Введение к работе
Актуальность темы
Современные молекулярно-биологические исследования позволили значительно расширить представления о структурно-функциональной организации плаценты человека и представить ее как чрезвычайно своеобразный орган, важнейшей функцией которого является синтез и секреция широкого спектра биологически активных сигнальных молекул, посредством которых осуществляется регуляция процессов, обеспечивающих нормальное развитие плода [Айламазян Э.К. и др., 2004].
Многочисленные пептиды, биогенные амины, стероиды, цитокины и другие сигнальные молекулы (которых уже верифицировано в плаценте более 100) выполняют роль гормонов, ферментов, проферментов, ингибиторов, рецепторов, факторов роста, иммунорегуляторных агентов, транспортных и связывающих белков [Кветной И.М. и др., 2005].
Уникальность плаценты в плане механизмов интеграции выполняемых функций и присутствие в ней большого числа биологически активных веществ, действующих эндокринным, паракринным и аутокринным путем, позволяет рассматривать плаценту как исключительно важный отдел диффузной нейроиммуноэндокринной системы.
Убедительно доказано, что наиболее активной тканью плаценты в метаболическом и функциональном плане является эпителий ворсинчатого хориона, который в силу особенностей строения играет наиболее важную роль в осуществлении обменных процессов между кровью матери и плода [Сельков С.А., Павлов О.В., 2007].
Многочисленные исследования, проведенные в последние годы, убедительно свидетельствуют, что современные представления о механизмах репродуктивной функции не могут формироваться без учета огромного и важного вклада нейро-иммуно-эндокринных структурно-функциональных связей, формирующихся непосредственно в половых органах, эндометрии, плаценте, молочной железе.
Анализ современной литературы показал, что большинство авторов изучало развитие адаптационных механизмов при патологическом состоянии плаценты. Вместе с тем, необходимо отметить недостаточное внимание к вопросам развития компенсаторно-приспособительных реакций, степени их мобилизации в плацентах у женщин с нормальной физиологической беременностью в зависимости от их возраста.
Имеются сведения, касающиеся степени структурных и функциональных сдвигов в плацентах у женщин различного возраста с нормальной физиологической беременностью, тогда как исследование нормальной плаценты ограничивалось лишь констатацией процессов, свидетельствующих о функциональном старении органа. Между тем от степени выраженности этих изменений зависит выключение больших или меньших участков из обменной поверхности плацентарной ткани.
Плацента уникальна и как объект для геронтологических исследований, поскольку ее онтогенез четко очерчен по времени гестации, а плацентарная ткань удобна для поиска четких, согласованных критериев старения на органном, тканевом, клеточном и субклеточном уровнях.
Вышеизложенные обстоятельства свидетельствуют об актуальности и необходимости проведения специального исследования экспрессии гормонов и биологически активных веществ в ворсинчатом хорионе у беременных разного возраста.
Цель и задачи исследования
Целью диссертационного исследования является сравнительный анализ морфо-функционального состояния ворсинчатого хориона зрелой плаценты у беременных разного возраста, а также при доношенной и переношенной беременности.
Для достижения указанной цели были поставлены и последовательно решены следующие задачи:
-
Изучить возрастную динамику экспрессии гормонов — соматостатина и серотонина в клетках ворсинчатого хориона.
-
Изучить экспрессию фактора роста сосудов VEGF для оценки микроциркуляции ворсинчатого хориона у женщин различных возрастных групп.
-
Верифицировать экспрессию пептида, ассоциированного с геном кальцитонина (CGRP) в ворсинчатом хорионе у женщин различных возрастных групп.
-
Выявить особенности экспрессии маркера молекул адгезии -интегрина CD61 как показателя устойчивости межклеточных связей в плаценте у женщин разного возраста.
-
Оценить влияние возраста беременной на процессы клеточного обновления в плодовой части плаценты.
-
Провести анализ морфо-функционального состояния плаценты при переношенной беременности у женщин нормального репродуктивного возраста.
