Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Распространенность пародонтита 10
1.2. Этиология и патогенез заболеваний пародонта. 12
1.2.1. Роль микрофлоры в инициации воспаления в пародонте 12
1.2.2. Факторы иммунологической защиты макроорганизма при заболеваниях пародонта . 13
1.3. Системные факторы в этиологии и патогенезе пародонтита. 16
1.3.1. Сахарный диабет 17
1.3.2. Курение. 18
1.3.3. Генетический фактор 20
Глава 2. Материал и методы исследования.
2.1... Объекты, объем и условия исследования. 29
2.2. Клинические методы исследования 30
2.2.1. Определение пародонтологического статуса 30
2.2.2. Забор клинического материала 31
2.2.3. Этапы пародонтологического лечения 31
2.3. Метод генотипирования 32
2.3. Лабораторные методы исследования. 34
2.4.1. Выделение ДНК из образцов венозной крови 35
2.4.2. Вычисление концентрации ДНК. 36
2.4.3. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) и его разновидности 36
2.4.4. Условия проведения ПЦР для определения полиморфизма. 41
2.4.5. Определение генетического полиморфизма 43
2.5. Статистический анализ. 50
Глава 3. Результаты собственных исследований.
3.1. Демографические и клинические параметры опытной и контрольной групп 50
3.2. Результаты исследования, полученные при генотипировании. 52
3.2.1. Результаты исследования, полученные при ICAM-1 генотипировании 52
3.2.2. Результаты исследования, полученные при MLF-173 генотипировании 52
3.2.3. Результаты исследованшь, полученные при hBD-І генотипировании. 52
3.2.4. Результаты исследования, полученные при TIMP-3 генотипирование. 52
3..3. Результаты исследования, полученные при генотипировании пациентов с сахарным диабетом и без него, ив контрольной группе 54
3.3.1. Результаты исследования, полученные при ICAM-1 генотипировании пациентов с сахарным диабетом и без него, и в контрольной группе 54
3.3.2. Результаты исследования, полученные при МП7-173 генотипировании пациентов с сахарным диабетом и без него, и в контрольной группе 64
3.3.3. Результаты исследования, полученные при ТТМР-3 генотипировании пациентов с сахарным диабетом и без него, и в контрольной группе 70
3.4. Отдаленные результаты собственных исследований 82
3.4.1. Результаты исследования, полученные при измерении глубины пародонтального кармана и кровоточивости десны среди пациентов с сахарным диабетом и без сопутствующей патологии 83
Глава 4. Обсуждение результатов исследования 88
Выводы 97
Практические рекомендации 97
Список литературы 98
Приложение 120
- Факторы иммунологической защиты макроорганизма при заболеваниях пародонта
- Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) и его разновидности
- Результаты исследования, полученные при ICAM-1 генотипировании пациентов с сахарным диабетом и без него, и в контрольной группе
- Результаты исследования, полученные при ТТМР-3 генотипировании пациентов с сахарным диабетом и без него, и в контрольной группе
Введение к работе
Актуальность исследования
Воспалительные заболевания пародонта остаются в настоящее время одной из важных и наиболее сложных проблем в современной стоматологии. По результатам анализа данных ВОЗ, собранных в 35 странах у лиц в возрасте 35 - 44 лет, в 7 странах отмечена очень высокая (свыше 75%), в 13 странах -высокая (40 - 75%) и в 15 странах - умеренная (менее 40%) распространенность заболеваний пародонта.
Современный уровень научных знаний в области пародонтологии позволяет свидетельствовать в пользу ведущего значения воспаления в тканях пародонта. Роль микрофлоры в инициации пародонтита очевидна, однако, в: настоящее время определение ее вида и степени патогенносте оказывается недостаточным для объяснения различий в тяжести течения заболевания. Выраженность воспалительной реакции в значительной мере определяется возможностями макроорганизма противостоять воздействию на него патогенной микрофлоры.
В последние годы в зарубежной литературе стали появляться публикации, посвященные ряду факторов, которые не вызывают заболевание как таковое, но способны усугубить течение воспалительного процесса, делая человека более восприимчивым к развитию пародонтита. Так, получены первые результаты по идентификации генетических маркеров пародонтита: интерлейкина-1 (K-S.Komman с соавт. 1997, B.Ehmke с соавт. 1999, PJSLPapapanou с соавт. 2000, MJ.McDevitt с соавт. 2000), интерлейкина-2 (R.M.Scarel-Caminaga с соавт. 2002), витамин Д рецептора (J.L.Sun с соавт. 2002), иммуноглобулин G Fc рецептора (TJCobayashi с соавт. 2000, 2002; N.Sugita с соавт. 2001) и фактора некроза опухоли-я (J.F.Wilson с соавт. 1992, 1993).
