Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Распространение и особенности эпизоочологии токсокароза плотоядных животных 10
1.2. Патогенез при токсокарозе 20
1.3. Методы иммунодиагностики токсокароза плотоядных животных 25
1.4. Применение современных антигельминтных препаратов при токсокаро плотоядных животных 32
2. Собственные исследования 37
2.1. Материалы и методы исследований 37
2.2. Результаты исследований 43
2.2.1. Распространение юксокароза в г. Рязани 43
2.2.1.1. Динамика эпизоотического процесса при токсокарозе собак в 2006-2009 г.г 43
2.2.1.2, Сезонные и возрастные и аспекты эпизоотологии токсокароза собак 45
2.2.2. Симптомы токсокароза при спонтанном и экспериментальном заражении 51
2.2.3. Результаты патол о го анатомического исследования при спонтанном и экспериментальном гоксокарозе 51
2.2.4. Культивирование яиц и личинок Тохосага canis с целью получения экскреторно-секреторных антигенов 52
2.2.5. Разработка иммунорсагентов для иммуноферменшого анализа и применение в диагностике «larva migrans» при токсокарозе собак 60
2.2.5.1. Приготовление экскреторно-секреторного антигена из личинок второй стадии Тохосага canifi 60
2.2.5.2. Иммунизация кроликов и получение специфических иммунных сывороток к экскреторно-секреторным антигенам личинок токсокар 61
2.2.5.3. Изучение активности и специфичности экскреторно-секреторных, и соматических антигенов личинок токсокар в ИФА 62
2.2.5.4. Определение чувствительности ИФА и диагностической эффективности полученных иммунореагентов при спонтанном и экспериментальном токсокарозе собак 70
2.2.5.5. Динамика антител к мигрирующим личинкам Тохосага canis при экспериментальном и спонтанном токсокарозе собак 73
2.2.6. Эффективность антигельминтных препаратов при токсокарозе собак 74
2.2.6.1. Антигельминтная эффективность препарата «Барс спот-он» при экспериментальном токсокарозе собак и динамика антител к личинкам Тохосага canis после дегельминтизации 74
2.2.6.2. Антигельминтная эффективность препарата «Пирадек» (суспензия) при спонтанном токсокарозе собак 77
2.2.7. Динамика антител к Тохосага canis в иммуноферментном анализе после дегельминтизации экспериментально зараженных собак 78
3. Заключение 80
Выводы 85
Практические предложения 86
Список литературы 87
Приложения 109
- Применение современных антигельминтных препаратов при токсокаро плотоядных животных
- Культивирование яиц и личинок Тохосага canis с целью получения экскреторно-секреторных антигенов
- Изучение активности и специфичности экскреторно-секреторных, и соматических антигенов личинок токсокар в ИФА
- Антигельминтная эффективность препарата «Барс спот-он» при экспериментальном токсокарозе собак и динамика антител к личинкам Тохосага canis после дегельминтизации
Введение к работе
Токсокароз распространен среди плотоядных животных во многих странах .мира,
В крупных іоролах наблюдается непрерывный рост численности собак и кошек. Плотоядные животные контаминируют окружающую среду яйцами токсо-кар. Механизмы передачи возбудителя токсокароза (алиментарный инвазионными яйцами, при каннибализме - личинками второй стадии, трапепла-ценгарный, трансмаммарный) В различных регионах Российской Федерации токсокароз установлен у 8,5-75% собак (Ф.Л, Ралуп, 1973, С.Д. Клочков, 1995, Ю.Э. Мыелинец и др,, 1998, А.Я Лысенко и др,, 1999, АЛ. Шинкаренко, 1999, Т.Г. Козырева, 1999, Л.Н. Во-личев, 2000, СИ, Калюжный, 2000, Н.В, Псаулова, МЛ1І Акбаев, 200L В.Б, Игнатьева, 2001, ИМ. Зубарева, 2001, А.В, Жабров, 2002, Н.С. Беспалова, 2003).
Щенки в нозрасте о\ рождения до 30 дней заражены токсокарами на 90-100%. Высокая напряженность эпизоотического иронесса является следствием пожизненного носительства личинок Тохосага canis и тран сплат янтарной передачей их во второй половине беременности (Л.Е, Верета, ОТ. Малышкова, 1984).
