Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Роль оксидативного стресса в развитии диабетической энцефалопатии и применение антиоксидантов в ее комплексном лечении 20
Глава 2. Материалы и методы исследования 53
2.1. Экспериментальные животные 54
2.2. Изучаемые лекарственные средства 54
2.3. Оценка влияния эмоксипина, реамберина, мексидола и а-липоевой кислоты на интенсивность переокисления липидов головного мозга in vitro 56
2.4. Оценка влияния эмоксипина, реамберина, мексидола и а-липоевой кислоты на устойчивость к острой гипоксической гипоксии у мышей 57
2.5. Оценка влияния эмоксипина, реамберина, мексидола и а-липоевой кислоты на устойчивость к острой аллоксановой интоксикации 58
2.6. Оценка влияния эмоксипина, реамберина, мексидола и а-липоевой кислоты на чувствительность к инсулину и толерантность к нагрузке глюкозой 60
2.7. Оценка антидепрессивной активности эмоксипина, реамберина, мексидола и а-липоевой кислоты 61
2.8. Моделирование аллоксанового диабета и его экспериментальная терапия эмоксипином, реамберином, мексидолом и а-липоевой кислотой 65
2.9. Биохимические методы исследования 67
2.10. Морфологические методы исследования 67
2.11. Оценка расстройств мотивированного поведения и условнорефлекторного обучения у животных с аллоксановым диабетом з
2.12. Методы статистической обработки полученных данных 70
Глава 3. Результаты собственных исследований 71
3.1. Обоснование целесообразности применения производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты с целью коррекции расстройств метаболизма и проявлений энцефалопатии при экспериментальном сахарном диабете 71
3.1.1. Влияние производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на спонтанное переокисление липидов головного мозга крыс in vitro 72
3.1.2. Влияние производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на устойчивость мышей к острой гипоксической гипоксии 76
3.1.3. Влияние производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на устойчивость к острой аллоксановой интоксикации 78
3.1.4. Влияние производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на чувствительность к инсулину и толерантность к глюкозе 85
3.1.5. Изучение антидепрессивной активности производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты 91
3.2. Терапевтическая эффективность производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты при однократном введении в остром периоде аллоксанового диабета у крыс 105
3.2.1. Влияние однократного введения производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на метаболические расстройства в остром периоде аллоксанового диабета у крыс 106
3.2.2. Влияние однократного введения производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на морфологию головного мозга в остром периоде аллоксанового диабета у крыс 118
3.2.3. Влияние однократного введения производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на расстройства поведения в остром периоде аллоксанового диабета у крыс 129
3.3. Терапевтическая эффективность производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты при семикратном введении крысам с аллоксановым диабетом 140
3.3.1. Влияние семикратного введения производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на метаболические расстройства у крыс с аллоксановым диабетом 141
3.3.2. Влияние семикратного введения производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на морфологию головного мозга крыс с аллоксановым диабетом 150
3.3.3. Влияние семикратного введения производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на расстройства поведения у крыс с аллоксановым диабетом 161
3.4. Терапевтическая эффективность производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты при 14-кратном введении крысам с аллоксановым диабетом 173
3.4.1. Влияние 14-кратного введения производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на метаболические расстройства у крыс с аллоксановым диабетом 173
3.4.2. Влияние 14-кратного введения производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на морфологию головного мозга крыс с аллоксановым диабетом 186
3.4.3. Влияние 14-кратного введения производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на расстройства поведения у крыс с аллоксановым диабетом 207
3.5. Терапевтическая эффективность производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты при аллоксановом диабете у мышей 218
Заключение 231
Выводы 279 Практические рекомендации 282
Список сокращений и условных обозначений 283
Список литературы 2
- Оценка влияния эмоксипина, реамберина, мексидола и а-липоевой кислоты на интенсивность переокисления липидов головного мозга in vitro
- Морфологические методы исследования
- Влияние производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на устойчивость к острой аллоксановой интоксикации
- Влияние 14-кратного введения производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на метаболические расстройства у крыс с аллоксановым диабетом
Введение к работе
Актуальность темы исследования и степень ее разработанности
Одним из наиболее проблемных разделов лечения сахарного диабета (СД) является коррекция его поздних неврологических осложнений (Балаболкин М.И., Клебанова Е.М., Креминская В.М. Лечение сахарного диабета и его осложнений. М. : Медицина, 2005. 512 с.). Диабетические поражения нервной системы неизбежно возникают даже на фоне многолетней компенсации этого заболевания, достигнутой благодаря применению современных, эффективных и доступных сахароснижающих препаратов (Callaghan B.C., Hur J., Feldman E.L. Diabetic neuropathy: one disease or two? // Curr. Opin. Neurol. 2012. Vol. 25, № 5. Р. 536-541.). Высокая медико-социальная значимость нейропатических осложнений СД связана с нарастающей распространенностью, инвалидизирующими и жизнеугрожающими последствиями диабетических поражений периферической нервной системы (Дедов И.И., Удовиченко О.В., Галстян Г.Р. Диабетическая стопа. М. : Практическая медицина, 2005. 197 с.; Tesfaye S., Selvarajah D. Advances in the epidemiology, pathogenesis and management of diabetic peripheral neuropathy // Diabetes Metab. Res. Rev. 2012. Vol. 28, Suppl. 1. Р. 8-14.). Диабетические поражения центральной нервной системы (ЦНС) и, прежде всего, диабетическая энцефалопатия (ДЭ) привлекают внимание специалистов здравоохранения в значительно меньшей степени. Это связано с малосимптомной, «расплывчатой» клинической картиной и относительно медленным темпом прогрессирования начальных проявлений ДЭ. Тем не менее ДЭ характеризуется прогредиентным течением с самоускоряющиейся эскалацией аффективных расстройств и когнитивного дефицита, высоким риском фатальных цереброваскулярных катастроф и исхода в деменцию (Строков И.А., Захаров В.В., Строков К.И. Диабетическая энцефалопатия // Неврология, психиатрия, психосоматика. 2012, № 2. С. 30-40.). Развитие деменции на фоне прогрессирования ДЭ особенно часто отмечается у пациентов, страдающих СД 2 типа, которые также представляют собой группу риска по развитию болезни Альцгеймера (Hlscher C. Diabetes as a risk factor for Alzheimer's disease: insulin signalling impairment in the brain as an alternative model of Alzheimer's disease // Biochem. Soc. Trans. 2011. Vol. 39, № 4. Р. 891-897). Накопленные к настоящему времени данные позволяют прогнозировать увеличение общего числа больных деменцией с 24 миллионов в 2001 году до 81 миллиона в 2040 году (Ferri C.P., M., C. et al. Global prevalence of dementia: a Delphi consensus study // 2005. Vol. 366, № 9503. Р. 2112-2117.). Это связано не только с увеличением популяционной доли пожилых и старых людей, но и со значительным нарастанием распространенности СД. В соответствии с текущим прогнозом предполагается, что к 2030 году число больных СД составит 552 миллиона человек, в основном за счет пациентов с СД 2 типа (Дедов И.И. Сахарный диабет – опаснейший вызов мировому сообществу // Вестн. РАМН. 2012. № 1. С. 7-13.). Несомненный прогресс в комплексном лечении СД способствует увеличению продолжительности жизни пациентов (Там же). Эти обстоятельства свидетельствуют о непрерывном нарастании медико-социальной значимости ДЭ, которая становится глобальной проблемой современного здравоохранения, требующей безотлагательного решения. Отсутствие стандартов диагностики, профилактики и лечения ДЭ диктует необходимость разработки эффективных, безопасных и экономически доступных подходов к предупреждению и терапии данного синдрома (Левин О.С., Ильясова Ф.Н. Когнитивные нарушения при сахарном диабете типа 2 // Consilium Medicum. 2012. Т. 14, № 9. С. 92-97.; Sima A.A. Encephalopathies: the emerging diabetic complications // Acta Diabetol. 2010. Vol. 47, № 4. Р. 279-293.).