Однако вопросы взаимосвязи генетического полиморфизма с особенностями течения воспалительного процесса и предрасположенностью к развитию пародонтита требуют дальнейшего изучения в целях разработки; новых методов диагностики и лечения этого заболевания;
Целью: настоящего исследования является повышение эффективности ранней диагностики и лечения воспалительных заболеваний пародонта на основании изучения влияния генетического полиморфизма человека на течение воспаления в пародонте В рамках данной проблемы были поставлены-следующие задачи:г
Ь. G помощью клинических, рентгенологических и функциональных методов исследования оценить пародонтологический статус; больных с хроническим генерализованным пародонтитом и здоровых лиц.
21 Двойным слепым методом провести изучение полиморфизма генов: IGAM-1, МШ-173; TIMP-3, hBD-І у основнойш контрольной группы.
3; Провести оценку влияния генетического полиморфизма на выраженность воспаления: в пародонте.
4. Определить возможные критерии раннеш диагностики воспалительных заболевании пародонта.
Научная новизна.
Впервые с помощью ПЦР осуществлено ІСАМ-1, MIF-173, ТІМР-3 и hBD-І генотипирование больных с хроническим? генерализованным пародонтитом:
Проведена оценка влияния генетического статуса пациентов;; на предрасположенность к развитию воспалительных заболеваний пародонта, а также на особенности течения заболевания.
Проанализировано сочетанное действие генетического фактора и некоторых других факторов риска развития пародонтита (сахарный диабет, курение); а также влияние на их работу возраста и пола пациента.
Практическая ценность работы;
Продемонстрирована эффективность ПНР метода для определения генетического статуса человека:
Определена нецелесообразность использования ICAM-1 (-241G/Av и 469ТУС), ME-L73j. TIMP-3 (-899Т/А, -915Т/С и -1296Т/С ш ftBD-V генетического полиморфизма в качестве маркера развития воспалительных заболеваний пародонта.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Пептиды IGAM-1 (молекула межклеточной адгезии-1), MIF (фактора ингибирующий миграцию макрофагов) hBD-І (человеческий Р дефензин-1») и ТГМР-3 (тканевой ингибитор матриксной металлопротеиназы-3),. обнаруженные в тканях пародонта, участвуют в иммунологическом ответе при; их воспалении;
2. Полимеразная цепная реакция в различных ее вариантах является? эффективным методом определения генетического статуса пациентов с воспалительными заболеваниями пародонта:
3. На основании проведенного исследования и анализа отдаленных результатов показано, что генетический статус пациента с хроническим генерализованным пародонтитом по 1С AM-1, MTF, hBD-1 иИМР-3 генам не оказывает влияния на особенности течения заболевания.
4. Полиморфизм ICAM-1, MLF, hBD-І и Т1МР-3 генов; не может быть предложен в качестве маркера предрасположенности человека к развитию пародонтита.
Внедрение результатов исследования в практику.
Ряд подходов, разработанных в диссертационном исследовании, составил методологическую основу специализированных направлений учебного процесса на кафедре пародонтологии и гериартрической стоматологии ГОУ ВПО «МГМСУ Росздрава».
Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на Берлинском пародонтологическом конгрессе EUROPERIO IV (Берлин, 2003 г.); на совместном заседании кафедры госпитальной терапевтической стоматологии и кафедры факультетской хирургической стоматологии ГОУ ВПО «МГМСУ Росздрава» 30 июня 2005 г.
Список работ по теме диссертации.
1. V. Pochtarenko, T.Beikler, B.Ehmke, U.Peters, T.Flemmig. ICAM-1 gene polymorphisms and periodontitis (Полиморфизм ICAM-1 гена и пародонтит) IIJ Clin. Periodontal. - 2003. - №3 (30). - P.44-45.
2. Почтаренко В.А., Янушевич O.O., Приор К. Генетический статус человека как фактор развития воспалительных заболеваний пародонта // Пародонтология. - 2005. — № 4. — С. 8-11.