Токсокароз - зооантропоноз. Зараженные собаки представляют эпидемическую опасность. Патологические изменения в тканях и органах людей, вызванные личинками токсокар, известны под названием синдрома «larva migrans» (Г.А. Котельников, 19В4, Ю.А. Берсзапцсв, ВЛЗ. Кривенко, 1986).
Установлено, 410 личинки токсокар при миграции проникают в капилляры легких, затем в большой круг кровообращения, центральную нервную систему, обусловливая патологические процессы в головном мозге (К,И. Скрябин, A.M. Петров, 1964).
В Болгарин зарегистрировано 723 больных с мигрирующими личинками токсокар. Описан случай менингита, индуцированный Тохосага canis (R. Jeleva et aL, 1998).
Известны дне формы токсокароза человека: висцеральный и глазной. Заболевание протекает с рецидивами и длительными ремиссиями (Л,С, Ходасевич и др.? 1998).
В России и .за рубежом для сероэпидемиологического обследования на токсокароз предложен имму но ферментный метод и другие и ммуноди а гностические тесты. Антитела к личинкам токсокар обнаруживают в сыворотках крови людей при помощи тест систем для ИФА «Тиаекар» (НПО «Вектор бест», г, Новосибирск).
До настоящего времени недостаточно изучены особенности эпизоотологии, патогенез ларвального токсокароза собак, патоморфологическис изменения в тканях, продолжительность персистенпии и сохранения инвазионных свойств личинок токсокар у взрослых плотоядных.
За рубежом с 70 ггг прошлого столетии применяются различные диагностические гесты для выявления ларвального токсокароза.
В отечественной вессринарпой практике отсутствуют эффективные методы иммунодиагностики «larva migrans» при шкоокарозе плотоядных.
В качестве источника антигена при иммунодиагностике ларвального токсокароза можно использовать взрослые особи Тохосага canis (С.С. Huntley el al., 1963, К. 1. jeska, 1967, R,l\ Collins ct aL, 1975), личинки второй и третьей стадий (.T.N. Annen et al., 1975), экскреторно-секреторные продукты личинок (D.H. Savig-ny, 1975,1С Matsumura ct al., 1983).
В работах отечественных и иностранных исследователей под іЄ]Живается трудность, длительность и невысокая эффективность лечения синдрома «larva migrans» у человека и животных (Н, Тумальская, 1997, А,Н. Воличев, 2000, S. Coman el al., 2000).
Актуальным для ветеринарной практики является научное обоснование комплексных профилакіических и оздоровительных мероприятий при токсокарозе собак в питомниках служебного собаководства и в кинологических Центрах, включающих диагностические исследовании и дегельминтизации сук перед наступлением беременности.
Цель и задачи исследований.
Цель: Изучить распространение и особенности эпизоотологии токсокароза собак в г. Рязани, разработать параметры культивирования личинок токсокар и получения антигенов для иммуноферментного анализа, установить терапевтическую эффективность препаратов «Барс спот-он»? «Пирадек» при «larva migrans» Toxocara canis и против половозрелых нематод
6 Задачи:
1. Изучить распространение, возрастные и сезонные аспекты эпизоотологии токсокароза собак в г, Рязани.
2. Разработать параметры культивирования яиц и получения экскреторно-секреторных антигенов личиночных стадий Toxocara canis.
3. Установить активность и специфичность экскреторно-секреторных антигеном личинок второй стадии Toxocara canis и чувствительность ИФА при спонтанном и экспериментальном токсокарозе собак.
4. С помощью ИФА выяснить динамику антител к мигрирующим личинкам токсокар в опыте на спонтанно и экспериментально зараженных собаках.
5. Определить терапевтическую эффективность антигельминтньтх препаратов «Барс спот-оп» и «Пирадск» при спонтанном и экспериментальном токсокарозе собак при «larva migrans» Toxocara canis.
Научная новизна работы. Впервые изучено распространение токсокароза среди собак в г. Рязани. Установлены возрастные и сезонные аспекты эпизоотологии токсокароза, динамика эпизоотического процесса по годам. Составлена схема паразитарной системы «Toxocara canis - плотоядные семейства Canidae». Разработаны параметры культивирования яиц и личинок токсокар и получения экскреторно-секреторных антигенов. Выяснены активность, специфичность экскреторно-секреторных антигенов личинок второй стадии токсокар в ИФА с иммунными кроличьими и другими сыворотками, Б опыте на щенках, спонтанно и экспериментально зараженных яйцами токсокар, установлена чувствительность ИФА. Изучена динамика антител к личинкам Toxocara canis при спонтанном и экспериментальном токсокарозе, а также после дегельминтизации.