В качестве перспективных лекарственных средств (ЛС) для решения этой задачи можно рассматривать оригинальные отечественные производные 3-оксипиридина (3-ОП) и янтарной кислоты (ЯК). Первым зарегистрированным препаратом этой группы является эмоксипин (2-этил-6-метил-3-оксипиридина гидрохлорид), синтезированный в начале 1960-х годов в Институте биохимической физики РАН Л.Д. Смирновым, В.И. Кузьминым, К.М. Дюмаевым, С.Б. Гашевым. Его действие подробно изучено группой исследователей под руководством академика РАН Н.М. Эммануэля (Дюмаев К.М., Воронина Т.А., Смирнов Л.Д. Антиоксиданты в профилактике и терапии патологий ЦНС. М. : Изд-во Института биомедицинской химии РАМН, 1995. 271 с.). Эмоксипин используется в основном в офтальмологической практике. В начале 1980-х годов в ГУ НИИ фармакологии РАМН Л.Д. Смирновым и В.И. Кузьминым синтезирован мексидол (2-этил-6-метил-3-тлоксипиридина сукцинат). Его фармакологическая активность изучена Т.А. Ворониной, С.Б. Середениным, А.В. Еремеенко, Л.Д. Лукьяновой и др. под общим руководством академика РАМН А.В. Вальдмана (Середенин С.Б., Воронина Т.А. Современная фармакотерапия эмоционально-стрессовых расстройств // Вестн. эстетической медицины. 2009. Т. 8, № 3. С. 32-40.). Широкий спектр фармакологических эффектов мексидола может быть сведен к двум основным действиям: собственно нейропротекторному и вазотропному (Воронина Т.А. Мексидол: спектр фармакологических эффектов // Журн. неврологии и психиатрии. 2012. № 12. С. 86-90.). Это делает его особенно перспективным для лечения ДЭ, которая справедливо рассматривается как дисциркуляторно-метаболическая патология головного мозга (Коркина М.В., Елфимова Е.В. Диабет и когнитивное старение // Журн. неврологии и психиатрии. 2004. № 3. С. 80-84.). На сегодняшний день не сформулированы четкие отличия в спектре фармакологических эффектов эмоксипина и мексидола. Мексидол отличается от эмоксипина наличием сукцинатного аниона. В связи с этим заслуживает внимания препарат ЯК реамберин, разработанный и внедренный в клиническую практику в начале 2000-х годов специалистами отечественной фармацевтической компании ООО «НТФФ«ПОЛИСАН» (Реамберин: реальность и перспективы : сб. науч. ст. СПб, 2002. 168 с.). В настоящее время реамберин интенсивно применяется в качестве антигипоксического и дезинтоксикационного средства.
Эмоксипин, реамберин и мексидол, представляющие своеобразный ряд производных 3-ОП и ЯК, были подробно изучены при дистальной симметричной сенсомоторной полинейропатии у больных СД. Они продемонстрировали выраженное антинейропатическое действие и способность к снижению коморбидных тревожно-депрессивных расстройств (Волчегорский И.А., Москвичева М.Г., Чащина Е.Н. Влияние антиоксидантов на проявления сенсомоторной полиневропатии и аффективные нарушения при сахарном диабете // Журн. неврологии и психиатрии. 2005. Т. 105, № 2. С. 41-45.). Основой терапевтического эффекта производных 3-ОП и ЯК принято считать их антиоксидантное и антигипоксическое действие (Галенко-Ярошеский В.П., Гулевская О.Н., Зеленская А.В. и др. Современные проблемы коррекции нарушений окислительного гомеостаза в практике экспериментальной фармакологии // Новые технологии. 2011. № 2. С. 166-171.). Это свидетельствует об актуальности и перспективности изучения эффективности эмоксипина, реамберина и мексидола в лечении ДЭ. Особого внимания заслуживает сопоставление их потенциальных церебропротекторных эффектов с действием -липоевой кислоты (-ЛК), которая в течение длительного времени рассматривалась в качестве эталонного средства лечения диабетических нейропатий (Ziegler D., Tritschler H.-J., Строков И.А. и др. Лечение диабетической полиневропатии тиоктовой кислотой // Фарматека. 2008. № 17. С. 28-36.).
Цель исследования
Провести сравнительное экспериментальное изучение церебропротекторного, ноотропного и тимоаналептического действия производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты (эмоксипина, реамберина и мексидола) при сахарном диабете в сопоставлении с их влиянием на расстройства углеводного и липидного обмена, а также в зависимости от их антиоксидантной, антигипоксической, сахароснижающей и инсулин-потенциирующей активности. Оценить возможности клинического применения производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты с целью коррекции аффективных нарушений и когнитивного дефицита у больных сахарным диабетом.
Задачи исследования
-
Изучить влияние эмоксипина, реамберина и мексидола на устойчивость к острой гипоксии и чувствительность к инсулину в зависимости от способности исследуемых препаратов модулировать липидную пероксидацию in vitro.
-
Изучить влияние эмоксипина, реамберина и мексидола на толерантность к нагрузке глюкозой.
-
Изучить влияние эмоксипина, реамберина и мексидола на выраженность гипергликемии при аллоксановом диабете.
-
Изучить влияние эмоксипина, реамберина и мексидола на выраженность дислипидемии и состояние системы «перекисное окисление липидов – антиоксидантная защита» при аллоксановом диабете.
-
Изучить влияние эмоксипина, реамберина и мексидола на изменения клеточного состава и гистохимические проявления оксидативного стресса в кортикальных и диэнцефальных структурах головного мозга крыс с аллоксановым диабетом.
