Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 13
1.1 Иммунобиологическая реактивность организма крупного рогатого скота 13
1.1.1 Роль иммунобиологической реактивности в системе защиты организма 13
1.1.2 Факторы клеточного иммунитета у животных 19
1.1.3. Гуморальные факторы иммунобиологической реактивности организма животных 23
1.2 Особенности иммунитета крупного рогатого скота в репродуктивный период 28
1.2.1 Роль плаценты в системе мать-плод 29
1.2.2 Нейрогуморальная регуляция иммунитета в период беременности 31
1.2.3 Состояние иммунобиологической реактивности коров при акушерско-гинекологических и других заболеваниях 43
1.3 Фармакологические приемы коррекции иммунного статуса у крупного рогатого скота 47
1.3.1 Использование иммуномодуляторов эндогенного происхождения 49
1.3.2 Использование иммуномодуляторов синтетического происхождения 57
1.3.3 Использование препаратов микробного происхождения, адъювантов, витаминов и микроэлементов 61
1.3.4 Иммуномодулирующее действие адаптогенов на организм животных 70
2. Материалы и методы исследования 77
3. Результаты собственных исследований 90
3.1 Состояние иммунобиологической реактивности организма коров в период беременности и после родов в зависимости от периода года 90
3.1.1 Гематологические показатели коров 90
3.1.2 Динамика изменений общего белка и белковых фракций у коров 112
3.1.3 Состояние неспецифической резистентности организма коров 127
3.1.3.1 Оценка фагоцитарной активности и переваривающей способности нейтрофильных гранулоцитов коров 128
3.1.3.2 Оценка микробицидных систем нейтрофильных гранулоцитов коров 137
3.1.3.3 Уровень бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови коров 151
3.1.3.4 Особенности клеточного и гуморального иммунитета у коров 159
3.2 Разработка и эффективность новых фитопрепаратов их использования в качестве иммунопротекторов в предродовой и послеродовой периоды 177
3.2.1 Получение фитопрепаратов аргэхина и содэхина 177
3.2.2 Токсикологическая оценка фитопрепаратов 180
3.2.3 Иммунопротективные свойства аргэхина и содэхина in vitro 188
3,2.4 Иммунобиологические свойства препаратов аргэхина и содэхина in vivo на белых крысах 191
3.3 Изучение иммунотропных свойств аргэхина и содэхина in vivo у коров в сухостойный и послеродовой периоды 193
3.3.1 Влияние тимогена и фитопрепаратов и на гематологический статус коров 193
3.3.2 Влияние тимогена и фитопрепаратов на общий белок и белковые фракции 207
3.3.3. Влияние тимогена и фитопрепаратов на состояние неспецифнческой резистентности коров в сухостойный и послеродовой периоды 223
3.3.3.1 Влияние тимогена и фитопрепаратов на
процессы фагоцитоза в нейтрофильных гранулоцитах 223
3.3.3.2 Влияние тимогена и фитопрепаратов на интралейкоцитарную систему нейтрофильных гранулоцитов 232
3.3.3.3 Влияние тимогена и фитопрепаратов на бактерицидную и лизоцимную активность сыворотки крови 249
3.3,3.4Влияние тимогена и фитопрепаратов на состояние клеточного и гуморального иммунитета у коров в сухостойный и послеродовой периоды 255
Заключение 290
Выводы и предложения 308
Список литературы 311
Приложения 379
- Роль иммунобиологической реактивности в системе защиты организма
- Состояние иммунобиологической реактивности коров при акушерско-гинекологических и других заболеваниях
- Динамика изменений общего белка и белковых фракций у коров
- Влияние тимогена и фитопрепаратов и на гематологический статус коров
Введение к работе
Актуальность работы. Одной из основных задач животноводства в нашей стране является обеспечение населения полноценными продуктами питания, что невозможно без интенсификации производства. Это напрямую зависит от воспроизводительной способности коров, которая сопряжена с иммунобиологической реактивностью организма и сохранностью поголовья. Однако ориентация селекционных мероприятий только на молочную и мясную продуктивность привела к снижению иммунобиологической реактивности, следовательно, и к сокращению срока эксплуатации коров. Коровы современных линий, особенно черно-пестрые, весьма чувствительны к воздействию неблагоприятных факторов внешней среды, вследствие чего подвержены частым заболеваниям, сопровождающимся потерей продуктивности и нарушением физиологии беременности и послеродового периода (А. Ф. Стояновский, Т. В. Рассказова, 1966; К. Г. Сухомлин, 1967, 1971, 2001; В. М. Шубик, 1976; С. И. Плященр), В. Т. Сидоров, 1979, Ram S. Lachhiraman, 1981; Н. Г. Дмитриев, А. И. Жигачев, С. М. Федорова, 1986; Н. М. Костома-хин, 1986; С. И. Джупина, 1988; J. Gavora, J. Spencer, 1987; А. В. Смирнова, 2001; А. С. Кашина, 2002).