Впервые при экспериментальном токсокарозе в период «larva migrans» испытан с положительным эффектом комплексный препарат «Барс спот - он» и определена высокая эффективность антигельминтика «Пирадек» против кишечных форм токсокар разного возраста.
Теоретическая и практическая значимость. Подробно (по часам и дням) изучены процессы бластогенеза яиц и гистогенеза личинок Toxocara canis, а также продолжительность жизни личинок второй стадии in vitro при оптимальных условиях культивирования.
Результаты изучения эпизоотологии токсокароза собак, разработанные параметры культивирования яиц и личинок Тохосага canis и приготовления экскреторно-секреторных антигенов имеют большое значение для совершенствования диагностики и оптимизации профилактических мероприятий.
Разработанные экскреторно-секреторные антигены (ESAgTox) рекомендуется использовать в иммуноферментном анализе при диагностике токсокароза плотоядных животных. Иммунодиагностический тест с ESAgTox антигеном личинок токсокар может применяться для выявления специфических антител к мигрирующим и инкапсулированным личинкам Тохосага canis у собак до наступления беременности.
Результаты испытания препаратов «Барс спот - он» и «Пирадек» (производство ООО «Ветзащита») с целью профилактики токсокароза следует включить в схему комплексных профилактических и оздоровительных мероприятий при паразитарных болезнях собак.
Результаты испытаний комплексного препарата «Барс спот -он» включены в инструкцию по применению. Регистрационный номер ПВР-2-3.7/01973 (утверждено Россельхознадзором 18.06.2009 г.).
На защиту выносятся следующие положения:
1. Распространение и особенности эпизоотологии токсокароза собак в г. Рязани.
2. Разработка параметров культивирования яиц и личинок Тохосага canis.
3. Приготовление экскреторно-секреторных антигенов личинок токсокар с целью использования в иммуноферментпом анализе при диагностике токсокароза в период «larva migrans».
4. Активность и специфичность экскреторно-секреторных антигенов личинок Тохосага canis при тестировании с иммунными сыворотками. Чувствительность иммуноферментного анализа при диагностике экспериментального и спонтанного токсокароза собак.
5. Терапевтическая эффективность препарата «Барс спот -он» при спонтанном и экспериментальном токсокарозе в период «larva migrans» и антигельминти ка «Пирадек» против кишечных форм токсокар разного возраста. Контроль эффективности антигельмиптпого препарата «Барс спот - он» с помощью иммуип-ферментного анализа (ИФА).
Пути реализации. Результаты исследований можно включить в схему научно-обоснованных профилактических и оздоровительных мероприятий при токсо-карозе плотоядных животных и в учеб но-методическую литературу для ветеринарных специалистов и студентов факультетов ветеринарной медицины вузов.
Апробация работы Материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на следующих конференциях и конгрессах:
L Научно-практическая конференция «Инновации молодых ученых и специалистов - национальному проекту «Развитие АПК» (Рязань, РГСХА, 2006);
2. Научная конференция «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, ВИГИС, 2008, 2009);
3. Международная научная конференции молодых ученых (Киров, ВГСХА, 2008).
4. Московский международный ветеринарный конгресс (Москва, 2009),
Публикации. По теме диссертации опубликовано шесть научных работ, в том числе одна в издании, рекомендованном ВАК Российской Федерации для публикации материалов по кандидатским диссертациям.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 114 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих материалы и методы и 4 главы результатов исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Библиографический список нредставлен 194 источниками, из них отечественных - 100, иностранных - 94, Работа иллюстрирована 16 таблицами и 21 рисунком.
Применение современных антигельминтных препаратов при токсокаро плотоядных животных
Одновременно с использованием аллергического метода разработана серологическая диагностика токсокароза. Многие исследователи (Р.Ц, Желева, 1975 б; С,С. Huntley et аЦ 1965; ST. Fernando, 1968; Т. Jalayer 1969; J. Lamina, 1970; J. Lapier, C. Holler, 1971; J.L Dieonza, J972; R.H. Cypess et ah, 1977) доказали высокую диагностическую эффективность при токеокарозе реакции двойной иммуно-диффузии по Оухтерлопи.