3. Почтаренко В.А., Янушевич О.О., Приор К. Влияние ICAM-1 (-241G/A и-469Т/С) генного полиморфизма на развитие пародонтита // Ортодонтия. — 2005. -№ 4 (32). - С. 56-59.
Факторы иммунологической защиты макроорганизма при заболеваниях пародонта
Роль микрофлоры в инициации пародонтита очевидна, однако выраженность воспалительной реакции в значительной мере определяется возможностями макроорганизма: противостоять воздействию на него патогенной микрофлоры, (RJiGenco&J.Slots, 1984; R.G.Page, 1991; G.J.Seymour et al., 1991, 1993). Одно из ведущих мест при развитии воспалительных заболеваний пародонта принадлежит иммунологической системе тканей полости рта; Н.К.Логанова и А.И;Воложин, 1995, отмечают, что данная система тесно связана с общим иммунитетом, но и обладает значительной автономией;
Весь инфекционный процесс, протекающий в тканях пародонта, по признаку доминирующего участия в нем различных форм иммунной защиты можно разделить на два этапа:
Первый, ранний этап; представляет собой немедленную реакцию факторов неспецифической защиты, тогда как второй; более поздний этап,, характеризуется включением в реакцию защиты от патогена участников-специфической иммунной защиты с последующим формированием памяти о» первой встрече с возбудителем.
Первыми и существенным барьером на пути проникновения» микроорганизмов является-эпителиальный покров, который является не только механической преградой; но и источником ряда химических соединений, либо? убивающих микробов, либо подавляющих их рост (лизоцим; антибактериальные пептиды, и т.д.). В качестве факторов, неспецифической защиты после проникновения патогена в субэпителиальные ткани выступают фагоцитирующие клетки, комплемент (активируемый по альтернативному пути); цитокины макрофагального происхождения. Основными цитокинами, уча(ггвующими в раннем ответе, являются интерлейкины: -1, -6; -8, -12 (ИЛ-1, -6, -8. -12) и фактор некроза опухоли - а (ФНО-а). Цитокины способствуют усилению сосудистой проницаемости, что обеспечивает активное поступление в очаг воспаления комплимента, антибактериальных белковых факторов, а также усиление диапедеза дополнительных фагоцитарных клеток (GJiSeymour&E.Gemmell, 2001).
В случае преодоления патогенном барьера, создаваемого факторами неспецифической защиты, создаются условия для формирования специфического иммунного ответа.
Первый этап в развитии специфического иммунного ответа связан с активацией Т-клеток в ближайшем к месту проникновения патогена лимфатическом узле. Антиген в лимфоидной ткани захватывается специализированными антигенпрезентирующими клетками (макрофаги, дендритные клетки, В-клетки); с тем, чтобы представить фрагменты антигена на поверхности эпителиальных клеток для распознавания Т-клетками (CW.GutleretaL,1999).
Т-клетки подразделяются на две субпопуляции: цитотоксическиё Т-клетки (GD 8+): Т-киллеры и Т-супрессоры, и Т-хелперы (CD 4+): ТН1- клетки воспаления и ТН2-хелперы. Распознавание антигена на поверхности В1 лимфоцитов является сигналом к трансформации С0 4+клеток в ТН2—хелперы, которые обеспечивают усиление продукции антител. Антитела же синтезируются плазматическими клетками, в которые превращаются В-лимфоциты, получив сигнал от ТН2 —хелперов.
Антитела выполняют 3 основные задачи. Во-первых, они нейтрализуют антиген (особенно важно при обезвреживании бактериальных токсинов). Ъо-вторых, выступают в качестве опсонинов т.е. специфически взаимодействуя с антигенными эпитопами бактериальной стенки, создают условия для лучшего захвата патогена фагоцитарными клетками, которые несут на своей поверхности рецепторы к Fc-фрагменту иммуноглобулинов. И, наконец, комплекс антигена с антителом активизирует белки системы комплемента, которые в свою очередь, формируют поры в клеточной стенке антигенов, определяя их гибель.
По данным целого ряда авторов пародонтит характеризуется существенным ослаблением факторов неспецифической и специфической защиты местного иммунитета полости рта (Т.И.Лемецкая, 1980; Л.М.Цепов и Л.Ю.Орехова, 1999; Л.Ю.Орехова с соавт., 1999; А.И.Грудянов, И.В.Безрукова, 2000; J.Wilton&T.Lehner, 1983 и др.).
