпонентной смесью углеводородов. Оптические спектры поглощения петролеума и экстракта были выполнены на однолучевом спектрофотометре Hitachi U 1900в, при комнатной температуре и атмосферном давлении (кварцевая кювета имеет длину оптического пути 10 мм). Данные регистрировали и записывали с интервалом 2 нм со скоростью сканирования 1200 нм в минуту в диапазоне от 1100 до 200 нм (рис. 3.10.1 –3.10.6).
В углеводородном экстракте мяты были зарегистрированы дополнительные пики – 665 , 608 , 534, 408 нм с абсорбцией поглощения 0,540, 0,121, 0,128, 1,010 соответственно (рис. 3.10.1, 3.10.2) диапазон измерения от 850 до 340 нм, при разбавлении углеводородный экстракт-EtOH 1:50). Данные пики могут соответствовать фиофитолу и возможно некоторые пики соответствуют монотерпиноидам. Вывод: Методом спектрофотометрического исследования в углеводородном экстракте предварительно идентифицирован фиофитол и отмечены характерные максимумы поглощения при 665 , 608 , 534, 408 нм с абсорбцией поглощения 0,540, 0,121,0,128, 1,01.
Углеводородный экстракт тысячелистника растворяли в спирте в соотношении 1: 100 и спектрофотометрировали по отношению к растворителю. Удалось получить с хорошим разрешением полосы поглощения в интервале 400-450 нм, 530 нм, 650- 700 нм, 800 нм (рис.3.10.2).
Спектральная характеристика показала, что имеется небольшое плечо при 400 нм, четкий максимум при 600 нм и интенсивный третий максимум при 660 нм. Данный спектр характерен для хлорофилла, что требует дальнейшего изучения (рис. 3.10.2).
При спектрофотометрическом исследовании углеводородного экстракта тысячелистника удалось получить с хорошим разрешением максимумы поглощения в интервале 400-450 нм, 530 нм, 650- 700 нм, 800 нм.
На основе очищенного авиационного керосина, полученного из российских сортов нефти, нами изготовлен «Petroleum-K», который использовался в качестве матричной субстанции для последующей динамизации. Потенцирование (разведение) петролеума проводили по методике общей фармакопейной статьи ОФС 42-0023-04. Петролеум – хорошо известный препарат, описанный в Немецкой гомеопатической фармакопее. Широко применяются разведения D2, D3, D4. В частной фармакопейной статье Немецкой гомеопатической фармакопеи приводится анализ качества препарата именно до D4 разведения. Нами изучены спектрофотометрические характеристики «Petroleum-K» в разбавлении 1:500, при котором удалось получить с хорошим разрешением полосы поглощения в интервале 235-200 и 300-240 нм (рис. 3.10.3). Актуальна задача стандартизации гомеопатических разведений изучаемого препарата «Petroleum-K». С этой целью измерены величины оптической абсорбции (Abs) полосы с максимумом при = 266 нм для концентрационного ряда разведений петролеума в диапазоне D2-D4 ( 2 D 4), что соответствует отношению объёмных частей чистой субстанции (петролеума) к растворителю (EtOH) в интервале значений 10 -4 Vсубст/ VEtOH 10 -2. Измерения проведены на однолучевом спектрофотометре Hitachi U1900 без динамизции исследуемых разведений. На основании полученных спектрофотометрических данных по величинам оптической абсорбции (и с применением метода наименьших квадратов (МНК) построен градуировочный график Abs = F (D). Следует отметить, что в изучаемом диапазоне разведений препарата для величины оптического поглощения наблюдалась зависимость, близкая к линейной.
Анализ качества гранул гомеопатических
Получен нами новый гомеопатический препарат Millefolium-petroleum, который в эксперименте в разведении С6 на достаточном количестве белых мышей и цыплят не проявил токсичности, а наоборот, благоприятно воздействовал на организм подопытных животных. Использовано 60 белых нелинейных мышей, из которых 5 мышей составили 13-ю контрольную группу( они не заражались), 14-я - 24-я группы -по 5 мышей в каждой заражались кровью от больного,который находился в состоянии острого пециломикозного сепсиса. По 0,2 мл крови от больного было введено внутрибрюшинно мышам. Все подопытные мыши, которым внутрибрюшинно вводилась кровь больного, заразились пециломикозом с переходом в пециломикозный сепсис,что следует оценивать как лабораторную модель.На заразившихся мышах были испытаны гомеопатические препараты.Контрольными препаратами были дифлюкан и микосист.
Все данные обработаны методом стандартной вариационной статистики. Достоверность результатов оценивали по критерию Стьюдента в пределах 95-99% надежности. Проведен статистический анализ.