Т, Jalayer (1969) при исследовании сывороток крови кроликов, экспериментально зараженных 5000 яиц Т. canis, при использовании в качестве антигена экстракта взрослых токсокар получил отрицательный результат РИД. По данным J. Fribouley-Durel et al. (1976). сыворотки кроликов, зараженных по 1000 яиц Т. canis, не показывают положительный результат РИД с антигенами-экстрактами из взрослых особей, а сыворотки кроликов, зараженных 10000 яиц, положительно реагируют, начиная с четвертой недели опыта. J.J. Diconza (1972), заражая крыс инвазионными яйцами Т.canis J дозе 101)0 экз., получил положительный результат s реакции иммуподаффузии с личиночным антигеном с 21 по 183 дни опыта (срок наблюдения). E.L. Jeska (1969) в реакции имму но диффузии с цельным экстрактом Т. canis исследовал сыворотки крови спонтанно зараженных токсокарами собак и экспериментально ипвазированных A. suum кроликов. В опытах, выполненных в гомологичной и гетерологичной системах, установлено наличие перекрестных реакций между Л. suum и Т. canis. Аналогичные результаты получены F.R. Zyngier (1976) при исследовании сывороток крови экспериментально зараженных Т. canis и А. suum кроликов и макак-резусов. В качестве антигена использованы экстракты взрослых особей Т. canis и A.suum. Во всех случаях иммунологические реакции оказались положительными в высоких титрах.
В зарубежной литературе описаны ПОПЫТКИ использования для диагностики экспериментального токсокароза реакции коль це преципитации (P. Todorov, D.P. toyanov, 1966; W. LaparL, 2. Prsyjaikowski, 1976; Z. Prsyjatkowski et al., 197). W, Lapart, Z, Prsyjaikowski (1976) диагностировали экспериментальный ток-сокароз у мышей при помощи реакции кольце преципитации, применяя антиген из личинок Т. canis. Положительные результаты серологического тестирования установлены на шестой день после заражения, что в последующем подтверждено обнаружением личинок в легких и печени лабораторных животных. Наиболее четкие результаты отмечены на 28 день после заражения. Специфичность и чувствительность реакции колъцелреципитации зависит от массивности заражающей дозы (Z. Prsyjatkowski et al. (1978).
В качестве метода серодиагностики токсокароза используется реакция мик-ропреішттитации на живых личинках (P. Todorov, D.P. Sloyanov, 1966; J. Lamina, 1974; P. Stevenson, D.E. Jacobs, 1974). По наличию преципитата па экскреторно-секреторных отверстиях личинок при микроскопическом исследовании судят о положительном результате, т,е, о присутствии антител в сыворотках крови,
P. Stevenson, DJi. Jacobs (1974) заражали морских свинок инвазионными яйцами Л, siuim, Т. canis, Т. cati, Toxascaris leonina и исследовали сыворотки кропи в реакции микропрециіштации па личинках токеокар. Положительный результат показали все инвазированные Т. canis свинки. У морских свинок, зараженных нематодами другого вида, антитела не обнаружены, иногда при тестировании этих же сывороток крови преципитаты отмечены на головном конце.
С целью разработки метода дифференциальной диагностики висцерального токсокароза и миграционного аскариоза испытана реакция «иммунного прилипания» (М. Orlandi, U. Bottone, 1978). Для этого личинки второй стадии Т. canis, обработанные комплементом и гомологичной антисывороткой кролика, зараженного Т. canis или A. suiim, инкубировали 30 минут при 37=С в смеси с 3 % эритроцитами здоровых доноров группы А. Установлено прилипание эритроцитов к кутикуле личинок Т. canis, обработанных гомологичной аитисыворогкой, и отсутствие реакции на личинках, обработанных антисывороткой к A. smim, что указывает на специфичное! ь метода.
Оптимальными параметрами специфичности и чувствительности по сравне нию с реакциями преципитации характеризуется реакция агглютинации. Особое место среди серологических тестов этого типа занимает реакция непрямой ге-магглютинации (РИГА). Ряд авторов, изучавших диагностическую ценность РНГА, использовали формалинизированпые по методу Вайибаха (1959) эритроциты, обработанные танином (I. Tarik et al., 1970; Р.Ц. Желсва, 1975 а), а затем сенсибилизированные антигеном. В качестве антигена в большинстве случаев использовали цельный экстракт взрослых токсокар.