Согласно статистической отчетности государственного управления ветеринарии Краснодарского края заболеваемость коров острым послеродовым эндометритом составила 25-42%, а заболеваемость маститами достигла 45%.
Учитывая тот факт, что количество послеродовых заболеваний у коров продолжает расти, следует предположить, что снижение адаптивных и защитных механизмов у них происходит уже в определенные сроки беременности. Поскольку до настоящего времени не установлен диапазон показателей физиологического статуса в различные периоды жизни коров, включая беременность, с учетом сезонов года представляется весьма важным как с теоретической, так и с практической точки зрения.
Несмотря на значительное количество фармакологических препаратов, предназначенных для иммуномодуляции, многие из них не нашли широкого применения в животноводстве и не испытаны в достаточной мере как средства профилактики послеродовых осложнений у коров.
Исходя из этого, весьма актуальным является изучение состояния специфического и неспецифического иммунитета при беременности и в послеродовой период, выявление фаз физиологического иммунодефицита при беременности, а, следовательно, периодов повышенного риска для здоровья матери и плода, а также поиск безопасных и экологически оправданных средств иммунокоррекции и иммунопрофилактики.
Цель и задачи исследования. Целью работы было изучение со стояния иммунитета и факторов естественной резистентности коров черно-пестрой породы, с использованием быков-производителей из ли нии Рефлекшн-Соверинг в течение беременности и послеродового периода до очередного осеменения, в зависимости от сезона года; разработка и оценка средств иммунопрофилактики послеродовых осложнений.
Для достижения намеченной цели были поставлены следующие за дачи, решаемые с учетом сезонов года:
1. Изучить характер гематологических показателей, уровень общего белка и белковых фракций сыворотки крови коров в период беремен-ности и после родов.
2. Изучить состояние клеточного и гуморального звена иммунитета у коров в период беременности и после родов, определить наиболее зна 8
чимые диагностические критерии оценки нарушений в иммунной систе-ме.
3. Разработать новые фитопрепараты и оценить их иммунотропное действие на организм коров в сухостойный и послеродовой периоды.
4. Разработать нормативно-техническую документацию на фитопрепараты аргэхин и содэхин.
Научная новизна. Впервые проведено масштабное изучение и ус тановлены параметры изменения показателей крови и иммунной системы коров в течение беременности и в послеродовой период в зависимости от сезона года. Установлено, что беременность у коров сопровождается периодами физиологической иммуносупрессии в первой половине беременности и сразу после родов. Выявлено, что зимне-весенний пери од года характеризуется депрессивными изменениями в клеточном им мунитете (Т- и В-лимфоциты) и снижением фагоцитарной функции ней трофильных гранулоцитов при беременности у коров. Впервые разрабо таны и апробированы новые фитопрепараты аргэхин и содэхин, обла • дающие широким спектром иммунотропного действия. Установлено, что аргэхин и содэхин стимулируют выработку Т- и В-лимфоцитов, повышают фагоцитарную активность нейтрофилов, усиливают эритропоэз, увеличивают уровень гемоглобина в крови и содержание общего белка, обладают противовоспалительным действием. Обоснована теоретиче-\ екая и практическая необходимость проведения иммунопрофилактики коров в их критические периоды (сухостойный и послеродовой) указанными фитопрепаратами. Выявлена высокая информативность разработанных и модифицированных методов определения и оценки функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов на внутриклеточном уровне.
Новизна полученных материалов подтверждена семью патентами Российской Федерации на изобретение.
Теоретическая и практическая значимость работы
Теоретическая значимость диссертационной работы состоит в установлении характера изменений неспецифического и специфического звена иммунной системы организма коров в течение беременности и послеродового периода в зависимости от сезона года. Показана ведущая роль иммуноглобулинов в формировании специфической защиты организма коров во второй половине беременности и естественной резистентности фагоцитарного звена интралейкоцитарной микробицидной системы. Сведения о том, что в зимне-весенний период года у беременных коров наблюдается выраженная депрессия Т- и В-клеточного иммунитета, подавление бактерицидных свойств крови, активности фагоцитоза, поглотительной и переваривающей способности нейтрофильных гра-нулоцитов на фоне максимального снижения общего белка и гемоглобина, могут быть использованы в практике для контроля состояния здоровья коров, а также в курсах лекций по ветеринарной иммунологии и по курсу акушерства и гинекологии.