Научная новизна работы
Впервые проведена верификация и анализ экспрессии гормонов соматостатина и серотонина, а также маркеров VEGF, CGRP, CD61, р53, Кі-67 в ворсинчатом хорионе зрелой плаценты у беременных разного возраста. Изучена возрастная динамика экспрессии исследуемых сигнальных молекул в ворсинчатом хорионе. Впервые выявлено снижение степени экспрессии соматостатина, серотонина, VEGF, CGRP, р53, Кі-67 клетками плодовой части плаценты в связи с увеличением возраста беременной женщины. При этом показано, что параметры экспрессии CGRP в ворсинчатом хорионе достоверно снижаются у юных первородящих и беременных старше 29 лет по сравнению с таковыми у
женщин нормального репродуктивного возраста. Установлены отличия в степени экспрессии интегрина CD61 в плаценте у женщин разного возраста. Впервые отмечено, что параметры экспрессии CD61 в плаценте у женщин разного возраста неодинаковы, так площадь экспрессии маркера CD61 в ворсинчатом хорионе достоверно увеличивается с возрастом беременной. Снижение васкуляризации ворсин хориона выявлено как у юных рожениц, так и у рожениц, старше 29 лет.
Результаты исследования свидетельствуют о снижении пролиферативной активности ворсинчатого хориона в связи с увеличением возраста беременной. При этом максимальная площадь экспрессии маркера пролиферации Ki-67 обнаружена в плацентах у женщин нормального репродуктивного возраста. Покзано, что число делящихся клеток прогрессивно увеличивается с возрастом беременной.
При оценке структурно-функциональной организации плаценты отмечается отсутствие отличий в экспрессии гормонов и сигнальных молекул (соматостатина, серотонина, VEGF, CGRP, CD61, р53 и Ki-67) в плацентах при доношенной и переношенной беременности, что свидетельствует о сохранении функциональной зрелости, а не о старении плаценты при увеличении продолжительности сроков гестации.
Практическая значимость работы
Полученные результаты позволяют расширить представления о морфо-функциональных изменениях плаценты в связи с возрастом беременной, что следует учитывать в акушерско-гинекологической практике для повышения эффективности профилактических и лечебных мероприятий.
Проведенные исследования позволили оценить диагностическую и прогностическую значимость иммуногистохимической верификации таких маркеров, как VEGF, CGRP, CD61, р53, Ki-67 при патогистологическом изучении плаценты после родов у женщин старшего репродуктивного возраста. Их применение позволяет оценить степень функциональной зрелости плаценты при прогнозе перинатального состояния новорожденных детей.
Установленное отсутствие различий в характере экспрессии гормонов при доношенной и переношенной беременности свидетельствует о сохранении гормональной функции плаценты при ее «старении».
Положения, выносимые на защиту
-
Экспрессия соматостатина, серотонина, VEGF, CGRP, р53 в клетках ворсинчатого хориона прогрессивно снижается в связи с увеличением возраста беременной женщины.
-
Экспрессия Кі-67 в ворсинчатом хорионе, а следовательно и его пролиферативная активность с увеличением возраста матери прогрессивно снижается.
3. Достоверные отличия в концентрации и характере экспрессии соматостатина, серотонина, VEGF, CGRP, р53, CD61, и Кі-67 в ворсинчатом хорионе при доношенной и переношенной беременности отсутствуют, что дает основание считать, что при переношенной беременности не происходит «старческой» инволюции плаценты.
Апробация и реализация результатов исследования
Материалы диссертации доложены на научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины», Санкт-Петербург (2009); на Весенней и Осенней геронтологических конференциях, Белгород (2009); на 1-ой ежегодной научной конференции молодых ученых и специалистов «Репродуктивная медицина: взгляд молодых», Санкт-Петербург (2010). Результаты исследований используются в научно-педагогической и практической деятельности Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН, НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта СЗО РАМН, Центра Простатологии РАЕН (Санкт-Петербург), медицинском факультете Белгородского государственного университета.
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе 3 статьи в журналах, включенных в Перечень ВАК Минобрнауки РФ для публикации материалов диссертационных исследований, 5 тезисов докладов.
Связь с научно-исследовательской работой Института
Диссертационная работа является научной темой, выполняемой по основному плану НИР Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН.
Структура и объем диссертации
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы с изложением материала и методов исследования, 3 глав собственных исследований, главы обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Работа иллюстрирована 29 рисунками и содержит 4 таблицы. Текст диссертации изложен на 149 страницах. Список литературы содержит 267 источников (38 отечественных и 229 зарубежных).