По наблюдениям R.C Jung (1958), у животных, зараженных личинками аскарид и токсокар, реакция непрямой гемагглютииации недостаточно специфична. ГЛ. Aljeboori et al. (1970) при исследовании в РНГА сывороток крови зараженных Т. canis кроликов и обезьян получили примерно одинаковые титры антител как с аскаридным, так и с токсокаровым экстрактами имаго гельминтов. Аналогичный результат получен Р.Ц. Желевой (1975 а).
Результаты исследований указывают на трудность дифференциальной диагностики ларвального токсокароза и аскариоза с применением цельного экстракта нематод в РНГА. Более специфична реакция агглютинации при использовании в качестве антигена кислоторастворимой фракции экстракта взрослых особей токсокар и аскарид (Р.Ц. Желева, 1976).
Максимально высокие показатели специфичности и чувствительности реакции непрямой гемагглютииации отмечены при использовании в качестве антигена экскреторно-секреторных продуктов личинок Т. canis второй стадии (D.H. Savigny, I.R. Tizard, 1977). При заражении кроликов Т. canis в дозе 10 личинок на 1 кг массы тела специфические антитела выявлялись на 13-й день опыта, в дозе 100000 — на 4-й день. Сыворотки крови кроликов, зараженных личинками A. suum в дозе 100000, не показали положительный результат в течение всего срока наблюдения (45 дней).
Для диагностики токсокароза используется реакция латексагглютииации, в которой антигеном служит цельный экстракт половозрелых особей Т. canis. Однако чувствительность и специфичность этого теста недостаточно высоки (С.С. Huntley et al., 1965).
Помимо тестов, основанных на принципах преципитации и агглютинации, для иммунодиагностики токсокароза рекомендована реакция связывания комплемента (S.T. Fernando, 1968; Т. Jalayer, 1969; F.R. Zyngter, 1976: J, Fribouley-Durot et al., 1976; M.P. Upadhyay et al., 1980) с использованием в качестве антигена цельного экстракта из имаго.
Культивирование яиц и личинок Тохосага canis с целью получения экскреторно-секреторных антигенов
В первые три дня после заражения, каких-либо симптомов, свойственные для токсокароза не наблюдали. На четвертый день зарегистрировано повышение аппетита, а к 15-17 дн. - отказ от корма. С 13 дня олмта отмечены беспокойство, угнетение, тускл ьтй и взъерошенный шерстный покров, анемичность слизистых оболочек, учащение пульса и дыхании, ослабление тонов сердца, частый сухой кашель, болезненная реакция при пальпации грудной клетки и брюшной стенки, диарея, в двух случаях - нарушение координации движения. Зараженные щенки заметно отставали в росте и развитии от контрольных животных. К 28 дню опыта живая масса подопытных животных уменьшилась и среднем в 2,1 раза по сравнению с контролем и составила 2150 г (в контрольной группе в среднем - 4600 г). Начиная с 23 дин опыта, у двух щенков наблюдали парез задних конечностей и неадекватные ответные реакции, отказ от корма. К 48 дню после заражения пали все животные подопытной группы.
При натоло го анатомическом исследовании: легкие воздушные, неоднородно окрашены (бледно-розового и темно-красного цвета), гладкие блестящие. Под плеврой множественные кровоизлияния. На разрезе ткань легких сочная, крове-наполнена. Во всех долях легких множественные, ограниченные, сероватые точечные очажки до 1-2 мм в диаметре, у животных (доза заражения 150-200 яиц I. canis) с зоной гиперемии до 2-3 мм в диаметре.
Печень несколько увеличена в объеме, с поверхности и на разрезе - пестрый мозаичный вид. Наряду с участками нормальной красно бурой окраски имеются множественные очаги желто вато-бел ого цвета неправильной формы; среди них встречаются участки темно-красного цвета. Консистенция печени дряблая. На разрезе соскоб обильный. В тонком отделе кишечника щенков обнаружено до 18 токсокар различного размера, слизистая оболочка гиперемирована, набухшая и рыхлая. Гиперемии неравномерная, очаговая. Складки кишечника утолщены, имеются диффузные кровоизлияния. На поверхности слизистой оболочки значительное количество густого тягучего полупрозрачного экссудата. У щенков зараженных 200 яиц Т. canis наблюдается инвагинация петель кишечника.