-
Изучить влияние эмоксипина, реамберина и мексидола на выраженность расстройств мотивированного поведения и условнорефлекторного обучения экспериментальных животных с аллоксановым диабетом.
-
Провести экспериментальное сопоставление терапевтической эффективности производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты при аллоксановом диабете с действием -липоевой кислоты, используемой в качестве препарата сравнения.
-
Изучить зависимость выраженности метаболических, церебропротекторных и психотропных эффектов производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты, а также -липоевой кислоты от дозировок и кратности введения соответствующих лекарственных препаратов животным с экспериментальным сахарным диабетом. Сопоставить полученные данные с влиянием производных 3-оксипиридина, янтарной и -липоевой кислоты на липидную пероксидацию in vitro, чувствительность к инсулину, толерантность к сахарной нагрузке и устойчивость к гипоксии.
-
На основании анализа результатов экспериментальных исследований выявить среди изучаемых производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты наиболее эффективное и безопасное лекарственное средство и провести его клинико-фармакологическую и фармакоэкономическую оценку в сравнении с препаратом -липоевой кислоты по влиянию на качество жизни, аффективные и когнитивные расстройства у больных сахарным диабетом в сопоставлении с влиянием на показатели углеводного, липидного обмена и систему «перекисное окисление липидов – антиоксидантная защита».
Методология и методы исследования
Работа включает экспериментальный и клинико-фармакологический разделы. Экспериментальный раздел исследования был осуществлен на лабораторных грызунах (мыши, крысы) с использованием модели аллоксанового диабета. В период с 4 по 17 день после индукции аллоксанового диабета проведено изучение церебропротекторного, ноотропного и антидепрессивного действия эмоксипина, реамберина и мексидола в сопоставлении с их влиянием на расстройства углеводного и липидного обмена, а также в зависимости от их антиоксидантной, антигипоксической, сахароснижающей и инсулин-потенциирующей активности. В качестве препарата сравнения изучалась -липоевая кислота. Клинико-фармакологический раздел исследования был посвящен клинической и фармакоэкономической оценке наиболее эффективного и метаболически безопасного производного 3-оксипиридина и янтарной кислоты, отобранного по результатам экспериментальной терапии. Клиническая эффективность применения этого ЛС была сопоставлена с действием -липоевой кислоты в рамках краткосрочного, проспективного, плацебо-контролируемого, простого «слепого», рандомизированного исследования влияния изученных препаратов на динамику нарушений аффективного статуса, когнитивных функций, качества жизни, показателей углеводного и липидного обмена у больных СД. В работе использованы биохимические, гистологические, гистохимические, морфометрические, клинико-лабораторные, психометрические, фармакоэкономические, статистические методы исследования.
Степень достоверности, апробация результатов, личное участие автора
Достаточный массив фактических данных, избранный дизайн и методы исследования, адекватные сформулированным в работе целям и задачам, корректный и разносторонний статистический анализ обеспечили достоверность полученных результатов, сформулированных выводов, положений и рекомендаций.
Основные положения диссертации доложены, обсуждены и опубликованы в материалах Российского национального конгресса кардиологов «Повышение качества и доступности кардиологической помощи» (Москва, 2008), 2-го Чешско-Российского медицинского Форума «Инновационные технологии в медицине» (Чехия, Брно, 2008), V Российской конференции с международным участием «Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция» (Москва, 2008), 3-го Международного Китайско-Российского фармакологического симпозиума (Китай, Харбин, 2008), научной сессии, посвященной 65-летию медицинской академии «Актуальные проблемы медицинской науки и практического здравоохранения» (Челябинск, 2009), Российской конференции «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии» (Челябинск, 2009), II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Ученые Урала и Сибири – развитию отечественной фармации: от синтеза до инновационных лекарственных средств» (Новосибирск, 2011), Конгресса «Здравоохранение Российской Федерации, стран СНГ и Европы» (Москва, 2011), Российской научно-практической конференции «Фундаментальные вопросы гематологии. Достижения и перспективы» (Челябинск, 2012), IV съезда фармакологов России «Инновации в современной фармакологии» (Казань, 2012).
Апробация работы состоялась на расширенном заседании кафедры фармакологии с участием сотрудников кафедры профессиональных болезней и клинической фармакологии, кафедры клинической фармакологии и терапии факультета дополнительного профессионального образования Государственного бюджетного учреждения высшего профессионального образования «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России) с приглашением врачей клинических баз, на которых выполнялось исследование.
Автор лично теоретически разработал и практически реализовал концепцию исследования на основе научно-информационного поиска, выполнения экспериментального раздела работы на лабораторных животных, организации многоцентрового клинического исследования, проведения комплексного психометрического обследования больных, организации и контроля за выполнением лабораторных исследований, самостоятельной статистической обработки первичных данных, анализа и интерпретации ее результатов. Автором лично сформулированы положения, выносимые на защиту, выводы, практические рекомендации, написан текст диссертации.
Положения, выносимые на защиту
-
Моделирование аллоксанового диабета приводит к раннему развитию гипергликемии, дислипидемии и оксидативного стресса, сопровождающихся быстропрогрессирующим нарушением клеточного состава кортикальных и диэнцефальных структур головного мозга с сопутствующими расстройствами мотивированного поведения экспериментальных животных и их способности к условнорефлекторному обучению.
-
Оригинальные отечественные производные 3-оксипиридина и янтарной кислоты (эмоксипин, реамберин и мексидол) обладают модулирующим влиянием на липидную пероксидацию, устойчивость к гипоксии, чувствительность к инсулину, толерантность к нагрузке глюкозой и могут быть использованы для коррекции метаболических, нейроморфологических и поведенческих расстройств при экспериментальном сахарном диабете.
-
Применение эмоксипина, реамберина и мексидола при аллоксановом диабете корригирует гипергликемию в зависимости от способности изученных лекарственных средств увеличивать толерантность к сахарной нагрузке, а также уменьшает дислипидемию в зависимости от их антигипоксической активности.
-
Курсовое применение производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты при аллоксановом диабете корригирует СД-ассоциированные нарушения клеточного состава церебральных структур, а также сопутствующие расстройства мотивированного поведения и условнорефлекторного обучения в зависимости от характера влияния изученных лекарственных средств на липидную пероксидацию.
-
Эмоксипин, реамберин и мексидол не уступают по своей терапевтической эффективности при аллоксановом диабете -липоевой кислоте.
-
Мексидол, одновременно являющийся производным 3-оксипиридина и янтарной кислоты, характеризуется оптимальным балансом между терапевтической эффективностью и метаболической безопасностью при аллоксановом диабете. Это позволяет рассматривать мексидол как предпочтительное производное 3-оксипиридина и янтарной кислоты для клинического применения у больных сахарным диабетом.