Так, при развитии воспаления в тканях пародонта отмечается снижение фагоцитарной активности нейтрофилов, что сказывается на процессе фагоцитоза - одного из важных компонентов защитной системы; подавление миграции лейкоцитов по мере расстройства микроциркуляции, а также угнетение функционального состояния соединительной ткани (лимфоидно-гистиоцитарная инфильтрация) (Н.Ф. Данилевский и Г.НіВйшняк, 1977; Н.Ф.Данилевский, 1990; Л.Ю.Орехова с соавт., 1996; В.С.Иванов 1998).
Кроме того; результаты работ свидетельствуют о значительных нарушениях в Т- и В-системах иммунитета (Т.П.Иванюшко с соавт., 1985, 1989;: ИМ.Жяконис, 1985; Л.А.Малиновская с соавт., 1985 и др). Установлено, что функциональная активность Т-лимфоцитов угнетена, нарушена их супрессорная функция, в то время как количество иммуноглобулинов растет (В.С.Иванов с соавт., 1986). Особую роль играют slgA, IgG и IgM; причем; slgA и IgG были обнаружены более поверхностно — в эпителии десневой борозды, тогда как IgM — в подлежащих тканях (D.F.Kinane&D.F.Lappin, 2001);.
Факт, доказывающий взаимосвязь между наличием зубного налета и воспалением тканей пародонта, не вызывает сомнений. Однако, характер влияния зубного налета на прогрессирование болезни все еще недостаточно ясен. Известно, что различия в количественном и видовом составе микрофлоры полости рта, инициирующей воспалительный процесс, не могут доподлинно объяснить особенностей течения пародонтита. Пародонтит возникает в результате сложного взаимодействия бактериальной инфекции и ответной реакции организма. Очевидно, что у пациентов с сопутствующими системными заболеваниями (сахарным диабетом, например) или другими поведенческими состояниями (курение и т.п.) риск развития и степень тяжести воспалительных заболеваний пародонта значительно выше. Поэтому стоматологи в настоящее время- должны уделять большее внимание факторам риска развития пародонтита у каждого отдельного пациента.
Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) и его разновидности
ПЦР - это метода позволяющий найти в исследуемом клиническом материале небольшой? участок генетической информации любого организма среди огромного количества других участков и многократно размножить его.
В основе метода лежит принцип естественной репликации ДНК, включающей расплетение двойной спирали ДНК, расхождение нитей» и комплементарное дополнение обоих. Репликация ДНК может начаться не в любой точке,; а только в определенных стартовых блоках — коротких двунитевых участках. Стартовый блок образуется при взаимодействии небольшого фрагмента ДНК, называемого праймером, с комплементарным участком соответствующей цепи матричной ДНК. Маркировав такими блоками специфический только для данного вида участок ДНК, можно многократно его амплифицировать (воспроизвести):
Таким образом, ПНР включает в себя 3 этапа: 1. расплетение спирали ДНК и расхождение нитей (денатурация); 2. гибридизация («отжиг») праймеров с матричной ДНК; для каждой пары праймеров существует своя температура отжига; 3. достраивание цепи дочерней нити (удлинение, элонгация); элонгация идет в направлении от 5 -конца к З -концу цепи, начиная с участков присоединения праймеров при помощи ДНК-полимеразы. Материалом для достраивания служат добавленные в раствор дезоксирибонуклеозидтрифосфаты. В ПЦР эти процессы осуществляются в пробирке, помещенной в программируемый термостат (амплификатор) в циклическом режиме (30-40 циклов). Переход от одной стадии реакции к другой достигается изменением температуры инкубационной смеси. При нагревании раствора до 93-95С происходит денатурация ДНК, для перехода, к следующему этапу — присоединению или «отжигу» праймеров — инкубационную смесь охлаждают до 50-65С. Далее смесь нагревают до 70-72С — оптимум работы ДНК-полимеразы (данный фермент выделен из бактерий, живущих в термальных источниках) — на этой стадии происходит достраивание новой нити ДНК. Далее цикл повторяется снова. Для осуществления такого процесса необходимы праймеры, которые и служат в качестве затравки для синтеза выбранного участка ДНК. Требуется подобрать такой фрагмент молекулы ДНК (из 15-30 нуклеотидов), который бы отличался генетической консервативностью и. присутствовал бы только у интересующего вида микроорганизма или в исследуемом гене. Остальными компонентами ПЦР являются дезоксирибонуклеозидтрифосфаты (дАТФ, дТТФ; дГТФ и дЦТФ), магний, необходимый для работы ДНК-полимеразы, ПЦР-буфер и дистиллированная вода. Схема ПЦР представлена на Рис 2.
