Введение к работе
Актуальность темы
В настоящее время использование аутологичных дендритных клеток (ДК), презентирующих заданный антиген, рассматривают как новую стратегию в разработке вакцинных препаратов для адоптивной иммунотерапии инфекционных и онкологических заболеваний (Jeannin, 2002). Это объясняется тем, что среди других профессиональных антиген- презентирующих клеток (АПК), ДК являются наиболее эффективным связующим звеном при активации врожденного и приобретенного иммунитета (Bancherau, 2005). Пульсированные ex vivo различными белковыми антигенами ДК способны примировать наивные Т-лимфоциты in vivo, вырабатывать ряд цитокинов и индуцировать протективный иммунитет против различных патогенов. При использовании ДК, во-первых, можно получить эффективные препараты в отношении инфекций, для которых создание традиционных вакцин невозможно. Так, исследования последних лет выявили обнадеживающие результаты адоптивной иммунотерапии при использовании пульсированных антигеном ДК у больных с ВИЧ-инфекцией (Walsh, 2003). Во-вторых, создание готового препарата ДК, обладающего протективным эффектом, занимает всего несколько дней и может быть использовано для экстренной профилактики инфекций неизвестной этиологии. Для этого достаточно иметь образец патогенного микроорганизма без проведения предварительной идентификации возбудителя и получения отдельных антигенов патогенного микрорганизма.
Учитывая то, что в последние десятилетия проблема лечения и профилактики инфекций, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами, сохраняет свою актуальность, в качестве модели исследования для получения вакцины на основе ДК мы выбрали Klebsiella pneumoniaе, занимающую одно из первых мест в структуре внутрибольничных инфекций (Hostacka, 2001; Sahly, 2000; Красноголовец, 1996). Вакцины на основе дендритных клеток в настоящее время находят клиническое применение в области онкологии, при этом для получения дендритно-клеточных препаратов с противоинфескционной и противоопухолевой активностью могут быть использованы идентичные технологии.
Цель исследования
Изучение роли дендритных клеток в противоинфекционном (на модели K. pneumoniae) и противоопухолевом (на модели меланомы В-16) иммунитете.
Задачи исследования
Оптимизация метода получения зрелых дендритных клеток из костномозговых предшественников, с использованием ФНО-a и бактериальных факторов в качестве индукторов созревания.
Исследование иммунофенотипа, морфологических параметров, уровня продукции цитокинов, а так же фагоцитарной активности дендритных клеток на разных этапах их созревания.
Определение дозы и кратности введения экспериментального образца клебсиеллезной и противоопухолевой вакцины на основе ДК для выяснения оптимальных режимов вакцинации, обеспечивающих протективный эффект.
Оценка пролиферативной и цитотоксической активности лимфоцитов вакцинированных мышей.
Основные положения, выносимые на защиту
-
-
С использованием коктейля цитокинов (ГМ-КСФ, ИЛ-4) и индукторов созревания (ФНО-a, лизат K. Pneumoniae, ВП-4) из клеток-предшественников костного мозга могут быть получены дендритные клетки, обладающие высокой антигенпрезентирующей активностью.
-
Вакцинация с использованием зрелых дендритных клеток, нагруженных лизатом клеток опухоли или микроорганизмов вызывает специфический иммунный ответ.
-
Предложенная технология получения вакцины на основе дендритных клеток позволяет индуцировать адаптивный противоопухолевый или противоинфекционный иммунный ответ.
Научная новизна
Впервые изучена противоинфекционная активность дендритных клеток в отношении K. pneumoniae. и произведена цейттраферная видеосъемка дендритных клеток на разных этапах их созревания. Впервые в сравнительном аспекте изучены бактериальные препараты (лизат К. pneumoniae, вакцина ВП-4) в качестве индукторов созревания ДК.
Впервые было показано, что бактериальный лизат может быть использован одновременно в качестве антигена и фактора созревания ДК.
Получены новые данные, характеризующие иммунофенотип, морфологические параметры, уровень продукции цитокинов ДК.
Научно-практическая значимость
Предложенная технология культивирования ДК может быть использована для получения противоопухолевых и противоинфекционных вакцин.
Для получения противоопухолевых и противоинфеккционных вакцин на основе ДК могут быть использованы различные бактериальные препараты (лизат К. pneumoniae, вакцина ВП-4).
Апробация работы
Материалы диссертационной работы доложены на совместном заседании кафедры микробиологии с вирусологией и иммунологией ММА им И.М. Сеченова и лаборатории клеточного иммунитета ГУ РОНЦ им Н.Н. Блохина РАМН 20 февраля 2006г., протокол №26.
Публикации
Основные положения диссертации отражены в 9 научных публикациях в центральной и местной печати.
Структура и объем диссертации
Похожие диссертации на Изучение роли дендритных клеток в противоинфекционном и противоопухолевом иммунитете на экспериментальных моделях
-