-
При курсовом двухнедельном введении больным сахарным диабетом мексидол не уступает -липоевой кислоте по корригирующему влиянию на параметры углеводного обмена и аффективного статуса.
Научная новизна
Впервые проведено целенаправленное систематическое изучение структурно-родственных отечественных производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты (эмоксипина, реамберина, мексидола) на проявления экспериментальной диабетической энцефалопатии.
Впервые показано, что моделирование аллоксанового диабета в эксперименте на крысах приводит к формированию нейроморфологических и поведенческих проявлений диабетической энцефалопатии уже через 96 часов после введения аллоксана с дальнейшим непрерывным прогрессированием на протяжении последующих двух недель.
Впервые показано, что наличие сукцинатного аниона в структуре отечественных производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты способствует развитию прооксидантного эффекта и ограничивает антиоксидантное действие 3-оксипиридинового катиона.
Впервые установлено инсулин-потенциирующее действие эмоксипина и реамберина, а также способность эмоксипина, реамберина и мексидола увеличивать толерантность к нагрузке глюкозой. Впервые продемонстрировано, что позитивное влияние производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на толерантность к нагрузке глюкозой прямо зависит от их антигипоксического потенциала. Впервые показано, что курсовое применение эмоксипина, реамберина, мексидола и -липоевой кислоты при аллоксановом диабете корригирует гипергликемию в прямой зависимости от способности изученных лекарственных средств увеличивать толерантность к сахарной нагрузке.
Впервые показано, что влияние эмоксипина, реамберина и мексидола на выраженность дислипидемии при аллоксановом диабете существенно зависит от их антигипоксической активности.
Впервые продемонстрировано, что наличие 3-оксипиридинового катиона в структуре отечественных производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты и их антиоксидантная активность in vitro играют определяющую роль в реализации церебропротекторного, ноотропного и гипогликемизирующего эффектов изученных лекарственных средств при аллоксановом диабете. Показано, что наличие сукцинатного компонента в структуре отечественных производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты определяет преимущественную локализацию церебропротекторного действия этих лекарственных средств на уровне поверхностных слоев первичной соматосенсоной коры крыс с аллоксановым диабетом.
Впервые показано, что отечественные производные 3-оксипиридина и янтарной кислоты не уступают -липоевой кислоте, изученной в качестве препарата сравнения, по способности корригировать метаболические, нейроморфологические и когнитивно-аффективные нарушения при сахарном диабете.
Теоретическая и практическая значимость работы
Установленные факты отражают новые, ранее неизвестные аспекты фармакодинамики отечественных производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты (эмоксипина, реамберина и мексидола) при лечении сахарного диабета. Установленные факты свидетельствуют о том, что антиоксидантная и антигипоксическая активность является определяющей в реализации корригирующего влияния изученных лекарственных средств на расстройства метаболизма и поражение центральной нервной системы при сахарном диабете.
Полученные в процессе диссертационной работы результаты свидетельствуют о целесообразности включения мексидола в схему комплексного лечения сахарного диабета. Подобное расширение стандартных схем лечения сахарного диабета позволит рассчитывать на эффективную и безопасную коррекцию нарушений углеводного обмена и аффективного статуса больных.
Внедрение результатов исследования в практику
Результаты диссертационного исследования используются в учебном процессе ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России на кафедре Фармакологии в разделе «Средства, влияющие на центральную нервную систему» по темам «Антидепрессивные средства», «Ноотропные средства», на кафедре Химии фармацевтического факультета при изучении фармацевтической и токсикологической химии в разделе «Алифатические органические соединения» по теме «Предельные карбоновые кислоты», в разделе «Группы веществ, изолируемых экстракцией и сорбцией» по теме «Химико-токсикологический анализ производных барбитуровой кислоты» и в вариативной дисциплину по выбору «Спектральные методы в современном анализе», на кафедре Госпитальной терапии № 2 в цикле «Эндокринология» по теме «Дифференциальная диагностика при синдроме гипергликемии. Стандарты диагностики и лечения сахарного диабета», а также в модуле специальных дисциплин по теме «Сахарный диабет» для интернов по специальности «Терапия», «Эндокринология» и ординаторов по специальности «Общеврачебная практика (семейная медицина)».
Результаты диссертационного исследования используются в клинической практике МБУЗ «Ордена Трудового Красного Знамени Городская клиническая больница №1» и МБУЗ «Городская клиническая больница №9» г.Челябинска, а также Клиники ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России.
Публикации
Соискатель имеет 76 опубликованных работ, из них по теме диссертации опубликовано 27 научных работ общим объемом 6 печатных листов, в том числе 18 статей в научных журналах и изданиях, которые включены в перечень российских рецензируемых научных журналов и изданий для опубликования основных научных результатов диссертаций. Соискателем опубликовано 7 работ в материалах всероссийских и международных конференций и симпозиумов, 2 статьи – в региональных изданиях.
Объем и структура диссертации
Диссертационная работа изложена на 344 листах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Диссертация иллюстрирована 48 таблицами, 20 рисунками. Список литературы содержит 525 источников, из которых 230 опубликовано в отечественной литературе и 295 – в зарубежных изданиях.
Оценка влияния эмоксипина, реамберина, мексидола и а-липоевой кислоты на интенсивность переокисления липидов головного мозга in vitro
Высокая заболеваемость СД и угрожающая тенденция к дальнейшему нарастанию распространенности этого заболевания является одной из глобальных проблем современного здравоохранения [92, 138, 324, 441]. Это отражается в прогрессирующем ухудшении прогнозов, касающихся эпидемиологии СД. В 2003 году считали, что к середине третьего десятилетия 21 века общее число больных СД составит 333 млн. человек [363]. В 2010 году ожидаемый показатель заболеваемости СД к 2030 году составил 435 миллионов человек [91]. И наконец, в 2011 году этот показатель увеличился уже до 552 миллионов человек [534]. В настоящее время в мире насчитывается более 371 миллионов больных СД, большая часть которых приходится на пациентов, страдающих СД 2 типа [364]. В нашей стране в 2011 году число официально зарегистрированных больных СД составляло 3 269 000 человек, а истинная численность могла достигать 9 миллионов человек, т.е. 5,5% всего населения России [92]. Изложенные факты позволяют расценивать ситуацию СД в качестве эпидемии неинфекционного заболевания [91, 138, 284] и рассматривать эту нозологическую форму как «опасный вызов мировому сообществу» [92].