В настоящем исследовании были использованы две разновидности ПЦР: аллель-специфическая ПЦР (allele-specific PCR) и ПЦР полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (PGR restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP).
Аллель-специфичекая ПЦР (AG-ПЦР) — наиболее часто используемый метод, позволяющий быстро выявить известные единичные нуклеотидные замены с помощью специфических праймеров. Пара таких праймеров представляет собой пару специфических олигонуклеотидов; селективно амплифицирующих только один аллель, т.е. праймер-взаимодействует с: одним (требуемым) аллелем, но не работает по отношению к другому. Таким образом в результате AG-ПЦР амплифицируется только требуемый аллель, и не происходит амплификация других аллелей. Другими словами, если ДНК, полученная от пациента, амплифицирует с мутантным олигонуклеотидом, то следовательно пациент является носителем мутации (GM. Рис.3).
ПЦР полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПЦР-ПДРФ) относится к ферментативным методам. Изменения последовательности ДНК в определенных точках узнаются с помощью специфичных ферментов (рестриктаз). Они разделяют длинную геномную ДНК на удобные для изучения фрагменты (См. Рис.4).
Результаты исследования, полученные при ICAM-1 генотипировании пациентов с сахарным диабетом и без него, и в контрольной группе
В настоящее время благодаря многочисленным исследованиям стало известно много нового о роли микрофлоры в развитии воспалительных заболеваний пародонта и о взаимодействии патогенной бактериальной инфекции с иммунным ответом организма. Однако, распространенность пародонтита остается очень высокой во всем мире — 94,3% (ВОЗ, 2000), и проблема разработки новых эффективных методов ранней диагностики этого заболевания по-прежнему актуальна.
Последние 15 лет стали появляться данные об идентификации генетических маркеров некоторых воспалительных заболеваний человека. Так, была найдена ассоциативная взаимосвязь полиморфизма IL-1 гена с туберкулезом (R.J.Wilkinson et al., 1999), острым гастритом (R.Hwang et al., 2002) и менингококковой инфекцией (R.C.Read et al., 2000); EL-6 гена - с юношеским хроническим артритом (D.Fishman et al., 1998); Toll-like рецептор гена — с Грам-негативным септическим шоком (E.Lorenz et al., 2000); TNF-a гена - с хроническим обструктивным бронхитом (M.Kucukayacan et al., 2002), гепатитом В (Т.НоЫег et al., 1998) и сепсисом (M.Majetschak et al., 1999).
Более того, целый ряд ученых занимался исследованием генетической предрасположенностью развития пародонтита. Среди потенциальных генов-маркеров оказались IL-1 ген,TL-2, витамин Д рецептор ген, иммуноглобулин G Fc рецептор ген и др. (K.S.Kornman et al. 1997; B.Ehmke et al. 1999; P.N.Papapanou et al. 2000; M.J.McDevitt et al. 2000; N.Sugita et al. 2001; R.M.Scarel-Caminaga et al. 2002; J.L.Sun et al. 2002; T.Kobayashi et al. 2000, 2002).
В нашем исследовании была предпринята попытка определить, существует ли взаимосвязь между полиморфизмом ICAM-1, MIF-173, hBD-І и TIMP-3 генов и предрасположенностью человека к развитию пародонтита, и влияет ли генетический статус на особенности течения воспаления в тканях пародонта. Результаты генотипирования анализировались при сравнении данных, полученных в двух группах: в группе пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом (117 человек) и в группе здоровых лиц (51 человек).
Полиморфизм ICAM-1 гена исследовался в двух участках - в позиции 241G/A и позиции -496Т/С. Мутантные аллели (А и С, соответственно) были обнаружены в обоих случаях как в опытной, так и в контрольной группах. Однако, в позиции -241G/A большинство составили гомозиготы GG несущие дикий аллель, как среди пациентов, так и в группе контроля в 75,0 ± 1,48% случаев. Гетерозиготы GA также оказались в равном процентном соотношении в обеих группах со средней частотой встречаемости 22,9 ±0,92%. Гомозиготы АА, несущие мутантный аллель, были обнаружены только среди пациентов в 3,4% случаев, а в контрольной группе лиц с таким генотипом не оказалось. Данное распределение 1С AM-1 -241G/A генотипов не достигло статистически значимой разницы —р 0,05.