Суспензию яиц Toxocara canis выдерживали в помещении лаборатории при средней суточной температуре +22С. относительной влажности воздуха 85 % и естественном освещении. Культивирование яиц токсокар выполняли в среде, содержащей і % глгота-мина, и для контроля - в физиологическом расі лоре. Наблюдение за жизнедеятельностью личинок второй стадии токсокар осуществляли через каждые 48 часов. Через одни сутки после начала культивирования в глютамин содержащей среде в 15 из 100 яиц отмечен бластогенез. С одной стороны бластомера видно просветление. Через трое суток в бластомерах 9 из 100 яиц образовалась перетяжка в центре, а в двух яйцах бластомеры поделились на два. Через семь суток по два бластомера установлено у 2753 % яиц в препарате, а у 9 % их число достигало 4-5. На II день бластогепез наблюдался у 50 % яиц. В 16,7 % случаев число бла-стомеров составляло 8-10. К 17 дню их количество у большинства яиц достигло 16, а на 19 сутки у 26 % яиц отмечен переход к гистогенезу. Формирование личинок началось на 21 день, что установили по контурам клеточной массы. В это же время общее число развивающихся яиц достигло 98 %, оставшиеся 2 % яиц разрушились. Спустя еще трое суток, т.е. на 24 день в 3 % случаев личинки полностью сформировались и проявляли двигательную активность внутри яиц. Через 30 суток с начала опыта 31 % яиц содержал жизнеспособные личинки первой стадии. Такое несинхронное развитие яиц и личинок связано с тем, что не все яйца, находящиеся в матке нематоды одинаково зрелые При снижении температуры в помещении и солнечной активности развитие личинок существенно замедляется. При культивировании it физиологическом растворе по истечении десяти суток с начала опыта 97,5 % яиц разрушилось,
В основном опыте осадок, содержащий инвазионные яйца токсокар, отстояли в течение 12 часов, надосадок удалили при помощи пипетки. К осадку добавили искусственный желудочный сок, состоящий из панкреатина, спиной желчи и 1 % соляной кислоты. Обработку яиц токсокар искусственным желудочным соком проводили в термостате при температуре 37,5С в течение 8-Ю часов. После освобождения личинок нематод из яйцевых оболочек их отделяли от жидкости путем центрифугиролания при 2500 об./мин. в течение 15 мин. и проводили дальнейшее культивирование в вышеуказанной среде. При микроскопическом исследовании после центрифугирования в осадке содержались подвижные личинки токсокар второй стадии. Личинки нематод в пробирках с глюъаминовой средой с целые получения экскреторно-секреторных антигенов содержали при температуре 37-38С (в термостате) на протяжении одной недели, К концу этого времени личинки нематод проявляли слабую жизнедеятельность. Через семь суток суспензию, содержащую личинок токсокар второй стадии с экскреторно-секреторными антигенами, профильтровали через капрон и отцентряфу г провали при 3000g 45 мин., надосадок (общий экскреторно-секреторный антиген) собрали в пластиковые контейнеры «Ependorf» объемом по 5 мл . Всего получено 50 мл экскреторно-секреторнот антигена личинок Тохосага canis.
Изучение активности и специфичности экскреторно-секреторных, и соматических антигенов личинок токсокар в ИФА
В городской ветеринарной станции и трех ветеринарных клиниках г. Рязани проведены исследования по изучению эффективности противопаразитарного препарата «Барс спот-он» (ивермектин + празиквантел).