Развитие СД обусловлено формированием абсолютной (при СД 1 типа) или относительной (при СД 2 типа) недостаточности инсулина [11, 187]. В динамике прогрессирования заболевания недостаточность инсулина приобретает смешанный характер вне зависимости от типа СД. В случае СД 1 типа это обусловлено развитием вторичной инсулинорезистентности, снижающей эффективность заместительной инсулинотерапии [157, 435, 443]. При длительном течении СД 2 типа развивается вторичное поражение панкреатических Р-эндокриноцитов с сопутствующим снижением продукции эндогенного инсулина и формированием потребности в лечении препаратами этого гормона [90, 204]. Абсолютный и относительный дефицит инсулина вызывает общеизвестные нарушения обмена веществ, приводящие к развитию поздних осложнений СД, наиболее часто представленных диабетическими нейро- и ангиопатиями [144, 188, 282, 342, 511]. Системное поражение нервной ткани клинически проявляется развитием ДН, частота которых коррелирует с длительностью заболевания и во многом определяет неблагоприятные исходы СД и снижение качества жизни пациентов [249, 362, 384]. Прежде всего, это касается наиболее распространенной формы нейропатического процесса -ДССП, во многом обусловливающей формирование СДС, прогрессирование которого часто завершается высокой ампутацией нижних конечностей и тяжелой инвалидизацией больных [89, 284]. Отдельного внимания заслуживает проблема диабетического поражения вегетативной нервной системы, затрагивающего, в первую очередь, ветви п. vagus [11, 360]. Развитие автономной нейропатии сопровождается разнообразными и трудно диагностируемыми нарушениями со стороны желудочно-кишечного тракта и мочеполовой системы [178, 241, 445]. Наиболее серьезным проявлением автономной нейропатии справедливо считается ее кардиоваскулярная форма, приводящая к нарушениям сердечного ритма, ортостатической гипотензии, безболевой ишемии и инфаркту миокарда [154, 395, 529]. Расстройства вегетативной регуляции сердечно-сосудистой системы в сочетании с макро- и микроангиопатиями на фоне дисметаболического повреждения миокарда в 2-4 раза повышают риск сердечнососудистой смертности у больных СД [91, 530], выводя ее на первое место среди причин смерти при этом заболевании [231, 324, 441]. Особого внимания заслуживает еще одно жизнеугорожающее проявление автономной нейропатии -бессимптомная гипогликемия [190].
Не меньшую угрозу для снижения качества жизни больных СД и уменьшения ее продолжительности представляют диабетические микроангиопатии, распространенность которых среди других видов осложнений достигает 40-60% [144]. Чаше всего поражение сосудов мелкого калибра проявляется в виде диабетической ретино- и нефропатии [143, 199, 390], в результате чего риск развития слепоты и хронической почечной недостаточности у больных СД повышается соответственно в 20 и 25 раз [315]. С диабетическими микроангиопатиями неразрывно связано развитие нейропатических осложнений СД [504, 510]. По мнению ряда авторов, поражение нервной ткани при СД следует рассматривать как одно из частных проявлений микроангиопатических процессов наряду с диабетической ретинопатией и нефропатией [315, 528].
На этом фоне проблема центральных нейропатий при СД выглядит клинически менее значимой [15, 228, 334, 470]. Главным образом это касается ДЭ, начальные стадии которой проявляются легким или умеренным когнитивным дефицитом и субклиническими аффективными расстройствами [40, 127,128,195,200,281,493].
Проблема ДЭ имеет многолетнюю историю. Взгляды на этот синдром претерпели трехфазную динамику от первоначальной декларации концепции ДЭ в 1950 году R.N. De Jong [306] до последующего отрицания и повторного возобновления интереса к данной проблеме в последнее десятилетие [176, 227, 283, 396, 405, 417]. В отечественной диабетологии впервые разделять центральную и периферическую нейропатию предложил В.М. Прихожан в 1987 году [173]. Позже М.И. Балаболкин в рамках центральной ДН выделил диабетическую энцефалопатию и миелопатию [11], а СВ. Котов и соавторы дополнили классификацию центральной ДН острыми нервно-психическими расстройствами на фоне декомпенсации метаболизма и острыми нарушениями мозгового кровообращения [130]. В ряде более поздних классификаций ДН понятия центральной ДН и ДЭ отсутствуют вообще [80].
Невзирая на то, что в настоящее время феномен развития центральных нейропатий не вызывает сомнений [141, 142, 152, 283, 417], проблема ДЭ зачастую замалчивается или подменяется представлениями о СД-ассоциированных когнитивных нарушениях. К сожалению, лишь немногочисленные группы исследователей в настоящее время целенаправленно занимаются изучением патогенеза ДЭ. В этом отношении несомненный интерес представляют концептуальные обобщения A. Sima и соавторов (2004 - 2010 гг.) которые отмечают существенные патогенетические, функциональные и структурные различия между ДЭ при СД 1 и 2 типа [484, 486, 488]. Согласно мнению этих авторов, ДЭ может развиваться как первичный синдром, обусловленный инсулинодефицитом и хронической гипергликемией. Действие этих двух факторов приводит к нарушению экспрессии нейротрофических факторов, нейротрансмиттеров, оксидативному стрессу, апоптотической гибели нейронов и когнитивному дефициту [484, 485, 487, 489, 490]. В этой связи первичная или «дисметаболическая» ДЭ рассматривается как относительно СД 1 - специфичное проявление центральной нейропатии [484, 487]. Вторичную ДЭ, по мнению A. Sima и соавторов, следует рассматривать как кумулятивный результат нарушения церебрального кровотока вследствие прогрессирования макро- и микроангиопатий или повторных эпизодов тяжелой гипогликемии [484, 487, 488]. Невзирая на то, что вторичная ДЭ считается относительно СД 2 -специфичным неврологическим осложнением, нельзя полностью исключить формирование ДЭ по аналогичному сценарию и при длительно текущем СД 1 типа, особенно в случае применения интенсивных режимов инсулинотерапии.
Морфологические методы исследования
Эффективность производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты, как и в ранее представленных разделах исследования, была сопоставлена с результатами применения а-ЛК. Учитывая особую уязвимость ростральных и диэнцефальных структур мозга при СД [265, 278, 353, 432], для гистологического анализа отбирали участки первичной соматосенсорной коры (слои I - III и IV - VI поля Pari), гиппокамп (поле СА1) и гипоталамус (паравентрикулярное ядро) [419]. К тому же, именно эти отделы головного мозга играют ведущую роль в координации когнитивных и аффективных функций, расстройства которых является закономерным следствием развития ДЭ. Кроме того, диэнцефальные и палеокортикальные отделы мозга играют значимую роль в процессах нейроэндокринной регуляции, расстройства которых наблюдаются при СД и вносят существенный вклад в эскалацию метаболических расстройств при этом заболевании [176].