В позиции -496Т/С статистически значимой разницы между результатами в группе пациентов и в группе сравнения также достигнуто не было (р 0,05). Распределение генотипов было примерно одинаковым в обеих группах: гетерозиготы ТС лидировали в 44,4% случаев среди пациентов и в 51,0% случаев среди здоровых лиц, а гомозиготы СС, несущие мутантный аллель, были в меньшинстве: 21,4% пациентов и 13,7% волонтеров имели данный генотип.
Полиморфизм MIF гена изучался в позиции -173. Мутантный аллель С был выявлен и у пациентов, и у здоровых лиц. Однако, гомозигот СС не было найдено ни в одной из групп, а гетерозиготы GC оказались в меньшинстве в обеих группах по сравнению с гомозиготами GG: 26,5% случаев среди пациентов и 15,7% среди здоровых лиц против 73,5% и 84,3% случаев (р 0,05).
Для гена hBD-1 полиморфизм исследовался нами в экзоне 2 G/A. Однако, в данном случае мутантных аллелей А обнаружено не было, все представители обеих групп имели генотип GG Таким образом, полиморфизм hBD-І гена у пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом и здоровых лиц зарегистрирован не был.
TIMP-3 генный полиморфизм изучался в трех позициях: -899Т/А, -915A/G и -1296Т/С. Мутантные аллели A, G и С, соответственно, были выявлены и в опытной группе, и у лиц из группы контроля.
В позиции -899Т/А гомозигот АА, несущих мутантный аллель, не оказалось ни в одной из групп, гетерозиготы ТА были зафиксированы только у двух пациентов с пародонтитом и 5 здоровых волонтеров, а в большинстве в обеих группах без какой-либо статистически значимой разницы (р 0,05) были гомозиготы ТТ.
При генотипировании в позиции -915A/G статистически значимой разницы между результатами в двух группах так же выявлено не было (р 0,05). В 53,0% случаев среди пациентов и в 58,8% случаев среди здоровых лиц нами обнаружены гомозиготы АА, несущие дикий аллель, тогда как генотип GG имели только 9 пациентов с пародонтитом и 7 человек из контрольной группы.
В позиции -1296Т/С распределение генотипов среди пациентов и в контрольной группе было примерно одинаковым (р 0,05): большинство пациентов (50,4%) и здоровых лиц (54,9%) оказались гомозиготами ТТ, несущими дикий аллель, а в меньшинстве были члены опытной и контрольной групп с генотипом СС (10,3% и 13,8%, соответственно).
Таким образом, исходя из результатов генотипирования, можно сделать вывод о том, что никакой статистически значимой разницы в частотах генотипов среди больных пародонтитом и здоровых лиц не наблюдалось. Более того, мы можем утверждать, что гомозиготы, несущие мутантный аллель, по всем исследованным генам оказались в меньшинстве в обеих группах.
Результаты исследования, полученные при ТТМР-3 генотипировании пациентов с сахарным диабетом и без него, и в контрольной группе
В позиции -915A/G TIMP-3 гена среди курильщиков в обеих подгруппах чаще всего встречались гомозиготы АА, тогда как некурящие без СД в большинстве случаев были гетерозиготами AQ а некурящие с СД в равном процентном соотношении имели генотип АА и GG
В позиции -1296Т/С ТІМР-3 гена гомозиготами ТТ оказалось только большинство курильщиков без СД, курильщики с СД в 47,0% случаев имели генотип ТС. Носителями этого же генотипа оказался 51,7% некурящих без СД, тогда как некурящие с СД в равном процентном соотношении были гомозиготами СС и ТТ.
Таким образом, исходя из данных сравнительного анализа результатов ICAM-1, MIF и ТІМР-3 генотипирования среди пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом и здоровых лиц, а также между подгруппами пациентов с СД и без СД; мы можем утверждать, что взаимосвязь между генетическим статусом человека по данным генам и его полом, возрастом и отношением к курению в свете их взаимного влияния на развитие воспалительных заболеваний пародонта отсутствует (р 0,05).
Для изучения возможного влияния генетического статуса пациента на динамику течения пародонтита и исход проведенного лечения нами проводился анализ динамики значений таких клинических показателей, как глубина ПК и ВОР, среди пациентов в рамках каждого генотипа всех исследуемых генов. Для этого значения данных показателей, полученные при повторном обследовании пациентов, мы сравнивали с изначальными.
