Введение к работе
Актуальность проблемы
Известно, что среди иейроинфекций наиболее значимое место по тяжести течения, инвалидизации и смертности занимает клещевой энцефалит (КЭ). Пермская область представляет собой крупнейший очаг этой инфекции, где заболеваемость, несмотря на систематическое проведение вакцинации, серопрофилактики и других противоэпидемических мероприятий, остается высокой, превышая в отдельные годы республиканский уровень в 4-7 раз.
Полиморфизм клинических симптомов клещевого энцефалита затрудняет его дифференциальную диагностику. Наиболее «рудны для клинического распознавания лихорадочные формы, которые составляют основное число случаев заболевания (АН. Шаповал,1974). Эти особенности КЭ свидетельствуют о значимости лабораторной диагностики инфекции.
Серодиагностика является ретроспективным методом и позволяет подтвердить диагноз не чаще чем в 40% случаев (А.В. Зотов, 1973; А.Н. Волкова, 1991; Н.Н, Воробьева, 1992). Ранний период заболевания, когда организм подвергается интенсивному антигенному воздействию возбудителя, исключен из серологического анализа. Наряду с этим, серологическая диагностика затруднена целим рядом дополнительных факторов - естественной иммунизацией населения от 4.9 до 48,8% в различных климаго-географических подзолах области (Р.3. Кузяев, 1968), многолетней вакцинопрофилактикой и введением гамма-глобулина лицам, отмечавших присасывание вирофорных клещей.
Это обстоятельство требует внедрения в широкую практику лабора-торно-диагностических исследований новых методических приемов, ос-
нованных на обнаружении антигенов вируса клещевого энцефалита в исследуемом материале.
Наиболее перспективным среди методов, позволяющих обнаруживать антиген вируса КЭ, является метод флуоресцирующих антител (МФА) с эритронитарным иммуиосорбсіггом (ЭИС). Этот метод успешно реализован при определении групповой зараженности клещей и выявлении вируса в крови экспериментально зараженных животных (Т.Г Пархоменко, Г. И. Стародубцева, Р.З. Кузяев,1984).
Цель исследовании
Совершенствование лабораторной диагностики КЭ на основе применения МФА с ЭИС в клинико-лабораторных и эпидемиологических исследованиях.
Задачи исследования
-
Оценить результативность МФА с ЭИС при использовании в качестве индикаторной части тест-системы новых флуоресцирующих конъюгатов: флуоресцирующих Fab-фрагментов антител и флуоресцирующих моноклональных антител, а также при применении в оценке результатов метода, предложенного нами "индекса свечения"" (ИС).
-
Исследовать возможность применения МФА с ЭИС для индикации антигена вируса в крови больных КЭ.
-
Изучить возможность использования метода для обнаружения антигена вируса КЭ в особях клещей, собранных в природе и снятых с людей после присасывания.
Научная ноиизиа исследования
1. Показана принципиальная возможность индикации антигена вируса в крови больных КЭ и особях спонтанно зараженных клещей.
-
Предложен оригинальный способ количественной оценки содержания антигена вируса КЗ в исследуемом материале.
-
Впервые в качестве флуоресцирующего конъюгата применен принципиально новый иммуноглобулиновый реагент на основе меченык Fab-фрагментов антител, что позволило повысить чувствительность МФА с ЭИС, существенно ускорить и упростить метод.
Практическая значимость работы и внедрение
-
Показана возможность использования МФЛ с ЭИС с целью ранней экспресс-диагностики КЭ.
-
Предложенная модификация МФА с ЭИС внедрена в практику клини-ко-лабораторной диагностики КЭ областного центра сапэпиднадзора и городской инфекционной больнице №1.
-
Полученные материалы о возможности индикации антигена вируса в крови больных КЭ и особях спонтанно зараженных клещей используются при преподавании микробиологии в Пермской медицинской академии.
-
Получены удостоверения на рационализаторские предложения № 1981 от 14 апреля 1098 г. "Модифицированный метод постановки МФА с ЭИС при определении вирофорносги клещей'" и № 1980 "' Методика количественного определения вирусного антигена » организме клетей-переносчиков" от 1998 г.
5.""Индикация антигена вируса в особях спонтагшо зараженных клетей н крови больных клещевым энцефалитом методом флуоресцирующих антител с применением зритроцитарного иммуносорбента".
6. Практическое внедрение полученных результатов.
Принцип ранней экспресс-диагностики КО внедрен в работу центра Госсанэпиднадзора (ГСЭН) г.Перми, вирусологической лаборатории Пермского областного центра ГСЭН
Результаты исследований включены в методические рекомендации "Клещевой энцефалит у де гей "(Диагностика, лечение и профилактика Пермь,] 9%).
Результаты диссертационной работы используются в преподавании микробиологии, эпидемиологии и детских инфекционных болезней студентам Пермской государственной медицинской академии, врачам на курсах повьсшешія квалификации в процессе чтения лекций и проведения практических занятий.
Основные положения, выносимые на зашиту
-
Показана высокая чувствительность и специфичность метода флуоресцирующих антител с применением эритроцитарного нммуносор-бента в эпидемиологических и клинико-лабораторных исследованиях при КЭ.
-
Использование ИС в опенке результэтов МФА с ЭИС сущесгвешю превышает эффективность метода.
-
Применение в качестве флуоресцирующего коньюгата меченых Fab-фрагментов антител повышает чувствительность метода.
-
Результаты проведенных исследований позволяют рассматривать МФА с ЭИС как метод ранней экспресс-диагностики клещевого энцефалита.
Ліірооашія работы
Работа выполнена на кафедре микробиологии ПГМЛ и вирусологической лаборатории Пермского областного центра ГСЭ11 и является частью комплексной темы по изучению КЭ на Западном Урале (№ госреги-страшш темы 01970002265).
Основные положения диссертации доложены:
на VII и IX иммунологической конференции Пермского государственного медицинского института (Пермь, 1988,1994),
на юбилейной научной сессии (90 леї) Пермского ордена трудового красного-знамени научно-исследовательского института вакцин и сывороток 11110 "Биомед" (Пермь, 1988).
на пленарных заседаниях Пермского отделения Всероссийского научного общества микробиологов, эпидемиологов, паразитологов (Пермь, 1989,1993).
на республиканской научной конференции "Актуальные вопросы медицинской вирусологии'' (Свердловск,1989),
на научно-практической конференции "Природно-очаговые инфекции и инвазии" (Пермь, 1990),
на республиканской научно-практической конференции "Актуальные вопросы изучения клетевого энцефалита и геморрагической лихорадки r их природных очагах (Ижевск, 1990),
на научной конференции "Актуальные вопросы инфекционной патологии"' (к 75-летию Пермского государственного медицинского института. Пермь, 1991),
на научной сессии 1996 года Пермской государственной медицинской академии.
Публикации По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ.
Объем и структура диссертации