В результате проведенного исследования было установлено, что индукция СД приводила к неравномерному снижению содержания нейронов и глиоцитов в изученных структурах головного мозга больных крыс. Через 96 часов после введения аллоксана убыль нейронов отмечалась только в палеокортексе. Это касалось поля СА1 гиппокампа, где было зарегистрировано уменьшение процентного содержания пирамидных и корзинчатых нейронов соответственно в 1,4 и 1,3 раза в сравнении с интактным контролем (таблица 12). Одновременно наблюдался существенный прирост (в 1,5 раза) доли липофусцин-позитивных (ЛП) нейроцитов, иллюстрирующих роль ОС в поражении «древней коры» при СД. Данный факт укладывается в рамки представлений, относящих нейроны поля СА1 к числу первоочередных мишеней ОС вообще [531], и СД-ассоциированного ОС в частности [307, 432].
Содержание глиальных клеток снижалось преимущественно в неокортексе (поле Pari соматосенсорной коры). Была отмечена наиболее выраженная убыль олигодендроцитов, число которых оказалось сниженным как в поверхностных (I - III), так и в глубоких (IV - VI) слоях соматосенсорной коры крыс с аллоксановым диабетом, соответственно на 26% и 10% (таблица 12). Количество астроцитов уменьшалось только в поверхностных слоях неокортекса в среднем на 17%. Там же наблюдалась выраженная убыль микроглиоцитов (на 29%). Содержание нейронов и глиоцитов в паравентрикулярном ядре (ПВЯ) гипоталамуса крыс с аллоксановым диабетом не изменилось в сравнении с интактными животными.
Изменения клеточного состава коры мозга крыс с аллоксановым диабетом развивались на фоне выраженной гипергликемии и гипертриглицеридемии (таблица 8). Однако в интегральной совокупности контрольных животных через 4 дня после введения аллоксана гликемия и триглицеридемия не коррелировали ни с одним из морфометрических показателей изученных отделов мозга.
При этом было установлено, что число олигодендроцитов в соматосенсорной коре снижалась по мере увеличения уровня вторичных продуктов ПОЛ в крови больных крыс. Это касалось изопропанолрастворимых КД и СТ, содержание которых отрицательно коррелировало с количеством клеток олигодендроглии I - III и IV - VI слоев поля Pari (соответственно, rs = -0,598, р = 0,04 и rs= - 0,637, р = 0,026). Аналогичная зависимость прослеживалась между числом олигодендроцитов I - III слоев неокортекса и уровнем гептанрастворимых КД и СТ в крови больных животных (rs= - 0,702, р = 0,011). Результаты корреляционного анализа позволяют считать циркулирующие продукты ПОЛ значимыми факторами поражения глии в остром периоде аллоксанового диабета.
Однократное введение изученных ЛС оказало существенное корригирующее влияние на изменения клеточного состава головного мозга в остром периоде аллоксанового диабета. В первую очередь это касается производного 3-оксипиридина - эмоксипина (таблица 13).
Влияние эмоксипина на морфометрические параметры первичной соматосенсорной коры, поля СА1 гиппокампа и паравентрикулярного ядра гипоталамуса крыс в остром периоде аллоксанового диабета, (М ± т)
" Интактныйконтроль(п=10) Аллоксано-вый диабет(п=10) у2 ЭСТД6,25 мг/кг(п=10) ЭСТД12,5 мг/кг (п=10) 2 ЭСТД25 мг/кг (п=10)
Зависимость действия эмоксипина от дозы имела U-образный характер, который иллюстрируется наиболее выраженными эффектами его минимальной ( ЭСТД) и максимальной (2 ЭСТД) дозировок. Только эти дозы эмоксипина достоверно уменьшали процентную долю липофусцин-содержащих нейронов поля СА1 гиппокампа соответственно в 1,3 и 1,6 раза. В случае применения 2 ЭСТД эмоксипина этот показатель снижался до уровня интактного контроля. Следует добавить, что Vi ЭСТД эмоксипина увеличивала на 20% количество нейронов ПВЯ у контрольных крыс с аллоксановым диабетом, а 2 ЭСТД этого ЛС вызывал увеличение процентного содержания пирамидных нейронов поля СА1 в 1,3 раза. Однократное применение Уг ЭСТД и ЭСТД эмоксипина приводило к нарастанию площади тигроидной зернистости в палеокортикальных нейроцитах соответственно на 40% и 31%, что является признаком интенсификации синтеза белка в этих клетках. Относительно высокие дозы эмоксипина (ЭСТД и 2 ЭСТД) предотвращали убыль олигодендроцитов в гиппокампе крыс с аллоксановым диабетом. Средняя доза (ЭСТД) эмоксипина оказывала противоположное действие на число клеток олигодендроглии в ПВЯ, которое снижалось в сравнении с крысами, не получавшими препарат.
Реамберин, также как эмоксипин, оказывал наиболее выраженное нейропротекторное действие в отношении «древней коры» при введении в минимальной и максимальной дозировках (таблица 14). Наиболее заметная коррекция нарушений клеточного состава поля СА1 палеокортекса была отмечена после введения Vi ЭСТД реамберина. Это проявилось почти двукратным снижением доли липофусцин-содержащих нейроцитов с одновременным нарастанием в 1,8 раза количества корзинчатых нейронов и в 2,1 раза - микроглиоцитов. Минимальная доза реамберина вызывала повышение содержания микроглиоцитов и в IV - VI слоях неокортекса (в 1,4 раза). В глубоких слоях коры этот эффект был менее выражен, чем в гиппокампе. Минимальная доза реамберина уменьшала в 1,3 раза относительную площадь тигроидной зернистости в нейронах ПВЯ.
Влияние производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на устойчивость к острой аллоксановой интоксикации
Минимальные дозы мексидола и эмоксипина вызывали сходное увеличение (в 1,2 раза) относительного содержания корзинчатых нейронов поля СА1 гиппокампа. При этом эмоксипин дополнительно повышал абсолютное содержание этих нейроцитов на 35%. Оба препарата способствовали увеличению тигроидной зернистости палеокортикальных нейроцитов (в случае эмоксипина -на 24%, в случае мексидола - на 18%). При использовании эмоксипина это сопровождалось значимым нарастанием общего количества нейронов поля СА1 на 22%. Установленные факты позволяют считать, что 14-дневное курсовое введение Vi ЭСТД производных 3-оксипиридина крысам с аллоксановым диабетом способствует интенсификации нейрогенеза, синтезу белка в нейроцитах и их дифференцировке. При увеличении дозировок эмоксипина и мексидола их позитивное влияние на гиппокамп ослабевало или сменялось на противоположное действие. В случае эмоксипина это проявилось снижением доли пирамидных и корзинчатых нейронов после 14-дневного введения относительно высоких доз (ЭСТД и 2 ЭСТД). При использовании ЭСТД и 2 ЭСТД мексидола он сохранял свое действие на тигроидную зернистость нейронов поля СА1, но утрачивал влияние на показатели содержания палеокортикальных нейронов. Стоит добавить, что ЭСТД мексидола увеличивал тигроидную зернистость нейронов, а его максимальная доза достоверно снижала этот показатель. Наименьшая выраженность нейропротекторного действия производных 3-оксипиридина была отмечена на диэнцефальном уровне (таблица 33, 34). Лишь курсовое введение минимальной дозы мексидола предотвращало убыль нейронов ПВЯ крыс с аллоксановым диабетом, повышая их число на 18% в сравнении с соответствующими показателями больных животных.