Испытания выполнены в летний и осенний сезоны года на собаках и кошках, зараженных гельминтами и паразитическими членистоногими. Собраны подробные анамнестические данные о животных. Препарат «Барс спот-он» применяли it соответствии с инструкцией, разработанной сотрудниками ООО «Ветзащита» (г. Москва). Эффективность устанавливали по результатам клинического осмотра и лабораторных исследований зараженных и обработанных препаратом собак и кошек. «Барс спот-он» наносили в область затылочно-атлантного сочленения или между лопатками в рекомендуемой дозе (L пипетка на 2-5 кг массы тела), тщательно втирали с целью быстрой резорбции. Копроовоскопическис исследования 29 спонтанно зараженных токсокарами беспородных щенков 2,5-4 мес. показали, что на 7-8 дни после дегельминтизации животные полностью освободились от половозрелых токсокар. В фекалиях щенков на 2-3 дни после обработки обнаружено от 3 до 10 половозрелых особей Тох-ocara canis. У контрольних ледегельмиптизіфованньтх 8 щенков в течение опыта и после его завершения в фекалиях обнаружены яйца токсокар. Результаты показаны в таблице 14. При применении препарата «Барс спот-он» 7 котятам 2-5 мес. половозрелые токсокары обнаружены в фекалиях трех котят на 3 и 4 дни после дегельминтязадии. Исследования животных после дегельминтизации проводили так же, как и при токсокарозе собак. По результатам наблюдений и исследований выяснена 100 % эффективность препарата «Барс спот-он» при имагинальном токсокарозе собак и кошек.. Кроме того, на 5 безнадзорных собаках 2-7 лет выполнен опыт по изучению оффективпости «Барс-спот он» при токсаскариозе. После нанесения препарата в область холки у двух собак на второй день в фекалиях обнаружены нематоды Toxascaris leonina. Таким образом, экстенсзффективность препарата «Барс спот-оп» при имагинальном и ларвальном токсокарозе я двух опытах составляет 100 %,
У подопытпьтх собак и кошек при применении препарата «Барс спот - он» в рекомендуемых дозах какие-либо симптомы, характеризующие интоксикацию и нарушение функций кожи, центральной нервной системы и сердечно-сосудистой системы не отменены.
Испытание эффективности препарата «Пирадек» (пирантел + иммуномодуля-тор) против половозрелых токсокар, а также изучение его овоцидного действия проводили на спонтанно зараженных токсокарами щенках 1,5 мес. возраста. Всего дегельминтизаровали 15 спонтанно зараженных щенков. Отмечено быстрое нема-тодоцидное воздействие препарата. Токсокары обнаружены в фекалиях всех 15 дегельминтизированных щенков через 6-9 часов после дегельминтизации (ЭЭ=100%).
Половозрелых самок токсокар, полученных через 6 часов после дегельминтизации суспензией «Пирадек», вскрывали в условиях лаборатории и выделяли из матки яйца. В последующем суспензию яиц токсокар культивировали в среде, содержащей глютамин. Спустя один месяц из 265 яиц только в трех сформировались инвазионные личинки, в 12 установлен неполный бластогенез (3-8 бластоме-ров в конце срока культивирования) и две деформированные, не проявляющие двигательной активности личинки. Результаты опыта подтверждают высокий овоцидный эффект препарата «Пирадек» при имагинальном токсокарозе. Спустя 25 дней после дегельминтизации в фекалиях собак вновь обнаружили яйца токсокар, что свидетельствует об отсутствии ларвоцидного действия препарата «Пнра-дск».
Окончательно результаты дегельминтизации препаратом «Пирадек» устаная-ллпали через две недели на основании копроовпекопических исследований. Яйца токсокар не обнаружены ни у одного животного из опытной группы. Консольные недегельмиытизир о ванные животные - аналоги (5) оказались ишшировапы половозрелыми токсокарами на протяжении всего опыта и после его завершения. Таким образом, экстенеэффективность препарата «Пирадек» при токсокарозе собак составляет 100 %. Результаты приведены в таблице 15.
С помощыо иммуно ферменти ого анализа изучали динамику титров антител к личинкам токсокар в сыворотках крови собак, спонтанно и экспериментально зараженных инвазионными яйцами Тохосага cams, до и после дегепьминтизиции препаратом «Барс спот-он» (схема опыта №1). ИФА выполняли с экскреторно-секреторными и соматическими антигенами личинок второй стадии токсокар. До проведения опыта у спонтанно зараженных токсокарами щенков в ИФА установили титры специфических антител от 1:400 до 1:1600.
Антигельминтная эффективность препарата «Барс спот-он» при экспериментальном токсокарозе собак и динамика антител к личинкам Тохосага canis после дегельминтизации
С 13-17 дп. после заражения отмечены беспокойство, угнетение, тусклый и взьеровіеїшьій шерстный покров, анемичность слизистых оболочек, учащение пульса и дыхания, ослабление тонов сердца, частый сухой кашель, болезненная реакция при пальпации грудной клетки и брюшной стенки, диарея, в двух случаях - нарушение координации движения. Зараженные щенки заметно отставали по массе тела от контрольных животных (к 27 дню опыта - в среднем в два раза по сравнению е контролем).
При патологоанатомическом исследовании установлена жировая дистрофия печени с выраженными небольшими очагами некроза, очаговая геморрагическая пневмония с участками эмфиземы и ателектаза, катарально-геморрагический энтерит. В тонком отделе кишечника щенков обнаружено от 5-8 до 18 токсокар различного размера. V двух щенков отмечена инвагинации кишечника.