Дано теоретическое и практическое обоснование коррекции иммунобиологической реактивности организма коров в период беременности, после родов и в различные периоды года, позволяющее предотвращать развитие акушерско-гинекологических заболеваний и обеспечить повышение жизнеспособности приплода.
Практическая значимость результатов исследований состоит в разработке и внедрении в ветеринарную практику новых фитопрепаратов -аргэхина и содэхина - для повышения их иммунной защиты в критические периоды (сухостойный и послеродовой) с целью профилактики послеродовых осложнений у коров и заболеваний у молодняка. Использование экологически безопасных фитопрепаратов аргэхина и содэхина способствует повышению обмена веществ, естественной резистентности организма. Они стимулируют неспецифические и специфические факторы иммунитета, обеспечивающие повышение резистентности животных к заболеваниям независимо от сезона года.
Разработана нормативно-техническая документация - временные наставления и технические условия на аргэхин и содэхин, утвержденные Департаментом ветеринарии Минсельхоза Российской Федерации (№ 13-4-03/0288 от 27.12.01г. и № 13-4-03/0297 от 29.12.01г.).
Разработанные методические рекомендации: «Гистохимия имму-нокомпетентных органов и цитохимический анализ крови», «Иммунологические методы исследования в ветеринарии», утвержденные Департаментом ветеринарии Минсельхоза России от 22.08.00 №13-7-2/2127 и 22.08.00 № 13-7-2/2128, внедрены в ветеринарную практику, учебно-методическую и научную работу факультетов ветеринарной медицины Кубанского, Алтайского, Омского, Ставропольского госагроуниверсите-тов; на кафедрах психофизиологии, анатомии, физиологии и гигиены человека Ставропольского государственного университета; в лаборатории иммуногенетики, биохимии и общей химии Всероссийского научно-исследовательского института овцеводства и козоводства; в отделах иммунологии, фармакологии и болезней жвачных животных Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института.
Апробация работы. Основные положения и результаты диссертации доложены и обсуждены на VII Международном конгрессе по репродуктивной иммунологии (VII International Congress of Reproductive Immunology, National Institute of Immunology, New Delhi, 1998); на Международных конференциях (Ставрополь, 1998, 1999; Воронеж, 2000; Уфа, 2000; Казань, 2001, 2002; Краснодар, 2001; Барнаул, 2001, 2002); на І и II Международном симпозиуме (Санкт-Петербург, 2001, 2003); на регио 11 нальной научно-практической конференции молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса» (Краснодар, 2000); на научных конференциях «Научные достижения молодежи Кубани» (Краснодар, 1998-2003); на научных и методических конференциях факультета ветеринарной медицины КубГАУ (Краснодар, 1990-2004).
Публикации результатов исследований. По материалам диссертации изданы 56 научных работ (в том числе монография), опубликованных в рекомендуемых Высшей аттестационной комиссией журналах: «Бюллетень экспериментальной биологии и медицины» - 2; «Ветеринария» - 1; «Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук» -1; «Сельскохозяйственная биология» - 1, «Вестник ветеринарии» - 2, в «AJRI» («American Journal of Reproductive Immunology») -LB материалах Всемирного конгресса (New Delhi, Индия) - 1, международных симпозиумах (Санкт-Петербург) - 3, международных конференций - 15 (Барнаул, Воронеж, Уфа, Казань, Краснодар, Ставрополь), всероссийских производственных конференций - 13 (Казань, Краснодар), межрегиональных конференциях - 2 (Барнаул) в сборниках научных трудов КубГАУ, в официальном бюллетене Российского агентства по патентам и товарным знакам «Изобретения, полезные советы», и в других научно-производственных изданиях.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Особенности изменения гематологических показателей, уровня общего белка и его фракций у коров при беременности и после родов в зависимости от сезона года.
2. Закономерности изменения клеточного и гуморального иммунитета у коров при беременности и после родов в зависимости от сезона года. 3. Эффективность использования новых фитопрепаратов в качестве иммуномодуляторов в сухостойный и послеродовой периоды. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 389 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, заключения, выводов, предложений производству, списка литературы и приложений. Работа иллюстрирована 60 таблицами, 15 рисунками. Список литературы включает 763 источника, в том числе 155 зарубежных авторов.