Реамберин и а-ЛК существенно уступали производным 3-оксипиридина по способности предотвращать убыль нейронов в изученных структурах головного мозга крыс с аллоксановым диабетом. Нейропротекторное действие реамберина и а-ЛК в соматосенсорной коре реализовалось только на уровне поверхностных слоев неокортекса. Реамберин оказывал такое действие лишь при использовании 2 ЭСТД, повышая на 17% число нейроцитов (таблица 35). интактным крысам вместо аллоксана и реамберина вводили эквиобъемныеколичества 0,9% раствора NaCl, контрольным крысам с аллоксановым диабетом вместореамберина вводили эквиобъемные количества 0,9% раствора NaCl;2) крысы с аллоксановым диабетом получали 3 ЕД/кг инсулина аспарта двухфазного,раз в сутки, подкожно, начиная с 4-го дня после введения аллоксана; животныесоответствующих контрольных подгрупп получали эквиобъемные подкожные инъекции 0,9%раствора NaCl в те же сроки и с аналогичной кратностью;3) - р 0,05 по сравнению с интактным контролем, - р 0,05 по сравнению скрысами с аллоксановым диабетом; значимость межгрупповых различий оценивали спомощью непараметрических критериев Манна-Уитни, Вальда-Вольфовица, Колмогорова-Смирнова. а-ЛК предотвращала убыль неокортикальных нейронов, число которых увеличивалось на 26% в сравнении с больными животными только при введении ЭСТД (таблица 36). Важно подчеркнуть, что минимальная доза а-ЛК на 16% уменьшала тигроидную зернистость нейронов в слоях IV - VI поля Par 1, что свидетельствует о потенциированом снижении синтеза белка нейроцитами глубоких слоев соматосенсорной коры при аллоксановом диабете. Еще одним проявлением неблагоприятного действия а-ЛК на кортикальные структуры больных животных явилось значимое снижение содержания пирамидных нейронов в поле СА1 гиппокампа на 35-38%. Данный эффект а-ЛК наблюдался во всем диапазоне изученных доз. Такое же действие наблюдалось при курсовом применении ЭСТД реамберина, который уменьшал долю пирамидных клеток на 29%. Вместе с тем минимальная доза реамберина вызывала небольшое, но статистически значимое нарастание процентного содержания корзинчатых нейронов в поле СА1.
В отличие от реамберина, не обладавшего нейропротекторной активностью на диэнцефальном уровне, а-ЛК эффективно предотвращала убыль нейронов ПВЯ у крыс с аллоксановым диабетом. Нейропротекторное действие а-ЛК в ПВЯ было зарегистрировано при использовании её единственной дозировки ( ЭСТД), повысившей число нейроцитов ПВЯ на 19% по сравнению с больными животными контрольной группы.
Распределение изученных ЛС по нейропротекторному эффекту при аллоксановом диабете соответствовало их распределению по способности модулировать липидную пероксидацию в гомогенатах нервной ткани in vitro (раздел 3.1.1., рисунок 1). Данное положение наиболее ярко подтвердилось при анализе изменений содержания липофусцинсодержащих нейронов в кортикальных структурах мозга животных из групп экспериментальной терапии. Все дозировки эмоксипина и мексидола, обладающих антиоксидантным действием в концентрациях 10" М, достоверно уменьшали процентное содержание липофусцинпозитивных нейроцитов в поверхностных слоях соматосенсорной коры (таблица 33, 34).
Выраженность данного эффекта эмоксипина достигала максимума при использовании ЭСТД, который почти пятикратно уменьшал долю этой категории нейронов в слоях I - III поля Pari коры крыс с аллоксановым диабетом. Наибольшая выраженность аналогичного эффекта мексидола была отмечена при использовании его максимальной дозировки, восьмикратно уменьшавшей содержание липоофусцин-позитивных нейроцитов в поверхностных слоях неокортекса больных животных. Полученные данные иллюстрируют роль антиоксидантной активности производных 3-оксипиридина в реализации их церебропротекторного действия при экспериментальном СД. В связи с этим необходимо подчеркнуть, что курсовое применение эмоксипина и мексидола уменьшало содержание липоофусцин-позитивных нейронов не только в поверхностных слоях соматосенсорной коры больных животных, но также в слоях IV - VI поля Pari и, особенно, в поле СА1 гиппокампа. Влияние 3-оксипиридиновых производных на динамику липофусцина в этой структуре палеокортекса характеризовалось наибольшей выраженностью, что проявилось уменьшением содержания липофусцин-позитивных нейронов в 2-10 раз при использовании различных доз эмоксипина и мексидола.
Реамберин и а-ЛК, обладающие проксидантым действием in vitro (раздел 3.1.1., рисунок 1), тоже уменьшали содержание липофусцин-позитивных нейронов поля СА1, однако выраженность данного эффекта была существенно ниже, чем при использовании производных 3-ОП. Курсовое введение а-ЛК и большинства доз реамберина уменьшало долю липофусцин-позитивных нейроцитов палеокортекса больных животных не более чем в 1,3 - 1,9 раз. Единственное исключение составил ЭСТД реамберина, вызвавший трехкратное снижение липофусцин-позитивных нейронов гиппокампа. Вполне возможно, что отмеченные сдвиги обусловлены ко-антиоксидантым действием сукцината и а-ЛК, которые играют важную роль в метаболическом обеспечении стабильного уровня восстановленного а-токоферола [162, 345]. На уровне соматосенсорной коры реамберин и а-ЛК оказывали отчетливое прооксидантное действие, которое проявилось 1,6 - 4,8 - кратным нарастанием содержания липофусцин 198 позитивных нейронов (таблица 35, 36). Аналогичная направленность эффекта реамберина и а-ЛК была отмечена на уровне промежуточного мозга крыс с аллоксановым диабетом. Курсовое применение этих ЛС вызывало относительно слабое (1,13 - 1,5 - кратное), но статистически значимое увеличение доли липофусцин-позитивных нейроцитов ПВЯ во всем диапазоне изученных доз. Необходимо заметить, что лишь отдельные дозы производных 3-оксипиридина вызывали сходные изменения содержания липофусцин-позитивных нейронов в ПВЯ. Это касается ЭСТД эмоксипина, увеличивавшего долю этих нейроцитов в 1,25 раза, и мексидола, относительно высокие дозы которого (ЭСТД и 2 ЭСТД) способствовали 1,3 - 1,4 - кратному приросту содержания таких нейронов. Не исключено, что слабая прооксидантная активность относительно высоких доз мексидола в ПВЯ может реализоваться благодаря наличию ЯК в структуре данного ЛС. Установлено, что энзиматическое окисление сукцината в нервной ткани является источником перекиси водорода [500], прооксидантное действие которой общеизвестно [162]. Благодаря этому мексидол, ограничивающий липидную пероксидацию нервной ткани в концентрациях 10" М in vitro, обладает прооксидантной активностью в миллимолярной концентрации (раздел З.1.1., рисунок 1 В).