Согласно данным измерений глубины ПК, полученным среди всех генетических вариаций, положительная динамика наблюдалась во всех трех категориях (глубина ПК 3, глубина ПК=4-6 мм и глубина ПК 7 мм).
Увеличение количества точек зондирования с глубиной ПК 3 мм в ICAM-1 вариациях в позиции -241G/A произошло примерно в 19,6±2,3% случаев среди пациентов без СД и 12,5±0,2% случаев среди пациентов с СД вне зависимости от генотипа. В позиции -469Т/С значения максимального и минимального прироста отличались. В подгруппе без СД наилучший результат (гетерозиготы ТС) составил 24,6±14,5%, а наименьший (гомозиготы СС) -13,4±14,1%. В подгруппе с СД среди гомозигот СС увеличение количества точек зондирования с глубиной ПК 3 мм произошло в 25,9±2,0% случаев, а среди гомозигот ТТ — в 6,9±19,1% случаев.
В MIF-173 вариациях увеличение количества точек зондирования с глубиной ПК 3 мм среди пациентов без СД произошло на одинаковом уровне - в 20,2±0,3% случаев. На том же уровне оказалось увеличение количества точек в данной категории среди гетерозигот GC с СД, тогда как среди гомозигот GG прирост составил лишь 8,8±12,5%.
По TIMP-3 гену увеличение количества точек зондирования с глубиной ПК 3 мм произошло на одинаковом уровне среди пациентов без СД вне зависимости от генотипа (в 20,9±1,8% случаев). Среди пациентов с СД данный уровень был ниже - 12,6±1,6%, но также не зависел от генотипа.
В двух других категориях (глубина ПК=4-6 мм и глубина ПК 7 мм) нами было отмечено уменьшение количества точек зондирования с данными показателями. Так, в ICAM-1 генетических вариациях без какой-либо разницы между ними уменьшение количества точек с глубиной ПК=4-6 мм произошло на 12,4±0,4% среди пациентов без СД и на 10,9±0,5% среди пациентов с СД в позиции 241G/A. В позиции -469Т/С результат был 14,4±1,2% и 11,0±0,5%, соответственно. В категории глубина ПК 7 мм, уменьшение количества точек произошло на одном уровне для обоих кодонов: в среднем 8,7±1,0% среди пациентов без СД и 1,9±0,5% среди пациентов с СД.
В обеих МП7-173 вариациях уменьшение количества точек зондирования с глубиной 1Ж=4-6 мм произошло на одинаковом уровне как среди пациентов без СД, так и среди пациентов с СД: в 12,7±1,3% случаев и в 7,1±0,4% случаев, соответственно. В категории глубина ПК 7 мм положительная динамика также не была связана с каким-либо генотипом. Для пациентов без СД уменьшение количества точек зондирования произошло в среднем в 7,6±1,6% случаев, а для пациентов с СД - в 1,7±0,5% случаев.
ТТМР-3 генотипы также не оказали на динамику изменения значений глубины ПК никакого влияния. В категории глубина ШС=4-6 мм уменьшение количества точек зондирования было отмечено нами в среднем в 12,4±1,1% случаев среди пациентов без СД, и в 9,9±1,4% случаев среди пациентов с СД. В категории глубина ПК 7 мм результаты были 9,7±0,5% и 1,1±0,2%, соответственно. Отклонения от средних значений наблюдались только среди вариации позиции -899Т/А TDVEP-3 гена. Этот факт можно объяснить значительным различием в количестве человек в данных вариациях: 2 человека в одной и 98 -в другой. При анализе результатов сравнения значений ВОР нами зафиксировано снижение уровня данного показателя. Так, во всех генетических вариациях ICAM-1 гена и MIF гена ВОР снизился в среднем на 21,9±2,6% среди пациентов без СД и на 22,0±4,7% среди пациентов с СД. Вне зависимости от генотипа по ТГМР-3 гену уровень ВОР среди пациентов с СД в среднем снизился на 22,7±3,0%, а пациентов без СД на 22,8±2,0%. Однако, в последнем случае исключением стали результаты, полученные у гомозигот GG (позиция -915) и гомозигот СС (позиция -1296), где снижение ВОР составило только 10,9%. Полное исчезновение кровоточивости произошло в среднем в 29,7±5,2% случаев у пациентов без СД и в 26,3±3,7% случаев у пациентов с СД вне зависимости от генотипа пациентов.