Роль иммунобиологической реактивности в системе защиты организма
Иммунобиологическая реактивность включает клеточные и гуморальные механизмы защиты, гематоэнцефалический, плацентарный и другие барьеры. К естественным механизмам защиты организма относится комплекс врожденных поведенческих реакций, таких, как инстинкт материнства, подражания и др., а также закрепившиеся и передающиеся по наследству хозяйственно-полезные качества - скороспелость, плодовитость и т. д. Естественная устойчивость организма выработана в процессе филогенетического развития животных и представляет собой важнейшую, безусловно-рефлекторную реакцию, проявляющуюся на субклеточном, клеточном, органном, системном и общеорганизменном уровнях. Ее можно охарактеризовать как способность противостоять любым отрицательным воздействиям со стороны внешней среды (микроорганизмы, стрессы и т. д.). Искусственная селекция сельскохозяйственных животных на невосприимчивость ко всем инфекционным агентам невозможна, однако отбор по жизнеспособности, оцениваемой по общей резистентности и адаптации к неблагоприятным факторам - реальная задача (А. Ф. Стояновский, Т. В. Рассказова, 1966; Р. В. Петров, 1976; В. М, Шубик, 1976; С. И. Плященко, В. Т. Сидоров, 1979; Дж. Ф. Г. Хейхоу, Д. Кваглино, 1983; Н. Г. Дмитриев, А. И. Жигачев, С. М. Федорова, 1986; Н. М. Костомахин, 1986; В. М. Скорляков, С. А. Пигалев, 1986; С. И. Джупи-на, 1988; И. С.Третьяков, 1993; Л. П. Шешуков, 1993; К. Р. Кондори, 1995; Г. А. Симонян, Ф. Ф. Хисамутдинов, 1995; Л. М. Исачкова, 1997; Плей-ферДж., 1999; R. D. Politiek, 1981; Ram S. Lachhiraman, 1981; J. Gavora, J. Spencer, 1987).
Уникальность иммунной системы заключается, прежде всего, в том, что клетки, входящие в ее структуру, постоянно циркулируют в различных тканях и органах и она теснее остальных связана с другими системами.
Утвердившееся в 70-е годы представление о почти полной автономности иммунной системы и аутокринном принципе ее регуляции в настоящее время признано несостоятельным. Накопились многочисленные факты, согласно которым иммунная система функционирует в организме не обособленно, а находится под сложным влиянием эндокринной и центральной нервной систем, и наоборот.
Доказательством наличия двусторонних регуляторных связей между нейроэндокринной и иммунной системами могут служить данные о сходстве регуляторных пептидов в этих системах. Так, адренокортикотропный гормон (АКТГ) и 6-эндорфин синтезируются не только в переднем гипофизе, что было установлено ранее, но и в лимфоцитах. Эти и подобные им соединения обладают иммунорегуляторным действием и являются гормонами иммунной системы (А. С. Апт, 1984; С. J. Heijnen, A. Kavelaars, R. Е. Bailieux, 1988).
На Т- и В-лимфоцитах, макрофагах обнаружены специфические рецепторы ко многим нейромодуляторам и к основным модуляторам стресса кате-холаминам, серотонину, кортикостероидам, ацетилхолину, эндорфинам, эн-цефалинам и ко многим естественным пептидам (М. Kronenberg, 1986).
Более того, лимфоциты обладают рецепторным аппаратом к некоторым синтетическим фармакологическим веществам, применяемым в качестве транквилизаторов и антидепрессантов. Наличие таких рецепторов указывает на то, что организм обладает подобными эндогенными веществами. Таким образом, эндогенные опиоидные пептиды являются не только связующим звеном между центральной нервной и иммунной системами, но и синтезируясь одними клетками иммунной системы и влияя на другие, они могут выполнять роль иммуномедиаторов, с помощью которых осуществляется ауторегуляция в иммунной системе (W. Krommer е. а., 1982; Т. Р. Su, 1982; В. L. Sliter, R. L. Blaster, 1983; S. В. Pert., 1985; S. W. Tam, 1986; B. L. Largent. e. a., 1987; S. G. Holtzman, 1989; E. M. Smith e. a., 1985, 1989; D. A. Weigent, J. E. Blaloch, 1989).
Опубликованы данные, согласно которым некоторые медиаторы иммунной системы (интерферон, тимозин, тималин, интерлейкин-2 и др.) сами обладают опиоидной активностью. Исходя из этого, можно предположить, что при помощи медиаторов иммунной системы, обладающих опиоидной активностью, может осуществляться обратная связь - влияние иммунной системы на центральную нервную систему (А. Г. Нежданов и др., 1998, 2001; А. П. Жуков, Ш. М. Биктеев, 2001; Е. М. Smith е. а., 1985).