Влияние 14-кратного введения производных 3-оксипиридина и янтарной кислоты на метаболические расстройства у крыс с аллоксановым диабетом
Наиболее эффективная коррекция нарушений поведения больных животных в «открытом поле» была отмечена при использовании максимальной дозировки а-ЛК. Относительно большие дозы а-ЛК (ЭСТД и 2 ЭСТД) повышали показатель качества формирования УРАИ соответственно в 2,4 - 2,5 раза. Важно отметить, что указанные дозировки препарата полностью восстанавливали мнестический потенциал больных крыс до уровня интактного контроля. Vi ЭСТД а-ЛК также повышала показатель качества формирования УРАИ в 1,8 раза. Следует подчеркнуть, что а-ЛК характеризовалась кумулятивным развитием ноотропного эффекта. Однократное введение этого ЛС корригировало показатель УРАИ только при введении Уг ЭСТД (раздел 3.2.3., таблица 18). При 7-кратном введении а-ЛК ноотропный эффект продемонстрировали её относительно высокие дозировки - ЭСТД и 2 ЭСТД (раздел 3.3.3., таблица 28). Лишь 14-кратное введение а-ЛК позволило достичь улучшения показателя УРАИ во всем диапазоне изученных доз (таблица 38). Все дозы а-ЛК при двухнедельном применении вызывали уменьшение анксиогенной дефекации и снижение показателя груминга до уровня интактного контроля и ниже.
Курсовое 14-дневное применение эмоксипина уменьшало выраженность расстройств поведения в «открытом поле» у больных животных в относительно высоких дозах (ЭСТД и 2ЭСТД). При этом двигательная активность повышалась на 64% и 61%, ориентировочная - на 64% и 85%, а исследовательская - на 99% и
Вместе с тем, Vi ЭСТД этого ЛС не оказала значимого корригирующего влияния на показатели двигательной и ориентировочной активности крыс с аллоксановым диабетом, но повышала исследовательскую активность животных на 52%. Эмоксипин, так же как мексидол и а-ЛК, существенно увеличивал показатель качества формирования УРАИ во всех дозах, причем в минимальной и максимальной дозировке этот параметр повышался почти в 2 раза, а при использовании средней - в 2,4 раза (таблица 38). Во всех вводимых дозировках эмоксипин также нормализовал повышенные показатели груминга и анксиогенной дефекации у больных животных, которые в большинстве случаев стали даже ниже уровня интактного контроля.
Наименее эффективным оказалось 14-дневное применение реамберина. Введение реамберина вызвало достоверный ноотропный эффект в единственной дозе (ЭСТД), которая повышала показатель качества формирования УРАИ в 1,5 раза. В отличие от эмоксипина, мексидола и а-ЛК, реамберин не влиял на показатели груминга в относительно высоких дозах. В остальном реамберин не уступал а-ЛК и производным 3-ОП по способности корригировать нарушения поведения больных животных в «открытом поле». В избранном дозовом диапазоне все дозы реамберина при двухнедельном введении примерно одинаково предотвращали СД-ассоциированную депрессию поведенческой активности больных животных в «открытом поле». При этом двигательная активность повышалась на 90 - 103%, ориентировочная - на 155 - 173%, исследовательская - на 165 - 176%. Все использованные дозы реамберина при 14-кратном введении снижали анксиогенную дефекацию до уровня интактного контроля. Следует подчеркнуть, что менее продолжительное (7-дневное) курсовое применение реамберина при аллоксановом диабете корригировало расстройства поведения во всем диапазоне изученных доз (раздел 3.3.3., таблица 28). Это свидетельствует о возможном развитии толерантности к ремберину в процессе его 14-дневного применения при экспериментальном СД. Не исключено, что формирование толерантности к реамберину при аллоксановом диабете может быть связано с неблагоприятным влиянием данного препарата на динамику гликемии после сахарной нагрузки (раздел 3.1.4., таблица 5).
В целом, производные 3-ОП и ЯК при 14-дневном применении эффективно корригировали нарушения поведения в «открытом поле» и снижение способности к условнорефлекторному обучению у крыс с аллоксановым диабетом. Наиболее ярко это проявилось для эмоксипина и мексидола. Данный факт хорошо согласуется с результатами клинического исследования, продемонстрировавшего тимоаналептическое и ноотропное действие эмоксипина и мексидола при двухнедельном применении у больных СД [40]. Основой терапевтического действия этих ЛС считается их антиоксидантный эффект [74,75, 99, 158]. Вместе с тем, в условиях клинического применения при СД данный эффект не всегда воспроизводится и зависит от исходной выраженности ОС [37, 40]. В разделах 3.3.1. и 3.4.1. показано, что 7- и 14-дневное применение производных 3-ОП при аллоксановом диабете не только не оказывает отчетливого антиоксидантного действия, но даже приводит к увеличению уровня отдельных категорий липопероксидов в крови. Это не позволяет считать антиоксидантную активность производных 3-ОП единственным, и тем более, главным механизмом их терапевтического действия при диабетических поражениях нервной системы. Позитивное влияние эмоксипина и, особенно, мексидола на толерантность к глюкозе (раздел 3.1.4., таблица 5) можно рассматривать в качестве альтернативного механизма их терапевтического эффекта при ДЭ. Справедливость данного положения иллюстрируется тем, что мексидол превосходит эмоксипин как по позитивному влиянию на ТТГ, так и по коррекции этологических нарушений при экспериментальной ДЭ.
Стандартизация полученных данных по средним величинам соответствующих контролей позволила оценить вклад изменений толерантности к глюкозе под действием изученных ЛС в реализацию их анксиолитического и ноотропного эффектов при аллоксановом диабете (рисунок 17).
![Гипотензивное действие 3-(3-[1,2,4-триазоло])-оксатриазолиум-5-олата: физиологический и биохимический анализ в экспериментах на крысах](/i/i/4363/460006.png "Гипотензивное действие 3-(3-[1,2,4-триазоло])-оксатриазолиум-5-олата: физиологический и биохимический анализ в экспериментах на крысах Артемьева, Марина Михайловна")