В эксперименте на 60 белых мышах в группах с 14-й по 24-ю на 3-4-е сутки развился пециломикозный сепсис. Мышам 14-й группы внутрижелудочно вводилось по 10 мг дифлюкана в течение 10 дней. А 15-й группе таким же способом вводилось по 10 мг микосиста.В этих двух группах выздоровело по 4 мыши и погибло по одной мыши. Мышам 19-й группы вводилось по одной крупке ежедневно гомеопатический Миллефолиум из петролеумно-миллефолевой матрицы.В этой группе одна мышь погибла,четыре выздоровело. Мышам 20-й группы вводилось по одной крупке С6 гомеопатического аптечного Миллефолиума, две мыши погибли, три выздоровели .
Мышам 23-й группы вводилось по одной крупке С6 гомеопатического Петролеума, купленного в гомеопатической аптеке Москвы. Две мыши погибли, три выздоровели. Мыши 24 группы никаких препаратов не получали, получали плацебо сахарную крупку. На 7-10-й мыши этой группы погибли от пециломикозного сепсиса .
Таким образом, нами установлено, что испытанные нами при лечении пециломикозных мышей гомеопатические препараты обладают противопециломикозным действием, что дало нам возможность применять данные препараты при лечении пециломикоза домашних животных, а аптечные гомеопатические препараты применить при лечении больных людей пециломикозом. Для экспериментального воспроизведения пециломикоза нами были использованы 190 белых нелинейных мышей. Мы также использовали суспензию 2-недельной культуры гриба Paecilomyces varioti.На первом этапе использовано 130 мышей. Животные были разделены на 12 групп: 1 группа – 15 белых мышей, которым суспензия была введена интраназально; 2 группа – 15 белых мышей, которым суспензия была введена внутрибрюшинно; 3 группа – 10 белых мышей, которым суспензия гриба была введена перорально; 4 группа – 10 здоровых мышей, которых не заражали, составили группу контроля; 5 – 8 группы – по 10 мышей заражены от больных эхинококкозом + пециломикозом, 9-я группа мышей заражена пециломикозной инфекцией материалом от женщин носителей, находившихся на лечении в клинике гинекологии СамГосМИ. 10 – 12 группы мышей заражали внутрибрюшинным введением бактерий Proteus mirabilis в дозе 140–200 млн. микробных тел суточной культуры.На втором этапе использовано 60 белых нелинейных мышей, из которых 5 мышей составили 13-ю контрольную группу( они не заражались), 14-я - 24-я группы - по 5 мышей в каждой заражались кровью от больного,который находился в состоянии острого пециломикозного сепсиса. По 0,2 мл крови от больного было введено внутрибрюшинно мышам. Все подопытные мыши, которым внутрибрюшинно вводилась кровь больного, заразились пециломикозом с переходом в пециломикозный сепсис,что следует оценивать как лабораторную модель. На заразившихся мышах были испытаны гомеопатические препараты.Контрольными препаратами были дифлюкан и микосист.
Все данные обработаны методом стандартной вариационной статистики. Достоверность результатов оценивали по критерию Стьюдента в пределах 95-99% надежности. Проведен статистический анализ.
Эксперименты, проведенные на белых мышах, показали, что несмотря на различные пути внедрения грибковой инфекции, клиническая картина развивалась однотипно. Результаты исследования показали, что внутрибрюшинное, интраназальное и пероральное заражение грибами Paecilomyces varioti приводит к развитию генерализованной инфекции по типу сепсиса и вторичному вовлечению легких, а также сердца и печени в патологический процесс, с выраженной иммуносупрессией.
С 8 дня после заражения мы начали лечение животных 5–12 групп. Мыши 5-й группы ежесуточно получали внутрь по 10 мг низорала, 6-й группы – по 10 мг дифлюкана, 7-й группы – по 10 мг орунгала, В 5-й группе выздоровели 4 мыши, остальные погибли. В 6, 7, группах все животные выздоровели.. Этими экспериментами было доказано, что только гомеопатическими препаратами без применения антибиотиков и фунгицидов гомеопатический Миллефолиум из петролеумно-миллефолиевой матрицы. В этой группе одна мышь погибла,четыре выздоровело. Мышам 20-й группы вводилось по одной крупке С6 гомеопатического аптечного Миллефолиума,две мыши погибли, три выздоровели .
Мышам 23-й группы вводилось по одной крупке С6гомеопатического Петролеума, купленного в гомеопатической аптеке Москвы. Две мыши погибли, три выздоровели. Мыши 24 группы никаких препаратов не получали, получали плацебо сахарную крупку. На 7-10-й день мыши этой группы погибли от пециломикозного сепсиса.
Таким образом, нами установлено, что испытанные нами при лечении пециломикозных мышей гомеопатические препараты обладают противопециломикозным действием, что дало нам возможность применять данные препараты при лечении пециломикоза домашних животных, а аптечные гомеопатические препараты применять при лечении больных людей пециломикозом.