Итак, между иммунной и нейроэндокринной системами имеется тесная двусторонняя связь, основанная на общности регуляторных молекул и их ре цепторов. Некоторые исследователи предполагают наличие в организме единой иммунонейроэндокринной системы (W. JCiess, В. Н. Belohradky, 1986).
Внутри самой иммунной системы регуляция происходит с помощью целого ряда цитокинов, синтезируемых иммунокомпетентными клетками, с помощью которых они «общаются» и вырабатывают защитные вещества. Наряду с этим, по нервным волокнам и гуморально, с помощью сигнальных молекул, информация об антигенах и иммунных реакциях поступает в центральную нервную систему, в которой интегрированы все гомеостатические механизмы организма (Р. Арсов, 1983; С. F. Nathan, Н. W. Murray, ME. Wiebe, 1983; Н. О. Besedovsky, А. Е. del Rey, Е. Sorkin, 1985; D. G. Fayan e. a., 1986; T. R. Mossmann e. a., 1989; J. F. Bazan, 1990; J. M. Grzych, E. Pearce, A. Cheever e. a., 1991; N. W. Lukacs, DX. Boros, 1993; T. Kishimoto, e. a., 1994; J. N. Ihle, 1995; M.C. Cohen, S. Cohen, 1996).
В результате формируется целостная ответная реакция на внедрение антигена, включающая не только эффекторное звено иммунитета, но и другие элементы сохранения постоянства среды. В системе иммунологического надзора существует несколько функциональных петель с прямыми и обратными связями; иммунная система, помимо ауторегуляции, испытывает регу-ляторные воздействия со стороны неироэндокринной системы, и наоборот (Ю. А. Гриневич, Т. В. Ельчиц, 1981; В. В. Абрамов, 1990; Н. Viveros, 1980).
По данным Я. 3. Лебенгарца (1987) физиологические опыты с электролитическим разрушением отдельных структур головного мозга доказали его участие в регуляции иммунной системы. Гипоталамо-гипофизарный комплекс прямо и опосредованно влияет на иммунную систему. Так, нарушение функций гипоталамуса ведет к снижению иммунобиологической реактивности организма (Я. 3. Лебенгарц, 1991, 1992; Т. L. Roszman, W.H.Brooks, 1985).
Состояние иммунобиологической реактивности коров при акушерско-гинекологических и других заболеваниях
Изучение этиопатогенеза, субклинической патологии при акушерско-гинекологической диспансеризации стад животных позволяет выявить характерный симптомокомплекс болезни (В, А. Середин, 1983; М. М. Авербах, A. М. Мороз, А. С. Апт и др., 1986; Е. В. Баева, Л. П. Марин, 3. Я. Арестова, 1987; Ф. Д. Гуков, И. М. Карпуть, И. 3. Севрюк, 1990; . В. Т Самохин и др.,1992; Н. Б. Кукушкин, 1999; Прошкин В. М, 2000; С. В, Пруцаков, 2000; B. И. Баранов и др., 2001; J. Thomas Yang е. а., 1980; J. Wolf, G. Schonstedt, 1982; A. Tolle, 1965, 1983), которым по данным исследователей является по казатель оплодотворяемости и внешний вид влагалищной слизи. Так, при скрытых воспалительных процессах в половой сфере коров процент оплодо творяемости по первому осеменению может снижаться до 15%. При этом в течковой слизи у части животных наблюдаются прожилки мутно-белесого, желтовато-серого и даже розового цвета, что указывает на гипофункцио нальное состояние слизистых оболочек всех отделов полового аппарата в ре зультате гипопластических и атрофических изменений в эндометрии, эндо цервиксе, эндосальпинксе (Ф. Д. Гуков, А. С. Терешников, А. Ф. Могиленко, 1987; Н. И. Полянцев, 1988; В. П. Павличенко, Ю. В. Мясников, 1990; Е. М, Романова, Н. В. Кригер, И. Ю. Еремина и др., 1990; В. П. Радченков, Н. С. Литвинов, 1991; В. В. Винников, 1999). У беременных при железодефецитной анемии наступает депрессия эндокринной функции фетоплацентарной и материнской систем. Проходит развитие Т-клеточного иммунодефицита и акушерской патологии при анемии у беременных. Главное место занимает снижение концентрации супрессорных гормонов материнского и фетоплацентарного происхождения (Ю. К. Джаб-барова 1987; Л. С. Волкова, 1970).
