Введение к работе
Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК) является эффективным методом лечения ряда гематологических, онкологических и аутоиммунных заболеваний (Румянцев А. Г., 1997). Одним из самых часто встречающихся ранних осложнений ТГСК является острая «реакция трансплантат против хозяина». «Реакция трансплантат против хозяина» (РТПХ) инициируется после пересадки клеток аллогенного костного мозга (КМ), когда пересаженные клетки здорового донора распознают антигенные детерминанты па антигенпрезентирующих клетках реципиента. Т-лимфоциты донора, специфически активированные клетками хозяина, пролиферируют, секретируют каскад цитокинов (так называемый «цитокиновый шторм»), и дифференцируются в эффекторные Т-клетки, которые обычно атакуют кожу, печень и гастроинтестинальный тракт реципиента (Румянцев А.Г., Масчан А.А., 2003). Острая РТПХ развивается в результате атаки клеток реципиента цитотоксическими CD8+ Т-лимфоцитами донора, сопровождается элиминацией лимфоцитов реципиента и тяжёлым иммунодефицитом (Rus V. et al, 1995).
Изучение влияния регуляторных Т-клеток CD4+CD25+ Foxp3+ (Трег) донора на поведение CD8+ Т-лимфоцитов реципиента показало, что именно Т per CD4+CD25+Foxp3+ могут блокировать активацию донорских CD8+ Т-клеток и, следовательно, препятствовать этой субпопуляции Т-лимфоцитов индуцировать острую РТПХ (Porada CD. et al, 2006). Напротив, в хронической РТПХ происходит активация CD4+ донорских Т-клеток, которые стимулируют субпопуляцию аутореактивных В лимфоцитов реципиента, что приводит к нарушению аутотолерантности (Morris S.C. et al, 1990).
Для приживления клеток донора и профилактики развития РТПХ, проводится химио- и иммуносупрессивная терапия. Однако применение иммуносупрессантов и миелоаблативной терапии сопряжено с глобальной депрессией иммунной системы, повышенной склонностью больного к инфекции и неоплазии, то есть, с резким ухудшением качества жизни. Специфические методы терапии РТПХ смогли бы разрешить одну из самых серьёзных проблем трансплантологии. Достижения в изучении супрессорной функции Т клеток и возможности их применения в клинике открывают перспективы для решения этой задачи.
Цель исследования
Изучение роли регуляторных Т лимфоцитов CD4+CD25+FOXP3+ в развитии и тяжести течения острой «реакции трансплантат против хозяина» у детей после аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток.
Задачи исследования:
Оценить частоту манифестации и степень тяжести острой РТПХ у детей с онкологическими и гематологическими заболеваниями после ТГСК, а также определить её связь с типом трансплантации (родственная/неродственная) и источником ГСК (костный мозг, стволовые клетки крови).
Изучить влияние содержания регуляторных Т клеток трансплантата на последующее развитие острой «реакции трансплантат против хозяина» у детей.
Провести количественный анализ регуляторных Т лимфоцитов периферической крови ребёнка и его связь с клиническим состоянием пациента в динамике острой РТПХ.
Оценить возможность и перспективы коррекции острой РТПХ с помощью выращенных ex vivo регуляторных Т лимфоцитов.
Научная новизна
Впервые показано, что количественное содержание регуляторных Т клеток в трансплантате напрямую связано с клиническим состоянием детей в посттрансплантационный период. Результаты свидетельствуют о прямой связи малого количества регуляторных Т клеток в донорском трансплантате с повышенной частотой и тяжестью острой РТПХ у реципиента.
Впервые показано, что низкая концентрация регуляторных Т клеток в периферической крови реципиента связана с повышенной частотой манифестации и тяжелыми (III-IV) стадиями острой РТПХ у детей после аллогенной ТГСК в посттрансплантационный период.
Показана перспектива, безопасность и целесообразность профилактики и/или лечения острой РТПХ с помощью ex vivo выращенных регуляторных Т лимфоцитов.
Практическая значимость исследования
Данное исследование отражает частоту манифестации основного осложнения ТГСК и тяжесть его течения, что позволяет более обоснованно подходить к вопросу планирования работы гематологических отделений. Прежде всего, планирования затрат на уход за больными в послеоперационном периоде.
Количество регуляторных Т лимфоцитов в субпопуляционном составе трансплантата является значимым прогностическим фактором состояния больного в ранний посттрансплантационный период, что позволяет лучше планировать работу отделения трансплантации и с более высокой достоверностью прогнозировать вероятность манифестации и тяжесть острой РТПХ.
Мониторинг регуляторных Т клеток периферической крови пациента во время его нахождения в больнице является ещё одним лабораторным критерием состояния ребёнка, помочь в более точном определении степени тяжести острой РТПХ и помочь в корректировке лечения.
Результаты данного исследования являются основанием для исследования эффекта введения больным выращенных ex vivo регуляторных Т клеток. Внедрение в практику
Результаты работы применены для планирования работы отделения трансплантации костного мозга РДКБ. Апробация работы
Апробация состоялась 10.08.2009 на объединенной научно-практической конференции сотрудников отдела координации и планирования научно-исследовательских работ ФГУ «ФНКЦ детской гематологии, онкологии и иммунологии» Росздрава, отделения трансплантации костного мозга ГУ РДКБ Росздрава.
Материалы диссертации представлены на VI симпозиуме «Биологические основы терапии онкологических и гематологических заболеваний» (Москва, 2009 год), I международной конференции «Иммунотерапия и иммуномониторинг раковых заболеваний» (Киев, 2009 год).
По материалам диссертации опубликовано 6 работ в журналах, в том числе 2 во включённых в перечень изданий ВАК. Структура и объем диссертации
Диссертация изложена на 110 страницах машинописного текста, состоит из введения, 8 глав, заключения, выводов, практических рекомендации, библиографического указателя, включающего 130 литературных источников, в том числе 4 отечественных и 126 иностранных и приложений. Работа иллюстрирована 20 таблицами и рисунками.
Работа выполнена в ФГУ «Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии» Росздрава (директор - член-корр. РАМН, д.м.н., профессор А. Г. Румянцев) на базе Российской детской клинической больницы Росздрава (главный врач - д.м.н., профессор Н. Н. Ваганов).