Сим атомы болезни, а также характерные патологические изменения и органах экспериментально зараженных Тохосага canis щенков подтверждаю! сенсибилизирующее и токсическое воздейепше метаболитов, экскреторно-секреторных продуктов мигрирующих личинок токсокар.
Большое значение в комплексе профилактических и оздоровительных мероприятий имеет диагностика ларвального токеокароза плотоядных животных. Наиболее эффективны иммунологические методы диагностики, позволяющие обнаруживать в сыворотке крови антигены личинок токсокар, антитела к ним, а также циркулирующие иммунные комплексы.
С целью получения антигенов для иммунодиапюстичееких тестов модифицирован метод культивирования личинок токсокар и усовершенствован способ шдсления укскреторно-секреторных антигенов. Культивирование яиц токсокар выполняли в среде, содержащей 1 % глютамина, а для контроля - в физиологическом растворе. Экскреторно-секреторные антигены получали из культуралыюй жидкости через 5-7 дней после выхода личинок токсокар из яйцевых оболочек.
Па основе HSAgTox и SomAgTox личинок второй стадии Toxocara canis разработаны иммунореагенты для серологическою метода диагностики — им.муно-ферментиого анализа (ИФА). При изучении специфичности полученных диагностических препаратов установлен диагностический титр для ИФА — 1:200,
На основании тестирования сывороток крови от 12 экспериментально и 48 спонтанно зараженных Toxocara cams щенков, а также при контроле грех серий собственных антигенных препаратов установлены высокая активность и оптимальные показатели специфичности экскреторно-секреторных антигенов личинок второй стадии токсокар. С 4 по 24 дни после экспериментального заражения щенков инвазионными яйцами Toxocara canis наблюдается увеличение уровня специфических антител к HSAgTox. Аптителогенез обусловлен стимуляцией антигенами личинок третьей стадии токсокар клеточно-гуморалышх факторов иммунитета, макрофаг - Т - В-клеточным взаимодействием и формированием клоков антителопродуцирующих плазматических к лето к. Результаты изучения специфичности, чувствительности и информативности ИФА при экспериментальном и спонтанном токсокарозе собак но общепринятой схеме позволили определить диагностическую эффективность метода. Высокий уровень антител к Toxocara canis у щепных собак и трансплацеп-тарная передача возбудителя связаны с влиянием циркулирующего в крови хо-рионического гормона, способствующего разрушению капсул, освобождению и активной мифатщи личинок токсокар. Изучение терапеш ических свойств препаратов «Баре снот-он» и «Пирадек» показало, что антгельмиптпые препараты її разработанных дозах при однократном обработке зараженных токсокарами собак показывают 100 % эффективность против половозрелых нематод.. На седьмой день после дегельминтизации вышеуказанными алтигельмин т-ными препаратами в фекалиях животных всех подопытных групп яйца Toxocara canis не обнаружены. S3 Изучение динамики титров антител в иммупофермеитном анализе у щелков, экспериментально зараженных и дегельминтизирояалных препаратами «Барс спот-он» и «Пирадек» позволило установить уменьшение титров специфических антител в сыворотках крови на 28 день после заражения, что обусловлено гибелью половозрелых токсокар, их личинок и элиминацией антигенов из тканей животных (дегельминтизация на 14 день после заражения). Полученные данные подтверждают возможность и перспективность использования иммуноферм с нтн о го анализа для диагностики ларваяьиого токсокароза собак и контроля эффективности дегельминтизации. Токсокароз - относительно новая проблема практического здравоохранения. Решение ее в большой степени зависит от целенаправленной совместной работы медицинской и ветеринарной служб, а также внедрения в практику новых методой диагностики, лечения и профилактики. Материалы по изучению эпизоотологии токсокароза собак, разработке антигенных препаратов для иммулодиагпоетических тестол, а также результаты испытания а і гш ге л ым и нтных препаратов, обладающих ларвоцидным и овоцидным действием, могут использоваться в комплексе лечебно-профилактических и оздоровительных мероприятий в питомниках служебного собаководства, кинологических центрах, в административных жилых районах городов сотрудниками управлений ветеринарии и Центра Госсанэпиднадзора.
Важным является проведение семинаров и бесед с владельцами собак, обеспечение гельминтологической ірамотности.