По данным В. А. Яблонского, Е. П. Кот и В. В. Пригара (1987) в развитии послеродовых осложнений, в частности задержания последа, субинволюции матки, послеродового эндометрита, определенную роль играет состояние иммунологической реактивности организма животного, которая, в свою очередь, зависит от различных алиментарных факторов.
Родовой акт сопровождается не только мобилизацией физических сил животного, но и большим нервным напряжением, обусловленным болевым синдромом, с возникновением которого в процесс изгнания плода включаются все защитные и компенсаторные механизмы организма (Р. М. Хаитов и др., 1995).
Во время родов происходят заметные изменения неспецифической реактивности организма коров и, прежде всего, в содержании в сыворотке крови общего белка. У коров накануне родов и на ранней стадии послеродового периода его количество было ниже (6,90±0,21 г%), чем у небеременных животных (7,44±0,16 г%; р 0,05).
На 8-9-й день послеродового периода уровень общего белка в сыворотке крови снизился до 6,49±0,15 г%, и только на 18-20-й день он повысился до 7,16±0,14 г%, в конце послеродового периода содержание общего белка составило 7,15±0,14 г% (р 0,05).
Лизоцимная активность сыворотки крови - один из факторов, определяющих иммунологическую реактивность организма, у беременных животных она ниже (22,04±2,65%), чем у небеременных (27,28±1,3%). В день родов еще более снижается (до 16,43±1,58%), но на 3-5-й день после родов повышается почти до предродового уровня и в дальнейшем удерживается на уровне 23,33±1,86% (А. А. Сысоев, 1978; В, А, Яблонский, Е. П. Кот, В. В. Пригара, 1987; Т. Н. Ракова, и др., 2001).
По бактерицидной активности сыворотки крови судят о состоянии резистентности организма. У беременных животных она также ниже (49,3±2,65%), чем у небеременных (58,93±1,79%). В день родов бактерицидная активность повышается до 56,5±1,99% (р 0,05), на 3-5-й, 8-10-й день -до 59,87±2,32% (р 0,01). К концу послеродового периода она незначительно снижается (А. А. Сысоев, 1978; А. П. Жуков, Ш. М. Биктеев, 2001; Т. Н. Ракова и др., 2001).
К числу клеточных факторов защиты относится фагоцитарная реакция. Ее уровень у беременных и небеременных животных практически одинаков (58,9±0,01%). Наиболее высока она в день родов (61,10±1,63%), на 3-5-й день эта реакция несколько снижалась, а затем повышалась на 8-10-й и в последующие дни послеродового периода. Индекс фагоцитоза у беременных и небеременных коров имеет значительные различия 5,18±0,24% и 5,58±0,13% соответственно. Высокий он в день родов (5,29±0,28%). В течение послеродового периода этот показатель постепенно уменьшается: на 8-10-й день -3,99±0,38% (р 0,02), на 18-20-й день - 3,52±0,18% (р 0,001), и только на 28-30-й день повышается до 4Д9±0,33% (р 0,05).
Фагоцитарное число в день родов было самым высоким по отношению к кишечной палочке (3,8±0Д7 ед). В послеродовой период оно несколько снижалось и на 18-20-й день составляло 1,88±0Д ед микробных тел (р 0,001), а на 28-30-й день увеличилось до 2,36±0Д6 ед (р 0,01). Фагоцитарная емкость, которая характеризует общую фагоцитарную активность крови, самая высокая в день родов (28326,4±2166,23 ед), у небеременных животных - 21986,39±1192,65 ед (р 0,02). После родов показатель фагоцитарной емкости крови уменьшается и на 18-20-й день составляет 13281,2±1351,48 ед (р 0,001), а на 28-30-й день повышается до 1725Ш393,91 ед (р 0,001) (Р. М. Васильев, 2001, В. Г. Семенов и др., 2001).
Таким образом, накануне и в день родов, а также в течение послеродового периода, происходят изменения неспецифической резистентности организма животных. Лизоцимная и бактерицидная активность сыворотки крови, накануне и в день родов понижается, а фагоцитарная активность остается на высоком уровне. В послеродовом периоде повышаются гуморальные факторы неспецифической защиты, и понижается клеточный иммунитет (М. А. Батманов., Р. Н. Мухаметгалиев, 2001).
Динамика изменений общего белка и белковых фракций у коров
Белки в организме играют решающую роль практически во всех обменных процессах. В биологических системах почти все реакции катализируются специфическими макромолекулами — ферментами, в состав которых входят белки. Специфические белки осуществляют транспорт многих небольших молекул и ионов. Например, содержащийся в эритроцитах гемоглобин переносит кислород к тканям, тогда как близкий к нему белок миоглобин запасает кислород в мышцах. Регуляция роста и дифференцировка клеток также осуществляется специфическими белками. Высокоспецифические белки (антитела) способны узнавать и связывать чужеродные объекты - вирусы, бактерии и другие микроорганизмы (В. М. Лифшиц, В. И. Сидельникова, 1998; Ф. И. Комаров, Б. Ф. Коровин, 1999).
Изучение белковых фракций имеет важное клиническое значение, так как по росту или снижению их концентрации можно судить о наличии или отсутствии патологического процесса. Повышение концентрации альбуминов в крови наступает при обезвоживании организма, а снижение при пониженном их синтезе (при несбалансированном белковом рационе), потере при заболеваниях почек и ожогах, распаде, вследствие развивающегося сепсиса и др. Уровень а-глобулинов повышается при воспалительных новообразовательных или некротических процессах, паразитарных заболеваниях, а понижается при кислородной недостаточности у новорожденных, потере белка. Концентрация р-глобулинов изменяется при беременности, гиперлипопротеинемии, приеме эстрогенов, железодефицитной анемии, хронических воспалительных процессах в печени, почках, кишечнике. Повышение концентрации у-глобулинов можно наблюдать при остром воспалении, хроническом гепатите и циррозе печени, саркоидозе, туберкулёзе, паразитарных и аутоиммунных заболеваниях, миелоидной болезни, лимфолейкозе, а снижение их концентрации - при нефротическом синдроме, длительных хронических инфекциях, лимфосаркома, лимфогранулематоз, облучении, удалении селезёнки, нарушении образования иммуноглобулинов (Е. А. Васильева, 1982; А. Ройт, 1991; А. Г. Нежданов и др., 1992, 1998). В связи с вышеизложенным, изучение общего белка и его фракций у коров беременных и после родов, представляется нам крайне важным, поскольку в первом случае функционирует сложная биологическая система мать-плод, во втором происходит реадаптация, восстановление и подготовка жизненно важных функций для последующего зачатия и вынашивания плода. Проведенными исследованиями установлено, что общий белок в сыворотке крови коров в начале беременности (2-3 месяца) находился в зависимости от сезона года на уровне 73-87 г/л. С увеличением срока беременности наблюдалось динамичное снижение этого показателя и к концу беременности концентрация общего белка в сыворотке крови составила 66 74 г/л. Спустя 1-2 дня после родов мы обнаруживали в крови минимальное содержание общего белка, равное 62-70 г/л. Изменения уровня общего белка у беременных и в послеродовой период напрямую связаны с переходом белка в молочную железу. Сравнительный анализ показал, что уменьшение содержания сывороточного f протеина происходило в среднем на 17-24%. Восстановление уровня общего белка начинается с 5-7 дня после родов и через три недели он достигал уровня, который был зафиксирован в начале беременности. К 19-21-м суткам после родов общий белок повышался относительно первых дней после родов на 16-24%, причем интенсивность увеличения была более выраженной в весенне-летний период, чем в другие периоды года. В весенне-летний период с увеличением срока беременности количество общего белка в сыворотке крови снижалось. Так, в начале сухостойного периода по сравнению со вторым месяцем беременности, общий белок снижался на 10% (р 0,01), а перед родами - на 15% (р 0,001). Ф На 1-2-е сутки после родов общий белок был лишь на 5% ниже относительно предродового периода. Но уже на 5—7-е сутки наблюдали незначительное повышение относительно 1-2-х суток после родов. В период полового возбуждения (19-21-е сутки) количество общего белка находилось на том же уровне, что и в начальный период беременности (табл. 5). Сходные изменения наблюдались и в содержании альбуминов. Так, в сухостойный период его уровень был ниже на 16% (р 0,001), чем в два месяца беременности. На 1-2-е сутки после родов относительно девятого месяца беременности альбумины снижались на 15,6%. На 19-21-е сутки после родов альбумины увеличивались - на 33% (р 0,001) относительно 1-2-х суток.
Влияние тимогена и фитопрепаратов и на гематологический статус коров
Результаты исследований показали наличие определенных нарушений в составе красной и белой крови у исследуемых коров. Данное обстоятельство послужило основанием для испытания фармакологических препаратов с целью коррекции лейкоэритропоэза в начале сухостойного периода и после родов, поскольку этот временной промежуток, как это стало видно из наших исследований, является наиболее критическим и определяющим дальнейшую воспроизводительную способность животных, а также жизнеспособность приплода.
Результаты данного опыта представлены в таблицах 30-33. Так, из данных таблицы 30 видно, что морфологические показатели крови коров до применения тимогена, аргэхина и содэхина были практически на одном уровне, как в контрольной, так и в опытных группах.
В опытных группах после применения иммуномодуляторов наблюдалось повышение общеклинических показателей крови. С восьмого месяца беременности происходило плавное возрастание количества клеток крови и продолжалось вплоть до родов. Сразу после родов наблюдалось незначительное снижение общеклинических показателей крови, а затем наступало их повышение, и к 19-21-м суткам достигало максимального значения, находясь в пределах физиологических границ.
В течение сухостойного периода и сразу после родов (на 1-2-е сутки) в весенне-летний период (табл. 30) в опытных группах морфологические показатели крови были незначительно выше, чем в контрольной группе. Более существенные изменения наблюдали в лейкоцитарной формуле: у коров на седьмом месяце беременности в первой опытной группе, где применяли ти-моген, достоверно повышалось количество сегментоядерных нейтрофилов на 6%, во второй и в третьей опытных группах после применения аргэхина - на 9-7%, лимфоцитов в первой и во второй опытных группах было выше на 3 %, а в третьей группе - практически на одном уровне с контрольной группой. Количество эозинофилов было незначительно выше контрольной группы, но при этом наблюдали достоверное (р 0,001) снижение палочкоя-дерных нейтрофилов в первой опытной группе в 1,5 раза, а во второй и в третьей - в 1,6 раза, моноцитов в первой опытной группе - в 1,2 раза, во второй - в 1,5 раза, в третьей - в 1,1 раза. Перед родами в первой опытной группе количество лейкоцитов было выше на 3%, а во второй и в третьей - на 18% и 22% (р 0,05) соответственно. Сегментоядерных нейтрофилов в первой опытной группе было выше на 6%, во второй и в третьей - на 11%, лимфоцитов в первой опытной было выше на 4%, во второй и в третьей - на 4—6%, эозинофилов в первой опытной было выше на 19%, во второй и в третьей - на 22-27% и, напротив, наблюдали снижение в опытных группах палочкоядер-ных нейтрофилов - в 2-3 раза, моноцитов в первой опытной - в 1,4 раза, во второй и в третьей - в 1,8 раза. После родов в течение двух недель во второй опытной группе продолжали применять аргэхин, а в третьей содэхин. Через 24-48 ч после родов наблюдалось достоверное снижение общеклинических показателей крови коров кроме палочкоядерных нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов. Необходимо отметить, что в опытных группах эти изменения были в меньшей степени, чем в контрольной группе. В стадии полового воз буждения в опытных группах нами отмечено достоверное повышение коли чества лейкоцитов в первой опытной - в 1,2 раза, во второй и в третьей - в 1,3 раза, сегментоядерных нейтрофилов в первой опытной - на 3%, во второй - на 11 %, в третьей - на 17%, количество эозинофилов в первой и во второй опытной группах увеличилось на 3%, а в третьей - на 6%. В то же время на блюдали и снижение лимфоцитов в третьей опытной группе на 4%, во второй опытной было практически на одном уровне с контрольной группой, а в первой опытной группе, напротив, повышение - на 4%, количество моноцитов снижалось в первой и во второй опытных группах на 6% и 3%, а в третьей, напротив, повышалось на 6%, количество палочкоядерных нейтрофилов в опытных группах понижалось в 2,1-2,5 раза относительно контрольной группы. Исследованиями установлено, что общеклинические показатели крови коров в весенне-летний период были самыми высокими, а самыми низкими -в зимне-весенний (табл. 30 и табл. 33). Так, в начале сухостойного периода в зимне-весенний период, относительно весенне-летнего, количество эритроцитов было ниже на 8%, имело место достоверное снижение гемоглобина на 15% и лейкоцитов - на 10% (р 0,001) в контрольной группе, в первой опытной группе количество эритроцитов снижалось на 9%, уровень гемоглобина -на 12% и количество лейкоцитов - на 10%, во второй группе - на 7%, 12% и 9%, и в третьей - на 8%, 12% и 9% соответственно. Количество сегментоя дерных нейтрофилов и эозинофилов в контрольной группе было ниже на 10% и в 1,4 раза (р 0,001), в первой опытной группе - на 11% и 21%» (в 1,3 раза), во второй - на 16 и 32% (в 1,5 раза), в третьей - на 19% и 27% (в 1,4 раза) соответственно (р 0,001). В то же время нами было отмечено незначи тельное повышение количества лимфоцитов и более существенное увеличение количества палочкоядерных нейтрофилов и моноцитов.
